交叉配血(凝聚胺法)
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合;反之,依照不同强度的凝块,试验结果判为阳性, 供受者血液不配合。实验结果必须在3分钟内判读。
异常结果处理:
1. 细胞自凝: 在冬天气温较低时,某些病人血清中含有冷凝 集素而导致交叉配血假阳性;遇此现象可用37℃-40℃生 理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动,观察结果。
2.若病人血清(血浆)含有肝素,如洗肾患者能影响配血,须 多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。
2.各管分别加低离子介质0.6ml,混匀置室温1分钟。加凝 聚胺溶液2滴,混匀,置室温15秒。
3.1000g(3000rpm),离心18秒,弃上清液,管底保留约2 滴液体。轻摇试管,观察是否形成凝块。如未形成凝块Байду номын сангаас 则重做前面试验。
操作步骤及结果判断:
4. 加入2滴重悬液,轻轻混合,肉眼或显微镜下观察结果。 5.凝块在1分钟内分散,试验结果为阴性,供受者血液配
标本采集
标本种类:抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清,将细胞配 成5%盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细 胞悬液。 标本要求:抗凝和干燥管均可,如用抗凝血主张用EDTAK2
(mg/dz)抗凝标本应无溶血。
操作步骤及结果判断:
1. 供受者红细胞用生理盐水配成3-5%的细胞悬液。加样 量为:血清2滴,红细胞悬液1滴。主侧:受血者血清+ 供者红细胞悬液;次侧:受血者红细胞悬液+供血者血 清(阴阳对照管另设)。
交叉配血(凝聚胺法)
血型鉴定
原理
根据红细胞膜表面有无A抗原和(或)B抗原,将血型分为 A型、B型、AB型和O型4种。可利用红细胞凝集试验, 通过正反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型,是指用 标准抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗 原和(或)B抗原;所谓反定型,是指用标准A型细胞和 B型细胞来测定血清中有无相应的抗A和(或)抗B。
结果判定(同血型鉴定)
- 100﹪的红细胞沉在微管的底部 ﹢/ 100﹪的红细胞沉在微管的下端1/3之内 1+ 80﹪的红细胞沉在微管的下端2/3之内 2+ 80﹪的红细胞沉在微管的上端2/3之内 3+ 80﹪的红细胞沉在微管的上端1/3之内 4+ 凝集的细胞全部处于微管的顶部 d.p. 双群 Hemo.. 溶血
操作步骤 实验前准备: 将所有的样品和试剂平衡至室温, 微柱凝胶卡处理:实验前,将新的ABO卡离心 病人红细胞:取病人抗凝血红细胞 5μl加生理盐水 500μl制成1%的红细胞悬液。
操作步骤
1.平行向后撕拉ABO卡上端的锡纸膜。 2.在主侧孔悬空加入献血员红细胞悬液50μl,病人血浆50μl。 3.在次侧孔悬空加入病人红细胞悬液50μl,献血员血浆50μl。 4.在孵育器内37度下孵育15分钟 5.专用离心机离心。结束后观察结果
结果判定(同血型鉴定)
- 100﹪的红细胞沉在微管的底部 ﹢/ 100﹪的红细胞沉在微管的下端1/3之内 1+ 80﹪的红细胞沉在微管的下端2/3之内 2+ 80﹪的红细胞沉在微管的上端2/3之内 3+ 80﹪的红细胞沉在微管的上端1/3之内 4+ 凝集的细胞全部处于微管的顶部 d.p. 双群 Hemo.. 溶血
试剂 微柱凝胶检测卡试剂盒。 A、B标准红细胞。 仪器设备 恒温孵育器,专用离心机
操作步骤 实验前准备: 将所有的样品和试剂平衡至室温, 微柱凝胶卡处理:实验前,将新的ABO卡离心 病人红细胞:取病人抗凝血红细胞 5μl加生理盐水 500μl制成1%的红细胞悬液。
操作步骤
1.平行向后撕拉ABO卡上端的锡纸膜。 2.在A1孔悬空加入50μl标准A1红细胞,在B孔悬空加入50μl 标准B红细胞,再在两孔中各加入50μl样品血浆 3.在A、B、D和质控孔内分别悬空加入病人红细胞悬液50μl (注意加样头不要碰试管壁,防止交叉污染) 4.专用离心机离心。结束后观察结果
3.红细胞悬液为5%为宜,过浓或过淡可使抗原抗体比例不适 当,反应不明显易误判。
4.各种原因引起的红细胞溶解,误判为不凝集。部分溶血时, 可溶性血型物质中和了相应的抗体。
交叉配血(卡式配血)
原理
凝胶具有分子筛效应和亲合效应,在微柱凝胶介质中红细 胞抗原与相应抗体结合,经低速离心,凝集的红细胞悬浮 在凝胶上层,而未和抗体结合的红细胞则沉于凝胶底部, 试验结果可用肉眼观察。
原理
凝聚胺(polybrene)法首先利用低离子介质降低溶液的离 子强度,减少红细胞周围的阳离子云,促进血清(浆)中 的抗体与红细胞相应抗原结合,再加入带亚电荷的高价阳 离子多聚物-凝聚胺溶液,中和红细胞表面的负电荷,缩 短细胞间距,形成可逆的非特异性聚集,并使IgG型抗体 直接凝集红细胞。加入中和液后,仅由凝聚胺引起的非特 异性聚集,会因电荷中和而分散,而由抗体介导的特异性 凝集则不会分散。
异常结果处理:
1. 细胞自凝: 在冬天气温较低时,某些病人血清中含有冷凝 集素而导致交叉配血假阳性;遇此现象可用37℃-40℃生 理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动,观察结果。
2.若病人血清(血浆)含有肝素,如洗肾患者能影响配血,须 多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。
2.各管分别加低离子介质0.6ml,混匀置室温1分钟。加凝 聚胺溶液2滴,混匀,置室温15秒。
3.1000g(3000rpm),离心18秒,弃上清液,管底保留约2 滴液体。轻摇试管,观察是否形成凝块。如未形成凝块Байду номын сангаас 则重做前面试验。
操作步骤及结果判断:
4. 加入2滴重悬液,轻轻混合,肉眼或显微镜下观察结果。 5.凝块在1分钟内分散,试验结果为阴性,供受者血液配
标本采集
标本种类:抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清,将细胞配 成5%盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细 胞悬液。 标本要求:抗凝和干燥管均可,如用抗凝血主张用EDTAK2
(mg/dz)抗凝标本应无溶血。
操作步骤及结果判断:
1. 供受者红细胞用生理盐水配成3-5%的细胞悬液。加样 量为:血清2滴,红细胞悬液1滴。主侧:受血者血清+ 供者红细胞悬液;次侧:受血者红细胞悬液+供血者血 清(阴阳对照管另设)。
交叉配血(凝聚胺法)
血型鉴定
原理
根据红细胞膜表面有无A抗原和(或)B抗原,将血型分为 A型、B型、AB型和O型4种。可利用红细胞凝集试验, 通过正反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型,是指用 标准抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗 原和(或)B抗原;所谓反定型,是指用标准A型细胞和 B型细胞来测定血清中有无相应的抗A和(或)抗B。
结果判定(同血型鉴定)
- 100﹪的红细胞沉在微管的底部 ﹢/ 100﹪的红细胞沉在微管的下端1/3之内 1+ 80﹪的红细胞沉在微管的下端2/3之内 2+ 80﹪的红细胞沉在微管的上端2/3之内 3+ 80﹪的红细胞沉在微管的上端1/3之内 4+ 凝集的细胞全部处于微管的顶部 d.p. 双群 Hemo.. 溶血
操作步骤 实验前准备: 将所有的样品和试剂平衡至室温, 微柱凝胶卡处理:实验前,将新的ABO卡离心 病人红细胞:取病人抗凝血红细胞 5μl加生理盐水 500μl制成1%的红细胞悬液。
操作步骤
1.平行向后撕拉ABO卡上端的锡纸膜。 2.在主侧孔悬空加入献血员红细胞悬液50μl,病人血浆50μl。 3.在次侧孔悬空加入病人红细胞悬液50μl,献血员血浆50μl。 4.在孵育器内37度下孵育15分钟 5.专用离心机离心。结束后观察结果
结果判定(同血型鉴定)
- 100﹪的红细胞沉在微管的底部 ﹢/ 100﹪的红细胞沉在微管的下端1/3之内 1+ 80﹪的红细胞沉在微管的下端2/3之内 2+ 80﹪的红细胞沉在微管的上端2/3之内 3+ 80﹪的红细胞沉在微管的上端1/3之内 4+ 凝集的细胞全部处于微管的顶部 d.p. 双群 Hemo.. 溶血
试剂 微柱凝胶检测卡试剂盒。 A、B标准红细胞。 仪器设备 恒温孵育器,专用离心机
操作步骤 实验前准备: 将所有的样品和试剂平衡至室温, 微柱凝胶卡处理:实验前,将新的ABO卡离心 病人红细胞:取病人抗凝血红细胞 5μl加生理盐水 500μl制成1%的红细胞悬液。
操作步骤
1.平行向后撕拉ABO卡上端的锡纸膜。 2.在A1孔悬空加入50μl标准A1红细胞,在B孔悬空加入50μl 标准B红细胞,再在两孔中各加入50μl样品血浆 3.在A、B、D和质控孔内分别悬空加入病人红细胞悬液50μl (注意加样头不要碰试管壁,防止交叉污染) 4.专用离心机离心。结束后观察结果
3.红细胞悬液为5%为宜,过浓或过淡可使抗原抗体比例不适 当,反应不明显易误判。
4.各种原因引起的红细胞溶解,误判为不凝集。部分溶血时, 可溶性血型物质中和了相应的抗体。
交叉配血(卡式配血)
原理
凝胶具有分子筛效应和亲合效应,在微柱凝胶介质中红细 胞抗原与相应抗体结合,经低速离心,凝集的红细胞悬浮 在凝胶上层,而未和抗体结合的红细胞则沉于凝胶底部, 试验结果可用肉眼观察。
原理
凝聚胺(polybrene)法首先利用低离子介质降低溶液的离 子强度,减少红细胞周围的阳离子云,促进血清(浆)中 的抗体与红细胞相应抗原结合,再加入带亚电荷的高价阳 离子多聚物-凝聚胺溶液,中和红细胞表面的负电荷,缩 短细胞间距,形成可逆的非特异性聚集,并使IgG型抗体 直接凝集红细胞。加入中和液后,仅由凝聚胺引起的非特 异性聚集,会因电荷中和而分散,而由抗体介导的特异性 凝集则不会分散。