[精品]流式细胞仪细胞分选的操作步骤
流式细胞仪细胞分选的操作步骤
细胞分选的简要操作步骤一、上样前的准备FACSCalibu可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。
1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
3L 70%乙醇（用无菌蒸馏水配制）5L无菌蒸馏水5L无菌PBS2、在干净的鞘液筒中加入3L 70%乙醇。
盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗涤。
安好鞘液筒。
3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。
4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。
5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。
6、放上一支装有70 %乙醇的进样管。
7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。
9、从Acquire menu选择SortSetup。
在Sort Gate菜单中选择步骤7设定的分选门。
按液流控制键RUN。
10、在Setup 方框中打叉，点击Acquisition Control 菜单中Acquire。
11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min ），点击Pause, Abort。
12、再重复上述步骤2次，共需要1h。
13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直至洗净桶内壁残余乙醇。
14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
15、在收集管接口处安装2支新的收集管。
16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。
17、点击Acquisition Control 菜单中Acquire。
18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause Abort。
19、再重复上述步骤2次，共需要1h。
20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L无菌PBS盖紧盖子。
安好鞘液筒。
21、在收集管接口处安装2支新的收集管。
22、放上一支装有无菌PBS的进样管。
23、点击Acquisition Control 菜单中Acquire。
流式细胞仪操作规程
FACSCalibur流式细胞仪操作规程一、编号：YQ0606二、标题：FACSCalibur流式细胞仪操作规程三、关键词：流式细胞仪操作规程四、目的：保证流式细胞仪的安全及有效操作五、背景知识：流式细胞术（Flow CytoMeter，FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。
六、原理待测细胞染色后制成单细胞悬液，用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。
流式细胞仪通常以激光作为发光源。
经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。
这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。
光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。
这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过A/D转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。
计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，液可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。
检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。
单参数数据以直方图的形式表达，其X轴为测量强度，Y轴为细胞数目。
一般来说，流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。
对于双参数或多参数数据，既可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。
流式细胞仪的使用程序
流式细胞仪的使用程序------血液病实验诊断中心一.开机程序1.检查稳压器电源,打开电源,稳定5分钟。
2.打开储液箱,倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。
打开压力阀,取出鞘液桶,将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水,做分选必须用PBS 或FACSFlow),合上压力阀。
确实盖紧桶盖,检查所有管路是否妥善安置。
3.将FACSCalibur开关打开,此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY,预热5-10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4.如果需要打印,打开打印机电源。
5.打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6.执行仪器PRIME功能一次,以排除Flow cell中的气泡。
7.分析样品时,先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
做过分选后,每次开机后需冲洗管道:向分选装置上装上两个50ml离心管,不接通浓缩系统,摁下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置,同上法冲洗一次。
二.预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1.从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗,可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2.选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot,绘出一个或多个Dot Plots(点图)。
从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源,并确定适当的x 轴和y轴参数。
3.选取屏幕左列绘图工具中的Histogram,同上法可绘出Histogram(直方图)。
4.将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuestFolder \EXP文件夹中,下次进行相同实验时可直接调用。
. 本计算机中已设定两个模式文件:ACQ和EXP,储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中,ACQ用于细胞DNA检测, EXP用于细胞表面标志分析。
流式细胞仪细胞分选的操作步骤
流式细胞仪细胞分选的操作步骤细胞分选的简要操作步骤一、上样前的准备FACSCalibur可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。
1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
●3L 70% 乙醇（用无菌蒸馏水配制）●5L 无菌蒸馏水●5L 无菌PBS2、在干净的鞘液筒中加入3L 70% 乙醇。
盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗涤。
安好鞘液筒。
3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。
4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。
5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。
6、放上一支装有70 % 乙醇的进样管。
7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。
9、从Acquire menu选择SortSetup 。
在Sort Gate菜单中选择步骤７设定的分选门。
按液流控制键RUN。
10、在Setup方框中打叉，点击Acquisition Control菜单中Acquire。
11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
12、再重复上述步骤2次，共需要1h。
13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL 无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直至洗净桶内壁残余乙醇。
14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
15、在收集管接口处安装2支新的收集管。
16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。
17、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
19、再重复上述步骤2次，共需要1h。
20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L 无菌PBS，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
21、在收集管接口处安装2支新的收集管。
22、放上一支装有无菌PBS的进样管。
FACSAria流式细胞仪无菌分选的基本流程
FACSAria流式细胞仪无菌分选的基本流程一、环境和液流的消毒1、准备足量的无菌1×PBS（3L左右）和去离子水（10L左右）。
PBS和去离子水可高压灭菌，sheath桶和装DI水的5L小桶依次用75％医用酒精和无菌去离子水各涮洗三次，然后将无菌PBS和去离子水分别注入相应桶内即可。
2、房间在分选前紫外灯照射15－20分钟；用1:50新洁尔灭拖地；用75％医用酒精擦拭工作台和收集架；用75％医用酒精喷洒分选细胞收集区和上样区。
二、开机和管道的消毒1、将 Sheath液换为活性氯浓度为0.5%的次氯酸钠溶液（不要用75％的酒精），开机。
开机前，先掀起流动室和分选室的罩盖，开启电源，打开计算机并等计算机进入WINDOWS系统后，打开激光电源，运行FACSDiva软件，联机成功后，执行Fluidics startup命令。
然后从FACSDiva的sort菜单进入sort setup，选择合适的液流压力（high、 middle、low）。
一般来说，100μm的喷嘴选用Low，而70μm的喷嘴选用middle。
2、打开breakoff window，点击显示窗上的液流开关，检查液流是否正好流入废液槽中间和液流的形态是否正常。
如果出现异常，可以通过调整喷嘴的位置，改变 Breakoff 窗口的Amplitude的大小和打开Attenuation开关等来进行调整。
（具体操作可参考Instrument User’s Guide的194－200页），直至液流形态和位置符合分选要求。
3、在上样管中装入1ml 活性氯浓度为0.5%的次氯酸钠溶液,将上样管放在上样架上，点击Acquisition窗口的Load开关，运行15－20分钟后，点击Unload 开关，取下上样管。
4、将Sheath液换为无菌PBS，先后执行Fluidics shutdown和Fluidics startup程序各一次。
通过上述操作完成了环境和管道的消毒，为分选准备了无菌的环境，在后续的操作中应注意保持，以确保分选样本不被污染。
流式细胞分选步骤
流式细胞分选步骤
流式细胞分选（fluorescence-activated cell sorting, FACS）是一种通过细胞表面标记物的荧光信号将细胞分离成单个克隆的分析技术。
以下是通常的流式细胞分选的步骤：
1. 细胞准备：将待分选的细胞进行培养和增殖，直到细胞数量足够用于分选。
此外，细胞也可以来源于个体的组织或血液。
细胞样本应该处于单细胞悬浮状态，以确保每个细胞的分选准确性。
2. 细胞标记：利用适当的荧光标记物标记细胞表面的特定分子或细胞内的组分。
常用的标记物包括荧光染料和荧光抗体。
这些标记物可以用来区分不同类型的细胞或细胞的亚群。
3. 流式细胞仪设置和样品加载：将细胞样品放置在流式细胞仪中。
根据所使用的流式细胞仪和实验条件，可以设置不同的参数，如激光功率、荧光信号检测通道和仪器的灵敏度。
4. 细胞分选：根据细胞表面标记物的荧光信号，通过流式细胞仪中的高压和细胞流速控制，将目标细胞从样品中逐个分选出来。
常见的分选方法包括电子静电排序（electrostatic-charge sorting），压控破裂排序（pressure-based sorting）和电压脉冲排序（voltage-pulse sorting）。
5. 细胞收获：被分选的细胞可以在培养皿中进行培养和进一步分析，或者可以直接用于其他实验或应用中。
6. 数据分析：将流式细胞仪生成的数据进行分析和解释，以获得有关每个分选细胞的详细信息，例如荧光信号的强度和细胞亚群的比例。
需要注意的是，流式细胞分选是一个高度专业化和技术性要求较高的实验技术，操作时需要严格控制污染和合理运用对比试剂以获得理想的结果。
流式细胞操作流程
流式细胞操作流程
流式细胞术是一种用于分析和分类细胞的生物学技术。
以下是典型的流式细胞操作流程：
1.细胞样本准备：
•收集要分析的细胞样本，可以是细胞悬液、组织细胞悬液或血液等。
•对样本进行必要的预处理，如裂解红细胞，去除细胞碎片等。
2.标记细胞：
•使用荧光标记物（荧光染料、抗体等）标记细胞中的特定分子，以便流式仪器能够检测到这些标记。
•标记的目标可以是表面抗原、细胞器、DNA或RNA等。
3.样本染色：
•添加染色剂（荧光标记物）到细胞样本中，使其能够在流式仪器中发光。
•染色通常通过孵育样本和染色剂混合物来实现。
4.细胞固定（可选）：
•如果需要保持细胞在染色后的状态，可以进行细胞固定步骤。
5.样本混合：
•将经过标记和染色的细胞混合均匀，以确保获得代表性的样本。
6.样本注射到流式细胞仪：
•将样本通过流式细胞仪的进样口注入，使其形成单个细胞的流动流。
7.激光激发和信号检测：
•使用激光激发样本中的荧光标记物。
•流式细胞仪会检测细胞产生的荧光信号，并记录下来。
8.数据分析：
•通过计算机软件对收集到的数据进行分析。
•分析可以包括对不同细胞亚群的鉴定、数量统计、染色物的表达水平等。
9.结果呈现：
•将分析结果呈现为图表、图像或表格，以便更好地理解和解释实验结果。
流式细胞术可以用于许多研究领域，如免疫学、细胞生物学、肿瘤学等，以研究和识别不同细胞类型、表达分子的水平等。
流式细胞技术的操作方法
流式细胞技术的操作方法
流式细胞技术是一种用于分析和分类细胞的方法，通常包括以下步骤：
1. 细胞准备：从组织样本或培养细胞中收集细胞。
可以使用细胞培养、离心、切片等方法获取细胞。
2. 细胞处理：对收集到的细胞进行处理，包括洗涤、消化、染色等步骤。
洗涤可以去除细胞外的杂质，消化可以使细胞变成单细胞悬浮状态，染色可以标记特定细胞结构或分子。
3. 细胞悬浮：将处理后的细胞悬浮在缓冲液中，确保细胞以单个细胞为单位悬浮。
4. 流式细胞仪设置：根据实验需要，对流式细胞仪进行设置，包括调整流速、选择相应的激发波长和检测滤光片等。
5. 细胞分析：将悬浮的细胞通过流式细胞仪进行分析。
细胞会依次通过激光束，激光照射到细胞上时，细胞中的荧光标记物会被激发，发出特定的荧光信号。
根据细胞在不同参数上的荧光信号的强弱和分布情况，可以得到细胞的特征信息。
6. 数据分析：根据流式细胞仪得到的荧光信号，可以利用相关的软件进行数据分析，包括细胞计数、细胞分类、细胞亚群分析等。
7. 结果解读：根据数据分析的结果，解读实验结果，得出相应的结论。
需要注意的是，流式细胞技术的操作方法可能会因具体实验目的和流式细胞仪型号的不同而有所变化。
在进行实验前，最好参考操作手册或相关文献，了解具体的操作步骤和注意事项。
流式细胞术操作规程
流式细胞术操作规程流式细胞术是一种常用的细胞分析技术，它可以用来检测和分析细胞表面标记物、细胞数量、细胞分布等信息。
以下是一份流式细胞术操作规程，详细介绍了该技术的操作步骤和注意事项。
一、实验前准备1. 准备所需的实验材料，包括流式细胞仪、标记抗体、孵育培养基、样本组织、显微镜片等。
2. 检查流式细胞仪的功能是否正常，确认仪器能够正常运行。
3. 清洁实验台面，确保操作环境干净整洁。
4. 准备所需的试剂和溶液，如PBS缓冲液、抗体染色溶液等。
二、样本处理1. 准备样本组织，将其转移到离心管中，并添加适量的孵育培养基使其完全浸泡。
2. 使用离心机将样本离心，去除上清液。
3. 重悬样本，将其转移到离心管中，并加入足够的PBS缓冲液进行洗涤。
4. 重复洗涤过程，直到样本完全洗净。
三、标记抗体染色1. 取出经过洗涤的样本，将其转移到离心管中，并加入足够的标记抗体溶液。
2. 在黑暗条件下孵育样本，使其与标记抗体充分结合。
3. 静置反应15-30分钟，确保充分染色。
4. 在光线和温度适宜的条件下冰冻样本，避免抗体的结合。
5. 根据实验需求，可以选择单标记或多标记抗体。
四、样本准备1. 取出经过标记抗体染色的样本，将其转移到离心管中，并加入足够的PBS缓冲液进行洗涤。
2. 将样本离心并去除上清液。
3. 重悬样本，并根据实验需要加入适量的PBS缓冲液进行稀释。
4. 检查样本的细胞数目和活性是否符合实验要求，如有必要，可以使用显微镜进行观察和计数。
五、流式分析1. 打开流式细胞仪，并确认仪器的设置和参数是否符合实验要求。
2. 调整仪器的流速和灵敏度，使其适应样本的特性。
3. 将样本转移至流式细胞仪的样本管中。
4. 开始流式细胞分析，记录并保存实验数据。
5. 根据实验需要，可以进行不同的数据分析和处理，包括细胞分布、细胞数量、表面标记物的表达等。
六、实验后处理1. 关闭仪器，清洁工作台和操作区域。
2. 处理和储存实验数据，可以使用相应的图像科学软件进行数据处理和结果分析。
流式细胞仪的使用流程
流式细胞仪的使用流程1. 简介流式细胞仪 (Flow Cytometer) 是一种先进的生物学实验设备，用于检测和分析细胞的形貌、大小、形态、功能和数量等特征。
它可通过流式技术将单个细胞排列成单个的流束，然后通过激光器进行激发和检测，实现对细胞的高通量分析。
本文将介绍使用流式细胞仪的具体使用流程，帮助用户能够正确、高效地操作该设备。
2. 准备工作在正式操作流式细胞仪之前，需要做一些准备工作：2.1 样本准备•从培养皿中取出待分析的细胞，并进行适当的处理，如洗涤、离心等。
•将细胞悬浮液转移至离心管中，并进行适当的离心操作，以获得较为纯净的细胞样本。
2.2 仪器准备•打开流式细胞仪的电源开关，并等待设备启动完成。
•根据实验需要，调整仪器的相关参数，如流速、激发光源、检测通道等。
•准备合适的背景溶液，用于样本的稀释和冲洗。
3. 操作步骤了解了准备工作后，下面将介绍流式细胞仪的具体操作步骤：3.1 样本准备与装载•使用移液器将经过处理的细胞悬浮液取出一定量至样本管中。
•观察样本管中的细胞悬浮液是否均匀分散，如果存在沉淀则轻轻摇晃样本管使之均匀。
3.2 仪器设置•在流式细胞仪的操作界面上设置相应的参数，如流速、激发光源、检测通道等。
•检查仪器的液路系统是否正常工作，如检查液体的流速、流量传感器是否正常等。
3.3 校准仪器•使用已知样本进行仪器的校准。
通常使用亮度微珠进行仪器的调整和刻度。
•在仪器设置界面选择亮度微珠的通道，并进一步设定检测参数以达到最佳校准效果。
3.4 样本测试•将样本管装载至流式细胞仪中的样本架上，确保样本与仪器的光学系统的光路对准。
•启动流式细胞仪，开始测试。
•根据实验需要，选择合适的激发光源和检测通道，进行样本的快速测试。
•在测试过程中，可根据实验需要采集样本的荧光和散射信号，以及其他额外的参数。
3.5 数据分析•测量完成后，通过流式细胞仪软件导出所测细胞的数据文件。
•使用相应的数据分析软件对所测细胞的数据进行分析和解读。
流式细胞分选操作流程
流式细胞分选操作流程流式细胞分选是个超有趣又很实用的技术呢。
一、样本准备。
咱们得先搞定样本呀。
这样本的质量可太重要啦。
如果是细胞样本的话，要保证细胞的活性。
要是细胞都半死不活的，那后面的分选可就麻烦咯。
一般要把细胞从培养瓶或者培养皿里轻柔地吹打下来，就像轻轻叫醒一个小宝贝一样。
然后把细胞收集到离心管里，给它来个离心，转速可不能太猛哦，不然细胞会被转晕的，大概1000 - 1500转每分钟就行啦。
离心完之后呢，倒掉上清液，再用合适的缓冲液把细胞重悬起来，让细胞舒舒服服地待在里面。
二、仪器准备。
接着就是我们的主角——流式细胞仪啦。
这仪器就像一个超级精密的大玩具一样。
在使用之前，得先开机预热一下，就像运动员上场前要热身似的。
然后检查一下各种管路有没有接好，有没有漏液的情况。
那些各种参数设置的地方，也要检查检查，确保都在初始状态呢。
还要校准仪器哦，这就像是给仪器定个标准，让它知道怎么准确地识别和分选细胞。
校准液就像是给仪器的小测试，看看它是不是能准确地把不同的“小颗粒”区分开。
三、设置分选参数。
现在要根据咱们想要分选的细胞特征来设置参数啦。
比如说，如果我们想分选表达某种特定蛋白的细胞，那就要把这个蛋白对应的荧光标记的检测参数设置好。
这就像是告诉仪器，你要找的是穿了某种特殊颜色衣服的小细胞哦。
要调整好不同荧光通道的电压呀，补偿呀这些参数。
这就有点像调收音机的频道一样，要调到最清晰的那个状态，这样才能准确地把目标细胞找出来。
如果参数设置得不好，可能就会把一些不是我们想要的细胞也选进来，或者把我们想要的细胞给漏掉了，那可就不好玩啦。
四、上样和分选。
一切准备就绪，就可以把我们的样本上样到流式细胞仪里啦。
看着细胞一点点被吸进去，感觉就像送小士兵去接受检阅一样。
在分选的过程中，仪器会根据我们设置的参数，把不同的细胞分到不同的收集管里。
这时候我们要时刻盯着仪器的显示屏，看看分选的情况是不是正常。
如果发现有什么不对劲的地方，就像发现小士兵走错路了一样，要赶紧调整参数或者检查一下样本或者仪器是不是出问题了。
AriaII操作手册-分选
FACSAri aⅡ流式细胞仪一、开机准备（一）准备液路1.将流式细胞仪的上盖打开；2.开启计算机，等待所有程序载入。
3.开主机电源Mainpower（右图），从电脑桌面上双击打开FACSDiva软件，输入密码BDIS。
打开激光开关laser power（根据实验需要进行选择）；开启实验所需激光器电源。
4.确认液流车中各种液体的液面水平（鞘液、废液、去离子水、漂白剂、乙醇），倒空废液或加满其他液体（下图）。
5.从软件的Cytometer菜单上选择Fluidic Startup(射流启动)，点击OK确认。
将出现如下窗口：6．将液路和气路管道从酒精桶断开，连接到鞘液桶；完成后点Done；7．将Closed-loop 喷嘴（闭环喷嘴）插入流动室；完成后点Done；会出现右侧窗口，提示液流开启进行中；8．达到100%，移去Closed-loop喷嘴，完成后点Done；9．按照实验要求，插入直径合适的喷嘴（喷嘴直径应该是分选颗粒直径的3-6倍）；10．然后点OK，完成整个过程；11．从菜单上选择Sort(分类)sort setup,确认setup模式与喷嘴大小匹配。
（二）开液流1．打开液流窗口的液流；♦点击软件界面上（如下图）的按钮打开分选液流窗口（如下图）♦点击分选液流窗口的按钮(stream 的前面按钮)，开启液流2．打开分选仓前的门，检查液流。
液流应为一条细线落入废液槽正中(可通过调整红色标志的键)；（如果液流不稳，检查流动室中是否有气泡，将液流关闭，10秒钟后再开，排除气泡。
）3．关上分选仓前的门。
（三）设定液流断点1.调整液流震幅（Ampl），使断滴位于窗口上方1/3处。
（Ampl不要超过70，如果超过，检查流动室是否有气泡；确认鞘液压力和震动频率是否合适）；2.确认卫星液滴与大液滴融合，应该在断滴的6滴之内融合（红色箭头数起，左图的左侧合格，右侧不合格），如果没有融合，重新安装喷嘴。
二、建立实验模板1.在软件界面左侧Browser面板下，依次点击New Folder、Experiment、Specimen （均可重命名），单击Specimen左侧“+”符号，显示下方的Tube，点击左侧灰色指示箭头，使之变成绿色（当前指示）。
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪的使用程序分子病毒实验室一.开机程序1.检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。
2.打开储液箱，倒掉废液，并在废液桶中加入400ml漂门水原液。
打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFIow),合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3.将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY,预热5- 10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4.如果需要打印，打开打印机电源。
5.打开电脑，等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6.执行仪器PRIME功能一次，以排除Flow cell中的气泡。
7.分析样品时，先用FACAFIow或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
o做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50ml离心管，不接通浓缩系统，扌恩下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。
预设获取模式文件(Acquisition Template Files)从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个1.获取模式文件。
2.选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot,绘出一个或多个Dot Plots （点图）。
从DotPlot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y 轴参数。
3.选取屏幕左列绘图工具中的Histogram，同上法可绘出Histogram （直方图）。
4.将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuestFolder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。
. 本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP,储存于FACStationG3\BD Applications \CELLQuest \EXP 文件夹中，ACQ 用于细胞DNA 检测，EXP 用于细胞表面标志分析。
流式细胞仪使用方法
流式细胞仪的使用方法及相关资料仪器名称：流式细胞仪生产厂家：美国贝克曼库尔特有限公司使用方法：一．开机程序1．检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。
2．打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。
打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3．将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4．如果需要打印，打开打印机电源。
5．打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6．执行仪器PRIME功能一次，以排除Flow cell中的气泡。
7．分析样品时，先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50ml离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。
二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1．从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2．选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。
从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y轴参数。
3．选取屏幕左列绘图工具中的Histogram，同上法可绘出Histogram（直方图）。
4．将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。
本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中，ACQ用于细胞DNA检测，EXP用于细胞表面标志分析。
小鼠脾脏t细胞流式分选实验步骤
实验目的：通过流式细胞仪对小鼠脾脏T细胞进行分选，以探究T细胞在免疫应答中的作用及机制。
一、实验前准备1.1 实验材料准备1.1.1 小鼠脾脏组织1.1.2 10mL注射用生理盐水1.1.3 0.25胰酶液1.1.4 洗涤缓冲液（PBS）1.1.5 红细胞裂解液1.1.6 表面标记抗体：CD3-FITC、CD4-PE、CD8-APC1.1.7 流式细胞仪1.1.8 离心管、移液枪、吸头、培养皿等实验器材1.2 实验环境准备1.2.1 无菌操作台1.2.2 常温恒温器1.2.3 培养箱1.2.4 流式细胞仪操作间二、实验步骤2.1 小鼠脾脏细胞分离2.1.1 将小鼠处死并取出脾脏组织，放入含有10mL生理盐水的培养皿中，剪碎均匀。
2.1.2 加入0.25胰酶液，放入37摄氏度恒温器中消化30分钟。
2.1.3 将组织碎片过滤，用PBS洗涤，避免红细胞污染。
2.1.4 使用红细胞裂解液裂解红细胞，离心沉淀，得到细胞悬液。
2.2 细胞表面标记2.2.1 取得细胞悬液，计数并调整浓度至合适水平。
2.2.2 分别加入CD3-FITC、CD4-PE、CD8-APC表面标记抗体，进行表面标记反应，避免光照。
2.2.3 进行表面标记抗体的洗涤和离心，得到标记的细胞悬液。
2.3 流式细胞仪分选2.3.1 将标记的细胞悬液输入流式细胞仪，设置合适的参数。
2.3.2 进行T细胞的流式细胞仪分选，并收集目标T细胞子集。
2.3.3 对收集的目标T细胞子集进行进一步的分析或培养。
三、实验注意事项3.1 实验过程中要保持无菌操作，避免细胞污染。
3.2 实验中避免表面标记抗体受光照。
3.3 实验材料和仪器的准备和操作要符合实验要求，确保实验结果的准确性和可靠性。
通过上述步骤，可以对小鼠脾脏T细胞进行流式分选实验，进一步探究T细胞在免疫调节中的作用及机制，为相关研究提供重要的实验数据支持。
在实验过程中，对于小鼠脾脏T细胞的流式分选需要严格控制各个步骤，确保实验结果的可靠性和准确性。
流式细胞仪细胞分选的操作步骤
细胞分选的简要操作步骤一、上样前的准备FACSCalibur可以分选细胞进行培养或功能性研究，而这些研究需要清洁环境以保持分选后细胞不受污染继续培养，因此在样本制备，上机检测分选等过程中需严格按无菌技术操作。
1、应用无菌技术制备下列无菌工作液。
●3L 70% 乙醇（用无菌蒸馏水配制）●5L 无菌蒸馏水●5L 无菌PBS2、在干净的鞘液筒中加入3L 70% 乙醇。
盖紧盖子，振摇鞘液筒，确保桶内壁被乙醇充分洗涤。
安好鞘液筒。
3、将过滤器短接，否则乙醇将破坏滤膜。
4、用70%乙醇冲洗收集管接口处，并喷洒进样口处的空气。
5、在收集管接口处安装2支BD 50ml收集管（若不使用浓缩器）。
6、放上一支装有70 % 乙醇的进样管。
7、设分选门（画一个空门使机器进行分选操作）。
9、从Acquire menu选择SortSetup 。
在Sort Gate菜单中选择步骤７设定的分选门。
按液流控制键RUN。
10、在Setup方框中打叉，点击Acquisition Control菜单中Acquire。
11、跑乙醇直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
12、再重复上述步骤2次，共需要1h。
13、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入500mL 无菌蒸馏水，振摇鞘液筒，倒掉液体，反复操作直至洗净桶内壁残余乙醇。
14、在鞘液筒中加入3L无菌蒸馏水，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
15、在收集管接口处安装2支新的收集管。
16、放上一支装有无菌蒸馏水的进样管。
17、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
18、跑无菌蒸馏水直至2支收集管注满（每管注满需要9min），点击Pause，Abort。
19、再重复上述步骤2次，共需要1h。
20、断开鞘液筒，在鞘液筒中加入3L 无菌PBS，盖紧盖子。
安好鞘液筒。
21、在收集管接口处安装2支新的收集管。
22、放上一支装有无菌PBS的进样管。
23、点击Acquisition Control菜单中Acquire。
流式细胞仪使用方法及程序
流式细胞仪的使用程序------血液病实验诊断中心一．开机程序1．检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。
2．打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。
打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3．将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4．如果需要打印，打开打印机电源。
5．打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6．执行仪器PRIME功能一次，以排除Flow cell中的气泡。
7．分析样品时，先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
。
做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50ml离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。
二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1．从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2．选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。
从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y轴参数。
3．选取屏幕左列绘图工具中的Histogram，同上法可绘出Histogram（直方图）。
4．将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。
. 本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中，ACQ用于细胞DNA检测，EXP用于细胞表面标志分析。
流式细胞术标准操作规程,1200字
流式细胞术标准操作规程流式细胞术（Flow Cytometry）是一种常用的细胞学研究技术，广泛应用于细胞表型分析、细胞分选、免疫学研究等领域。
为了确保流式细胞术的准确性和可靠性，需要遵循一系列的标准操作规程。
1. 实验前准备- 确保流式细胞仪、计算机和相关设备正常工作，包括保证激光器、光学系统等的正常运行。
- 确保光谱校准及标定的准确性，包括日常监测仪器的性能、定期校准补偿参数等。
- 准备所需试剂和标记抗体，确保其质量良好并符合实验要求。
2. 样本处理- 根据实验目的选择合适的细胞来源和取样方式，并保持细胞的完整性及活性。
- 根据细胞类型和实验需要选择适当的预处理方法，如细胞固定、细胞膜穿透等。
- 对于固定样本，要避免过度固定和过度穿透，以免影响细胞染色和光学性能。
3. 样品标记- 预先优化标记抗体的浓度和反应时间，确保准确的抗原检测和最大的靶向效率。
- 避免标记抗体和细胞表面抗原的非特异性结合，应加入相应的负对照组和等位控制。
- 合理选择荧光染料和标记方法，避免光谱重叠和串扰，以确保标记物的准确检测。
4. 流式细胞仪调试及仪器设置- 根据样本类型和实验需求，选择适当的仪器设置，包括选择合适的激光器、滤光片和检测参数等。
- 对于多色染色，进行补偿设置以消除光谱重叠和仪器漂移带来的影响。
- 定期校准和检验仪器的参数，确保仪器性能和数据稳定性。
5. 流式细胞术操作- 严格控制实验要求的温度、湿度和光照等环境条件，避免对细胞和染料的影响。
- 合理设置流速和事件采集数目，以确保准确且充分的样本分析。
- 避免空管事件和双重事件的发生，及时清理堵塞和冲洗流式细胞仪采集管路。
- 对于稀有事件和低频事件，需要增加采集数目和合理的补偿设置，以提高检测敏感性。
- 及时保存数据和相应的控制实验数据，以备后续数据分析和结果验证。
6. 数据分析和结果解释- 使用专业的流式细胞术分析软件进行数据处理和结果分析。
- 对于多色染色，应进行合理的补偿和背景校正，确保数据的准确性和可靠性。
巨噬细胞流式分选操作步骤
巨噬细胞流式分选操作步骤
巨噬细胞流式分选是一种基于细胞表面标记物的分选技术，可以将巨噬细胞从混合细胞群中纯化出来。
下面是巨噬细胞流式分选的操作步骤：
1. 细胞采集：采用适当的方法采集需要分选的细胞，如胎牛血清（FBS）激活巨噬细胞、巨噬细胞培养物中的巨噬细胞等。
2. 细胞标记：使用巨噬细胞特异性表面标记物（如CD11b）进行标记。
3. 细胞分选：将标记后的细胞通过流式细胞仪进行分选，根据标记物的特异性将巨噬细胞从混合细胞群中纯化出来。
4. 细胞收集：将分选出的巨噬细胞收集下来，经过后续处理（如培养、实验等）。
总之，巨噬细胞流式分选是一种高效、快速、准确的巨噬细胞分选方法，适用于各种巨噬细胞研究。
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