血球计数板的使用

血球计数板的使用
h
1
①血球计数板的原理和构造 ②方法与步骤
h
2
①血球计数板的原理和构造
Ⅰ构造 血球计数板是一种专门用于计算较大单细
胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻 片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下 凹的槽，构成三个平台。
h
3
h
4
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔 为两半，每半边上面刻有一个方格网。方 格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一 个大方格为计数室。这一大方格的长和宽 各为1mm，深度为0.1mm，其容积为 0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数 板。
h
29
如果规格为25格×16格的计数板统计计数池中央 大方格内四角及中央中格内(即80个小方格)的单 胞藻数，并记录。
计数时，小心移动载物台，从上到下，由左及右 又由右及左依次计数各小格内的细胞数。一般可 采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则 处理。凡压方格的上线和左线的细胞，统一算此 方格内的细胞，而压方格的下线和右线的细胞， 统一不算此方格内的细胞。
h
30
h
31
如果一个小方格内单胞藻过多，难以数清，应当 对培养液进行稀释以便于单胞藻的计数。
具体方法是：摇匀试管，取1mL单胞藻培养液， 加入成倍的无菌水（消毒海水）稀释，稀释n倍后， 再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。 以每小方格内含有4—5个单胞藻细胞为宜。特别 是在培养后期的样液需要稀释后计数。
12
计数一个样品要从两个计数室中计得的平 均数值来计算，
对每个样品计数三次，再取其平均值。
N1=(n1-1+n1-2)/2 N2=(n2-1+n2-2)/2 N3=(n3-1+n3-2)/2
N=(N1+N2+N3) /3
h
13
N1=(n1-1+n1-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的平 均数值来计算。
N小格平均每小格内的细胞数=N/(5×16) 设每毫升中有x个单胞藻
x个 1cm3
N小格×16×25个 (1mm × 1mm × 0.1mm÷1000)cm3
x个 = N/(5×16) ×16×25个
1cm3
(1mm × 1mm × 0.1mm÷1000)cm3
x = N/(5×16) ×16×25个× 1cm3 × 1000÷ (1mm × 1mm × 0.1mm)
=50000 N
h
18
②用血球计数板对藻细胞进行计数 的方法与步骤：
ⅰ检查计数室 先用显微镜对计数板的计数室进行镜检是否干净。
若有污物，则需用清水清洗，吹干，用擦镜纸擦 拭干净。
盖玻片使用前浸在75%的酒精溶液中，使用时用 眼科镊取出，放在滤纸上吸水，用擦镜纸擦拭干 净。
将盖有盖玻片的计数板放在显微镜的载物台上， 调焦，用低倍镜找到计数区检查是否干净。
h
8
把中央大方格的中方格再分 成小方格的分割线并不只 局限于中央大方格内，而 是一直延伸到正方形凹槽 的边缘，所以在其延长线 上的4个大方格中分割线 显得密集。
h
9
h
10
25×16型的计数板一般 计数四个角和中央的 五个中方格（5×16=80 个小方格）的细胞数。
h
11
Ⅱ血球计数板的原理
h
h
21
将计数板连同盖玻片一起取下，用细口胶 头滴管吸取稀释后的摇匀的单胞藻悬液， 迅速将吸管尖靠在计数池上盖玻片的边缘， 略挤胶头滴管让培养液利用液体的表面张 力，自行渗入。
h
22
h
23
h
24
h
25
h
26
h
27
样品流入的量以充满盖玻片下面的空间为 宜，盖玻片下面不能有气泡存在，否则会 造成计数不准。多余的藻液会流入H形的凹 沟中。
h
32
计数一个样品要从两个计数室中计得的平 均数值来计算，将计数板及盖玻片用流水 冲洗，吹干，擦净，重复上述步骤，对每 个样品计数三次，再取其平均值。
h
33
N1=(n1-1+n1-2)/2
h
19
从试管中吸出培养液Baidu Nhomakorabea行计数之前，要将 试管轻轻震荡几下，这样使单胞藻分布均 匀，防止单胞藻凝聚沉淀，提高计数的代 表性和准确性，求得的培养液中的单胞藻 数量误差小。
h
20
注意，当藻液浓度高时，为了便于计数，可 将藻液用消毒海水稀释后进行计数。
在计数有鞭毛或有运动性的藻类时，可先吸 取定量的藻液，滴加鲁哥氏碘液（1000毫升 藻类用15毫升的鲁哥氏液固定）进行固定， 然后添加消毒海水稀释后计数。
n1-1
n1-2
N1=(n1-1+n1-2)/2
h
14
N2=(n2-1+n2-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的平 均数值来计算。
n2-1
n2-2
N2=(n2-1+n2-2)/2
h
15
N3=(n3-1+n3-2)/2
计数一个样品要从两个计数室中计得的平 均数值来计算。
n3-1
n3-2
N3=(n3-1+n3-2)/2
h
16
将计数板及盖玻片用流水冲洗，擦干，重 复上述步骤，对每个样品可计数三次，再 取其平均值。
N1=(n1-1+n1-2)/2 N2=(n2-1+n2-2)/2 N3=(n3-1+n3-2)/2
N=(N1+N2+N3) /3
h
17
将同一样品的计数结果，取平均值。代入下式， 求算单胞藻的密度：
h
28
样品添加到计数池后，静置5min。使藻细胞沉降， 否则，细胞呈悬浮状态，不处于同一平面上，给 计数造成不便。待单胞藻全部沉降到计数室底部 后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下 找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察，仔 细调焦，同时调节光栅，必要时调节光源和反光 镜角度，直至细胞和纵横格线都清楚。计数并记 录。
h
5
1mm×1mm×0.1mm=0.1mm3
20mm×20mm×0.25mm=100mm3
h
6
25×16型的计数板
计数池中央的大格又 被双线划分成25个中 格，其中的每个中格 又被单线划分成16个 小格，中央大方格由 25×16=400个小方格 组成。
h
7
在血球计数板上，刻 有一些符号和数字(见 图一)，其含义是： XB-K-25为计数板的型 号和规格，表示此计 数板分25个中格； 0.10mm为盖上盖玻片 后计数室的高； 1/400mm2表示计数室 面积是1mm2，分400 个小格，每小格面积 是1/400 mm2。