细胞培养实验室操作准则2014.10版
细胞培养室操作守则
精心整理细胞培育室操作规范1、本室是进行各样细胞培育的（准）净化级实验室，全部进入细胞培育实验室的人员都一定恪守本室的规章制度，接受本室管理人员的管理。
2、按预定制度使用细胞室。
非实验人员未经赞同不得进入细胞室。
3、按培育室的要求洗手、换衣、换拖鞋，将衣服寄存在指定地址。
实验用品尽量一次带入，出入细胞室请顺手关门。
禁止将与实验没关的易燃、易爆及其余有毒有害物件带入细胞室；在本细胞室内不得进行病原性微生物等其余易污染物的操作。
4、培育实验所用试剂专人专用，以防备交错污染。
5、使用仪器前仔细阅读“操作规程” ，并严格按“操作规程”进行操作，未经管理者赞同不得私自改正仪器程序。
使用后仪器恢还原位，并填写“使用状况记录”。
如仪器出现故障，请实时通知实验室老师。
因操作不妥导至仪器、设施、实验器械的破坏，追查实验者责任，并按学校相关规定补偿。
6、未经实验者赞同，不得翻看其余实验者的细胞。
不按规则进行操作造成别人细胞损失，需酌情补偿。
7、每次实验结束后，应实时清理桌面、台面、地面，整理好用过的实验器械。
察看培育箱中 CO2 的浓度、温度、供气压力等参数，待正常后方可走开。
实验区用紫外线照耀 30 分钟，并做好记录。
将荒弃物件带出操作间。
8、爱惜实验室公共财物。
节俭使用惯例实验耗材、节俭用电。
注意防火防盗，根绝全部可能致使火灾的行为。
9、进入细胞室的实验人员一定恪守洁净卫生值日安排。
禁止任意频频出入培育室。
每周做全面洁净消毒一次，超净台上滤网需每个月冲洗一次。
精心整理精心整理10、禁止在培育室抽烟、进餐，实验过程中禁止吵闹、闲谈。
11、本制度自宣布之日起奏效，解说权归实验室。
精心整理。
细胞培养操作规范
细胞传代方法： 传代指针： 观察培养基颜色：当培养基的颜色由红色渐渐褪成橙黄色，颜色清亮，无杂质，无浑浊 显微镜观察细胞生长状态：细胞生长状态良好，铺满培养瓶80%以上，细胞透亮，形态清晰，间隙无杂质，确认无细菌真菌污染
传代方法：
将新的培养皿、吸管、废液缸放入工作台开启细胞培养房及工作台紫外消毒20分钟， 开启恒温水浴箱，培养液、消化液预热 关毕紫外灯，开灯，通气，点燃酒精灯 吸弃培养基，PBS清洗两次 加入2ml消化液晃动培养瓶使消化液覆盖整个细胞界面后吸弃培养液 肉眼观察细胞培养瓶底部出现一层云雾状，轻轻敲打底部有块状物脱落，显微镜下观察看到细胞间隙变大，细胞回缩变圆少量漂浮后加入10ml含血清培养基终止消化，吹打管吹打数次 将细胞悬液吸至离心管，1000rpm离心5分钟 吸弃上清，加入PBS吹打混匀， 1000rpm再次离心5分钟 吸弃上清，加入新鲜培养基，吹打混匀，按比例接种到细胞培养瓶
细胞消化时间的控制：Leabharlann 细胞冻存：胰酶消化
细胞计数
贰
壹
叁
细胞计数
细胞计数板计数室构造 数红色边框标记的四个方格内的细胞总数（如有压线则计上不计下，计左不计右） 细胞数/ml=（4个大方格细胞总数/4）×104×稀释倍数
四、细胞培养注意事项
实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射20-30分钟灭菌，以75 %酒精 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以75 %酒精擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作
细胞培养室操作指南
细胞培养室操作指南操作前的准备在进入细胞培养室之前，请做好以下准备工作：1. 穿戴适当的实验室衣物，包括实验服、手套和口罩。
2. 确保细胞培养室的工作台面、仪器和设备已经清洁干净。
3. 检查培养基、细胞培养物和其他试剂的质量和数量，确保充足供应以及正确的储存条件。
4. 准备好所需的实验室用品和器具，如离心机、培养皿、培养瓶等。
操作步骤1. 进入细胞培养室后，先进行必要的消毒。
使用合适的消毒剂擦拭工作台面和仪器设备，确保无菌环境。
2. 打开细胞培养室的通风系统，保持室内空气流通。
3. 对培养皿和培养瓶进行预处理。
使用稳定的手法将培养皿倒置于工作台上，滴入适量的无菌培养基，避免气泡产生，并确保密封良好。
4. 将培养皿和培养瓶放入培养箱中，并设置适当的温度和湿度。
5. 操作前，确保用于细胞培养的仪器和器具已经经过严格的清洁和消毒，以防止污染细胞培养物。
6. 用适当的实验室方法取得需要培养的细胞，并按照实验要求进行处理和培养。
7. 在细胞培养的过程中，定期检查细胞的生长和状态，并根据需要进行细胞传代或其他处理。
8. 在操作结束后，将实验室用品和培养物妥善清洁和处理。
将使用过的培养皿和培养瓶放入含有漂白剂的计量瓶中进行消毒，确保无菌。
注意事项1. 在操作过程中，尽量减少对细胞培养物的污染和扰动，以维持细胞的健康生长。
2. 每次操作前，检查培养基、培养皿和培养瓶的有效日期和质量，确保使用的试剂和设备符合要求。
3. 严格遵守实验室安全操作规范，避免意外事故的发生。
4. 当存在不确定的实验结果或问题时，及时寻求上级或相关专家的意见和帮助。
5. 保持细胞培养室的整洁和有序，定期进行消毒和清理，确保实验环境的良好状态。
以上是细胞培养室操作的基本指南，请在进行任何实验前仔细阅读并理解。
如有需要，随时更新和补充这份操作指南，并及时将变更通知相关人员。
祝实验顺利！。
细胞培养室安全和操作守则
细胞培养室安全和操作守则细胞培养室不同于其他实验室～要求在无菌条件下进行实验。
所以每位做细胞培养的同人都要严格无菌操作～保持无微生物污染～以便实验顺利进行。
细胞培养室进入规定1、细胞培养室是进行各种细胞培养的净化级实验室～所有进入实验室的人员都必须遵守实验室有关的规章制度～接受实验室管理人员的管理。
非实验人员未经允许不得进入细胞室。
如有不符合实验室工作和生物安全要求的～实验室负责人和细胞室工作人员有权责令整改。
2、凡进入细胞培养室的人员要有严格的无菌操作概念～任何人员初次使用细胞室必须有本实验室人员陪同指导～待完全掌握操作规定之后方可独立操作。
3、进出细胞室必须立即随手关门～一般情况下不允许两扇门同时打开～即将前一道门关闭后方可打开后一道门～尤其多人进入时特别注意。
实验人员进入细胞室进行实验操作须更换专用的实验服、鞋、帽、口罩等。
离开实验室前应在二更脱去手套～帽子～口罩～鞋等。
出细胞房后要洗手。
4、实验用品应尽量一次从传送窗带入～确保实验顺利完成。
5、实验人员在进行实验前必须熟悉实验内容、操作步骤及各类仪器的性能和操作方法～严格执行操作规程～并做好必要的安全防护。
细胞培养室使用规定1、实验前需预先打开超净台或生物安全柜～紫外线照射30分钟。
紫外开好后需开风机至少5min后方可上台操作。
操作台上的实验用品从左至右依次摆放～酒精灯居中,生物安全柜禁用酒精灯等带明火的物品,。
生物安全柜操作方法详见生物安全柜标准操作程序。
2、细胞室中培养基、胰酶、血清等均分装后单独使用～并对自己实验物品需做好标记～包括物品名称～分装人～分装时间～未经同意不得擅自使用他人物品～避免交叉污染。
不得擅自查看或取出他人培养的细胞或实验记录。
细胞室内移液枪为专用～严禁将移液枪等带离细胞室。
3、严禁将与实验无关的物品、易燃～易爆及其他有毒有害物品带入细胞室～4、实验过程中严禁喧哗～闲聊～反复进出细胞室。
禁止在培养室吸烟、进餐。
严禁带闲杂人等进入细胞室。
细胞培养室工作守则
细胞培养室工作守则一、入室基本规则1禁止私自带非本实验平台人员入室操作。
2.进细胞培养室必须穿专用工作衣（白大衣），换拖鞋或鞋套，不必需的物品勿携入室内。
3.严禁吸烟和饮食，保持安静和良好秩序，实验时要严肃认真。
4.当天要操作的使用者，实验开始前、结束后开操作间外紫外灯消毒细胞房15-30min;检查培养箱内水量是否足够；检查灭菌物品的储备情况，以便及时补充。
5.细胞培养室遵循预约原则。
预约时间和实际操作时间都要登记！备查！无预约者若要在他人预约时段内使用，需先征得预约者的同意，否则应无条件让出工作台，以免耽误他人实验。
6.试剂耗材都由实验人员自己准备，各自物品请写好名字，不能私自拿取他人试剂耗材或消毒物品，如紧急需要，则需征得本人同意后方可。
注：公用材料如枪头、离心管，配制消毒用75%的酒精，制作酒精棉球等遵从谁消耗谁补充，与人方便于己方便！耗材的使用秉持节约的原则，同一类耗材必须使用完才可以拆封新的耗材，同一类耗材快使用完的时候到徐老师处领取。
7.离开实验室前，脱去工作衣和拖鞋或鞋套。
若有垃圾堆积，请顺手扔掉, 更换垃圾袋。
关好水、电、门、窗，方可离开实验室。
8.定期1-2月清理冰箱里的个人物品。
9.新进细胞培养室进行实验的老师或同学，由负责该新进人员的指导教师进行细胞培养培训。
二、培养箱使用规则1从培养箱取放物品前"用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。
注：培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。
长时间敞开或频繁开关培养箱,容易造成污染。
10培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒瓶口位置，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。
3.2-3人共用一层培养箱，按预定位置摆放培养器皿，方便查找，以免长时间敞开培养箱。
4.普通培养中的细胞，若非实验需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。
注：频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。
细胞培养室操作指南
细胞培养室操作指南---1. 引言细胞培养室是进行细胞培养的重要场所，严格的操作规范可以确保细胞培养的成功和细胞的活力。
本文档旨在提供明确的操作指南，以确保细胞培养室的操作规范和细胞培养的高质量。
2. 安全操作指南2.1 穿戴好实验室服进入细胞培养室前，必须穿戴好干净的实验室服，确保衣物无毛发、皮屑等污染物，并配戴好所需的防护用品：手套、口罩、护目镜等。
2.2 细胞培养室的清洁与消毒细胞培养室应保持干净整洁，并定期进行消毒。
在每次培养细胞前，使用酒精将培养台面、培养箱、培养器具等进行消毒处理，确保无细菌污染。
2.3 合理使用培养物料在细胞培养室内，严禁使用过期的培养物料和试剂。
新开封的培养物料和试剂，应经过质量控制检验，并按照使用要求进行存储。
3. 细胞培养操作指南3.1 培养细胞前的准备工作在培养细胞之前，确保准备充分，包括以下内容：- 清洁工作台和培养箱。
- 检查培养物料和培养基的储存情况。
- 保证所需的培养器具和设备可用。
3.2 细胞的传代和分离- 按照实验要求，选择适当的培养基和传代倍数。
- 去除细胞培养瓶的上清液，进行细胞的分离。
- 细胞的传代时，应注意传代倍数的控制，避免细胞老化和突变。
3.3 细胞的培养和存储- 将细胞分散均匀地添加到预先准备好的培养基中，根据要求添加适宜的生长因子和抗生素。
- 监测细胞的生长状态和数量，确保培养的成功。
- 细胞培养完成后，将培养瓶和细胞样品储存在恰当温度和湿度的培养箱中。
4. 实验结束后的注意事项- 清洗培养器具：将培养器具进行清洗和消毒处理，确保下一次使用时的无菌环境。
~- 处理废弃物：将用过的培养器具、培养材料等废弃物集中处理，按照实验室废物管理的要求进行处理。
~- 关闭培养箱、灭菌器等设备，确保实验室的安全和设备的长寿命。
---以上是细胞培养室操作指南的主要内容。
在操作过程中，务必保持专注和细心，按照操作规范进行操作，确保细胞培养的质量和实验室的安全。
细胞培养室使用规则.ppt
work in the hood
D. prevention of cellular crosscontamination
1. Eliminate aerosol or cell suspension aerosol
with 70% EtOH
C. Additional considerations for good sterile techniques
1. avoid f bottle, tubes, and flasks
2. never pour from a culture dish or flask 3. do not over fill culture flask or dish 4. never invert caps or lids 5. never work directly over an open
PBS, culture medium 3. Sterilization of equipments
• volumetric pipette • glass bottle for medium and reagent • disposable centrifuges 4. 75% ETOH
D-PBSA g/L
5.酒精燈使用須知 : (1)確定瓶外無酒精殘留或溢出 (2)確定內含酒精（95﹪）不超過 六分滿 (3)確定酒精燈無玻璃裂痕
6.瓦斯使用須知 :
(1)本生燈及瓦斯罐,在使用後記得關好
(2)瓦斯用盡時,需請陳小姐通知瓦斯公司
善後處理相關事宜： 1.將桌面清理乾淨，所有使用品歸位 2.操作台以70﹪酒精擦拭乾淨
细胞培养室操作规程
细胞培养室操作规程1. 引言在细胞培养室进行实验时，需要遵循一定的操作规程，以确保实验的顺利进行并保护实验人员和细胞的安全。
本文档旨在提供详细的细胞培养室操作规程。
2. 实验前准备在进行细胞培养室实验前，需要做好以下准备工作：- 穿戴实验室制定的个人防护装备，如实验服、手套、口罩和护目镜。
- 检查实验室设备和操作台的清洁度，并确保工作区域整洁无杂物。
- 准备实验所需的培养基、细胞培养物和实验器材，并进行必要的消毒处理。
- 检查培养器具和实验器材的完整性和干净程度。
3. 实验操作在进行细胞培养室实验时，需按照以下操作规程进行：- 打开细胞培养室的门时，先用消毒剂擦拭手部，然后使用洗手液洗手并彻底冲洗干净。
- 进入细胞培养室后，先进行操作台和培养器具的消毒处理，使用消毒剂彻底擦拭工作面和器具表面。
- 进行各项实验操作前，务必佩戴好手套，勿将裸露的手部接触培养物或实验器材。
- 操作过程中，避免发生剧烈动作和摇动，以防止细胞培养物的污染。
- 操作完成后，彻底清洁和消毒操作台、培养器具和实验器材，确保无残留。
4. 废弃物处理细胞培养室中产生的废弃物需按照以下要求进行处理：- 生物废弃物和污染物应放入专用的标有生物危险标志的中，严禁随意丢弃。
- 已消毒处理的实验器皿和培养器具应单独收集，放入装有消毒液的中浸泡，待处理完毕后进行干燥和垃圾分类处理。
5. 安全措施在细胞培养室实验中，请注意以下安全措施：- 不得在实验室内饮食、吸烟或使用化妆品。
- 注意保持良好的个人卫生，经常洗手、勤换手套，避免感染的交叉传播。
- 遇到实验室事故或异常情况时，应立即向负责人报告，并按照相关应急预案进行处理。
6. 总结细胞培养室操作规程的遵守对于实验的成功和细胞的安全至关重要。
在进行实验前准备、实验操作、废弃物处理和安全措施等方面都需要严格按照规程执行。
保持实验室整洁和个人卫生，是保证实验可靠性和重复性的基础。
细胞培养技术操作规范
细胞培养技术操作规范细胞培养是一项重要的实验技术，用于研究细胞的生物学特性及其在疾病治疗和药物开发中的应用。
为了确保实验结果的准确性和可重复性，需要遵循一系列的操作规范。
本文档旨在提供细胞培养技术的操作规范，以帮助研究人员顺利进行实验。
实验室准备- 实验室应保持干净整洁，设施设备应处于正常运行状态。
- 所有使用的试剂和培养物应检查保质期，并妥善存放在适当的温度下。
- 工作平台及工作台面应进行消毒处理，以防止细菌和真菌的污染。
- 所有使用的器械和培养罐应在使用前进行高压蒸汽灭菌。
细胞培养操作细胞培养器具的准备- 使用无菌操作进行所有操作，包括试剂和培养基的添加、培养器具的取用等。
- 使用带无菌手套的清洁无菌工作台进行操作。
- 细胞培养器具（如培养瓶、孔板等）在使用前应进行高压蒸汽灭菌处理，确保无菌状态。
培养基的准备- 准备培养基前应检查其成分和配比是否正确，确保培养基的质量。
- 使用无菌操作取出所需量的培养基，并避免直接接触细胞培养器具。
- 遵循培养基的配制方法和步骤，确保其与细胞的适应性。
细胞的分离与传代- 分离细胞时，使用胰酶等消化酶进行细胞的释放，并遵循操作步骤和浓度要求。
- 记录分离细胞的季度数，避免过度传代，以保持细胞的稳定性和特性。
- 合理设置细胞传代次数和细胞数量，避免细胞过早进入衰老状态。
培养条件和操作- 确保培养器具与细胞接触的表面无菌、干净，避免细胞污染或黏附的问题。
- 控制培养环境的温度、湿度和二氧化碳浓度，以满足不同类型细胞的生长要求。
- 定期更换培养基，确保细胞得到足够的营养物质和生长条件。
- 注意培养器具和试剂的使用方法和操作顺序，避免对细胞生长和健康产生负面影响。
细胞培养操作的记录与管理- 记录每次细胞培养的详细信息，包括培养时间、细胞密度、培养基配制方法等，以便于实验结果的追溯和分析。
- 管理细胞的库存，包括标识、记录和储存，以确保细胞的可追溯性和可重复性。
- 定期检查细胞的污染和变异情况，及时采取必要的措施防止实验结果的偏差。
生物实验室细胞培养和处理准则
生物实验室细胞培养和处理准则概述在生物实验室中，细胞培养和处理是进行生物学研究的重要一环。
为确保实验结果的准确性和可重复性，以及实验人员的安全，有必要遵循一定的细胞培养和处理准则。
本文将介绍生物实验室细胞培养和处理的基本原则和操作步骤。
1. 实验室准备在进行细胞培养和处理实验之前，实验室应准备好必要的设备和试剂。
应检查培养箱、显微镜、离心机等设备的工作状态，确保正常运转。
试剂应按照规定储存和标识，避免误用和交叉污染。
2. 消毒和清洗细胞培养和处理前，应对实验台面、仪器设备、培养皿和管道进行消毒和清洗。
常用的消毒方法包括使用75%酒精擦拭和高温高压灭菌。
清洗过程中要彻底清除污垢和残留的试剂，避免交叉污染。
3. 培养基的配制和储存培养基是细胞培养和处理的基础，应按照配方准确称取所需的试剂，并使用无菌技术进行制备。
制备好的培养基应在无菌条件下储存，避免接触空气和细菌，以保持其有效性。
4. 细胞种子的培养和传代细胞培养的首要任务是细胞种子的培养和传代。
在培养细胞种子之前，实验人员应佩戴好实验手套，并确保工作区域清洁无尘。
细胞种子应从液氮罐中快速取出，并迅速加入培养基，避免过多暴露在室温下。
培养细胞时应控制细胞密度，避免过度生长或过度稀释。
5. 细胞处理的操作技巧细胞处理是为了进行特定的实验目的而对细胞进行操作。
在进行细胞处理之前，应充分了解实验目的和操作步骤，并准备好所需的试剂和仪器。
操作时应注意操作技巧，避免对细胞产生损伤或污染。
6. 实验数据的记录和整理在进行细胞培养和处理实验时，应及时记录实验数据，包括培养时间、细胞密度、试剂用量等重要信息。
这样有助于实验结果的分析和复现。
实验数据应整理并安全储存，以便需要时能够方便查阅。
7. 实验后的处理实验结束后，应对实验区域进行清理和消毒，将实验产生的废液和废弃物妥善处理，避免对环境和他人的影响。
仪器设备应进行清洗和维护，以确保其正常运转和延长使用寿命。
结论细胞培养和处理在生物实验室中具有重要的地位，为生物学研究提供了重要的实验手段。
细胞生物室操作规范(参考Word)
细胞生物室操作规范细胞培养室是对各种动物组织细胞进行体外培养的实验室，具有良好的空气净化系统及多种大型精密仪器。
为保证实验室的正常工作秩序，请做到以下几点：1.每天工作前打开换气扇及紫外灯半小时，确保无菌环境。
2.进入操作间要换洁净的白大衣、拖鞋，清洗双手。
3.操作间地面每周以新洁尔灭清洁两次。
4.CO2培养箱每月以70%酒精清洁一次；注意CO2浓度，及时更换气瓶。
5.倒置、荧光显微镜及附设照相、图象采集分析系统的使用必须在专管人员指导下，严格按操作规程进行。
6.培养的细胞要定期观察及时换液，做好记录，遇有污染，彻底消毒。
7.操作完毕，认真清洁超净工作台。
8.离开实验室前关闭各水、电闸门。
各种培养用液的配制一、平衡盐溶液（BBS）的配制Hanks液1、按成分表所示，准确称量试剂；许多试剂是含有水分的化合物，与不含水分者的称量不同，应加以换算；2、将CaCl2先溶解于100ml水中；3、其它成分依次溶解于750ml水中（注意应待前一种试剂完全溶解后，再溶解下一种成）；4、用数滴5.6%的NaCO3溶液溶解酚红；5、将2缓慢倒入3中，并不时搅动，防止出现沉淀；6、将4加入5中；7、将6入容量瓶中，补足水充分混均；8、分装瓶中，8磅10分钟高压蒸气灭菌，4℃冰箱保存。
二、培养液的制备用干粉制备培养液的制备1、制备出去离子水（玻璃三蒸水）；2、加温水至15-30℃；3、把干粉加入水中，搅拌令之溶解；4、加NaHCO3；5、加水至最终量；6、必要时用1HCl或1N NaOH调节pH；因滤过时pH可能受影响；7、用0.22μm滤膜滤过消毒。
三、胰蛋白酶溶液的配制(1)将D-Han液高压消灭菌，用NaHCO3液调节PH至7．2左右；(2)称取胰蛋白酶粉末置烧杯中，先用少许消毒的盐溶液调成糊状，然后再补足盐溶液，搅拌混匀，量室温4小时或冰箱内过夜，并不时搅拌振荡；(3)次日先用滤纸粗滤，再进行过滤除菌，分装入瓶中，低温冰箱保存备用，常用浓度为0.25％或0.125%，胰蛋白酶溶液偏酸，使用前可调PH至7．2左右。
细胞培养操作规范课件
02
细胞培养操作流程
准备工作
细胞培养用品
准备适合细胞生长的培 养基、细胞培养瓶、细 胞培养板、离心管等。
无菌操作
在超净工作台中进行操 作，确保无菌环境。
细胞来源
确保细胞来源可靠，避 免使用污染或异常细胞
。
培养环境
调节室内温度和湿度， 保持适宜的二氧化碳浓
度。
细胞复苏
01
02
03
04
细胞凋亡的检测与分析
细胞凋亡的检测
利用荧光染色、电镜观察等技术手段 检测细胞凋亡的特征性形态学变化和 生化改变。
凋亡分析
分析凋亡细胞的形态学特征、数量分 布以及与细胞生长、分化等生物学过 程的关系，了解凋亡在细胞生命活动 中的作用。
THANKS
感谢观看
02
细胞培养技术广泛应用于生命科 学、医学、农业和工业等领域， 是研究细胞生物学和疾病机制的 重要手段。
细胞培养的类型
01
02
03
原代细胞培养
直接从生物体获取的细胞 进行培养。
传代细胞培养
将原代细胞进行传代培养 ，使其在体外持续生长和 分裂。
干细胞培养
对干细胞进行体外培养， 以维持其未分化状态或诱 导其分化为特定类型的细 胞。
注意药物处理对细胞的影响，控 制药物浓度和作用时间。
总结词：细胞死亡可能是由于培 养条件不适、药物处理或细胞交 叉污染等原因引起的。
检查培养基是否新鲜，确保没有 过期或污染。
对细胞进行鉴定和纯化，避免交 叉污染。
细胞形态异常
总结词：细胞形态异常 可能是由于细胞发生突 变、癌变或病毒感染等
原因引起的。
准备复苏液
将适量的培养基和胎牛血清混 合，加入细胞培养瓶中。
细胞培养室使用规则
細胞培養室使用規則
一、禁止在培養室內進食及飲水，違反規定者停用一個月。
二、做primary culture者不得進入。
三、液體廢棄物污染的的器皿必須當日清除。
四、離心機開啟中，必須掩上蓋子；使用完畢之後，必須打開蓋子晾乾；
違規兩次者，一個月不得使用培養室。
五、需要使用培養室者，必須先通知203室劉佩珊教授，以方便排入值日
生。
六、必須先找好放置細胞的空間，才可以在培養室進行操作。
七、請各實驗室將液態氮放在各實驗室的固定位置，不可隨意放置。
八、值日生的安排及工作項目：
1、所有使用人每兩星期輪一次，每次的工作內容如下列各項所述。
2、清洗water bath；除了有污染物嚴重的情形之外，water bath的內
部勿放藥物。
3、以室內拖把拖地一次。
4、隨時檢查桌面，必須保持清潔，且不可有螞蟻。
5、測N2一次，大筒若在32cm以下須添加。
6、培養室中培養箱的清理由各使用之實驗室負責，但由值日生通知
所有使用該培養箱得實驗室共同清理。
7、每兩天檢查一次垃圾，並須適時清理。
8、與下一位值日生交接完畢時需通知劉老師。
~9~。
细胞培养室操作规定
细胞培养室操作规定前言细胞培养室是进行细胞培养实验的专用空间，为了确保实验的顺利进行和实验人员的安全，我们制定了以下操作规定。
请所有使用细胞培养室的人员务必遵守。
操作规范1. 入室前准备- 进入细胞培养室前，必须穿上实验服，并戴上口罩和手套。
- 注意在进入细胞培养室前，消毒双手和工作台面。
- 携带必要实验用品和文具，准备好所有需要的材料和试剂。
- 检查冰箱和培养箱的温度是否符合要求。
2. 实验操作- 使用前，请核对细胞株的种类、数量和存储情况。
- 操作台面和设备必须保持干净整洁，随用随清理，避免交叉感染。
- 所有液体垃圾和废弃的培养物必须安全处理，避免污染环境。
- 禁止在细胞培养室内进行食物或饮料的食用和存放。
- 禁止抽烟、喷雾、喷香及其他不相干的活动。
- 注意细胞冻存的规范和操作要求，避免细胞资源的浪费。
- 操作结束后，及时进行消毒处理，彻底清洁操作台和设备。
3. 设备使用- 使用常用实验设备前，请先阅读相关操作手册，了解使用方法和安全注意事项。
- 使用计量器具时，必须准确读数和使用。
- 使用离心机时，遵循安全规范，确认好转速和离心时间，避免发生事故。
- 使用显微镜时，小心操作，避免损坏设备。
- 使用培养箱和CO2培养箱时，遵循设备使用说明书，注意温度、湿度等参数的设定。
4. 实验记录和文档管理- 在实验过程中，准确记录实验步骤、时间、材料和结果等数据。
- 所有实验数据必须进行备份，并妥善保存。
- 实验结束后，将实验数据整理并填写到实验记录表中。
- 所有文档和数据必须按照规定的分类和命名方式进行管理。
安全注意事项- 进入细胞培养室前，务必检查并确保实验服、口罩和手套的完整性。
- 操作台面上不得放置易燃、易爆和有毒的物质。
- 禁止随意更改培养箱和冰箱的温度设置。
- 使用培养箱时，注意插头的接触是否良好，避免电器故障。
- 实验结束后，切勿随意将存储液体倒入水槽。
备注以上操作规定适用于本实验室内的细胞培养室，旨在保障实验安全和实验品质。
细胞培养实验室操作准则2014.10版
细胞培养实验室操作准则任何首次准备开展细胞实验的人员必须首先认真阅读以下准则，然后在已经熟练掌握细胞培养操作技术人员的指导下开始进行细胞实验，并在以后的实验过程中严格遵守各项准则。
一、细胞实验准备1.进入细胞房前要换鞋，穿无菌服（干净实验工作服），戴手套，接触细胞前喷75%酒精消毒手套。
2.将所需实验用品：培养基（完全培养基、空白培养基）、胰酶（含ETTA）、枪头（1ml、200ul、10ul)、离心管，预先放置到超净工作台，打开紫外照射30min 后开始细胞实验。
3.观察细胞前，用75%酒精纱布擦拭显微镜镜头及台面，进行消毒后方可开始观察细胞。
4.观察细胞主要包括：细胞数量（汇合度）、形态、分布情况（是否均匀）、有无漂浮的死细胞和污染等，观察完及时放回培养箱。
（如图，汇合度约90%，分布均匀）5.每次开始细胞实验前，需关闭紫外照射，打开超净台风机及灯。
用含75%酒精的纱布擦拭超净工作台。
超净台内物品放置情况：左侧（各式枪头，及可常温放置的试剂如PBS等），右侧（5ml枪头及镊子），废弃瓶位于右上角，尽可能远离操作区域，正前方为枪和酒精灯，培养基及胰酶放置左侧便于取用。
6.超净台在使用前后，都需用含75%酒精的纱布擦拭台面至纱布上看不到明显脏物为止，每天操作后废液缸需清洗用紫外照射，此外，从外面拿进超净台的东西都要喷75%酒精消毒。
7、每周四需更换培养箱中高压过的超纯水，每周五对超净台（包括风机）、细胞培养房卫生进行打扫，每月对培养箱进行消毒清洗，确保细胞不受污染。
8、检查培养箱的CO2含量是否正常，如出现异常及时联系细胞平台相关负责人。
9、5mL枪头清洗高压的流程:(1)用洗洁精将枪头超声一遍（2）更换干净的自来水超声清洗3遍（3）用超纯水超声清洗1遍（4）将枪头捞出后再用超纯水荡洗3遍（5）放入烘干箱烘干（6）装在铁盒中，注意枪头放置顺序一致，放入高压锅，选择橡胶类（7）高压后放入烘干箱烘干后方可拿入细胞房使用1ml、200ul、10ul装入枪盒后放入高压锅高压烘干后方可拿入细胞房使用二、细胞传代1.细胞传代前要观察细胞，细胞汇合度达到80%-90%时可以进行传代。
细胞培养操作步骤
细胞培养操作规范一、目的：规范质控细胞复苏、传代和冻存操作。
二、材料和试剂：1640培养基，DMEM培养基，无菌磷酸盐缓冲液，0.25%-Trypsin-EDTA，胎牛血清。
以上试剂使用前37℃水浴锅复温。
三、操作步骤3.1复苏3.1.1.把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。
液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
3.1.2.把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），800-1000转离心3-5分钟。
3.1.3.把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。
吸到装有5ml培养基的6cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。
3.1.4.标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。
3.1.5.2天换一次培养基。
第二天观察细胞状态（死细胞，贴壁状态），必要时更换培养基。
6cm皿加6ml左右可以培养2天，3ml左右1天。
3.2换液3.2.1倒掉培养液，剩余部分用移液枪贴着培养皿壁吸。
3.2.2加入pbs2ml清洗培养皿后倒掉，吸掉多余pbs。
3.2.3加入培养基放入二氧化碳培养箱培养。
3.2.4悬浮培养换液：将原培养瓶竖起，在30min内，若细胞沉于瓶底，可用吸管轻轻吸取一半上清弃去，再加入等量的新鲜培养基。
若细胞不能沉于瓶底，可吸出细胞悬液，采用低速离心（800-1000rpm，5min），弃去一半上清加入等量的新鲜培养基，混匀再转入原瓶继续培养。
各细胞所用培养基：PC-3,SK-N-BE(2):DMEM;PC-9,Jurket：1640.3.3传代3.3.1.培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
3.3.2.把原有培养基吸掉。
3.3.3.加适当的胰蛋白酶（GIBCO0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液）（能覆盖细胞就行），消化1-2分钟(根据不同细胞：PC9:3min左右，PC3和SKNBE(2)1min左右)。
【高中生物】高中生物实验：细胞培养
【高中生物】高中生物实验：细胞培养高中生物实验：细胞培养1.玻璃液体和玻璃培育瓶的消毒:1)高压蒸汽杀菌15分钟以上;2)干活煮消毒140度2小时以上;2.无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净,紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上;3.培养基(ph7.2)和血清酿制不好后必须搞无菌试验:将血清按10%重新加入培养基内,用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶挑全然培养基5-10ml复置培育箱内培育2-3天,肉眼见并无混浊或结晶等异物.灌装后置-20度留存;4.消化液(ph7.8)或其它加入液,应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌,分装成支置-20度保存;5.各种炒作娴囊禾甯次率为庇ρ咭”辣诨?否则有的液体(特别就是培养基)难产生结晶.6.培养箱应先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外线的应照射1小时以上,如有高温灭菌的应按程序来菌).至少每月一次.7.步入操作方式时应特别注意先冲洗双手及手腕,然后用75%酒精冲洗,操作方式时特别注意无菌台内空间层次.手及物品不要在曝露的瓶口上方往来,如果数量较多,培育瓶应当放到与酒精灯平行地方易于操作方式,瓶与瓶之间应当相距一定的距离,开瓶(砌)时应先用75%酒精反反复复冲洗或用灯火烧,额滴后应用领域灯先火烧口,然后烧盖.用瘤果同样操作方式.整个操作过程尽量在无菌台靠里面一点.复苏:1.应当严格遵守快闷快融的原则.先将水温锅调至37-37.5度,抽出冻存的细胞快速放进后交细胞面浸至水面以下不断晃动至融化.2.在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内,约5ml左右,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞,置培养并内轻轻摇晃,使细胞均匀后置培养箱内培养.传代:1.贴壁细胞:对于贴壁细胞应当先吸(好像)天下培养基,喷的越整洁越不好,以免中和后重新加入的消化液,并使强度弱化.50ml培育瓶重新加入消化液约0.6ml,按此比例展开消化,(根据酿制强度经验),摇晃并使消化液砌光滑复置37度培养箱约2分钟,镜四围细胞膨胀变圆或少数开裂后,轻轻振动瓶底并使细胞全部开裂,重新加入2-3ml全然培养基后,轻轻王繇,并使细胞基本成单个漂浮,然后分后复置其它无菌培育瓶内,重新加入全然培养基后稳步培育或实验.2.悬浮细胞:通常传代可以轻易将细胞原液分后复置其它培育瓶内,重新加入全然培养基稳步培育,例如必须高浓度可以先Vergt500rpm,5min后重新加入全然培养基,轻轻吹匀后,分后复置其它培育瓶内重新加入全然培养基稳步培育.。
细胞培养
细胞培养无菌操作基本技术1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。
实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。
容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。
操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。
5. 定期检测下列项目：a. CO2 钢瓶之CO2 压力b. CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。
c. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。
实验用品1. 种类︰a. 细胞培养实验用品均为无菌，除了玻璃容器与pasteur pipet 外，其它均为塑料无菌制品。
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细胞培养实验室操作准则任何首次准备开展细胞实验的人员必须首先认真阅读以下准则，然后在已经熟练掌握细胞培养操作技术人员的指导下开始进行细胞实验，并在以后的实验过程中严格遵守各项准则。
一、细胞实验准备1.进入细胞房前要换鞋，穿无菌服（干净实验工作服），戴手套，接触细胞前喷75%酒精消毒手套。
2.将所需实验用品：培养基（完全培养基、空白培养基）、胰酶（含ETTA）、枪头（1ml、200ul、10ul)、离心管，预先放置到超净工作台，打开紫外照射30min 后开始细胞实验。
3.观察细胞前，用75%酒精纱布擦拭显微镜镜头及台面，进行消毒后方可开始观察细胞。
4.观察细胞主要包括：细胞数量（汇合度）、形态、分布情况（是否均匀）、有无漂浮的死细胞和污染等，观察完及时放回培养箱。
（如图，汇合度约90%，分布均匀）5.每次开始细胞实验前，需关闭紫外照射，打开超净台风机及灯。
用含75%酒精的纱布擦拭超净工作台。
超净台物品放置情况：左侧（各式枪头，及可常温放置的试剂如PBS等），右侧（5ml枪头及镊子），废弃瓶位于右上角，尽可能远离操作区域，正前方为枪和酒精灯，培养基及胰酶放置左侧便于取用。
6.超净台在使用前后，都需用含75%酒精的纱布擦拭台面至纱布上看不到明显脏物为止，每天操作后废液缸需清洗用紫外照射，此外，从外面拿进超净台的东西都要喷75%酒精消毒。
7、每周四需更换培养箱中高压过的超纯水，每周五对超净台（包括风机）、细胞培养房卫生进行打扫，每月对培养箱进行消毒清洗，确保细胞不受污染。
8、检查培养箱的CO2含量是否正常，如出现异常及时联系细胞平台相关负责人。
9、5mL枪头清洗高压的流程:(1)用洗洁精将枪头超声一遍（2）更换干净的自来水超声清洗3遍（3）用超纯水超声清洗1遍（4）将枪头捞出后再用超纯水荡洗3遍（5）放入烘干箱烘干（6）装在铁盒中，注意枪头放置顺序一致，放入高压锅，选择橡胶类（7）高压后放入烘干箱烘干后方可拿入细胞房使用1ml、200ul、10ul装入枪盒后放入高压锅高压烘干后方可拿入细胞房使用二、细胞传代1.细胞传代前要观察细胞，细胞汇合度达到80%-90%时可以进行传代。
图片2.以25cm2培养瓶为例：打开培养瓶瓶盖，将盖子地面朝下放在超净台台面上，然后将培养瓶倾斜，用量程5ml的枪将旧培养基吸走，然后用量程1ml枪加1ml 空白培养基轻轻摇匀清洗，用5ml枪将清洗的培养基吸走。
注：75cm2加3ml空白培养基清洗3.加入胰酶（含EDTA）500ul；然后轻轻摇晃培养瓶，注意让所有细胞都要接触到胰酶，放入37度培养箱消化。
注：75㎡大瓶加1500ul胰酶、6孔板加300ul 胰酶、12孔板加200ul胰酶4.消化时间长短根据不同细胞有不同选择，镜下观察大部分细胞变圆，见大部分细胞脱落即可终止消化。
5.25cm2培养瓶加入2ml完全培养基终止消化。
注：75cm2培养瓶加5ml完全培养基终止消化、6孔板加1.5ml完全培养基终止消化、12孔板加1ml完全培养基终止消化。
6.用5ml枪头轻轻吹打细胞后，观察底部大部分细胞已脱落，然后倾斜培养瓶，将细胞混悬液转移到15ml离心管，800r/min条件下离心3min。
7.离心时，准备新的培养瓶，标记好细胞的名称、日期、代数。
8.离心结束后，弃上清液。
缓缓沿壁加入5ml新鲜的完全培养基，计数（方法参见后面）。
9.重悬细胞，用量程5ml枪，枪打到第一档，深入管底部，轻轻吸取离心管底部的整个沉淀的细胞团和培养基，然后沿管壁缓慢匀速打下，枪头随着液面的的上升而逐渐上提，这样可避免产生气泡。
按此方法反复几次，待细胞混匀后，吸取细胞混悬液，加入新培养瓶，按所需比例进行传代即可。
细胞传代的比例是根据所需细胞的数量以及时间来决定。
如需急用可用低的比例（1:2,1:3）传代，并每天换液，如时间充裕，不用时可适量加大传代比例（1:4,1:5），并3天换液，减少细胞的代数，暂时不用细胞只需留一小瓶培养即可。
10.进行十字型摇匀，有序放入培养箱中。
注意事项：1、需要进行细胞实验前，合理扩大培养，尽量安排在同一代数情况下做实验。
2、在进行细胞实验时，不可同时处理两种及以上细胞，避免交叉污染。
三、细胞计数：（计数前操作与传代相同）1、消化后的细胞充分混匀后，用10ul枪吸取l0ul细胞混悬液，再吸取10ul 台盼蓝，在1.5ml离心管中将两者混和均匀后，将20ul混合液注入计数板。
2、打开计数器，确认红色指示灯亮起，蓝色指示灯在第几格，一般为第一格，旋转选择正确区域。
3、打开计数软件“count star”,标明日期及细胞名称，选择比例1:1，细胞类型为，注意观察细胞分布，如果不均匀，应重新混匀后计数。
4、记录容：细胞总数，死细胞数，细胞活力（一般活力在95%以上）及活细胞数。
（活细胞数用于计算接板所需的细胞量）5、将计数板及时从count star取出，关闭软件，计数完成。
四、细胞接种：1、细胞计数完后，正确计算所需的细胞量和培养基的量，取一洁净的皿，将细胞混悬液和完全培养基分别加入皿。
2、混匀：先用5ml枪混匀，然后取排枪混匀后，先加一孔到96孔板中，去镜下观察分布是否均匀，如若不均匀需再次混匀，确保均匀后再加入。
避免产生气泡，如有少许气泡可用10ul枪头戳破。
每次吸取液体后需观察高度是否一致和准确。
3、对于接板的细胞，96孔板可先静置一会再放入培养箱，避免摇动，以免细胞集中在中央。
例如：需接一块96孔板，细胞密度为0.5*105，细胞计数----活细胞数为5*105个/ml需稀释的倍数为5*105除以0.5*105等于10倍，一块96孔板需要12ml，故需细胞悬液的体积为12ml除以稀释位数10等于1.2ml，其余的量用完全培养基补足。
注意事项：无论是接种在6孔板、12孔板、24孔板和96孔，培养皿或者培养瓶中，都需要先加入一孔、一个培养皿或一个培养瓶在镜下观察细胞悬液分布是否均匀，若发现细胞有抱团、成束现象需重新混匀后方可接种。
附不同板底面积五、细胞冻存：1、订购新细胞之前需查阅相关的文献，选择合适的细胞，并仔细阅读说明书（培养的条件包括培养基等），准备好细胞培养所需的相关试剂及耗材。
1、买来后传一个25cm2小瓶，记为第一代---P0，若细胞状态不好可每天换液，长满后1:3传3个小瓶，记为第一代P1，然后根据细胞的生长速度长满后按1:6传6个大瓶，记为P2，保种5大瓶，另一大瓶可开始用于实验，以此类推，详细记录细胞的代数。
冻存时写上细胞名称、冻存日期及细胞的代数。
2、细胞消化离心后，去掉上清液，快速加入冻存液，充分混匀后装入冻存管。
3、一般一瓶75cm2的瓶子可冻存3-4小管，标号细胞名称，冻存日期和细胞代数，用封口膜封口，放入程序性降温盒置于-80℃冰箱过夜，第二天置于液氮中保存。
4、放入液氮时，注意放入正确的位置，记录好冻存细胞的位置，顺序按时间先后排，时间前的放外面。
六、细胞复1、复前准备：将所需物品放入超净台，打开紫外照射约半小时，75%酒精擦拭台面。
2、准备15ml离心管，加入5ml培养基。
3、提前打开37℃水浴锅预热，从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其全部融化，更换新手套。
4、用75%酒精喷洒冻存管后，擦拭台面，打开盖子，1ml枪头吸出细胞悬液，加到含培养基的离心管，充分混匀；5、离心，800r，3min；6、弃去上清液，重悬细胞，加入完全培养基到25cm2的小瓶子，在显微镜下观察细胞状态，然后放入37℃培养箱静置培养；7、注意观察细胞状态，及时换液。
8、细胞复后，根据细胞的特性，按适当的比例传到75cm2的大瓶子，每天换液，长满后立即保种，并记录细胞的代数，细胞状态稳定后方可开始实验。
8、复后观察细胞如果发现一小瓶有很多细胞，立即传到大瓶子七、细胞加药1、细胞加药前需在镜下观察细胞形态和数量，根据具体实验对细胞覆盖率的要求不同。
一般药物作用24h是在细胞长到50%-60%时加药。
2、计算好所需配置的量，准备离心管，配药可采用两种方法：（1)配置最高浓度，再进行倍比稀释配成所需各浓度。
（2）分别配置所需的各种浓度。
配完药后注意要上下混匀！3、加药时沿孔板壁加，避免产生气泡，加完后注意检查有无气泡，小气泡需用小枪头捅破，以免影响药物的均匀分布。
4、加药后，立即放入培养箱。
例如：1、一块96孔板加药，复方熊胆粉(FF)储存液浓度为500mg/ml（PBS配置），我们需要配置成0、1.25、2.5、5mg/ml的工作液各1ml，采用倍比稀释法，准备4个5ml的离心管，在0、1.25和2.5mg/ml的离心管中分别加入1mlDMEM完全培养基，然后将500mg/ml的工作液稀释成最高浓度5mg/ml，然后过滤，加入2ml到5mg/ml的离心管中。
八、细胞污染处理混匀后加1ml0mg/ml 1.25mg/ml 2.5mg/ml 5mg/ml混匀后加1ml2ml(5mg/ml) 1mlDMEM 1mlDMEM1mlDMEM1.我们实验室一般较少细胞污染，细胞污染时多出现不明游动物体、底部有连片黄色斑点、出现絮状或毛线状的菌落等，常伴有明显不适气味。
2、一经发现细胞污染，立刻上报不得隐瞒。
马上将被污染细胞移出培养箱（不要开盖，防止细胞交叉污染），在细胞房外向瓶注入新洁尔灭，盖紧瓶口，扔进医疗垃圾桶。
3、将培养箱中的细胞，逐一在镜下观察是否已交叉污染，如发现已交叉污染做污染细胞处理，排除隐患后，将正常细胞移到另一培养箱中。
4、关闭污染培养箱的电源开关，将隔板取出，用新洁尔灭(1:1000-1:2000)擦拭，确保每个角落都擦到，后进行紫外照射2小时。
箱除用洁尔灭擦拭外，还需用75%酒精擦拭，确保每个角落都不能遗漏。
5、将水槽清洗干净后用75%酒精擦拭，用新高压的超纯水换掉原先的水。
6、细胞移回的一周，要细心观察是否污染的现象再次出现，一般污染为偶然事件，如再次出现就不是培养箱的问题，而是培养箱外部的问题如培养基、操作、外部带环境等。
十、常用试剂的配制及保存1、完全培养基的配置：空白培养基+1%双抗（Hyclone)+10%胎牛血清（目前使用的是Gibco灭菌过滤过的，配置时无需过滤）例如：500ml的DMEM空白培养基+55mlFBS+5.5ml双抗空白培养基：4℃保存。
双抗：-20℃保存，100ml/瓶，15ml离心管分装，用前解冻，避免反复冻融。
FBS：-20℃保存，500ml/瓶，50ml离心管分装，用前常温解冻，避免反复冻融。
胰酶（不含EDTA）：-20℃保存，500ml/瓶，50ml离心管分装，用前常温解冻，避免反复冻融。
冻存液2、MTT的配置：250mgMTT粉末+50mlPBS配置成5mg/ml的储存液，超声至完全溶解，分装100小管，每管500ul，标记好浓度和日期，用锡箔纸包好后放在-20℃避光保存，用时根据所需的量取用，用后不再放回。