体内药物分析复习资料(精品文档)_共5页

6 请简述液液萃取法、蛋白沉淀法和固相萃取法的优缺点。

（1）液液萃取法：

优点：有选择性缺点：存在乳化现象

（2）蛋白沉淀法：

优点：快速简便缺点：待测物含量低时，不适用。

（3）固相萃取法：

优点：①引入干扰物质少②完全避免乳化的形成③在优化条件下，有较高的萃取率④可以用少量的样品⑤柱子可弃，无污染⑥使用的溶剂大多可以与水混合⑧易于自动化。

缺点：①价格昂贵②技术要求高③批与批之间有差异④柱子易阻塞，影响分离效果⑤样品需要经过预处理

7 液液提取法的原理、影响因素及提取技术。

原理：药物与干扰成分在互不相容的两相溶剂中的分配系数不同，选择性地提取生物基质中的药物。

影响因素：水相pH。提取溶剂种类、离子强度。

提取技术：通常在戴塞的试管中进行，多半进行一次提取，用酸碱回提时也只是一次，不考虑提取尽药物。

8 液固提取法的原理，固相萃取的主要步骤，及固相萃取的影响因素。

原理：将样品液通过合适的固相小柱，利用药物与杂质对固相小柱亲和力的差别，用适当溶剂冲洗、洗脱，使药物得到净化。

步骤：（1）固相柱选择（2）固相柱处理（3）样品液上样（4）分离净化（5）待测物洗脱。

提取率、选择性的影响因素：（1）流速（2）样品装载量（3）固相柱使用要求（4）样品上柱前的处理。

8 生物样品分析中，常用的分析方法及其适用测定对象。

①色谱分析法，对象：蛋白质，多肽等生物大分子类药物或内源性物质的检测与分析

②免疫分析法，对象：应用于临床TDM及生物大分子类物质的药物动力学及其相关研究

③生物学方法，对像：用于抗生素类药物的体内分析

9 需要进行哪些稳定性试验？

①短期室温稳定性②长期储存稳定性③冻融稳定性④储备液稳定性⑤待测溶液稳定性⑥样品处理过程稳定性

10 生物样品制备时应考虑哪些问题？

（1）药物的理化性质和存在形式（2）待测药物的浓度范围（3）药物测定的目的（4）选用的生物样品类型（5）样品预处理与分析技术的关系

12 生物样品选择的基本原则，常用的生物样品及其应用特点。

选择原则：

①必须能反映浓度与药效的关系②易于获得③便于处理④根据不同目的要求选取

常用生物样品及应用特点：

血液优点：较好体现药物浓度与治疗的关系

缺点：（1）损伤性取样，取样量有限制（2）需要专业人员操作

尿液优点：（1）非损伤性取样（2）药物浓度高（3）收集方便

缺点：（1）浓度变化大、与血药浓度相关性差（2）不易采集、保存（3）肾功不全、婴儿不宜用

唾液优点：（1）非损伤性取样（2）含蛋白浓度低，易处理（3）C S/C P较恒定时，可代替血样进行TDM及药物动力学研究

缺点：（1）适用药少（2）取样量变化大

毛发优点：（1）取样方便，可重复取样（2）通过测某特定代谢物区别滥用药、临床药（3）可获得长期用药信息

缺点：（1）预处理繁杂，干扰多（2）分析对象含量低，需精密仪器

14 体内药物分析方法的建立时需要通过哪些实验对色谱条件进行优化？

在进行分离条件筛选时，应考察生物基质中的内源性物质及代谢产物对分离与检测的干扰，步骤如下：

（1）空白溶剂试验—溶剂(方法特异性)（2）空白生物基质试验—(方法特异性)

（3）质控样品实验—方法效能指标（4）实际生物样品测试—代谢产物(方法特异性)

15 体内药物分析方法验证的内容。

效能指标

（1）特异性（专属性）—避免干扰（2）标准曲线（3）线性范围—覆盖所有浓度范围

（4）准确度—与实际状况相符（5）精密度—结果可重现（6）定量限—LLOQ和ULOQ

样品（1）稳定性—确保所有样品准确测定（2）提取回收率—确保准确度

16 生物样品的预处理技术有哪些？

A: 有机破坏法B: 除蛋白法C: 分离、纯化与浓集D: 缀合物水解E: 化学衍生化法

（1）血液：血清样品：室温下放置至少30min到1h，待凝结出血饼后，用细竹捧或玻璃棒轻轻

地剥去血饼，以2500～3000rpm离心5min使与血细胞分离，分取上清液即得；血浆样品：置含有抗凝剂

的试管中，混合，以2500～3000rpm离心5min使与血细胞分离，分取上清液即得；全血样品：置含有抗

凝剂的试管中混合，不离心。

（2）尿液：测定一定时间内（如8h、12h或24h等）尿液中药物的总量将排泄的尿液全部储在起来，

并记录其体积，取其一部分测定药物浓度，然后乘以尿量求得排泄总量。尿液采集后需立即测定或加

入适当的防腐剂保存。

（3）唾液：测量体积，静置分层后离心（3000rpm,5min)，取上清。放置后分为泡沫部分、透明部分、灰乳白色沉淀部分。

（4）组织：先将组织均匀化，脏器组织用生理盐水清洗后，滤纸吸干表面水分，称重，加入一定量

的水或生理盐水等，在匀浆机中匀浆，使被测药物溶解，之后可直接可取上清液，或用加入蛋白沉淀剂，加入一定量酸或碱，酶解法等方法萃取。

（5）毛发：清洗，反复清洗2～3次，再有机破坏，最后提取（甲醇、酸碱液、酶解）。

贮存：

（1）冰冻（短期保存：可置4℃冰箱中冷藏；长期保存：需置-20℃或更低温度冰柜中冷冻；临时来不及处理：先置冰屑或冰块中，然后再进行冷冻贮存；小体积分装贮存）。

去活性：

加防腐剂，改变生物样品pH。

2 简要说明直接沉淀法、液液萃取法、固相萃取法3种生物样品预处理技术的操作步骤、注意事项，并

比较三者。

答：（1）直接沉淀法：将一定量生物样品加蛋白沉淀剂，涡旋，离心，取上清夜进样。注意沉淀剂

体积、沉淀剂的选择及对药物稳定性的影响（氧化、对酸不稳定）。

液液萃取法：取一定量生物样品加有机提取溶剂，涡旋，离心，取有机层，氮气吹干，流动相溶样进样。注意⑴水相pH值，⑵提取溶剂选择，⑶有机相和水相的体积。

固相萃取法：将不同填料作为固定相装入微型小柱，当含有药物的生物样品溶液通过时，由于受到“吸