红细胞渗透脆性检测仪测试报告

红细胞渗透脆性检测仪测试报告

1 背景资料

人体红细胞约占血液总体积的40%，红细胞内含量最多的水分和血红蛋白分别占红细胞的65%和32%。红细胞在低渗盐溶液中，水分透过细胞膜进入细胞内，使红细胞逐渐胀大破裂，细胞内血红蛋白溢出即称为低渗性溶血。红细胞对低渗液溶血作用的抵抗能力称为红细胞的渗透脆性。地中海贫血、缺铁性贫血患者红细胞内血红蛋白生成减少，细胞体积较小，渗透脆性比正常人明显减小，因此红细胞渗透脆性在临床上常用于地中海贫血、缺铁性贫血等小细胞性贫血的辅助诊断指标。

2 试验原理

将血液样品与特定渗透压的低渗液混合，将未溶血红细胞作为构成该混合液浊度的主要颗粒，选用一种未溶红细胞对其有较高的吸光度，从红细胞溶出的游离血红蛋白等可溶性有色物质对其有较弱吸光度的特定波长光源作为测定光源，利用不透光法对混合液进行比浊分析，得出AD 值（AD 值与吸光度成反比），通过对AD 值与“金标准”结果的综合分析后确定临界区间。对于诊断系统的准确性评价，首先应知道受试者的真实情况，即哪些是对照组，哪些是病例组，划分它们的标准就是“金标准”。尽管“金标准”不需要十全十美，但是它们应比评价的诊断系统更可靠，且与评价的诊断系统无关。因此在本项目测试方案中，诊断系统为红细胞渗透脆性检测，“金标准”选用基因检测（即常说的PCR）。

3 试验设计及拟采用的方法

（1）预试验：先利用旧的血样做测试，以检测样机的各项性能是否符合测试要求。

（2）利用样机对“金标准”确诊的地贫血样与正常血样进行测试（每个血样重复≥3 次）。

（3）将测得的AD 值综合“金标准”的结果进行分析并确定临界区间。（允许有可接受限度的假阳性存在）

临界区间的确定：在确定的实验条件（测试步骤、温度、时间、试剂配制方法、试剂配制参数等）下，用我们规范的操作方法，对“金标准”确诊的地贫血样与正常血样进行大量检测和统计学分析，观察样机做出的AD 值分布规律是否符合“金标准”确诊的结果；正常血AD 值分布在一个特定区间，而地贫血AD 值分布在另一个特定区间，理论上可能存在个别离散点，但不影响判断，这两个区间的交界处即为临界区间。

（4）拿回来的血样尽量当天或下一天测试完毕。

（5）初步拟至少测定“金标准”确诊的地贫血样与正常血样各200 个，最好分多批次取回（因血样保存期有限，一次取回太多样本如无法完成测试会造成浪费）。

（6）血样要求：①抗凝全血（首选肝素抗凝血，其次EDTA-K2 或枸橼酸钠抗凝血）；

②尽量新鲜(理论上要求：2-5℃保存时间不宜超过24 小时、室温保存不宜超过8 小时)；③ 肉眼可见溶血的舍弃；④每个血样的血量尽量＞1ml。

4 实验材料

样机、台式电脑、比色皿、未知血样、1 号地贫血样、2 号地贫血样、3.5g/L NaCl -pbs 缓冲液（pH7.4）、一次性手套、医用橡皮胶手套。

5 测试步骤：

（1）将待检测的采血管放置于样机试管架中；

（2）样机自动运行，对血样进行检测并报告结果；

（3）对检测结果进行数据分析。

6 测试数据和曲线

（1）未知血样滴入浓度3.5g/L 盐水中，用波长为526nm 的发光二极管做光源时其对应光敏二极管的AD 值与时间的变化曲线（图1）。

图1

由图1 曲线分析可知未知血样滴入浓度3.5g/L 盐水中，用波长为526nm 的发光二极管做光源，由于红细胞破裂引起光敏二极管的AD 值慢慢增大，从放进测试架开始T90=15 秒，

AD 值增大了110（由于滴入的血液量存在着一定的差异，所以测量结果显示出来的重复性不大好）。

（2）1 号地贫血液滴入浓度3.5g/L 盐水中，用波长为526nm 的发光二极管做光源时其对应光敏二极管的AD 值与时间的变化曲线（图2）。

1 36 71 106141 176211 246281 316351

图2

由图2 曲线分析可知1 号地贫血液滴入浓度3.5g/L 盐水中，用波长为526nm 的发光二极管做光源，由于红细胞破裂引起光敏二极管的AD 值慢慢增大，从放进测试架开始T90=16 秒，AD 值增大了52。

（3）2 号地贫血液滴入浓度3.5g/L 盐水中，用波长为526nm 的发光二极管做光源时其对应光敏二极管的AD 值与时间的变化曲线（图3）。

图3

由图3 曲线分析可知2 号地贫血液滴入浓度3.5g/L 盐水中，用波长为526nm 的发光二极管做光源，由于红细胞破裂引起光敏二极管的AD 值慢慢增大，从放进测试架开始T90=13 秒，AD 值增大了65。

（4）未知血样滴入浓度3.5g/L 盐水中，用波长为940nm 的发光二极管做光源时其对应光敏二极管的AD 值与时间的变化曲线（图4）。

第1

次第

2次

第3

次第

4次

图4

由图4 曲线分析可知未知血样滴入浓度3.5g/L 盐水中，用波长为940nm 的发光二极管做光源，由于红细胞破裂引起光敏二极管的AD 值慢慢增大，从放进测试架开始T90=17 秒，AD 值增大了211。

（5）1 号地贫血液滴入浓度3.5g/L 盐水中，用波长为940nm 的发光二极管做光源时其对应光敏二极管的AD 值与时间的变化曲线（图5）。

图5

由图5 曲线分析可知未知血样滴入浓度3.5g/L 盐水中，用波长为940nm 的发光二极管做光源，由于红细胞破裂引起光敏二极管的AD 值慢慢增大，从放进测试架开始T90=20 秒，AD 值增大了100。

（6）2 号地贫血液滴入浓度3.5g/L 盐水中，用波长为940nm 的发光二极管做光源时进行了三次重复测试，其对应光敏二极管的AD 值与时间的变化曲线（图6）。