无机磷的测定
土壤无机磷形态实验方法
土壤无机磷形态测定药品配置：一、氯化铵溶液[c(NH4Cl)=1 mol/L]：53.5g氯化铵(NH4Cl，化学纯)溶于约800mL水中，稀释至1L。
二、NaHCO3-Na2S2O4: A试剂：0.11 mol/L Na2S2O4:称取19.14g Na2S2O4溶于800mL水中，转移至容量瓶后定容至1L。
B试剂：0.11 mol/L NaHCO3：称取9.24g NaHCO3 800mL水中，转移至容量瓶后定容至1L。
三、氢氧化钠溶液[c(NaOH)=1 mol/L]：40g氢氧化钠(NaOH，化学纯)溶于约800mL水中，稀释至1L。
四、饱和氯化钠（1mol/L）：58.5g氯化钠溶于1L水中，待溶解至饱和后过滤。
五、盐酸溶液[c(HCl)=0.5 mol/L]：用小量筒取浓盐酸16.7mL，加水稀释至400mL混匀即得。
六、2-4-二硝基酚试剂：取0.25g 2-4-二硝基酚（化学纯）溶解于100mL蒸馏水中即可。
此指示剂的变色点约为pH3，酸性时无色，碱性时呈黄色。
七、混酸配制：500mL的浓硫酸中加入50mL高氯酸（5:1）。
八、4mol/L氢氧化钠溶液：称取16gNaOH（化学纯）溶解于100mL蒸馏水中。
九、2mol/L(1/2H2SO4)溶液：吸取6mL浓硫酸，缓缓加入80mL水中，边加边搅拌，冷却后转移至100mL容量瓶并定容值刻度线。
十、钼睇抗储备液：A.浓硫酸(H2SO4) (分析纯)153 mL缓缓地倾人约400 mL蒸馏水中，搅拌、冷却。
称取10.0g钼酸铵(分析纯)溶于约60℃的300 mL水中，冷却。
将硫酸溶液缓缓滴人钼酸铵溶液中，冷却；B.称取0.5g酒石酸氧锑钾（K(SbO)C4H4O6），溶解于100mL 蒸馏水中。
再将上诉B液加入到A液中，最后加水定容至1L。
充分摇均，保存于棕色瓶子中，此为钼睇抗储备液。
钼锑抗显色剂:称1.5 g抗坏血酸(C6H8O6化学纯)，溶于100 ml上诉钼睇抗储备液中。
无机磷测试方法
无机磷的测试
钼锑分光光度法
1、原理
在酸性条件下，正磷酸盐与钼酸铵、酒石酸锑钾反应，生成磷钼杂多酸，被还原剂抗坏血酸还原，即变成蓝色络合物，既称磷钼蓝
2、适用范围：
检测量程：0.01mg/L—0.6mg/L
地面水，生活污水及日化、磷肥、农药等工业废水中磷酸盐的测定
3、仪器
（1）分光光度计
( 2 ) 消解仪
( 3 )50ml比色管
4、试剂
1）1+1 硫酸
( 2 ) 10%抗坏血酸：溶解10g抗坏血酸于蒸馏水中，稀释至100ml，贮存在棕色瓶中，需冷藏，如颜色变黄，需弃去重配
( 3 )钼酸盐溶液：溶解13g钼酸铵于100ml蒸馏水中，溶解0.35g酒石酸锑钾于100ml蒸馏水中；在搅拌下将钼酸铵溶液倒入300ml 1+1硫酸中，加入酒石酸锑钾溶液混匀，试剂贮存在棕色瓶中，储存两个月
（4）磷酸盐贮备液：称取早110℃干燥两小时的磷酸二氢钾0.217g溶于水，移入1000ml容量瓶中，加1+1硫酸5ml，用水稀释至标线，此溶液每毫升含50微克磷
( 5 ) 磷酸盐标准使用液：吸取10ml磷酸盐贮备液于250ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至标线，此溶液每毫升含2微克磷
5、实验步骤：
（1）取7支50ml的比色管，分别加入磷酸盐标准使用液.00ml,0.50m,1.00m 3.00m,5.00m.10.00ml，15.00ml，用蒸馏水稀释至50ml
（2）显色：向比色管中加入1ml抗坏血酸，30秒后加入2ml钼酸盐溶液混匀，放置15分钟
（3）测量：用10mm或30mm的比色皿，于波长700nm处以水为参比，测量吸光度
（4）用以上测得的数据，画出标准曲线
（5）水样测得的吸光度在标准曲线上找出对应的值。
无机磷的测定
□ 在酒石酸锑钾存在下，磷钼黄被抗坏血酸还原为磷钼
蓝，即在酒石酸锑钾存在下，加入抗坏血酸，使磷钼酸
中的一部分Mo6+离子被还原为Mo5+，生成一种叫做“钼蓝
”的物质（磷钼黄被还原为磷钼蓝）
(NH4)3[PMo12O40 ]
H3PO4•2Mo2O5 H3PO4•10MoO3•2Mo2O5
-----精品文档------
-----精品文档------
分析步骤
■ 绘制标准曲线 按以下步骤绘制标准曲线： ① 量取0 ml, 0.50 ml, 1.00 ml, 2.00 ml, 3.00 ml,
4.00 ml磷酸盐标准使用溶液于50ml带刻度具塞比色管中，加水 至50 ml标线，混匀。
② 各加1.0 ml混合溶液，1.0 ml抗坏血酸溶液，混匀。显 色5 min后，注入5 cm测定池中，以蒸馏水作参比，于882 nm波 长处测定其吸光值Ai。其中零浓度为标准空白吸光值A0。
-----精品文档------
谢谢观看
-----精品文档------
-----精含磷洗衣粉、洗涤剂） 食物废渣 人体排泄
■ 工厂和畜牧业废水 化工行业（造纸业、磷肥工业） 生化制药（生物制药企业） 金属表面处理 食品工业 ……
■ 降雪降雨
-----精品文档------
影响
■ 水体的富营养化 缓慢流动的湖泊、水库、内海等水域的生物营养成分（如 氮、磷等），因长期不断补给而过多积累，导致水草、藻 类等大量繁殖，引起水质恶化、鱼群死亡的现象。
所需试剂
■ 硫酸溶液 ■ 钼酸铵溶液 ■ 酒石酸锑钾溶液 ■ 混合溶液 ■ 抗坏血酸溶液 ■ 硫酸盐标准储备溶液 ■ 磷酸盐标准使用溶液
-----精品文档------
无机磷的测定钼蓝法原理
无机磷的测定钼蓝法原理
钼蓝法是一种常用于测定无机磷含量的方法，其原理如下：
1. 总磷转化为无机磷：样品中的总磷可以通过一系列化学反应转化为无机磷。
这些化学反应通常包括酸消解、氢氧化钠沉淀、盐酸回溶等步骤。
2. 磷酸与钼酸的反应：转化后的无机磷酸溶液与酸性钼酸反应生成磷酸钼酸盐。
这个反应会导致溶液颜色由无色变为淡黄色。
3. 颜色的测定：钼酸盐与磷酸盐形成的黄色化合物可以通过测定其吸光度来间接测定样品中无机磷的含量。
具体测定方法通常是使用分光光度计测量在700 nm波长处的吸光度。
通过比较待测样品的吸光度与标准曲线上的标准品吸光度的关系，可以确定出待测样品中无机磷的含量。
需要注意的是，钼蓝法是一种相对定性的测定方法，对于磷酸盐的混合物不太适用。
在测定时，需要注意样品的处理方法和反应条件的控制，以保证准确测定无机磷的含量。
实验十四血清无机磷的测定
实验十四血清无机磷的测定【原理】用三氯醋酸沉淀血清之蛋白质，于其无蛋白滤液中加入钼酸试剂后，与血清的无机磷结合生成磷钼酸，再用氯化亚锡将磷钼酸还原成蓝色的钼蓝，其蓝色之深浅与血清无机磷的含量成正比。
与同样处理的磷标准溶液比色后，通过计算即求出血清无机磷的含量。
【试剂】1、10%三氯醋酸。
2、磷标准溶液（每毫升0.8微克）。
3、钼酸试剂。
4、氯化亚锡溶液。
【操作】1、取小三角瓶一个，加入血清0.2ml，10%三氯醋酸9.8ml，混合后，静置5分钟，过2、取三支试管，标明1、2、3号，按前表操作。
3、将各管摇匀后，于室温中静置10分钟，以1号管内溶液作空白，在660nm波长进行比色，记录2、3号管内溶液的吸光度读数分别为A标、A样。
每100毫升血清中无机磷的含量（毫克）正常血清无机磷的含量为3~5毫克/100ml。
在甲状旁腺机能减退、维生素D缺乏病时，血清无机磷的含量可降低。
在肾功能不全时，可以使血清无机磷的含量升高。
故临床上测定血清无机磷含量，有助于有关疾病的诊断。
【试剂配法】1、钼酸试剂：称取5克钼酸铵，溶于10毫升蒸馏水内，再加15毫升浓硫酸，待冷却后，加蒸馏水至100毫升。
2、氯化亚锡溶液：称取2克氯化亚锡溶于5毫升浓盐酸中，保存于棕色瓶内，贮冰箱，此液称为氯化亚锡原液。
在每次实验前，取该溶液0.5毫升，用蒸馏水稀释至100毫升。
该液贮于冰箱，但只能应用2~3天。
3、无机磷标准液：（1毫升=0.8微克）称取2.194克纯KH2PO4溶于已盛有约100毫升蒸馏水的500毫升的量瓶中，加入10毫升5mol/L硫酸，摇匀，再用蒸馏水稀释至刻度，反复倒转几次摇匀。
此液为标准无机磷贮存液，每毫升含磷1毫克。
向标准无机磷贮存液中加入氯仿10毫升，用力振荡，使氯仿在贮存液中饱和，如此可防止因细菌的生长而使标准磷的含量下降，取该贮存液0.8毫升用蒸馏水稀释至1000毫升，即配成每毫升含磷0.8微克的标准应用液。
石灰性土壤无机磷分级的测定方法
石灰性土壤无机磷分级的测定河北省地矿中心实验室 有机有机分析分析分析室室 （参考参考蒋柏藩蒋柏藩蒋柏藩等的等的等的资料资料资料整理整理整理））1范围本方法适用于石灰性土壤中Ca2-P、Ca8-P、Al-P、Fe-P、O-P、Ca10-P 无机磷的6级分级测定。
2原理土壤中不同形态的磷被适当的提取剂震荡提取，采用钼锑抗比色法测定提取液，吸光度与磷的含量成正比，与标准系列比较定量。
3试剂3.1 NaHCO 3溶液（pH=7.5）:称取21.0g NaHCO 3溶于990mL 水中，用1：1HCl 调节pH=7.5，用水稀释至1L ，塑料瓶中保存（不宜久放）。
3.2 HN 4AC 溶液（pH=4.2）:量取29.5mL 冰醋酸于800mL 水中，用氨水调节pH=4.2，用水稀释至1L 保存。
3.4 HN 4F 溶液（pH=8.2）: 称取18.5g HN 4F 溶于990mL 水中，用4mol/L HN 4OH 调节pH=8.2，用水稀释至1L ，塑料瓶中保存。
3.5 NaOH-Na 2CO 3溶液: 称取5.3g 无水Na 2CO 3和4.0gNaOH 溶于800mL 水中，用水稀释至1L ，塑料瓶中保存。
3.6 柠檬酸钠溶液：称取88.2g 柠檬酸三钠（Na 3C 6H 5O 7•2H 2O ）溶于900mL 热水中，用水稀释至1L 。
3.7 NaOH 溶液: 称取20g NaOH 溶于800mL 水中，用水稀释至1L ，塑料瓶中保存。
3.8 H2SO4溶液: 15mL浓H2SO4、溶于约800mL水中，稀释至1升。
3.9饱和NaCl溶液：400gNaCl溶于1升水中，待溶液呈饱和后使用。
3.10 H3B03溶液：49g硼酸溶于900mL热水中，冷却后稀释至1升。
3.11三酸混合液：H2SO4:HCIO4:HNO3以1:2:7的体积比混合。
3.12连二亚硫酸钠(保险粉Na2S2O4) 密封避光、防潮保存。
实验七：土壤无机磷的测定
实验七：土壤无机磷的测定一、实验方法及目的采用SMT法测定土壤无机磷；掌握土壤无机磷的测定方法及分光光度法。
二、实验原理1）样品的前处理：用1mol/L的HCL溶液将土壤中无机磷转移到提取液中。
2）提取液中正磷酸盐的测定：在酸性条件下，试液中的P（正磷酸盐）与钼酸形成配合物-磷钼杂多酸（又叫磷钼酸杂聚配合物）。
H3PO4 + 12H2MoO4 = H3P(Mo3O10)4 + 12H2O P多时呈黄色，少时无色在一定酸度下，加入还原剂后，杂多酸中的Mo 被还原，产生特殊兰色（钼兰），其中一部分Mo6+被还原成Mo5+或Mo3+，或Mo3+、Mo5+都有。
在钼兰的吸收光谱曲线中有两个吸收峰(660nm或880nm)。
测定时可以根据分光光度计的性能选用。
我国国标采用700nm波长。
三、实验仪器与药品1仪器：多用调速振荡器，离心机，分光光度计。
2试剂：1）1mol•L-1HCl溶液：准确移取83.3ml浓HCl溶于定容至1L；2）（1+1）硫酸溶液3）磷标准贮备液（50.0 μg.mL-1）：称取0.2197±0.001g于110℃干燥2h在干燥器中放冷的磷酸二氢钾(KH2PO4)，用水溶解后转移至1000mL容量瓶中，加入大约800mL水、加5mL1+1硫酸用水稀释至标线并混匀。
1.00mL此标准溶液含50.0 μg磷。
4）抗坏血酸（10%）：溶解10g抗坏血酸(C6H8O6)于水中，并稀释至100mL。
此溶液贮于棕色的试剂瓶中，在冷处可稳定几周。
如不变色可长时间使用。
5）钼酸盐溶液：溶解13g钼酸铵[(NH4)6Mo7O24•4H2O]于100mL水中。
溶解0.35g酒石酸锑钾[KSbC4H4O7•½H2O]于100mL水中。
在不断搅拌下把钼酸铵溶液徐徐加到300mL硫酸(1+1)中，加酒石酸锑钾溶液并且混合均匀。
此溶液贮存于棕色试剂瓶中，在冷处可保存二个月。
6）过100目筛土样0.2g。
海水—无机磷的测定—磷钼蓝萃取分光光度法
FHZDZHS0067 海水无机磷的测定磷钼蓝萃取分光光度法F-HZ-DZ-HS-0067海水—无机磷的测定—磷钼蓝萃取分光光度法1 范围本方法适用于海水中活性磷酸盐的测定。
2 原理在酸性介质中，活性磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼黄，以抗坏血酸还原为磷钼蓝，用醇类有机溶剂萃取，于波长700nm处测定吸光度。
硫化物含量大于1mg/L时，对本法有明显的影响，此时，在水样酸化后，通氮气10min，将硫化氢驱除，可消除干扰。
砷酸盐含量大于0.5mg/L时，对本法有明显影响。
通常海水中砷含量约0.003mg/L，其影响可忽略不计。
硅酸盐含量大于 1.4mg/L时，对本法有影响。
河口水和大洋深层水中硅酸盐含量常大于1.4mg/L，应进行校正。
3 试剂除非另作说明，本法所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水或等效纯水。
3.1 正已醇[CH3(CH2)5OH]。
3.2 无水乙醇(C2H5OH)。
3.3 硫酸溶液，1+2。
3.4 钼酸铵溶液：溶解28g钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·4H2O]于200mL水中。
溶液变混浊时，应重配。
3.5 酒石酸锑钾溶液：溶解6g酒石酸锑钾(C4H4KO7Sb·1/2H2O)于200mL水中，贮存于聚乙烯瓶中，溶液变混浊时，应重配。
3.6 混合溶液：搅拌下将45mL钼酸铵溶液加到200mL硫酸（1+2）中，加入5mL酒石酸锑钾溶液，贮存于棕色玻璃瓶中，溶液变混浊时，应重配。
3.7 抗坏血酸溶液：溶解20g抗坏血酸(C6H8O6)于200mL水中，贮于棕色试剂瓶或聚乙烯瓶。
在4℃避光保存，可稳定一个月。
3.8 磷酸盐标准溶液3.8.1 磷酸盐标准贮备溶液，0.300mg/mL-p：称取1.3181g磷酸二氢钾(KH2PO4，光谱纯，预先在110℃～115℃烘1h～2h，置于干燥器中冷却至室温)溶于10mL硫酸（1+2）中，移入1000mL 容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀。
血清无机磷磷钼酸法测定
血清无机磷（Pi）磷钼酸法测定1. 实验原理磷钼酸紫外终点比色法。
钼酸铵+硫酸+磷酸盐磷钼酸络合物；该络合物在340nm有最大光吸收峰。
在340nm的吸光度与标本中无机磷的浓度成正比2. 标本采集2.1 病人准备：无特殊要求。
2.2 类型：血清、肝素血浆或尿液。
3. 标本存放：血清/血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月。
尿液稳定性：4～25℃在pH<5保存可稳定2天；不可使用已被污染的标本。
收集24h尿液时，应在收集瓶中加入10%（W/V）盐酸10ml，以防止磷酸盐沉淀。
测定前尿液应用蒸馏水作1：20稀释，测定结果乘以21。
4. 标本运输：室温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染不能做测定。
6. 实验材料：6.1申能无机磷测定试剂盒（货号：112 5207170 1 试剂：8×70ml）6.1.1 试剂组成硫酸210mmol/L钼酸铵0.4mmol/L表面活性剂适量6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
开盖后应避免污染。
6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含硫酸，如与皮肤及粘膜接触，请仔细地用大量水冲洗。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：贝克曼AU680生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见AU680生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
无机磷(IP)试剂盒标准操作程序
无机磷测定标准操作程序1.摘要无机磷试剂盒适用于定量测定人血清无机磷的含量。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中IP的浓度。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定IP浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的无机磷（IP）试剂盒采用的是紫外法。
5.原理血清中无机磷在酸性溶液中与钼酸铵作用形成络合物，引起在波长340nm处吸光度的上升，直接用340nm波长测定其吸光度，吸光度的变化与无机磷含量成正比。
−++无机磷−→还愿磷酸钼酸络合物硫酸钼酸铵仪器日立7600自动生化分析仪6.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：硫酸，钼酸铵，表面活性剂。
7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
7.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
8.4质控判断规则：按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》8.5室间质评：分别参加某地区室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。
无机磷的测定
无机磷的测定1、血液样品必须新鲜，不能有溶血现象，否则，血球内大量的有机磷进入血清，影响结果，如血液样品久置不分离，血球之中有机磷经酶的作用可变为无机磷，然后通过红血球膜进入血清中，也会导致测定结果过高。
2、用三氯醋酸沉淀蛋白质，滤液呈较强酸性，使磷酸盐不致沉淀，并抑制有机磷化合物的分解。
3、滤纸应先用稀盐酸洗涤，否则滤纸上的磷影响测定结果。
4、氯化亚锡有还原作用（本身不稳定，易被氧化），实验时须临时配制应用液。
【参考值】维生素C-磷钼酸比色法成人0.97~1.61mmol/L (3~5mg/dl)儿童1.29~1.94mmol/L (4~6mg/dl)。
【临床意义】血清磷增高(1) 甲状旁腺功能减退，因PTH分泌减少，肾小管对磷重吸收亢进。
(2) 甲状腺性能亢进，可出现高血磷。
(3) 维生素D中毒，出现高血钙同时有高血磷。
由于维生素D亦可促进肾小管对磷的重吸收，也促进肠道对磷的吸收。
(4) 垂体前叶性能亢进，如生长激素分泌过多，可使尿磷排泄减少，故肢端肥大症患者可出现高血磷。
血清磷升高与否可作为肢端肥大症病情是否活动的指标。
(5) 慢性肾功能不全，可有磷潴留而致高血磷。
血清磷降低(1) 甲状旁腺性能亢进，使尿中磷排出量增加，导致血清磷减少。
(2) 肠道吸收不良或维生素D缺乏，可引起血磷降低。
(3) 肾小管重吸收功能缺陷，如范可尼综合征、肾小管性酸中毒等可出现血清磷降低。
（3）在血清中加入三氯醋酸-硫酸亚铁溶液时速度要慢，边加边混使蛋白沉淀物呈细颗粒，如蛋白沉淀呈片状，可将磷包裹在其中，使测定结果偏低。
（4）加入钼酸盐后应立即充分混合。
柠檬酸盐一旦同钼酸盐结合，就不再同磷结合。
（5）尿磷测定与血磷相同。
可取24h混合酸性尿（碱性尿磷酸盐会沉淀析出，故应加酸防腐），稀释100倍左右后测定。
无机磷测定方法
无机磷的测定方法1.1 原理在酸性条件下，无机磷酸与钼酸作用生成黄色磷钼酸铵，再用适当还原剂还原成深蓝色的钼蓝。
磷含量越高所形成的钼蓝物质越多，蓝色就越深，用分光光度计在650 nm处测吸光度，通过计算就能得知溶液中无机磷的含量。
1.2 试剂配制磷试剂Ⅰ：A称取钼酸铵24 g，用适量纯化水溶解，稀释至240 mL；B将360 mL浓硫酸缓慢倒入240 mL纯化水中；将A和B混匀，贮存于棕色玻璃瓶中。
磷试剂Ⅱ：称取米吐尔0.8 g，无水亚硫酸钠4 g，溶于40 mL纯化水中；称取重亚硫酸钠176 g（或亚硫酸氢钠），溶于760 mL纯化水中，两溶液混合后过滤，滤液贮存于棕色玻璃瓶中，避光保存。
10%三氯醋酸：称取三氯醋酸100 g，加纯化水溶解，稀释至1000 mL。
备注：配制本岗位各种溶液均用分析纯试剂，各试剂开瓶1年后不得再使用。
1.3 标准曲线的绘制精确称取于105℃烘箱干燥3 h的KH2PO4 0.4394 g于1000 mL容量瓶中，加入20 mL 0.05 mol/L H2SO4，加纯化水至刻度（即得磷浓度为100μg/mL的标准溶液，贮棕色瓶中备用）。
吸取10 mL至100 mL容量瓶中，加纯化水至刻度使成10 μg / mL，作为标准液。
分别吸取标准液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL于25 mL容量瓶中，加磷试剂Ⅰ、Ⅱ各1 mL，加纯化水使成10 mL，在沸水浴中加热30 min，取出冷却后加蒸馏水至刻度，摇匀，用721型分光光度计在650 nm处测定吸光度，用纯化水作空白对照，以吸光值为横坐标，磷浓度为纵坐标作标准曲线备用。
1.4 测定步骤吸取样品离心上清液5 mL于50 mL容量瓶中，加入10%三氯醋酸溶液10 mL，沸水浴中加热7 min，加纯化水至刻度，摇匀、过滤。
吸取滤液2 mL于25 mL容量瓶中，加磷试剂Ⅰ、Ⅱ各1 mL，再加纯化水6 mL，摇匀，在沸水浴中加热30 min后取出冷却，补加纯化水至刻度，摇匀，用721型分光光度计在650 nm处测定吸光度，用纯化水作空白对照。
无机磷的测定实验报告
无机磷的测定实验报告- -、实验方法及目的采用SMT法测定土壤无机磷;掌握土壤无机磷的测定方法及分光光度法。
二、实验原理1)样品的前处理:用1molIL的HCL溶液将土壤中无机磷转移到提取液中。
2)提取液中正磷酸盐的测定:在酸性条件下，试液中的P (正磷酸盐)与钼酸形成配合物-磷钼杂多酸(又叫磷钼酸杂聚配合物)。
HyPO4+ 12H2MoO4 = HP(Mo3010)4 + 12H2OP多时呈黄色，少时无色在一定酸度下，加入还原剂后，杂多酸中的Mo被还原，产生特殊兰色(钼兰),其中一部分Mo6+被还原成Mo5+或Mo3+,或Mo3+、Mo5+都有。
在钼兰的吸收光谱曲线中有两个吸收峰(660nm或880nm)。
. 测定时可以根据分光光度计的性能选用。
我国国标采用700nm波长。
三、实验仪器与药品1仪器:多用调速振荡器，离心机，分光光度计。
2试剂:1) 1mol*L -HCI溶液:准确移取83.3ml浓HCl溶于定容至1L;2) (1+1)硫酸溶液3)磷标准贮备液(50.0 μ gmL-1) :称取0.2197+0.001g于110C干燥2h在干燥器中放冷的磷酸二氢钾(KHPO,),用水溶解后转移至1000mL 容量瓶中，加入大约800mL水、加5mL1+1硫酸用水稀释至标线并混匀。
1.00mL 此标准溶液含50.0 μg磷。
4)抗坏血酸(10%) :溶解10g抗坏血酸(CJHsOj于水中，并稀释至100mL。
此溶液贮于棕色的试剂瓶中，在冷处可稳定几周。
如不变色可长时间使用。
5)钼酸盐溶液溶解13g钼酸铵[QNH)6MoμO2+4H2O]于100mL 水中。
溶解0.35g酒石酸锑钾[KSbCHO,%H20]吁100mL水中。
在不断搅拌下把钼酸铵溶液徐徐加到300mL 硫酸(1+1)中，加酒石酸锑钾溶液并且混合均匀。
此溶液贮存于棕色试剂瓶中，在冷处可保存二个月。
6)过100目筛土样0.2g。
四、实验步骤1)土壤干样前处理称取0. 2g土壤样品于50m1离心管中,加入1mo1.L- 4HC1溶液20mL，塞紧塞子。
无机磷测定标准操作程序
无机磷（紫外直接法）测定标准操作程序1.摘要适用于定量测定人血清样本中无机磷的含量，作临床辅助诊断用。
2.适用范围程序适用于AU5811自动生化分析仪检测脑脊液及尿蛋白的浓度。
3.职责使用AU5811自动生化分析仪进行测定无机磷浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的无机磷测定试剂盒采用的是紫外直接法。
5.原理无机磷＋钼酸铵＋硫酸还原磷酸钼酸络合物络合物的生成，引起在波长340nm处吸光度的上升，吸光度的变化与无机磷含量成正比。
6.仪器AU5811自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：硫酸≥220mmol/L，钼酸铵≥1.00mmol/L，表面活性剂适量。
7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用科华公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品：罗氏公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控，加试剂后做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
8.4质控判断规则：按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》8.5室间质评：分别参加河北省临检中心室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。
无机磷测定
无机磷测定简介无机磷是指不含有机结构的磷化合物，它在许多领域具有重要的应用价值。
无机磷的测定是一项常见的分析化学技术，可以用于环境监测、农业生产、食品安全等领域。
本文将介绍无机磷测定的原理、常用方法以及应用。
原理无机磷的测定原理基于其在特定条件下与其他化合物发生化学反应的特性。
常见的测定方法包括颜色反应法、光度法、电化学法等。
颜色反应法是一种基于无机磷与特定试剂发生反应后产生颜色变化的方法。
例如，无机磷可以与钼酸盐在酸性条件下反应生成黄色的钼酸铵盐沉淀。
通过测量产生的颜色强度，可以确定无机磷的含量。
光度法是利用无机磷与特定试剂发生反应后产生吸收或发射特定波长的光的方法。
例如，无机磷可以与酚酞试剂在碱性条件下反应生成红色的络合物。
通过测量产生的红色光的强度，可以确定无机磷的含量。
电化学法是利用无机磷在电极表面发生氧化还原反应的方法。
例如，无机磷可以在阳极上氧化生成磷酸根离子，通过测量阳极电流的变化，可以确定无机磷的含量。
常用方法钼酸盐法钼酸盐法是一种常用的无机磷测定方法，适用于测定水样、土壤样品中的无机磷含量。
实验步骤：1.取一定量的样品，加入适量的硫酸溶液，使样品完全溶解。
2.加入适量的钼酸铵试剂溶液，使无机磷与钼酸铵发生反应生成黄色的钼酸铵盐沉淀。
3.离心沉淀，取上清液进行测定。
4.使用分光光度计测量上清液的吸光度，根据标准曲线确定无机磷的浓度。
酚酞法酚酞法是一种常用的无机磷测定方法，适用于测定水样、肥料中的无机磷含量。
实验步骤：1.取一定量的样品，加入适量的酸溶液，使样品完全溶解。
2.加入适量的酚酞试剂溶液，使无机磷与酚酞发生反应生成红色的络合物。
3.使用分光光度计测量溶液的吸光度，根据标准曲线确定无机磷的浓度。
电化学法电化学法是一种常用的无机磷测定方法，适用于测定土壤样品中的无机磷含量。
实验步骤：1.取一定量的样品，加入适量的电解液，使样品完全溶解。
2.将电解液中的无机磷转化为磷酸根离子。
血清无机磷磷钼酸法测定
血清无机磷（Pi）磷钼酸法测定1. 实验原理磷钼酸紫外终点比色法。
钼酸铵+硫酸+磷酸盐磷钼酸络合物；该络合物在340nm有最大光吸收峰。
在340nm的吸光度与标本中无机磷的浓度成正比2. 标本采集2.1 病人准备：无特殊要求。
2.2 类型：血清、肝素血浆或尿液。
3. 标本存放：血清/血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月。
尿液稳定性：4～25℃在pH<5保存可稳定2天；不可使用已被污染的标本。
收集24h尿液时，应在收集瓶中加入10%（W/V）盐酸10ml，以防止磷酸盐沉淀。
测定前尿液应用蒸馏水作1：20稀释，测定结果乘以21。
4. 标本运输：室温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染不能做测定。
6. 实验材料：6.1申能无机磷测定试剂盒（货号：112 5207170 1 试剂：8×70ml）6.1.1 试剂组成硫酸210mmol/L钼酸铵0.4mmol/L表面活性剂适量6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
开盖后应避免污染。
6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含硫酸，如与皮肤及粘膜接触，请仔细地用大量水冲洗。
应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：贝克曼AU680生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2 仪器操作步骤：参见AU680生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
谢谢观看
无机磷的测定
磷钼蓝分光光度法测定海水 中的活性磷酸盐
09海环1班 张姣 2011-11-6
无机磷&活性磷酸盐
■ 天然水和废水中含有的磷绝大多数以各种形式的磷酸盐存
在，也有有机磷的化合物。从化学形式上看，水中的磷化合物 可分以下几类。 (1)正磷酸盐，即PO43-、HPO42-、H2PO4-。 无机磷形态 (2)缩合磷酸盐，包括焦磷酸盐、偏磷酸盐、 聚合磷酸盐等，如P2O74-、P3O105-、HP3O92-、（PO3)63-等。 (3)有机磷化合物。
分析步骤
■ 绘制标准曲线
按以下步骤绘制标准曲线： ① 量取0 ml, 0.50 ml, 1.00 ml, 2.00 ml, 3.00 ml, 4.00 ml磷酸盐标准使用溶液于50ml带刻度具塞比色管中，加水 至50 ml标线，混匀。 ② 各加1.0 ml混合溶液，1.0 ml抗坏血酸溶液，混匀。显 色5 min后，注入5 cm测定池中，以蒸馏水作参比，于882 nm波 长处测定其吸光值Ai。其中零浓度为标准空白吸光值A0。 ③以吸光值(Ai-A0)为纵坐标，相应的磷酸盐浓度(mg/L)为横 坐标，绘制标准曲线。
■ 海水中磷以两种化学形式存在，即有机磷和无机磷。每一
种化学形式又分为溶解和颗粒的两种形态。
■
在各种无机磷形态中，仅正磷酸盐可通过标准的磷钼蓝方 法定量地测定，而焦磷酸盐和无机磷聚合物均需要首先将其水 解为活性磷酸盐后才能测定。
■ 一般情况下,活性磷酸盐绝大部分是溶解态无机磷(DIP)，
通常指能被植物直接吸收的。
测定方法
■ 测定水中无机磷的方法是磷钼蓝分光光度法 ■ 海洋监测规范GB17378.4-2007（磷钼蓝分光光度法）
磷钼蓝分光光度法
■ 适用范围和应用领域 □ 本法适用于海水中活性磷酸盐的测定
本方法为介质中，活性磷酸盐与钼酸铵反应生成磷钼黄， 用抗坏血酸还原为磷钼蓝后，于882 nm波长测定吸光值。
■ 水样测定
按以下步骤测定样品： ① 量取50 ml经0.45 μm微孔滤膜过滤的水样至带刻度具 塞比色管中，按上一步骤②测定吸光值Aw。 ②同时量取50 ml水按相同步骤测定分析空白吸光值Ab。
■ 记录与计算
据(Aw-Ab)值在标准曲线上查得水样的磷酸盐浓度(mg/L)， 或用标准曲线性回归方程计算。将所得数据记入《海洋监测规 范》的附录A中表A3及表A16中。
注意事项
除非另作说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为二 次水或等效纯水。 ■ 水样采集后应马上过滤，立即测定。若不能立即测定， 应置于冰箱中保存，但也应在48 h内测定完毕。 ■ 过滤水样的微孔滤膜，需用0.5 mol/L盐酸浸泡，临 用时用水洗净。 ■ 硫化物含量高于2 mg/L-S时干扰测定。此时，水样用 硫酸酸化，通氮气15 min，将硫化氢驱去，可消除干扰。 ■ 磷钼蓝颜色在4 h内稳定。
□ 活性磷酸盐与钼酸铵形成磷钼黄
7PO43- + 21NH4+ + 12Mo7O246- + 72H+ =7(NH4)3[PMo12O40 ]↓（淡黄色）+ 36H2O
□ 在酒石酸锑钾存在下，磷钼黄被抗坏血酸还原为磷钼蓝，
即在酒石酸锑钾存在下，加入抗坏血酸，使磷钼酸中的一部分 Mo6+离子被还原为Mo5+，生成一种叫做“钼蓝”的物质（磷钼 黄被还原为磷钼蓝） (NH4)3[PMo12O40 ] H3PO4•2Mo2O5 H3PO4•10MoO3•2Mo2O5
■ 磷含量增加，导致红色浮游生物爆发性繁殖而引发的
近海海水出现的“赤潮”和城市水系（湖泊、水库）中出 现水生植物疯长的“水华”现象。
采样和样品贮存
■ 含磷酸盐的水样，在贮存时由于生物、酶和吸附作用，
使磷酸盐的浓度在采样后1小时内就会发生变化。所以样品 采集后应尽快分析，最好在半小时之内进行，不要超过两小 时。若不能立即分析，采取措施固定。
所需试剂
■ ■ ■ ■ ■ ■ ■
硫酸溶液 钼酸铵溶液 酒石酸锑钾溶液 混合溶液 抗坏血酸溶液 硫酸盐标准储备溶液 磷酸盐标准使用溶液
仪器
■ 分光光度计：配5cm测定池 ■ 量筒：容量10，50，100，250，500 ml ■ 量瓶：容量100，1000 ml ■ 带刻度具塞比色管：容量50 ml ■ 刻度吸管：容量1，5，10 ml ■ 自动加液器：容量1 ml ■ 一般实验室常备仪器和设备
无机磷污染的来源
■ 生活污水
洗涤废水（含磷洗衣粉、洗涤剂） 食物废渣 人体排泄
■ 工厂和畜牧业废水
化工行业（造纸业、磷肥工业） 生化制药（生物制药企业） 金属表面处理 食品工业 ……
■
降雪降雨
影响
■ 水体的富营养化
缓慢流动的湖泊、水库、内海等水域的生物营养成分（如 氮、磷等），因长期不断补给而过多积累，导致水草、藻 类等大量繁殖，引起水质恶化、鱼群死亡的现象。
■ 关于样品的贮存和固定问题，目前无定论，主要有快速冷冻
法和化学保存法两种。若只放几个小时，可冷藏。 □ 冷冻法：水样采集后迅速冷冻到-20°C以下，（测溶解无机 磷则要过滤）。这种方法目前大多数人认为可保存几个月，基本 用此法。 □ 化学法：加入HgCl2 100ml水样中加入约3滴HgCl2饱和溶液。 □ 样品贮存：样品采集后可存于玻璃瓶中，待分样及过滤结 束后，一般用塑料瓶贮存样品（聚丙烯或聚四氟乙烯，不可用聚 乙烯-原因：吸附有机物质、磷酸盐、油类）。 由于观察到磷为玻璃所吸收，长期贮存不应采用玻璃瓶。