p53蛋白表达在直肠肿瘤中病理意义

·病理分析·2012年7月第19卷第20期自20世纪80年代中期以来，抑癌基因的重要作用得到了广泛研究和深入探讨。

p53是大肠癌发生中最常变化的基因[1]，本文对p53蛋白在直肠肿瘤中的表达情况进行研究，以期进一步揭示p53蛋白在直肠肿瘤发生发展中的作用及意义。

1资料与方法1.1一般资料收集通城县人民医院病理科2006～2011年手术及肠镜活检的部分标本，其中，结直肠绒毛状腺癌33例、结直肠绒毛状腺瘤32例，非肿瘤性黏膜15例，所有患者术前均未作放疗、化疗及免疫治疗。

1.2免疫组化染色及方法1.2.1p53单克隆抗体，S-P免疫组化试剂盒均购自福州迈新公司。

1.2.2组织化学检测：采用S-P(streptavidin-perosidase，链霉菌亲和素-过氧化物酶)免疫组化方法。

步骤：（1）石蜡切片4μm 厚，常规脱蜡水化后，用PBS（即磷酸缓冲液）（pH=7.4）冲洗3次，每次5min；（2）加50μL过氧化酶阻断溶液，室温下孵育10min；（3）PBS（pH=7.4）冲洗3次，每次5min；（4）加50μL 非免疫动物血清，室温下孵育5min，PBS冲洗一次；（5）加50μL第一抗体，室温下孵育60min；（6）PBS（pH=7.4）冲洗3次；（7）加生物素标记的第二抗体，室温下孵育10min；（8）PBS（pH=7.4）冲洗3次，每次5min；（9）加50μL链亲和素-过氧化酶溶液，室温下孵育10min；（10）PBS（pH=7.4）冲洗3次，每次5min；（11）加2滴新鲜配制的DAB溶液显色；（12）自来水冲洗，苏木素复染，中性树胶封固。

用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.3p53染色结果的判定细胞核内出现棕黄色颗粒为染色阳性，认为p53阳性。

如果非肿瘤细胞或核周围着色，不认为p53阳性。

当少于10%的肿瘤细胞着色时，认为免疫组化结果阴性；当超过10%的肿瘤细胞着色时，认为免疫组化阳性。

1.4统计分析数据处理采用SPSS13.0软件，率的比较采用卡方检验，Ridit分析。

P<0.05为差异有统计学意义。

2结果2.1结直肠绒毛状腺癌和绒毛状腺瘤中p53蛋白表达强度和表达率p53在结直肠绒毛状腺癌、绒毛状腺瘤、非肿瘤黏膜的阳性表达率分别为：75.7%（25/33）、59.4%（19/32）、13.3%（2/15）。

结直肠绒毛状腺癌组织p53阳性表达率明显高于结直肠绒毛状腺瘤和非肿瘤黏膜（P＜0.05），见表1。

p53蛋白表达在直肠肿瘤中病理意义李金淼周桂台湖北省通城县人民医院病理科，湖北通城437400[摘要]目的研究p53蛋白在结直肠肿瘤中的表达及病理意义。

方法采用免疫组织化学法检测p53在33例结直肠绒毛状腺癌、32例绒毛状腺瘤、15例非肿瘤黏膜组织中的表达。

结果p53在结直肠绒毛状腺癌、绒毛状腺瘤、非肿瘤黏膜的阳性表达率分别为：75.7%（25/33）、59.4%（19/32）、13.3%（2/15）。

p53蛋白表达强度：结直肠绒毛状腺癌＞绒毛状腺瘤＞非肿瘤黏膜（R从大至小），其中结直肠绒毛状腺癌和绒毛状腺瘤R的95%可信限下界均高于非肿瘤的上界，差异有统计学意义。

结论p53基因突变及其产物p53蛋白的检测，用于早期发现结直肠腺癌具有重要的病理诊断意义。

[关键词]p53；结直肠肿瘤；免疫组化；蛋白[中图分类号]R735.3+7[文献标识码]B[文章编号]1674-4721（2012）07（b）-0118-02 Pathological significance of p53protein expression in rectal cancerLI Jinmiao ZHOU GuitaiPathology Department of Tongcheng People′s Hospital in Hubei Province,Tongcheng437400,China[Abstract]Objective To study the pathological significance of p53protein expression in rectal cancer.Methods Immuno-histochemical techniques were used to detect the expression of p53protein in33cases of colorectal papillary adenoma,32 cases of villous adenoma and15cases of non-tumor mucosa tissue.Results The ratios of positive expression of p53protein in colorectal papillary adenoma,villous adenoma and non-tumor mucosa were75.7%(25/33),59.4%(19/32)and13.3% (2/15),respectively.The intensity order of the expression of p53protein was colorectal papillary adenocarcinoma>villous adenomas>non-tumor mucosa(R from big to small).The lower limits of95%confidence interval of R values in both col-orectal papillary adenoma and villous adenoma were higher than the upper limit in non-tumor mucosa,and there were sig-nificant differences.Conclusion The detections of p53gene mutation and p53protein contribute to pathological diagnosis of early colorectal adenocarcinoma.[Key words]p53;Colorectal neoplasms;Immunohistochemistry;Protein2012年7月第19卷第20期·病理分析·表1结直肠绒毛状腺癌和绒毛状腺瘤中p53蛋白表达强度和表达率（n）2.2Ridit分析具体见表2。

表2p53表达强度的Ridit分析结果分析：由表中可见，p53蛋白表达强度结直肠绒毛状腺癌＞绒毛状腺瘤＞非肿瘤黏膜（R从大至小），其中结直肠绒毛状腺癌和绒毛状腺瘤R的95%可信限下界均高于非肿瘤的上界，差异有统计学意义。

3讨论p53基因是细胞凋亡的重要调控基因，分为野生型和突变型二型，野生型p53基因是一种抑癌基因，能诱导细胞终末分化，维持基因稳定，触发衰老和诱导细胞凋亡，抑制细胞增殖，因此是细胞生长的负性调控因子；当p53基因突变时，细胞周期失控，一些原癌基因激活（如RAS基因），刺激细胞增殖。

正常细胞内p53基因为野生型，其表达的蛋白在细胞中含量极少，且半衰期短（5～45min），因此一般免疫组化方法不易检出[2]。

但p53基因突变，其表达的p53蛋白构象改变，在细胞核内累积并且半衰期延长，稳定性增加，因此用免疫组织化学方法测得的p53蛋白基本上是突变型p53蛋白[3]。

本研究结果显示正常黏膜中p53表达阳性很少，仅为13.3%，与最近报道的结果相一致[4]。

绒毛状腺瘤p53表达阳性占59.4%，明显高于正常黏膜中p53的表达，提示p53基因可能发生了突变。

已发现p53基因突变具有阶段性，常出现在良性腺瘤向恶性腺癌转变时期，其遗传学改变发生在良性肿瘤恶变阶段。

因此，绒毛状腺瘤出现p53高阳性表达则提示存在腺瘤易于癌变危险。

本研究还发现结直肠绒毛状腺癌变后，其p53表达阳性率进一步提高至75.7%,与文献[5]报道结果一致。

已发现结直肠癌患者抑癌基因p53出现突变，该组织中常可检测到突变的p53蛋白，且结直肠功能减退与突变p53蛋白的异常堆积密切相关[6]。

从病理形态学看，结直肠绒毛状腺瘤与绒毛状腺癌是容易区分的，但重度不典型增生腺瘤与癌有时很难判断。

本研究的结果表明，p53蛋白表达异常与大肠癌的发生密切相关，检测腺瘤p53表达状况有助于预测其癌变倾向。

也就是说，p53蛋白一定程度上可作为预测癌变的一个辅助标志物，若某一腺瘤形态上出现了异型性，而且p53蛋白染色阳性，判断该腺瘤发生癌变可能性增大。

由于一旦p53基因发生突变，则肿瘤就有恶变倾向。

综上所述，从正常结直肠黏膜-结直肠腺瘤-结直肠腺癌变化中，p53的表达相应发生变化，推测其均参与结直肠肿瘤的发生和发展，其蛋白的检测对于早期诊断病理形态学上难以鉴别的大肠腺瘤和腺癌具有重要的辅助诊断作用。

[参考文献][1]Baker SJ，Preisinger AC，Jessup JM，et al.p53gene mutation occurcombination with17p allelic deletions as late event in colorectal tumorigenesis[J].Cancer Res，1990，50（23）：7717-7722.[2]Horiuchi H，Kawamata H，Omotehara F，et al.Negative immunohisto-chemical staining of p53protein does not always reflect wild-type p53 gene in cancer cells[J].J Gastroenterol，2004，39：801-803.[3]Porcelli B,Frosi B,Arezzini L,et al.Expression of p185and p53inbenign and malignant colorectal lesions[J].Histochem J，2001，33：51-57.[4]Sousa WA，Rodrigues LV，Silva RG Jr，et al.Immunohistochemicalevaluation of p53and Ki-67proteins in colorectal adenomas[J].Arq Gastroenterol，2012，49（1）：35-40.[5]赵光明，展瑞，邹国桢，等.Hpa、P53表达与大肠癌浸润转移的关系[J].山东医药，2010，50（10）：54.[6]Zou Yang，Sun Zhen-dong，Di Jian-zhong，et al.The correlation betweenthe expresion of P53protein with the clinical stage and prognosis of colorectal cancer[J].Surg Theory and practice，2003，8（2）：155.（收稿日期：2012-04-09本文编辑：林利利）绒毛状腺癌绒毛状腺瘤非肿瘤黏膜333215813131215274675.759.413.3项目例数p53蛋白表达强度-++++++百分率（%）绒毛状腺癌绒毛状腺瘤非肿瘤黏膜3332150.6286±0.04790.4775±0.04180.2650±0.03580.5347～0.72240.3955～0.55950.1949～0.3351项目例数（n）R±S R（即R95%可信限）。