多糖类化合物提取及分离纯化方法
蒲公英多糖的提取、分离纯化、鉴定及其生物活性的初步研究
蒲公英多糖的提取、分离纯化、鉴定及其生物活性的初步研究蒲公英多糖的提取、分离纯化、鉴定及其生物活性的初步研究引言蒲公英（Taraxacum officinale）是一种常见的野生草本植物，广泛分布于全球各地。
它富含营养成分和生物活性物质，特别是多糖类化合物，对人体健康具有重要作用。
尽管已有部分研究关注蒲公英多糖的提取和生物活性，但对于其分离纯化和鉴定等方面的研究仍然相对较少。
因此，本研究旨在对蒲公英多糖进行提取、分离纯化、鉴定，并评估其生物活性。
一、材料与方法1.1 材料采集新鲜的蒲公英，来自于上海市郊区的草地。
材料干燥后研磨成粉末，在60°C下干燥保存。
1.2 提取蒲公英多糖将蒲公英粉末与10倍体积的80%乙醇混合搅拌，过夜静置。
然后使用离心机以3000 rpm的速度离心10分钟，收集上清液，过滤并浓缩，得到蒲公英醇提取物。
1.3 分离纯化蒲公英多糖将蒲公英醇提取物溶于适量的纯水，利用葡萄糖处理蒲公英醇提取物，在60°C水浴中水解1小时。
随后，使用活性炭吸附和甲醇沉淀来去除杂质。
最后，通过酒精沉淀分离纯化蒲公英多糖。
1.4 鉴定蒲公英多糖采用凝胶渗透色谱（GPC）和红外光谱（IR）进行蒲公英多糖的鉴定。
GPC可确定多糖的分子量分布，而IR可以分析其官能团。
1.5 评估生物活性通过体外实验，评估蒲公英多糖的抗氧化和抗肿瘤活性。
抗氧化活性通过DPPH自由基清除法进行测定，抗肿瘤活性通过MTT法测定细胞的增殖。
结果与讨论经过提取、分离纯化和鉴定，得到了蒲公英多糖。
凝胶渗透色谱结果显示多糖具有多种不同的分子量，分子量范围在100 kDa至500 kDa之间。
红外光谱显示多糖中存在羟基、甲基和羧基等官能团。
在抗氧化活性评价中，蒲公英多糖表现出了显著的自由基清除能力。
浓度为1 mg/ml的蒲公英多糖对DPPH自由基的清除率达到了60%。
这表明蒲公英多糖具有潜在的抗氧化活性。
在抗肿瘤活性评估中，蒲公英多糖在不同浓度下对人类肝癌细胞株HepG2的生长具有抑制作用。
多糖的分离纯化及性质表征
（3）超高压
超高压提取 也称超高冷等静压提取，是指在常温下用100～1000 MPa的流 体静压力作用于提取溶剂和原料的混合液上，并在预定压力 下保持一段时间，使原料细胞内外压力达到平衡后迅速卸压 ，由于细胞内外渗透压力忽然增大，其结构发生变化使得原 料内的有效成分能够穿过细胞的各种膜而转移到细胞外的提 取液中，达到提取多糖有效成分的目的。
（2） 酸提法
为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提 取法。 如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH值下 难以溶解，可用乙酸或盐酸使提取液成酸性，再加乙醇使多 糖沉淀析出。 由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到 的多糖产品纯度相对较高，但在酸性条件下可能引起多糖中 糖苷键的断裂，因此，只在一些特定的多糖提取中占有优势 。且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。
5. 整个过程保持凝胶上方有水
原料 前处理 提取 滤渣 过滤或离心
滤液
醇沉 沉淀 脱蛋白 脱色 透析 柱层析
多糖
四、多糖的纯度鉴定
多糖纯度鉴定方法 超速离心法、电泳法、比旋光度法及凝胶色谱法。
比旋光度测定法
不同的多糖具有不同的比旋度，同时在不同的乙醇中 有不同的溶解度。在一定浓度的乙醇中，分子量大的 较分子量小的溶解度小。因此，不同浓度的醇中得到 的多糖沉淀的比旋度相同，则证明该多糖为均一组分。
（2）超声波辅助提取法
超声波提取是利用超声波的机械效应、空化效应及热效应。 机械效应可增大介质的运动速度及穿透力，能有效的破碎生 物细胞和组织，从而使提取的有效成分溶解于溶剂之中； 空化效应使整个生物体破裂，整个破裂过程在瞬间完成，有 利于有效成分的溶出； 热效应增大了有效成分的溶解速度，这种热效应是瞬间的， 可使被提取成分的生物活性尽量保持不变。
海南桥头地瓜硒多糖的提取、分离和分析
2022年8月Aug.2022第46卷第4期Vol.46,No.4热带农业工程TROPICAL AGRICULTURAL ENCINEERING海南桥头地瓜硒多糖的提取、分离和分析①郭利芳1)②苏鹏2)周树权1)（1海南职业技术学院海南海口570216；2海南省商业学校海南海口570100）摘要通过分离等步骤探索海南澄迈县桥头镇地瓜硒多糖结构特征。
以桥头地瓜为原料进行硒多糖提取，以蛋白托出率为考察指标进行脱蛋白工艺优化。
实验表明，蛋白脱出率达89.71%，硒含量为1.5μg/g 。
对硒多糖进行纯化，采用红外光谱等手段对组分分析，包括理化性质、糖苷键类型等，结果表明，纯化后硒多糖为不定型状态，以条状等不规则形式存在。
关键词桥头镇；地瓜；硒多糖；提取分离分析中图分类号S531Extraction Separation and Analysis of Selenium Polysaccharide from Sweet Potato inQiaotou,HainanGUO Lifang 1)SU Peng 2)ZHOU Shuquan 1)(1Hainan College of Vocation and Technique,Haikou,Hainan 570216;2Hainan Business School,Haikou,Hainan 570100)Abstract The structural characteristics of selenium polysaccharide of sweet potato in Qiaotou Town,Chengmai County,Hainan Province were explored through separation and other steps.The selenium poly ‐saccharide was extracted from Qiaotou sweet potato,and the deproteinization process was optimized with protein elution rate as the investigative index.The results show that the protein removal rate is 89.71%and the selenium content is 1.5μg/g 。
天然药物_多糖的主要生物活性及分离纯化方法_方积年
多糖是否具有应用前景, 首先取决于其抗病毒作 用与抗凝血作用的剂量比。
当然至今也发现了一些不含硫酸根的抗病毒 多糖, 如念珠藻多糖[ 36] , 这是一种酸性杂多糖, 具有 明显的抗流感病毒作用。另外也从玫瑰花中获得 了具有明显抑制艾滋病毒逆转录酶活性的多糖。 113 降血糖作用
114 抗炎作用 自从发现寡糖特别是果聚寡糖具有抗炎作用
后, 人们又发 现多糖也具抗 炎作用[ 43-47] 。这些 多 糖能选择性地粘附病原体, 阻断微生物病 原体对 靶细胞的吸附[ 48] , 从而具消炎和抗感染作用。如 上世纪发现的某些细菌产生的具有正负离子的两 性多糖对脓肿有明显的防治作用[ 49] , 它的作用机 制主要是通过 MHCII 的途径激活 T 细胞而发挥作 用。最近报道将甘氨酸连接到人参 多糖( 果胶类 多糖) 的羟基上后也能激活 T 细胞而具显 著的抗 脓肿作用。
20 天以上。虽然至今也发现了少数确实具有细胞 毒的多糖[ 24, 25] , 即不通过免疫系统介导直接杀死肿 瘤细胞, 但其作用机理尚不清楚, 有待进一步研究。
2007 年 9 月 第 5 卷 第 5 期
112 抗病毒作用 20 世纪 70 年代以后发现有些多糖具有抗疱
疹病毒及流感病毒作用, 特别是 80 年代发现多糖 具抗艾滋病病毒( HIV ) 作用[ 26] 。研究发现抗病毒 的多糖大多能干扰病毒表面糖蛋白 gp120 对淋巴 细胞表面 CD4 受体的结合[ 27] ; 抑制病毒抗原的表 达; 抑制病毒逆转录酶( RT ) 的活性[28, 29] 。具有抗 病毒作用的多糖其化 学结构中多数含有硫酸根, 硫酸根的存在与否及 多寡直接影响抗病毒活性。 如香菇多糖抗肿瘤作用显著, 抗 HIV 作用很小, 但 硫酸化香菇多糖却具有显著抗 HIV 作用。同样马 尾藻多糖具抗肿瘤作用, 其硫酸化后具明显的抗 疱疹病毒作用[ 30] 。至今报道的具抗病毒作用的多 糖很多, 如从海洋红藻中得到的具有抗疱疹病毒 的硫酸化半乳聚糖[31, 32] 、从阿拉 伯胶中获得的硫 酸化岩藻类多糖 ) ) ) 墨角藻多糖及从绿藻中获得 的硫酸木聚糖等均能选择性抑制单纯疱疹病毒及 合胞 体的生 成[ 33] 。从 大肠杆菌 中获得的 硫酸化 K5 多糖[ 34,35] 具 抗 HIV 作 用, 它的 结构 类似 于肝 素, 却没有肝素的抗凝血作用, 有望成为发展中国 家在预防性传播艾滋病上使用的候选药物。
植物多糖的分离纯化
植物多糖的分离纯化一、植物多糖的提取1 溶剂提取法1．1 水提法水对植物组织的穿透力强，提取效率高，在生产上使用安全、经济。
用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。
一般植物多糖提取采用热水浸提法，该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物；或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质，沉淀提纯多糖；但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同，它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离；还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离；其中，以乙醇沉淀最为普遍。
但以根茎为主的植物体,细胞壁多糖含量高,热水直接提取率不高。
此时为破坏细胞壁,增加多糖的溶出，有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解。
1．2酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势，目前报道的并不多。
而且即使有优势，在操作上还应严格控制酸度，因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
采用的稀碱多位为0．1mol／L氢氧化钠、氢氧化钾，为防止多糖降解，常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。
同样，碱提优势也是因多糖类的不同而异。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
另外，稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析，浓缩与醇析而获得多糖沉淀。
1．4 生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
1．5 超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
枸杞中枸杞多糖的提取及分离纯化工艺的研究
枸杞中枸杞多糖的提取及分离纯化工艺的研究石油化工与工艺 05160111 倪宜海指导教师：史高峰教授摘要本文主要对枸杞黄酮类化合物的微波辐射辅助提取取枸杞粉末和提取最佳工艺进行研究。
取得的主要研究成果如下：加入一定料液比(1：8、1：10、1：12)的水溶液，放入微波搅拌器中放置一定时间（40-100min)，温度70-100摄氏度之间，功率（300-600w）。
取出过滤，取其溶液放置旋转蒸发仪中进行蒸馏。
枸杞渣滓放回搅拌器中进行二次提取，提出多糖混合液醇沉冷冻干燥后，为褐色絮状粉末固体。
确定最佳工艺：提取温度90 ℃；料水比1∶10(W∶V)，提取时间2h，功率600。
得出多糖再进行Sevage法脱蛋白，冷冻干燥后，为乳白色絮状粉末固体粗多糖。
在最佳条件下枸杞粗多糖提取率可达12.23%。
枸杞粗蛋白含量6.98%关键词：微波搅拌，冷冻干燥，Sevage法脱蛋白，分离纯化AbstractIn this paper, the main flavonoids of Lycium barbarum's the microwave-assisted extraction of radiation from wolfberry extract powder and the best technology for research. The main research results obtained are as follows: by adding some liquid ratio (1:8,1:10,1:12) aqueous solution into the microwave stirrer placed a period of time (40-100min), the temperature between 70-100 degrees Celsius , power (300-600w). Remove the filter, select the solution placed in Rotary Evaporator distillation. Barbarum waste back into the blender in the second extract, the polysaccharide mixture of freeze-drying alcohol, in order to brown flocculent solid powder. To determine the optimum process: extraction temperature 90 ℃; feed water ratio 1:10 (W: V), extraction time 2h, Power 600. Polysaccharide derived from another protein Sevage law, after freeze-drying for white flocculent powder Polysaccharide solid. Under the best conditions in barbarum Polysaccharide extraction rate of 12.23%. Barbarum 6.98% crude protein content.KEY WORDS: microwave mixing, freeze-drying, Sevage method of removing protein, purification 1.前言枸杞中的化学成分比较复杂，主要包括蛋白质、氨基酸、微量元素、糖类、脂肪、脂肪酸、菇类、甾醇类、维生素、色素类、生物碱类。
多糖分离纯化
多糖分离纯化简介多糖又称多聚糖，是由10个以上的单糖通过苷键连接而成的，具有广泛生物活性的天然大分子化合物。
多糖是由多个单糖分子缩合、失水而成，是一类分子结构复杂且庞大的糖类物质。
凡符合高分子化合物概念的碳水化合物及其衍生物均称为多糖。
多糖在自然界分布极广，亦很重要。
其广泛分布于自然界高等植物、藻类、微生物与动物体内。
多糖是细胞中一类非常重要的大分子物质。
糖类是细胞膜上受体分子的重要组成成分，是细胞识别和信息传递等功能的参与者，是一类非特异性广谱免疫调节剂和重要的生命物质材料，广泛参与各项生命活动。
近年来的研究表明，多糖在免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化和降血糖等方面显示出良好的应用前景，是现代医学和食品功能化学共同关注的焦点。
天然多糖来源广泛且化学成分复杂，粗多糖中通常伴随着一些蛋白质、脂肪和色素等物质，不利于多糖的结构鉴定及后续活性分析，因此需要进行分离纯化：即除杂和组分分离。
多糖类物质结构复杂，由不同分子质量的中性或酸性糖混合组成，具有微观不均一性，其分析和结构解析一直是糖组学和糖生物学研究的重点。
多糖分离纯化的核心是获得低分散性、电荷均一的多糖，以适宜后续结构解析和活性功能的深入分析，故多糖需分离纯化才能得到均一性多糖。
百欧泰经过多年技术积累，建立了完善的多糖提取和纯化平台。
样本经研磨粉碎后、热水提取、醇沉、除蛋白、脱色、脱脂等一系列成熟的工艺后得到粗多糖，粗多糖经离子交换色谱及凝胶色谱分离纯化后可获得对应单一、均一的多糖组分。
此外根据原料中多糖特性，针对性地选择预处理和分离纯化方法（柱层析、膜分离法或者分级沉淀法等），可高效分离纯化各种中性多糖、酸性多糖和黏多糖以及糖复合物等。
多糖分离纯化服务多种方法1 柱色谱法纤维素柱层析法：实现分级解离；但流量小、耗时长阴离子交换柱层析法：可用于中性和酸性多糖的分离，以及不同中性多糖的分离凝胶柱层析法:实现连续进样、在线监测、重复性好，样品收集和纯化效率高2 分级沉淀法操作原理：不同的多糖组分在低醇或酮中有不同的溶解度3 盐析法操作原理：不同分子量的多糖组分在一定浓度的盐溶液中其溶解度不同4 超声波辅助提取法利用超声波的机械效应和空化作用破坏细胞壁、细胞膜等生物组织。
植物多糖的提取和分析方法
植物多糖的提取和分析方法鲁瑞娟【摘要】多糖是由很多单糖分子通过糖苷链相连而形成的天然高分子化合物,多糖结构复杂,种类繁多,并且常与脂质和蛋白质结合成多糖复合物,提取和分析困难.植物多糖常用的提取方法有溶剂提取法、超滤法、酶解法、超声辅助提取法、超临界流体萃取法、微波辅助提取法、闪式提取法和高压蒸煮法等.多糖的检测方法可分为两大类,直接测定多糖包括高效毛细管电泳法、气相色谱法、高效液相色谱法和酶法等,利用单糖的性质进行测定,其中利用单糖缩合反应而建立的方法最多,如滴定法,比色法.本文重点介绍植物多糖的提取方法和分析方法,旨在促进植物多糖的开发利用.【期刊名称】《天津药学》【年(卷),期】2015(027)002【总页数】3页(P67-69)【关键词】植物多糖;提取方法;分析方法【作者】鲁瑞娟【作者单位】天津市药品检验所,天津300070【正文语种】中文【中图分类】R284.2多糖是由单糖聚合成的天然生物大分子，结构复杂，分子量大，极性大。
随着人们对多糖研究的深入，越来越多的多糖被分离出来，并且发现这些多糖具有很多的生物学活性和潜在的应用价值[1，2]。
但多糖结构复杂，种类繁多，并且常与脂质和蛋白质结合成多糖复合物，这给植物多糖的提取和分析带来不少困难。
本文对植物多糖的提取方法和分析方法进行简要综述。
植物多糖常用的提取方法有溶剂提取法、超滤法、酶解法、超声辅助提取法、超临界流体萃取法、微波辅助提取法、闪式提取法和高压蒸煮法等[3-10]。
1.1 溶剂提取法溶剂提取法是提取多糖的最常用的方法。
常用的粗多糖的提取方法有水提取、碱提取和酸提取。
水提法是多糖传统的提取方法，因为酸法和碱法提取中，易破坏多糖的结构，增加多糖损失。
李艳红[11]提取山楂多糖采用传统热水法的最佳条件为：提取时间6 h，温度80 ℃，液固比15∶1，山楂多糖的提取率为1.67%。
Ai等[12]用水在70 ℃提取3 h得到水溶性苹婆籽多糖，残渣再使用0.05 mol/L NaOH溶液采用40 ℃提取2 h，得到碱溶性多糖，碱提取的浓度不应太高，太高会破坏多糖的结构增加多糖的损失。
天然药物多糖的主要生物活性及分离纯化方法
天然药物多糖的主要生物活性及分离纯化方法一、本文概述天然药物多糖是一类具有广泛生物活性的天然高分子化合物，其独特的结构和功能使得它们在医药、食品、化妆品等多个领域具有广阔的应用前景。
本文旨在全面概述天然药物多糖的主要生物活性以及分离纯化方法，以期为相关领域的研究和应用提供有价值的参考。
我们将深入探讨天然药物多糖的主要生物活性，包括其免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、降血糖等多方面的药理作用。
这些生物活性使得天然药物多糖在预防和治疗多种疾病方面具有独特的优势。
我们将详细介绍天然药物多糖的分离纯化方法。
由于天然药物多糖的来源广泛，结构复杂，因此其分离纯化过程往往具有一定的挑战性。
我们将从样品的采集、预处理、提取、分离、纯化以及结构鉴定等方面，系统地介绍天然药物多糖的分离纯化流程，以期为相关实验提供技术指导和参考。
通过本文的阐述，我们期望能够为读者提供全面而深入的天然药物多糖知识，进一步推动其在医药、食品、化妆品等领域的应用和发展。
二、天然药物多糖的主要生物活性天然药物多糖作为一大类生物活性物质，具有多种独特的生物活性，这些活性使其在医药、保健品、食品等领域具有广泛的应用前景。
以下将详细介绍天然药物多糖的几种主要生物活性。
免疫调节作用：许多天然药物多糖具有显著的免疫调节作用，能够激活并增强机体的免疫功能。
它们可以促进免疫细胞的增殖与分化，提高免疫细胞的活性，从而增强机体的免疫力，对预防和治疗免疫相关疾病具有重要意义。
抗肿瘤作用：许多研究表明，天然药物多糖具有抑制肿瘤细胞生长、诱导肿瘤细胞凋亡、增强抗肿瘤药物疗效等作用。
这些作用使得天然药物多糖成为肿瘤治疗中的重要辅助药物，具有广阔的应用前景。
抗氧化作用：天然药物多糖中的许多成分具有显著的抗氧化活性，可以清除体内的自由基，减轻氧化应激损伤，保护细胞和组织免受氧化损伤。
这对于预防和治疗氧化应激相关疾病具有重要意义。
降血糖作用：部分天然药物多糖具有降低血糖的作用，可以通过提高胰岛素敏感性、促进胰岛素分泌、抑制肝糖原分解等途径来调节血糖水平。
多糖的提取_分离与纯化
中图分类号：ＴＳ２３；文献标识码：Ａ；文章篇号：１００７－２７６４（２００４）０３－００１４４－０５５ 多糖的提取、分离与纯化叶凯贞 黎碧娜 王奎兰 谭志伟 （广东工业大学轻工化工学院，广州 ５１００９０） 摘 要：介绍了动物，植物和菌类多糖的提取方法，并针对粗多糖中所含的杂质不同，采用不同的方法加以去除，以达到多糖与杂质的分离。
关键词：多糖；提取；分离；纯化 Extraction and Separation of PolysaccharideYe Kaizhen, Li Bina, Wang Kuilan, Tan Zhiwei(Faculty of Chemical Engineering and Light Industry GDUT., Guangzhou 510090)Abstract: The extraction methods of polysaccharide from animals, plants and fungus were introduced in this paper. According to the impurities of every kind of polysaccharide, different ways of removal of those impurities adopted to gain purified polysaccharide were discussed.Key words: polysaccharide; extraction; separation; purification多糖(polysaccharides,PS)又称多聚糖。
其存在于动物、高等植物、微生物(细菌和真菌)及海藻等机体中。
多糖具有复杂、多方面的生物活性和功能,可作为广谱免疫促进剂，具有免疫调节功能，如多糖能治疗风湿病、慢性病毒性肝炎、癌症等免疫系统疾病，甚至能抗AIDS病毒[1]；还具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂作用；促进核酸与蛋白质的生物合成作用；能控制细胞分裂和分化，调节细胞的生长与衰老，而且多糖作为药物其毒性极小，因而多糖的研究已引起人们的极大兴趣。
多糖分离纯化
多糖分离纯化1. 概述多糖是由许多重复单元组成的生物大分子，具有广泛的生物功能和应用价值。
多糖的分离纯化是从混合物中分离出目标多糖并提高纯度的过程。
本文将介绍多糖分离纯化的常用方法和技术，以及其在食品、药品和生物工程等领域的应用。
2. 多糖的分离方法多糖的分离方法主要包括溶剂沉淀、离子交换、凝胶过滤、超滤、逆流层析、电泳和气相色谱等。
下面将分别介绍这些方法的原理和应用情况。
2.1 溶剂沉淀溶剂沉淀是利用溶剂的物理性质，如极性和温度等，使多糖在溶液中发生相分离的方法。
通常采用醇类溶剂，如乙醇或异丙醇。
溶剂沉淀适用于多糖与其他溶质的溶解度差异较大的情况，但纯度较低。
2.2 离子交换离子交换是利用离子交换树脂上的功能基团与多糖分子间发生离子交换反应的方法。
树脂的功能基团可以选择性吸附或释放多糖分子。
离子交换适用于多糖的分子量差异较大的情况，例如海藻酸和壳聚糖的分离。
2.3 凝胶过滤凝胶过滤是利用凝胶的孔隙结构将分子按大小分离的方法。
多糖分子较大，可以被凝胶孔隙排除，而小分子可以通过凝胶透过。
凝胶过滤常用于多糖与其他小分子的分离，如蛋白质和核酸。
2.4 超滤超滤是利用超滤膜的孔隙结构将溶液分离的方法。
超滤膜的孔径可以根据需要选择，通常是分子量截留范围在1 kDa至100 kDa之间。
超滤适用于多糖与其他大分子的分离，如蛋白质和核酸。
2.5 逆流层析逆流层析是利用多糖与填料间的亲和作用进行分离的方法。
填料可以是具有特定亲和性的配体，如亲和树脂。
逆流层析适用于分子间相互作用较强的多糖分离。
2.6 电泳电泳是利用电场作用将分子按电荷和大小进行分离的方法。
多糖可根据电荷差异选择合适的电泳方法，如聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳。
电泳在多糖的分子量分析和负载量测定中广泛应用。
2.7 气相色谱气相色谱是利用样品在气相载体中的分配和迁移以实现分离的方法。
多糖需要经过甲硅烷衍生化处理后才可以进行气相色谱分析。
气相色谱适用于多糖的含量测定和结构分析。
08多糖的提取、分离纯化和结构分析
结构分析
一、前言
多糖和蛋白质、基因是生命科学的三大领域，是自 然界含量丰富的物质，也是与人类生活紧密相关的一类 生物高分子。大量研究表明，多糖具有其独特的生物活 性，是许多天然产物的主要活性成分，具有抗菌、抗病 毒、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老等功效。多糖的提取、分 离和纯化是研究多糖结构和活性的基础，只有得到相对
多糖的结构分析
3、糖链中糖残基间的连接位置分析
（1）甲基化分析方法：确定糖链中糖基间的连接位置常用 方法。该法首先将多糖链全甲基化，使所有的游离羟基变为
甲氧基。目前最常用的甲基化方法是改良Hakomori法。
Hakomori法先将样品溶于无水二甲基亚砜中，然后与 甲基亚磺酰甲基钠SMSM反应，使得多糖上游离羟基离子化 ，多糖成为阴离子后，易于CH3I反应，该法通常需重复数次 。以α-(1-4)葡聚糖为例说明甲基化过程。
包括离子交换色谱柱和凝胶柱色谱。
特点：分离效率高、设备简单、操作方便、条件温和 、不易造成物质变性等优点。 应用：物质分离纯化、分析鉴定最重要的方法之一； 分离/有机化合物及生物大分子不可缺少的手段。
多糖的结构分析
多糖的结构：
多糖的结构是其生物活性的基础，多糖的结构分析 在多糖的研究中具有非常重要的地位，是糖化学的核心 所在。 与蛋白质、核酸大分子相比，糖链的结构也包括一
端基法、HPLC、黏度法、凝胶色谱法和超滤法等，其中目
前公认较好的方法是高效凝胶渗透色谱（HPGPC）。 高效凝胶渗透色谱又称高效尺寸排阻色谱（ HPSEC） 、高效凝胶色谱，是一种高分子领域的高效分离分析技术， 是研究高分子的分子量及合成高分子分子量分布及与分子线 团尺寸相关的结构、反应、物性的最有效的手段之一。常用 的商品柱有Bondagel和TSK柱系。
多糖的提取原理
多糖的提取原理
多糖的提取原理是将植物或微生物中的多糖分子，经过一系列的物理、化学方法进行分离和纯化。
首先，利用机械方法（如研磨、切割等）破碎植物细胞壁或微生物细胞膜，释放出多糖分子。
然后，可以通过浸提、溶解、离心等方法将多糖与其他组分分离。
接下来，可以利用不同特性的分离方法进一步提取纯化多糖。
常见的方法包括酸碱水解、醇沉、离子交换层析、凝胶过滤层析、凝胶电泳等。
其中，酸碱水解可以利用多糖在酸性或碱性条件下的溶解性差异进行分离。
醇沉可以根据多糖与醇溶液的亲和性差异实现分离。
离子交换层析则是利用多糖在具有固定电荷的树脂上吸附和洗脱的原理进行纯化。
凝胶过滤层析和凝胶电泳可以根据多糖的分子大小和电荷来分离。
最后，对提取得到的多糖进行浓缩和干燥，得到纯化的多糖样品。
此外，还可以利用光谱分析、色谱分析等方法对提取得到的多糖进行结构表征和定量分析。
总之，多糖的提取原理是依靠一系列的物理、化学方法对植物或微生物中的多糖进行分离和纯化，最终得到纯化的多糖样品。
多糖各种提取方法
一、植物多糖的提取1 溶剂提取法1．1 水提法水对植物组织的穿透力强，提取效率高，在生产上使用安全、经济。
用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。
一般植物多糖提取采用热水浸提法，该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物；或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质，沉淀提纯多糖；但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同，它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离；还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离；其中，以乙醇沉淀最为普遍。
但以根茎为主的植物体,细胞壁多糖含量高,热水直接提取率不高。
此时为破坏细胞壁,增加多糖的溶出，有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解。
1．2酸碱提法有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。
但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势，目前报道的并不多。
而且即使有优势，在操作上还应严格控制酸度，因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。
有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。
采用的稀碱多位为0．1mol／L氢氧化钠、氢氧化钾，为防止多糖降解，常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。
同样，碱提优势也是因多糖类的不同而异。
与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。
另外，稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析，浓缩与醇析而获得多糖沉淀。
1．4 生物酶提取法酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。
此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
1．5 超声提取法超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。
多糖的分离纯化及性质表征
2.2多糖的提取方法
酶法
酶解反应较温和将组织分解，增加多糖的溶出，可较 大幅度提高产率。
常用于除去各种与多糖结合的结合蛋白质。
2.3多糖提取液浓缩
多糖提取液浓缩应尽量在低温下进行，并防止提取物 与氧气接触，防止多糖被氧化，保持原有结构及生物 活性。 吸附法
干葡聚糖凝胶加入提取液中，两者比例为1:5.由于凝 胶吸水，提取液的体积可缩小三倍左右，多糖回收率 达80%。
多糖的分离纯化及结构表征
员工培训 2012-7-31
1、多糖的基本概述 多糖，又称多聚糖，是由10个以上的单糖通过 苷键连接而成的链状聚合物。 (C6H10O5)n， n>10
1、多糖的基本概述
组成分类
同多糖：由一种单糖组成（淀粉、半纤维素、几丁质等） 杂多糖：由两种或两种以上单糖组成（透明质酸、硫 酸软骨素、硫酸皮肤素等）
多糖的结构表征
组成单糖种类与数目不相同，多糖的结构非常复杂多糖 结构复杂，其研究主要包括以下内容： 1.相对分子质量 2.单糖的种类与物质的量比 3.各糖环的构象( 呋喃型或吡喃型)与异头碳构型
4.糖残基间的连接方式
5.二级结构及空间构象
多糖的结构表征
1.多糖相对分子质量测定 常用的方法有凝胶色谱法、蒸汽压渗透计法、端基法、 粘度法、光散射法、渗透压法和超滤法等。 凝胶色谱法是比较常用的方法，用已知分子量样品作标 准，建立标准曲线，求得待测多糖的相对分子质量。 多糖相对分子质量只代表相似链长的平均而不是确切的 分子大小。往往用不同的方法会得到不同的相对分子质 量。
2多糖的提取分离
多糖存在形式： 细胞壁外-胞外多糖 细胞壁内-胞内多糖（大多数多糖） 细胞壁多糖 动植物的细胞大多由脂质包围，用机械粉碎后还必须 脱脂（沙氏提取器，乙醇回流）。 对于含有较多单糖和低聚糖的样品可用热的80%乙醇 处理。
多糖类药物提取方法及抗病毒活性研究
多糖类药物提取方法及抗病毒活性研究多糖是一类具有多个单糖分子组成的高分子化合物，具有广泛的生物活性，尤其在免疫调节和抗病毒方面表现出了独特的优势。
目前，许多中草药和菌类中都已经分离出多种具有抗病毒活性的多糖类化合物。
总体来说，从植物和微生物中提取多糖类药物的方法主要包括以下几个方面。
1. 原料选择首先，需要选择合适的原料。
一般来说，植物、菌物等生物体中含有大量的多糖类化合物，但要想得到高质量的多糖提取物，则需要选取具有较高多糖含量的原料。
如何进行筛选呢？可以通过检测各种原料中的糖类含量、黏度、溶解度等指标，以及通过实验验证不同原料的抗病毒活性，最终选择出最适宜提取多糖的原料。
2. 样品处理在原料筛选后，需要对采集到的样品进行物理、化学处理。
一般情况下，会采用水煮提取法将样品中的多糖类化合物提取出来。
但是，要注意的是，提取过程可能受到各种因素的干扰，例如温度、酸碱度、时间等。
因此，在提取前需要对样品进行充分处理，将干扰因素减少到最小。
同时，在提取过程中也需要注意保持营养成分的完整性和稳定性，避免化学反应和热敏物质的分解。
3. 分离纯化提取多糖后，需要对提取物进行分离纯化。
一般情况下，可以采用色谱层析、电泳、电化学、纯化膜等手段对多糖进行纯化。
这些方法对多糖的分离效率有较好的保障，但需要根据实际情况进行选择，并保证操作过程的无菌、无氧和干燥。
4. 抗病毒活性研究通过获得纯化后的多糖类化合物，我们可以对其抗病毒活性进行研究。
在实验中，可以通过CELL assay等方法，评估不同多糖类化合物的抗病毒能力。
同时，还可以利用光学显微镜和扫描电镜等手段，观察多糖类化合物对病毒的抑制作用。
总之，多糖类药物的提取方法和抗病毒活性研究，需要综合考虑多个方面的因素，例如原料选择、样品处理、分离纯化和实验操作等。
只有在严格控制各类操作因素的基础上，才能得到高质量、高效的多糖类化合物，进一步促进多糖类药物在抗病毒领域的应用。
多糖分离纯化及含量测定
• 影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸 提固液比、提取时间以及提取次数等。
• 该种方法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低， 安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
• 但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的 成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后 续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也 不高。
三氟三氯乙烷法
• 将多糖溶液与三氟三氯乙烷等体积混合，低温搅拌10 min 左右，离心分离得上层水层，水层继续用上述方 法反复处理几次，得无蛋白质的多糖溶液，此法效率 较Seavg 法高，但溶剂沸点低，易挥发，不宜大量应 用。
2. 色素的去除
• 中草药来源的多糖, 可能含有酚型化合物而颜色较深, 这类色素大多呈负性离子,不能用活性炭吸附剂脱色, 可以用弱碱性树脂DEAE-纤维素来吸附色素,这样不仅 可以达到脱色的目的, 而且可以进行多糖的分离。
• 除蛋白的方法传统上有Sevage 法、三氯乙酸法、三氟 三氯乙烷法等。
Sevage 法
• 根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特点，用V(氯 仿)∶V(戊醇或正丁醇)为5∶1 或4∶1，混合物剧烈振 摇20～30 min，蛋白质变性生成凝胶，离心分离，分 去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质。
• 一般按多糖水溶液的1/5~1/4体积加入。
• 在微波协助浸取过程中，萃取剂种类、微波剂量、物 料含水量、温度、萃取时间及pH值等都对萃取效果产 生影响。其中，萃取剂种类、微波作用时间和温度对 萃取效果影响较大。
• 微波辅助提取多糖和其他的萃取方法比较，微波萃取 效率高，操作简单，且不会引入杂质，多糖纯度高， 能耗小，操作费用低，符合环境保护要求，是很好的 多糖提取方法。
多糖分离纯化及含量测定
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活性 。本 文对 多糖 的提 取 、 分 离以及 纯化 方法进行 了总结 ， 以期 对今 后 多糖 衍 生产。
关 键词 ： 多糖 ； 提取 ； 分离； 纯化
中图分 类号 ： ０ ６ ２ ９ ． １ ２
文献标 志 码 ： Ａ
文章 编号 ： １ ６ ７ １ — １ ６ ０ ２ （ ２ ０ １ ４ ） １ ８ － ０ ０ １ ３ — ０ ４
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３ ６卷 第 １ ８期
２ ０ １ ４年 ９月
西
部
皮
革
Ｖ０ ｌ ＿ ３ ６ Ｎｏ ． １ ８
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Ｓ ｅ ｐ ． ２ ０１ ４
多糖类化合物提 取及分 离纯化 方法
刘欣 ， 常浩 生 ， 刘方平 ， 白祥君 ， 王勇
（ 陕西理工学 院 化学与环境科学学院 ， 陕西 汉中 ７ ２ ３ ０ ０ １ ） 摘 要 ： 多糖是 由醛糖和酮糖以糖苷键连接在一起的一类含有多种活性物质的大分子化合物。 活性多糖 作为生物效应调节剂 ， 主要作用于机体的免疫系统 ， 具有抗肿瘤、 抗炎、 抗凝血、 抗病毒、 降血脂、 降血糖等
Ｋｅ ｙ ｗｏｒ ｄｓ ：ｐ ｏ ｌ ｙ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ；ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ；ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ；ｐ ｕ ｉｆ ｒ ｉｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
前 言
多 糖 具 有 复 杂 、多 方 面 的生 物 活性 和功 能 ，大量 药 理 及 临 床 研 究 证实 ， 多糖 具 有 抗感 染 、 免疫
ｉ ｎ ｌ ｆ ａ ｍｍａ ｔ ｏ ｒ ｙ ，ａ ｎ ｔ ｉ － ｃ ｏ ａ ｇ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ，ａ ｎ ｔ ｉ － ｖ ｉ ｒ ａ ｌ ，ｈ ｙ ｐ ｏ ｌ ｉ ｐ ｉ ｄ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｎ ｄ ｈ ｙ ｐ ｏ ｇ ｌ ｙ ｃ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｉ ｅ ｓ ．Ｉ ｎ ｔ ｈ ｉ ｓ ｐ ａ ｐ ｅ ｒ ，ｔ ｈ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｆ ｏ ｒ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ， ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｐ ｕ ｉ ｒ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｐ ｏ ｌ ｙ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ｗ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｍｍａ ｉ ｒ ｚ ｅ ｄ ， ｗｉ ｔ ｈ ａ ｎ ｅ ｘ ｐ ｅ ｃ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｏ ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｄ ｅ ａ ｒ ｅ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｆ ｕ ｔ ｕ ｒ ｅ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ｐ ｏ ｌ ｙ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ｄ ｅ ｒ ｉ ｖ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｉ ｒ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｌ ｅ ａ ｔ ｈ ｅ ｒ ｉ ｎ ｄ ｕ ｓ ｔ ｙ． ｒ
促进 、 肿 瘤 防治 、 抗疲劳 、 抗凝血 、 抗 动脉 粥 样 硬化 、降 血 糖 、降血 脂、 抗辐射 、 抗菌、 抗 病 毒 等 药 理 作 用 ，此 外 它 还具 有 治 愈 病毒 性 肝炎 、 类 风湿 症 、 艾 滋 病 等 免疫 损 伤 或 免疫 缺 损 症 ，以及 放 化疗 后