仪器分析法导论优秀课件
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习惯上，t’R2＞ t’R1，故α ＞1，标志两峰在色谱图中的相对位置。相对 保留值只与柱温和固定相性质有关，与其他色谱操作条件无关，它表示了 固定相对这两种组分的选择性。
色谱分离是基于试样中各组分在两相间平衡分配的差异。平衡分配 可用分配系数和容量因子表征。
14-2-4 分配系数和容量因子
1. 分配系数（partion factor） K 组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、挥发的过
Wb=4 ，W1/2 =2.354
4. 峰面积 A
峰与基线延长线所包面积，A=1.065hW1/2
14-2-3 保留值
1. 用时间表示的保留值
（1）死时间（tM）
不被固定相保留的组分，从进样 到出现峰极大值所需要的时间。实际 是流动相流经色谱柱所需时间，或组 分在流动相中消耗的时间。
对气相色谱，tM指从进样到空气 峰（对热导检测器）或甲烷峰（对氢 火焰检测器）最高点所经过的时间。
以三聚氰胺为例，其分子式由3个碳原子、6 个氢原子和6个氮原子组成，氮含量高达66.7％。 而牛乳蛋白氮含量只有15.7％，大豆蛋白氮含量 也仅有16％。毋庸置疑，在氮含量比较上，三聚 氰胺胜出。难怪，有人把三聚氰胺称做“蛋白 精”。
三聚氰胺具有轻微的生物学毒性。早在1945年，美国 纽约里德勒实验室两位毒理学专家便发表论文指出，长期 给大鼠、兔和狗喂食大剂量三聚氰胺后，会造成其生殖、 泌尿系统的损害，以及膀胱、肾部结石，并可以进一步诱 发膀胱癌。
1. 分配系数与分配比都是与组分及固定相的热力学性质有关的常数，随分 离柱温度、柱压的改变而变化。
2.分配系数与分配比都是衡量色谱柱对组分保留能力的参数，数值越大， 该组分的保留时间越长。
3. 分配比可以由实验测得。
从色谱流出曲线上，得到信息是：
（l）根据色谱峰的个数，可以判断样品中所含组份的最少个数． （2）根据色谱峰的保留值(或位置），可以进行定性分析． （3）根据色谱峰下的面积或峰高，可以进行定量分析． （4）色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依
国家标准规定了高效液相色谱法、气相色谱-质谱联 用法、液相色谱-质谱/质谱法三种方法为三聚氰胺的检 测方法，检测定量限分别为2毫克/千克、0.05毫克/千克 和0.01毫克/千克。标准适用于原料乳、乳制品以及含乳 制品中三聚氰胺的定量测定。
3. 区域宽度
用来衡量色谱峰宽度的参数，有三种 表示方法： （1）峰底宽(Wb)：色谱峰两边转折点所 画切线与基线相交截距；拐点位于0.607h 处。 （2）半峰宽(W1/2)：色谱峰高一半处的 宽度 ； （3）标准偏差()：拐点间距离的一半， 即0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半。
2. 按固定相的固定方式分类
柱色谱 固定相装于柱内的色谱法 平板色谱 固定相呈平板状的色谱法
纸色谱 薄层色谱
3. 按分离过程的机制分类
吸附色谱：利用吸附剂表面对不同组分的物理吸附性能差异 分配色谱：利用不同组分在两相分配系数不同 离子交换色谱：利用离子交换原理 排阻色谱：利用多孔性物质对不同大小分子的排阻作用
3.色谱法的特点
（1）分离效率高 复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。
（2） 灵敏度高 可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-12)级的物
质量 （3） 分析速度快
一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分 析 （4） 样品用量少
(5)可用于定性和定量
wenku.baidu.com
蛋白质中含有碳、氢、氧、氮、硫等元素。其中，氮元素极为特别：氮在绝 大多数蛋白质中含量相当接近，一般为15％～17％，平均值为16％左右。因此， 丹麦化学家约翰·凯达尔很巧妙地想到，既然氮元素含量稳定，只要准确测量出氮 的含量，便能推算出其蛋白质含量。发表于1883年的此方法，无疑为蛋白质的检 测做出了巨大贡献。而凯氏定氮法亦有不足之处。最大的问题在于这种方法只能 检测氮含量，并不能鉴定蛋白质真伪。不难想象，只要加入含氮量高的物质，就 可以骗过凯氏定氮法，轻松获得“高蛋白含量”的称号。
（2）保留时间（tR）
tM
L u
从进样开始到色谱峰出现极大值时所需的时间；组分的保留时间就是它通过 色谱柱所需的时间，也就是组分在柱内运行的时间。
3. 相对保留值（选择性因子，ri,s 或α）
组分2与组分1调整保留值之比：
tR2 tM t'R2
tR1 tM t'R1
1. 基准组分，可以是被测物中某一指定组分，也可人为配制； 2. 组分
2.容量因子(capacity factor) k’ 在实际工作中，也常用分配比来表征色谱分配平衡过程。分配比是
指，在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的质量比：
k' 组 组分 分在 在流 固动 定相 相中 中的 的质 质量 量mmqpsm
容量因子也称： 容量比（capacity factor）、分配比 （partion radio）
仪器分析法导论优秀课件
色谱法是一种分离技术； ➢ 装CaCO3的玻璃柱叫色谱柱； ➢ 其中的一相固定不动，称为固定相； ➢ 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称 为流动相。 ➢ 试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在色谱柱中的两相间不 断进行着的分配过程。
色谱法的实质是分离，它是根据混合物各组分在互不相溶的两相— 固定相与流动相中吸附能力、分配系数或其它亲和作用性能的差异作为 分离依据的。当混合物各组分随流动相通过固定相时，在流动相与固定 相之间进行反复多次分配，使吸附性能或分配系数有微小差别的物质， 在移动速度上产生较大差别，从而得到分离。与适当的柱后检测方法结 合，实现混合物中各组分的分离与检测。
程叫做分配过程。在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的浓 度（单位：g/mL）比，称为分配系数，用 K 表示，即：
K 组 组分 分在 在流 固动 定相 相中 中的 的浓 浓度 度 ccms
K除了与温度、压力有关外，还和组分的性质、固定相和流动相的性质有关。 分配系数是色谱分离的依据。不同组分的分配系数的差异，是实现色谱分离的 先决条件，分配系数相差越大，越容易实现分离。 例：组分A、B在某气液色谱柱上K分别为495，467，哪个先出峰？
色谱分离是基于试样中各组分在两相间平衡分配的差异。平衡分配 可用分配系数和容量因子表征。
14-2-4 分配系数和容量因子
1. 分配系数（partion factor） K 组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、挥发的过
Wb=4 ，W1/2 =2.354
4. 峰面积 A
峰与基线延长线所包面积，A=1.065hW1/2
14-2-3 保留值
1. 用时间表示的保留值
（1）死时间（tM）
不被固定相保留的组分，从进样 到出现峰极大值所需要的时间。实际 是流动相流经色谱柱所需时间，或组 分在流动相中消耗的时间。
对气相色谱，tM指从进样到空气 峰（对热导检测器）或甲烷峰（对氢 火焰检测器）最高点所经过的时间。
以三聚氰胺为例，其分子式由3个碳原子、6 个氢原子和6个氮原子组成，氮含量高达66.7％。 而牛乳蛋白氮含量只有15.7％，大豆蛋白氮含量 也仅有16％。毋庸置疑，在氮含量比较上，三聚 氰胺胜出。难怪，有人把三聚氰胺称做“蛋白 精”。
三聚氰胺具有轻微的生物学毒性。早在1945年，美国 纽约里德勒实验室两位毒理学专家便发表论文指出，长期 给大鼠、兔和狗喂食大剂量三聚氰胺后，会造成其生殖、 泌尿系统的损害，以及膀胱、肾部结石，并可以进一步诱 发膀胱癌。
1. 分配系数与分配比都是与组分及固定相的热力学性质有关的常数，随分 离柱温度、柱压的改变而变化。
2.分配系数与分配比都是衡量色谱柱对组分保留能力的参数，数值越大， 该组分的保留时间越长。
3. 分配比可以由实验测得。
从色谱流出曲线上，得到信息是：
（l）根据色谱峰的个数，可以判断样品中所含组份的最少个数． （2）根据色谱峰的保留值(或位置），可以进行定性分析． （3）根据色谱峰下的面积或峰高，可以进行定量分析． （4）色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依
国家标准规定了高效液相色谱法、气相色谱-质谱联 用法、液相色谱-质谱/质谱法三种方法为三聚氰胺的检 测方法，检测定量限分别为2毫克/千克、0.05毫克/千克 和0.01毫克/千克。标准适用于原料乳、乳制品以及含乳 制品中三聚氰胺的定量测定。
3. 区域宽度
用来衡量色谱峰宽度的参数，有三种 表示方法： （1）峰底宽(Wb)：色谱峰两边转折点所 画切线与基线相交截距；拐点位于0.607h 处。 （2）半峰宽(W1/2)：色谱峰高一半处的 宽度 ； （3）标准偏差()：拐点间距离的一半， 即0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半。
2. 按固定相的固定方式分类
柱色谱 固定相装于柱内的色谱法 平板色谱 固定相呈平板状的色谱法
纸色谱 薄层色谱
3. 按分离过程的机制分类
吸附色谱：利用吸附剂表面对不同组分的物理吸附性能差异 分配色谱：利用不同组分在两相分配系数不同 离子交换色谱：利用离子交换原理 排阻色谱：利用多孔性物质对不同大小分子的排阻作用
3.色谱法的特点
（1）分离效率高 复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。
（2） 灵敏度高 可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-12)级的物
质量 （3） 分析速度快
一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分 析 （4） 样品用量少
(5)可用于定性和定量
wenku.baidu.com
蛋白质中含有碳、氢、氧、氮、硫等元素。其中，氮元素极为特别：氮在绝 大多数蛋白质中含量相当接近，一般为15％～17％，平均值为16％左右。因此， 丹麦化学家约翰·凯达尔很巧妙地想到，既然氮元素含量稳定，只要准确测量出氮 的含量，便能推算出其蛋白质含量。发表于1883年的此方法，无疑为蛋白质的检 测做出了巨大贡献。而凯氏定氮法亦有不足之处。最大的问题在于这种方法只能 检测氮含量，并不能鉴定蛋白质真伪。不难想象，只要加入含氮量高的物质，就 可以骗过凯氏定氮法，轻松获得“高蛋白含量”的称号。
（2）保留时间（tR）
tM
L u
从进样开始到色谱峰出现极大值时所需的时间；组分的保留时间就是它通过 色谱柱所需的时间，也就是组分在柱内运行的时间。
3. 相对保留值（选择性因子，ri,s 或α）
组分2与组分1调整保留值之比：
tR2 tM t'R2
tR1 tM t'R1
1. 基准组分，可以是被测物中某一指定组分，也可人为配制； 2. 组分
2.容量因子(capacity factor) k’ 在实际工作中，也常用分配比来表征色谱分配平衡过程。分配比是
指，在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的质量比：
k' 组 组分 分在 在流 固动 定相 相中 中的 的质 质量 量mmqpsm
容量因子也称： 容量比（capacity factor）、分配比 （partion radio）
仪器分析法导论优秀课件
色谱法是一种分离技术； ➢ 装CaCO3的玻璃柱叫色谱柱； ➢ 其中的一相固定不动，称为固定相； ➢ 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称 为流动相。 ➢ 试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在色谱柱中的两相间不 断进行着的分配过程。
色谱法的实质是分离，它是根据混合物各组分在互不相溶的两相— 固定相与流动相中吸附能力、分配系数或其它亲和作用性能的差异作为 分离依据的。当混合物各组分随流动相通过固定相时，在流动相与固定 相之间进行反复多次分配，使吸附性能或分配系数有微小差别的物质， 在移动速度上产生较大差别，从而得到分离。与适当的柱后检测方法结 合，实现混合物中各组分的分离与检测。
程叫做分配过程。在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的浓 度（单位：g/mL）比，称为分配系数，用 K 表示，即：
K 组 组分 分在 在流 固动 定相 相中 中的 的浓 浓度 度 ccms
K除了与温度、压力有关外，还和组分的性质、固定相和流动相的性质有关。 分配系数是色谱分离的依据。不同组分的分配系数的差异，是实现色谱分离的 先决条件，分配系数相差越大，越容易实现分离。 例：组分A、B在某气液色谱柱上K分别为495，467，哪个先出峰？