植物组织培养脱毒快繁技术的综述
植物组培脱毒技术及在花卉上的应用
组织培养技术在名贵花卉上的应用前景摘要：综述了组织培养技术的形成、研究进展、意义及其应用植物组培脱毒技术的培养条件，并重点阐述了组织培养方法及其在名贵花卉上的应用以及病毒检测的重要性，最后浅析了组织培养技术存在的问题及展望。
关键词：组织培养；名贵花卉；应用；病毒检测；前景1组织培养技术概述1．1组织培养技术的形成危害植物的病毒、植物菌原体、类细菌有几百种，果树、花卉、蔬菜等植物病毒也不下500多种，绝大多数植物种类是靠无性繁殖的，由于病毒通过无性繁殖传递，在母体内逐代积累，种性退化严重，表现为植物生长受到抑制，形态畸变，产量下降，品质变劣，严重时只好拔除病株，因而造成很大经济损失，而目前生产上对病毒病的防治尚无特效药物。
自从2O世纪5O年代发现通过植物组织培养的方法，可以脱除严重患病毒病植物的病毒，恢复种性，提高产量、质量，组织培养脱毒技术便在生产实践中得到广泛应用，且有不少国家已将其纳入常规良种繁育体系，有的还专门建立了大规模的无病毒苗生产基地。
1．2组织培养技术研究进展white于1943年首先发现，在感染烟草花叶病毒的烟草植株生长点附近病毒的浓度很低，甚至没有病毒，并且病毒的含量随植株部位和年龄而异。
Morel等在这个启示下，于1952年利用感染花叶病毒的大丽菊茎尖分生组织培养，得到了无毒植株。
自1952年以来，通过茎尖分生组织培养或热处理与分生组织培养结合的方法获得成功的实例有100余种，其中最成功的实例之一是马铃薯的脱毒培养Ⅲ。
随着植物细胞培养技术的发展，2O世纪5O年代末通过愈伤组织培养脱毒获得成功。
7O年代初植物原生质体培养成完整的植株，为利用原生质体培育无毒植株提供了可能性。
1975年Shepard_5 通过对瘟染病毒的烟草原生质体的培养得到了无毒植株。
1972年Navarro等将果树嫁接方法与茎尖分生组织培养法两者有机结合，创立了一种新的植物组织培养脱毒技术，即茎尖显微嫁接法。
组培快繁的主要流程及其技术要点
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组织培养常见植物脱毒与快繁
为微型薯 不带病毒;增产效果一般在40%以上 1 试管生产 微型薯一般只有1～5g 用组织培养
方法生产微型薯分以下两个步骤： 1单茎段扩大繁殖 2微型薯的诱导
2 温室多层架盘工厂化生产 3 低网畦生产
二 甘薯的脱毒与快繁
一茎尖培养 1 茎尖培养脱毒
取高产 优质母株枝条;切成带1芽小段 自来水 流水冲洗; 70%酒精10s; 0 1%的升汞10min; 无菌水4～5次;或2%次氯酸钠5min;无菌水3～ 4次 2 茎尖剥离和培养 解剖镜下剥去芽上较大幼叶;切取0 3～0 5mm含1～2个叶原基的茎尖分生组织;迅速接 种到制备好的培养基上
原 球 茎 的 增 殖
3 苗的分化培养 兰科植物与其他草本花卉不同;它不易受生
长调节物质的影响;一般是将原球茎转入离子浓 度较低的培养基中;加入一些如椰子汁等天然提 取物质;效果会更好;原球茎很快再生成植株
lcm高的幼苗转移到壮苗培养基上培养3～6 个月;使其长3～4片叶 3～4条根 3～10cm高; 可移栽在泥炭和蛭石中;保湿弱光施肥
所结薯块即为生产用种薯良种
红薯原原种炼苗
第二节 果树脱毒快繁
利用组织培养方法繁殖果树植株具有占地面积 小;繁殖周期短;全年都能进行繁殖;繁殖系数高等特 点 还可以消除果树的某些病毒病;适应果树向品种 更新快 矮化密植以及无病毒栽培方向发展的需要
一 草莓 一草莓离体快繁技术 1 外植体 6～7月份匍匐茎15～20cm长时取材 2 培养基 初代MS+6BA0 5mg/L+GA30 1mg/L+IBA
0 2mg/L 增殖MS+6BA0 5～1 0mg/L 3 生根和驯化 1/2MS+IBA0 2～1 0mg/L 根2～3cm时炼苗;一周后发新根;四周后可移栽
植物组织培养综述
植物组织培养技术综述摘要：组织培养是细胞生物学研究最常用的方法之一，是指从生物体中取出组织或细胞，在离体的条件下模拟体内的生理环境，使其生存、生长、繁殖或传代，借以观察、研究细胞的生长发育等生命活动现象。
植物组织培养以其条件可控、便于观察的优点，在快速繁殖、育种、保护珍贵苗木等工作中应用广泛。
以菊花的组织培养为例，从原理、方法和常见问题三个方面对植物组织培养进行讨论。
关键词：菊花；花瓣；MS培养基；组织培养1 引言自1902年，德国植物学家Haberlandt根据细胞学说，提出单个细胞的植物细胞全能性（totipotency）理论以来，组织培养技术的研究已有100多年历史。
植物组织培养是指在无菌的条件下，将离体的植物器官（根、茎、叶、花、果实等）、组织（形成层、花药、皮层等）、细胞（体细胞和生殖细胞），以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植株。
根据所培养的植物材料的不同，可以把组织培养分为5种类型，即愈伤组织培养、悬浮组织培养、器官培养（胚、花药、子房、根和茎的培养等）、茎尖分生组织培养和原生质体组织培养。
现在植物组织培养技术已在科研和生产中广泛应用，成为最引人注目的生物技术之一，广泛应用于植物的快速繁殖、品种改良、基因工程育种、种质资源保存、次生代谢产物生产等方面，产生了巨大的经济效益和社会效益，对现代农业和医药等领域产生了深刻影响。
2 组织培养基本原理植物细胞具有全能性，即生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能。
离体的植物组织或细胞（也称外植体），在培养了一段时间以后会通过细胞分裂形成愈伤组织（愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞）。
由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物组织的脱分化，或者叫作去分化。
脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫作再分化。
再分化产生的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整的植物体。
植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用
植物组织培养是一种重要的生物技术，它能够实现植物的快速繁殖、脱毒和基因转化。
在植物学研究和植物育种领域，植物组织培养技术的应用非常广泛。
本文将深入探讨植物组织培养中的快繁与脱毒技术及其应用，以帮助读者更深入地理解这一重要领域。
1. 快繁技术在植物组织培养中，快繁技术是指利用植物体的一小部分组织或细胞，通过体外条件培养，实现植物的快速繁殖。
这种技术可以大大提高繁殖速度，缩短繁殖周期，是进行新种质创制、遗传改良和疫病防治的重要手段。
快繁技术的主要方法包括离体培养、愈伤组织培养和微繁殖等。
1.1 离体培养离体培养是将植物体表层（如幼叶、幼茎）或内部组织（如胚乳、子叶）分离出来，移入含有适当营养盐和植物生长调节物的培养基中培养。
通过控制培养条件和添加合适的植物生长激素，可以诱导组织分化和再生形成新植株。
1.2 愈伤组织培养愈伤组织是植物在受到外界刺激或损伤后，经过细胞分裂和组织再生形成的一种未分化的组织。
愈伤组织培养是利用这种特殊组织进行快速繁殖的一种方法，通过控制培养条件和添加植物生长调节物，可以诱导愈伤组织再生形成新植株。
1.3 微繁殖微繁殖是利用植物的微小芽或胚珠进行快速繁殖的方法。
通过培养条件的控制和植物激素的添加，可以诱导微小芽或胚珠快速生长并形成新植株。
2. 脱毒技术在植物组织培养中，由于植物体内可能携带病毒、细菌等病原体，因此会影响到组织培养的效果。
脱毒技术是为了解决这一问题而出现的一种重要技术。
脱毒技术能够有效地清除植物体内的病原体，提高组织培养的成功率和繁殖效率。
2.1 生物脱毒生物脱毒是利用生物制剂对植物体内的病原体进行清除的方法。
通过培养环境中添加含有特定菌株或真菌的生物剂，可以促进植物体内病原体的清除和组织的健康再生。
2.2 生理脱毒生理脱毒是利用植物自身的生理代谢特性进行脱毒的方法。
通过调节培养条件和添加特定的营养物质，可以激活植物的生理代谢活性，加速病原体的清除和组织的再生。
第7章 茎尖培养和脱毒、快繁技术
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
3. 快繁的一般步骤：
③ 试管苗的壮苗与生根：
• 一般要分成单苗 ， 转移到盐浓度较低 、 不含细 一般要分成单苗， 转移到盐浓度较低、 胞分裂素， 含低浓度生长素的生根壮苗培养基， 胞分裂素 ， 含低浓度生长素的生根壮苗培养基 ， 至根、茎长到合适的长度，即可锻炼出瓶。 至根、茎长到合适的长度，即可锻炼出瓶。 • 问题：不易生根 （ 延长时间、 继代 ） ；易生根： 问题：不易生根（ 延长时间 、 继代） 壮苗阶段不加生长素， 壮苗阶段不加生长素 ， 试管外生根可减少费用； • 特殊方法：如马铃薯的小球茎法。 特殊方法：如马铃薯的小球茎法。
7.3 快速繁殖技术（micropropagation ） 快速繁殖技术（
4. 提高试管苗繁殖速度的措施：
① 选择合适的繁殖途径 ② 改良培养基： 激素 （腋芽 、 不定芽 、 胚状体 ） 等； 激素（ 腋芽、 不定芽、 胚状体） ③ 改良培养条件 ： 温 、光 、 湿度、 气体（有利气体、 湿度 、 气体 （ 有利气体、
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 培养方法：固体培养、液体纸 桥培养（易愈伤化时）
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 对培养基和培养条件的要求： • 一般可用MS培养基，加少量的生长素（不 用2,4-D）和细胞分裂素；GA3有时对抑制 愈伤等有一定的效果。
7.2 脱毒技术： 脱毒技术：
3. 茎尖培养技术： • 材料消毒：在温室种植或田间种植的健康植 株上取枝条，必要时母株可用杀菌剂处理； 在实验室切取2-3cm长的芽，去掉较大的叶 片，进行常规的表面灭菌；
7.1 茎尖培养
3. 茎尖培养技术： • 茎尖分离：将灭菌的芽置放有湿滤纸的无菌 培养皿中，置体视显微镜下，依次用镊子或 解剖刀剥去叶片直至露出生长点，用锋利的 解剖刀片把带或不带叶原基的分生组织切下 来，直接接种到培养基上；
脱毒技术及组织培养操作
（二）诱导、继代培养
在无菌条件下，用剪刀将外植体茎段切成0. 5～1
cm 长小段，水平放置接种；叶片切成5mm×5mm小
块，下表皮朝下水平放置接入初代培养基中，接种完
成后即转入培养室进行初代培养，培养温度22～28 ℃，
光强1000～4000 Lx。
1.间接再生途径
培养温度为(25±2)℃,光照强度2000Lx,光照时间为
12h/d,空气相对湿度为65%左右。培养基pH值为5.8～
6.0。培养25d后出现黄绿色的愈伤组织块，诱导率高。
（三）分化、继代培养
将上步得到的愈伤组织转接在诱导丛生芽 的分化培养基MS+6-BA2.0+NAA0.1上，培养1周左 右,观察到愈伤组织表面陆续长出不定芽，继续 增殖培养达到所需芽丛数。
组培快繁技术
• 1．无菌苗培养 • (1)西瓜籽消毒 取无籽西瓜的种子用水浸泡24h， 70％酒精消毒1～2min，再转入0.1％升汞溶液中 消毒15～20 min，无菌水冲洗4～5次，在无菌条 件下剥去种壳，置于无激素的1/2MS培养基中， 直接接受光照或发芽后再行光照培养，30～33℃ 下发芽。 • (2)小腋芽消毒 用于西瓜蔓的消毒剂为滴加少 量吐温-80的4.0％漂白粉溶液。先将西瓜蔓在清 水中漂洗、揩干，再用70％酒精擦净。然后置于 上述消毒剂中消毒15～30 min，在无菌水中漂洗 5次，接种于1/2MS的培养基中或直接放于增殖培 养基中，在25～28℃的条件下培养。
茎段和叶片接种到培养基上，均可以从一周 内，明显可以看到茎段和叶片开始膨大。20d后 产生愈伤组织，30d愈伤组织分化出芽。
2.直接再生途径
茎段和叶片接种到培养基上，均可以从一周 内，明显可以看到茎段和叶片开始膨大。但是 20d后不产生愈伤组织，直接分化出芽。
桂花组织培养快繁技术研究综述
桂花组织培养快繁技术研究综述摘要：目的通过对桂花组织培养快繁技术研究文献的梳理，了解桂花快速繁殖的技术并为市场上大量生产桂花做好一定的准备基础。
方法采用文献综述法和理论分析法。
结果初步总结出组织培养中桂花外植体处理的实际方法。
结论桂花属植物在组织培养快繁技术上具有很大的开发价值和应用价值。
关键词：桂花；组织培养；快繁技术；研究综述一．桂花的生物学描述桂花（Osmanthus fragrans)是我国传统“十大名花”之一，又名木樨、岩桂，属木樨科(Oleaceae)木樨属（Osmanthus Lour)。
为常绿灌木至小乔木，其树干端直，树冠圆整，四季常青，香飘数里。
高可达12m；树皮灰色，不裂；芽叠生；叶长椭圆形，长5-12cm，端尖，基楔形，全缘或上半部有细锯齿；花簇生叶腋或聚伞状，花小，黄白色，浓香；核果椭圆形，紫黑色：花期9．10月(陈有民，1990)。
桂花以其独特的香韵和月宫桂子美丽的神话传说而著称，自古以来深受我国人民喜爱，一向被视作高洁、吉祥、荣誉的象征。
桂花为亚热带树种，原产于我国西南部及中部，在云南、四川、贵州、湖南、湖北、江西、浙江、安徽、广东和广西等地，均有野生桂花树的生长。
现广泛栽培于长江流域及其以南地区。
与我国西南接壤的印度、尼泊尔及邻近的柬埔寨，也有分布(朱文江，1987)。
桂花的花可作香料，也是食品加工业的重要原料，亦可入药。
然而，传统的扦插繁殖技术繁育速度慢，周期长，难以满足市场需要。
生物技术和系统选育方法是花木培育的新趋势，能快速培育花木新品种，增强花木对环境的适应能力，实现花木种植的规模化生产。
目前关于桂花组织培养的研究鲜有报道（张丽霞2013）二．桂花的组织培养和繁殖技术根据不同的桂花品种及其对环境条件的适应性，桂花品种主要采用扦插、压条和嫁接三种方法进行繁殖。
赵昌恒等(2005)研究了桂花品种不同扦插季节和激素处理对其成活率的影响，认为夏季扦插优于春季和秋季；在使用激素中，以IAA效果最好，BA和NAA次之。
植物组织培养技术第七章植物脱毒快繁技术
1、茎尖培养脱毒原理
病毒在植物体内分布不均匀，其数量随植株 部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域，病毒感染 的程度越低，生长点即分生组织（约0.1-1mm） 几乎不含或含病毒很少。
分生组织不带病毒，可能有4方面的原因：
1、植物体病毒的移动主要靠2条途径：一是通过维管 系统，而分生组织中尚未形成维管系统；二是通过胞间连 丝，但这条途径病毒移动速度非常慢，赶不上茎尖和根尖 细胞不断分裂和活跃的生长速度。
二、脱毒方法
(一) 热处理脱毒
（一）发现： 1889年印度尼西亚爪畦人发现，患枯萎病的甘蔗(现证
明为病毒病)，放在50-52℃的热水中保持30min，甘蔗就可 去病生长良好。以后此方法被广泛用于防治许多植物的病 毒病。
热处理又称温治疗法。
• 1、热处理脱毒原理：
①病毒是DNA大分子，病毒进入植 物细胞后，随植物细胞DNA一起复制。 热处理并不能杀死细胞，只是钝化病毒 的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或 增殖停止，而失去病毒的侵染能力。
把抗原-抗体的免疫反应于酶的催化反应相结合而发展 起来的一种综合性技术，灵敏度高，特异性强，发展最快 应用最广的方法。
原理：采用酶标记的特异抗体指示抗原-抗体的结合， 从而检测样品中的抗原定量测定法。
操作程序：将待检植物汁液注入酶联板（聚苯乙烯多 孔微量反应板）中，使抗原吸附在它的孔壁，加入酶(
过氧化物酶或碱性磷酸酶)标记的特异抗体，抗原 -抗体充分反应后，清洗，固相载体酶联板表面只留 下以酶标记的抗原-抗体复合物。加入酶嘚无色底物
葡萄扇叶病毒
苹果花叶病毒
（二）茎尖培养脱毒
1、茎尖培养脱毒原理 2、培养基 3、茎尖培养方法 4、影响微茎尖培养的因素
①外植体大小 ②培养条件 ③外植体的生理状态
chapter3 植物组培快繁和脱毒技术
根形成
根的起源有两种： • 一种是起源于苗基部切口处形成的愈伤
组织上，由愈伤组织内部形成； • 另一种是起源于苗基部切口处愈伤组织
的上部，直接起源于中柱鞘细胞，由于 发生与茎的中柱相连，故利于移栽成活。
胚状体形成
• 概念： 离体培养下起源
于非合子细胞，经历 了胚胎发生和胚胎发 育过程所形成的类胚 结构。
细胞分裂素可打破顶端优势对腋芽 的抑制作用，组培中常添加细胞分裂素 促进腋芽的不断分化和生长，逐渐形成 芽丛；
不定芽（除现有的芽之外，在任何 器官上的通过器官发生重新形成的芽） 形成，一般使用细胞分裂素高于生长素 的配比，两者配比接近1的也用得很多；
• 一般在含丰富还原氮的培养基上 诱导胚状体形成，加生长素，特 别是2，4——D能诱导胚状体发 生，然后转移到降低浓度或没有 生长素的培养基上使其成熟 。
增殖方式
腋芽增殖 不定芽增殖 体细胞胚增殖 愈伤组织增殖
腋芽增殖
• 培养方法简单，能高度保持遗传 稳定性，能长期继代增殖。
• 一般不需要添加外源激素，即使 加也要严格控制浓度，防治产生 愈伤组织。
不定芽增殖
• 从现存的芽以外 的任何器官、组 织上通过器官发 生重新形成芽。
• 繁殖系数高 • 遗传稳定性较好 • 继代次数有限
离体快繁的一般技术
•培养材料选择及消毒 •材料的初代培养(无菌母株制备) • 试管苗的增殖与继代培养（不定芽增殖） • 试管苗的生根与移栽（完整植株形成）
• 再生植株鉴定
芦荟的植物组织培养过程
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1、培养材料选择及消毒 1）、培养材料的选择 • 种和品种选择
苹果脱毒技术
树上的苹果 优质苹果
二、脱毒技术
1.病毒传播方式：苹果以营养繁殖为主，其病毒主要 通过嫁接传播。 2.主要病毒有6种，包括：苹果锈果类病毒（ASSV） 、苹果花叶病毒（ApMV）、苹果绿皱果病毒（AGCV ）、苹果褪绿叶斑病毒（ACLSV）、苹果茎痘病毒（ ASPV）、苹果茎沟槽病毒（ASGV）
电子显微镜法 ELISA法
指示植物法
五、无毒原种苗的保存与应用
1.无毒原种苗的保存
隔离种植保存；离体保存脱毒种苗。 2.无毒原种的推广繁殖
一方面要积极进行无毒苗的推广；另一方面做 好无病毒良种的繁殖。
园艺植物组织培养 —苹果的脱毒与快繁
班级：2011级园艺 姓名：高丽银 学号：2011139139
一、苹果树的形态特征和生物学特性
苹果树落叶乔木，树高可达15米，栽培条 件下一般高3～5米。树干灰褐色，老皮有不规 则的纵裂或片状剥落，小枝光滑。单叶互生，椭 圆至卵圆形，叶缘有锯齿。伞房花序，花瓣白色 ，含苞时带粉红色。果实为仁果，颜色及大小因 品种而异。 苹果树喜光；喜凉；喜微酸性到中性土壤。 最适于土层深厚，富含有机质，心土通气排水良 好的沙质土壤。
5.微体嫁接脱毒 受苹果凹茎病毒（ApSGV）侵染的品种用热处理 无法4脱除病毒，可以用微体嫁接的方法来解决。 以金冠品种品种做砧木，种子经低温层积处理 后消毒，剥取种胚接到MS无机盐培养基中，在25℃ 下暗培养15天，去掉上胚轴和子叶。将去顶幼苗移 至液体培养基，培养瓶内放一中有小孔的滤纸桥。 作接穗的茎尖分生组织，可取自试管苗新梢或田间 植株新梢。将茎尖分生组织嫁接于砧木，使二者维 管束部位相接，1周后接触部位产生愈伤组织，6周 后接穗发育成具有4~6片叶的新梢，此时即可试管外 移栽。
天
植物组织培养脱毒快繁技术的综述
植物组织培养脱毒快繁技术的综述李西雁（广西职业技术学院农业技术工程系2002级应用生物技术专业）摘要：脱除病毒是植物组织培养深入探讨研究中的一个技术难题。
本文结合在桂林莱茵生物科技股份有限公司的实践情况，简要介绍植物组织培养的基本原理和方法，综述植物脱除病毒的热处理、茎尖培养和抗病毒药剂三种方法的原理、发展史和技术方法，并介绍了几种常用的病毒检测方法。
本文以马铃薯为例，重点介绍了利用热处理加茎尖组织培养法获得马铃薯脱毒苗的具体技术方法，脱毒率可达100%。
同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。
关键词：茎尖培养，组织培养，快繁脱毒技术，病毒检测，应用前景1 植物组织培养研究概况1.1 研究简史自从1943年怀特（White）提出植物细胞“全能性”（Totipotency）学说及诸多后学者（Steward，1958，Guha和Marteshwari，1964）相继证实后，引发植物组织和细胞培养快繁技术的勃然兴起。
我国的专家学者在20世纪70年代后也在此领域做了大量的研究和开发工作，创造了很多新方法、新技术，提出不少新成果，开拓了植物组织培养快繁技术的新局面[1]。
目前采用组织培养脱病毒快繁及离体快繁生产株苗的技术已发展相当成熟[2]。
脱毒株苗具有无杂菌、适应能力较强、繁育较快、质量优、抗性好、分蘖性强、繁殖系数高、大批量生产、周年供应、便于运输等优点，已得到有关专家的鉴定及高度评价和种植试验区、种植产区果农的认可。
例如脱毒马铃薯、脱毒红薯、脱毒生姜、脱毒大蒜、脱毒草莓、脱毒苗木、脱毒花卉等等，已成为现代农民致富的新宠[2]。
1.2 植物组织培养和脱毒快繁的定义植物组织培养（Plant tissue culture）是指在无菌的条件下，将离体的植物（根、茎、叶、花、果实、种子等）、组织（形成层、花药组织、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞和生殖细胞）以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植株。
植物离体快繁技术的综述
植物离体快繁技术的综述黄新（生物科学技术学院2021级生物技术一班）全文：植物快繁技术就是一种全新的耕作技术，就是现代计算机智能控制技术与生物技术有机结合的高新农业技术。
运用植物生长模拟计算机为植物创造最为适宜的温、光、气、热、营养、激素环境，使植物的生理潜能得到最大的发挥，植物的生根基因尽快表达，从而实现植物的快速生根。
它的推广应用将会带来一次全新的育苗革命。
本文简要介绍植物快繁技术程序、相关培养技术以及植物快繁相关问题的讨论。
同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。
关键词：植物离体快繁、愈受伤非政府、不定芽细胞分裂、腋芽细胞分裂、愈伤组与织增殖、体细胞胚增殖、玻璃化问题、褐化问题、应用前景1植物离体快繁概况1.1研究简史离体微产卵技术的应用领域，首先应当归因于morel，他在1960年首先创建了兰花离体产卵的方法（原球茎产卵）。
目前总计有400种植物的离体产卵已获得成功，其中许多具备关键经济价值的花卉(例如兰花、菊花、石竹)、果树(草莓、无籽西瓜、葡萄)、经济作物(马铃薯、甘蔗)、林木(桉树、杨树)均已在种苗生产上广泛应用，获得了非常大的经济和社会效益。
我国快速产卵植物的种类超过443种之多荷兰就是试管苗的生产王国1.2植物离体快繁的定义快速产卵（rapidclonepropagation）：也叫做离体产卵（invitropropagation）、微体繁殖（micropropagation），是指在无菌条件下，将植物体的器官、组织或细胞培养于人工培养基中，并辅以人工控制环境，使其生长出完整植株的繁殖技术。
追责植物组织培养郡新得町快繁技术的发展简史，在11世纪就发生的热处理郡新得町法，最早化解一些作物的病毒病害问题[1]。
本世纪50年代发展的植物组织培养技术为郡新得町提供更多了一条有效途径。
现在植物的郡新得町技术存有多种，其中应用领域最广为的存有三种：热处理法、茎细长培育郡新得町法、抗病毒药剂法，将相同的方法结合出来应用领域效果更好。
植物组织培养技术植物脱毒快繁技术
能会产生变异植株。
植物组织培养技术植物脱毒快繁技 术
理由：①病毒的复制速度赶不上细胞的增殖 速度；② 有些细胞通过突变获得了抗病毒 的抗性。
缺点：植株遗传性不稳定，可能会产生变异 植株
植物组织培养技术植物脱毒快繁技 术
（二）茎尖微体嫁接
1. 概念：将无病毒茎尖（ 0.4~1.0mm ）嫁接在培养基 上培养的实生砧木上，以获得脱毒苗木的技术。
植物组织培养技术植物脱毒快繁技 术
无病毒植株培育的意义
1. 去除病毒危害，提高作物品质与产量。采用生物、物理、 化学等途径防治病毒病收效甚微，甚至毫无成效。而通过 组织培养的方法可以脱除严重患病毒植物的病毒种类，提 高产量、质量。因此，到60至70年代在花卉、蔬菜和果 树等得到广泛的应用。 2. 减少环境污染，有利于保护环境 栽培去病毒植物可 减少药剂的使用。
植物组织培养技术植物脱毒快繁技 术
茎尖培养的继代培养和生根培养和一般器 官的培养相同。
茎尖培养脱毒，由于其脱毒效果好，后代 稳定，所以是目前培育无病毒苗最广泛和最 重要的一个途径。
植物组织培养技术植物脱毒快繁技 术
4、影响微茎尖成活及脱毒的因素 （1）母体材料病毒侵染程度
被单一病毒感染的植株脱毒较容易，复合感染的较难。
植物组织培养技术植物脱毒快繁技 术
1、愈伤组织培养脱毒
愈伤组织细胞带病原菌不均一，部分细胞不带病 毒，由这些细胞再生的植株是无病毒的。多次继代的 愈伤组织中病毒含量下降，甚至检测不出病毒。
植物组织培养技术植物脱毒快繁技 术
愈伤组织的某些细胞不带病毒原因：
1、病毒的复制速度赶不上细胞的增殖速度；
2、有些细胞通过突变获得了抗病毒的抗性。
论文综述
暗紫贝母组织培养和快速繁殖的研究第一章文献综述1前言1.1组织培养的研究概况及发展简史20世纪后半叶，植物组织培养发展十分迅速，利用组织培养，不仅可以生产大量的优良无性系，并可获得人类需要的多种代谢物质；细胞融合可打破种属间的界限，克服远缘杂交不亲和性障碍，在植物新品种的培育和种性的改良中有着巨大的潜力；还可获得单倍体、三倍体及其它多倍体、非整倍体；组织培养的植物细胞也成为在细胞水平上分析研究的理想材料。
因此，植物组织细胞培养广泛应用于植物科学的各个分支，如植物学、植物生理学、遗传学、育种学、栽培学、胚胎学、解剖学、病理学等等。
植物组织培养的历史可以追溯到上个世纪初。
1902年德国著名的植物学家Haberlandt根据细胞理论，大胆提出著名论点，即植物细胞具有再生成完整植株的潜在全能性(TotiPotnecy)(陈正华，1986)。
这一理论的提出，使得植物的离体培养成为了可能。
所谓植物组织培养就是指在无菌条件下，将离体的植物器官(根、茎、叶、花、果实、种子等)、组织(如形成层、花药组织、胚乳、皮层等)、细胞(体细胞和生殖细胞)以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植株。
由于培养的是脱离植物母体的培养物，所以也叫离体培养(culture in vitro)或试管培养(culture in test～tube)。
1934 年美国植物生理学家White 通过对番茄根尖的组织培养，建立了第一个有活跃生长的无性繁殖系，并能进行继代培养。
利用根系培养物，研究了光、温、 pH值和培养基组成对根生长的影响。
到这时，有关离体根的培养实验才获得了真正的成功（White，1934）。
1937年，他们首先配制成综合培养基，发现了B族维生素对离体根生长的重要性（李浚明，1992）。
同年，法国的Gautheret、Nobecourt 培养块根和树木形成层使其生长。
White、Gautheret 和Nobecourt 确立的植物组织培养的基本方法，成为以后各种植物组织培养的技术基础。
植物脱毒综述
植物脱毒方法综述袁晶13级生物技术摘要：植物在长期的营养繁殖过程中易感染各种病毒病害，严重威胁了植物的生长发育，降低了经济价值。
应用脱毒技术，恢复其种性，增强抗性，明显提高了作物的产量和品质。
通过查阅国内研究文献和资料，综合阐述了茎尖培养脱毒、热处理脱毒、化学药剂培养脱毒等方法。
关键词：脱毒；茎尖培养；无病毒苗Summarization on the methods of virus elimination by plant Abstract:Plants during long term vegetative propagation are prone to infected by various virus, a serious threat to the plant growth and development, reduce the economic value. .Application of detoxification technology, restore its kind of sex, enhance resistance, obviously increase the crop yield and quality.By searching the research domesticbibliographicalinforemantion, this paper describes the methods to eliminate virus by shoot-tip culture, heat treatment and chemical treatment, so on.Key words: virus elimination; shoot-tip culture;Virus-free seedling绝大多数植物都可以无性繁殖的，容易受到多种病原菌的侵染，体内积累浓度相当高的病毒。
植物的快繁与脱毒培养
• 有性生殖退化、仅用无性繁殖方法繁殖的 植物，极易受病毒病的侵染。
• 大多植物病毒不经种子传播（专化性强的 病毒除外）。
• 病毒在生长旺盛的部位繁殖速度慢.
三、传统的植物脱毒技术简介
• 物理方法：X射线、紫外线、超短波、高温 热处理等
– 原理：钝化病毒，从而达到抑制病毒蔓延的目 的。
• 化学方法：采用化学抑制剂，干扰病毒在 植物体内的复制。
第一节 植物脱毒（virus elimination)培养
一、概念 • 利用植物组织培养技术，脱除植物细胞
中的病毒，生产健康的繁殖材料。
二、植物病毒病简介
• 定义：由植物病毒寄生引起的病害。
• 症状：
– ①变色，叶片的叶绿素形成受阻或积聚，从而产 生花叶、斑点、环斑、脉带和黄化等。花朵的花 青素也可因而改变,使花色变成绿色或杂色等,常 见的症状为深绿与浅绿相间的花叶症如烟草花叶 病。
ISEM
• 脱毒苗的保存与快速繁殖
• 脱毒苗的离体保存与繁殖，建立脱毒种苗 生产繁殖网络体系，木本植物建立隔离的 脱毒苗母本园。
Proliferation medium
Rooting medium
六、植物脱毒培养的意义
• 能够有效地保持优良品种的特性； • 生产无病毒种苗，防止品种退化； • 快速繁殖新品种，使优良品种迅速应用； • 节约耕地，提高农产品的商品率；
五、脱毒植物的鉴定方法
指示植物 (test plants)鉴定——利用病毒在其他植 物上出现症状的特征，作为鉴别种类的标准。这种 专用以产生症状的（寄主）植物就是指示植物。寄 主植物能够辨别某种病毒的专化性症状。 方法：将待测植物的汁液接种到指示植物，如果 待测植株带毒，则指示植物上会出现特定症状。 由于病毒的寄生范围不同，所以应根据不同的病 毒选择适合的指示植物。
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植物组织培养脱毒快繁技术的综述李西雁(广西职业技术学院农业技术工程系20０２级应用生物技术专业)摘要：脱除病毒是植物组织培养深入探讨研究中的一个技术难题。
本文结合在桂林莱茵生物科技股份有限公司的实践情况,简要介绍植物组织培养的基本原理和方法,综述植物脱除病毒的热处理、茎尖培养和抗病毒药剂三种方法的原理、发展史和技术方法,并介绍了几种常用的病毒检测方法。
本文以马铃薯为例,重点介绍了利用热处理加茎尖组织培养法获得马铃薯脱毒苗的具体技术方法，脱毒率可达1０0％。
同时还对植物组织培养脱毒快繁技术的应用前景作了分析。
关键词：茎尖培养，组织培养，快繁脱毒技术，病毒检测，应用前景1植物组织培养研究概况1．1研究简史自从1943年怀特(White）提出植物细胞“全能性”(Tｏtipoｔｅncy）学说及诸多后学者(Steward，1958，Guｈａ和Marteshwａｒｉ，196４）相继证实后，引发植物组织和细胞培养快繁技术的勃然兴起。
我国的专家学者在20世纪７０年代后也在此领域做了大量的研究和开发工作,创造了很多新方法、新技术，提出不少新成果，开拓了植物组织培养快繁技术的新局面[１]。
目前采用组织培养脱病毒快繁及离体快繁生产株苗的技术已发展相当成熟[2]。
脱毒株苗具有无杂菌、适应能力较强、繁育较快、质量优、抗性好、分蘖性强、繁殖系数高、大批量生产、周年供应、便于运输等优点，已得到有关专家的鉴定及高度评价和种植试验区、种植产区果农的认可。
例如脱毒马铃薯、脱毒红薯、脱毒生姜、脱毒大蒜、脱毒草莓、脱毒苗木、脱毒花卉等等,已成为现代农民致富的新宠[2]。
１．2植物组织培养和脱毒快繁的定义植物组织培养（Ｐlant tｉssue culture)是指在无菌的条件下，将离体的植物(根、茎、叶、花、果实、种子等)、组织（形成层、花药组织、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞和生殖细胞)以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植株。
由于培养物是脱离植物母体,在玻璃瓶中进行培养，所以也叫做离体培养。
其完整过程是:脱分化 再分化 生长 根茎叶 外植体 愈伤组织 生长点 或 完整植株发生 胚状体在有些情况下，再分化也可不经愈伤组织阶段，而直接发生于脱分化的细胞[1]。
植物组织培养脱毒快繁是人工在无菌条件下利用植物体的一部分,在人工控制的营养和环境条件下繁殖植物,脱除病毒得到无毒苗株，继而在大田快速繁殖的技术。
脱毒及离体快繁,这是目前植物组织培养应用最多、最广泛和是有效的一个方面。
主要是进行茎尖培养脱除病毒。
对于脱毒苗、新育成、新引进、稀缺良种、优良单株、濒危植物和基因工程植株等可通过离体快速繁殖，同时可不受地区和气候的影响,比传统的繁殖方法快数万倍。
植物组织培养已发展成为一门富有生命力的学科。
追究植物组织培养脱毒快繁技术的发展简史，在11世纪就出现的热处理脱毒法，最早解决一些作物的病毒病害问题［1]。
本世纪50年代发展的植物组织培养技术为脱毒提供了一条有效途径。
现在植物的脱毒技术有多种,其中应用最广泛的有三种：热处理法、茎尖培养脱毒法、抗病毒药剂法，将不同的方法相结合起来应用效果更好。
它们的脱毒原理各不相同。
２ 脱毒技术及其原理2．１ 热处理法2.1．1 概述热处理法是利用病毒和寄主植物对高温的忍耐性的差异，使植物的生长速度超过病毒的扩散速度,得到一小部分不含病毒的植物分生组织，然后进行无毒个体培育。
热处理法中,最主要的影响因素是温度和时间。
热处理可通过热水浸泡或湿热空气进行。
热水浸泡对休眠芽效果较好，湿热空气对活跃生长的茎尖效果较好,既能消除病毒又能使寄主植物有较高的存活机会。
热空气处理比较容易进行，把旺盛生长的植物移入到1个热疗室中,在35~４０℃下处理一段时间即可，处理时间的长短,可由几分钟到数月不等[4]。
热处理的方法有恒温处理和变温处理，处理的材料可以是植株，也可以是接穗。
２．１.2原理热处理脱毒是根据病毒与寄生细胞对高温的忍耐程度不同,选择适当的温度和处理时间，植物组织中的很多病毒被部分地或完全地钝化而可控制其的活动,但很少伤害甚至不伤害寄主组织，从而让植物细胞加快生长，使生长点附近不带病毒，从而达到脱毒的目的。
２.1.3简史用热处理脱除马铃薯卷叶病毒（PLＲV）是世界上脱除已知病毒最早的例子。
早在1889年,印度尼西亚爪哇人就把繁殖用的甘蔗切断放在5０℃左右的热水中浸泡３0mｉn来防止枯萎病（现已知是病毒病)的发生。
现在世界许多国家在种植前仍使用这种方法处理甘蔗。
但是后来人们发现热水对植物的伤害大,Bａｋe(1９72)研究表明在热水处理中,由于植物组织经过淋洗，在水中长期浸泡常常会窒息死亡,并且这种处理也会打破或延长植物的休眠期。
所以现在更常用的方法是将病毒感染的植物用35℃~３8℃热空气处理２～４周或者更长时间进行脱毒[4]。
此法尤其适合处理生理干旱的材料和处于休眠状态的果树。
热处理脱毒法已应用多年,被世界多个国家利用。
该项技术要求的设备条件比较简单，脱毒操作也比较容易。
主要缺点是脱毒时间长，脱毒不完全，例如TＭV这类杆状病毒就不能用这种方法脱除,因而该方法有一定的局限性。
2.2 茎尖培养脱毒法2.2.1概述茎尖培养脱毒就是采取茎尖分生组织离体培养的方法获取无病毒试管苗,其方法是在解剖镜下,用锋利的解剖刀进行迅速准确地茎尖剥离,因为茎尖分生组织基本不带病毒,利用植物茎尖分生组织进行离体培养，再结合病毒检测,就可以获得无病毒的植株。
茎尖培养中最主要的影响因素就是切取茎尖的大小，一般要求茎尖长度小于１mm。
技术上通常切取茎尖越小,脱毒效果越好，但是茎尖培养成活率变低。
曹为玉等研究发现葡萄茎尖长度与存活率成正相关，与脱毒率成反相关。
当切取茎尖长度为0.2～0.３m ｍ时,存活率为２1%~3８%,脱毒率为９1.４%~97%;当切取０.5mm以上时，存活率为７5％~83％,脱毒率仅为7０.6％～76.5%[8]。
茎尖培养脱毒法脱毒率高,脱毒速度快，能在较短的时间内得到较多的原种繁殖材料,但这种方法存在的缺点是植物的存活率低。
为了克服这一缺点，现在经常是将茎尖培养与热处理相结合来使用。
茎尖培养与热处理相结合之所以能够提高脱毒效果，是由于热处理可使植物生长本身所具有的顶端免疫区得以扩大,有利于切取较大的茎尖（在1mm左右)，从而能够提高培养或嫁接的成活率。
如大樱桃置于45℃的恒温培养室内，培养35天，再切取０．2~0.4mm的茎尖培养,平均脱毒率为98%。
2.2．2原理茎尖培养脱毒的原理是植物体内病毒靠维管束系统移动，分生组织中没有维管束存在,病毒只靠胞间连丝移动，速度很慢，难以追上生长活跃的分生组织，所以旺盛生长的根尖、茎尖一般都无病毒或很少有病毒分布。
２.2.3 简史White于１9４3年首先发现在感染烟草花叶病毒的烟草生长点附近病毒的浓度很低，甚至没有病毒。
这一发现为茎尖培养脱除病毒提供了理论依据。
怀特(Wｈit ｅ,1934）在体外培养感染了ＴMV病毒的马铃薯根，并用枯斑寄主法测定了根不同部位的病毒含量，发现根尖部位的病毒含量比其他部位少，甚至不存在病毒。
Mｏｒel等1952年首先从感染了花叶病毒和斑萎病毒的大丽花植株上切取茎尖，通过组织培养获得了无病毒的大丽花,证明了前人假设的正确性[1]。
此后，人们采用茎尖培养技术相继获得了多种植物的无病毒植株。
现在茎尖培养脱毒法已经成为植物无毒苗生产中应用最广泛的一种方法。
199８年,桂林市大地生物技术研究所与广西山河经济发展公司联合开展罗汉果脱毒苗的培育生产技术科技攻关,在选出的健康植株中选取营养体,经过茎尖培养与其它脱毒方法相结合脱毒后进行组织培养，从而获得不带病的健康苗。
经农业种植区试点种植表明,这些经茎尖培养脱毒快繁得到的罗汉果脱毒苗植株健壮无病，长势旺，结果早,数量多,品质高,与传统压蔓技术种植的普通苗相比，种后第一年结果的植株达50%~70％,增加近一倍；平均每株挂果约3０个，增加了两倍,一级果增加了１5%，有效成分罗汉果甜甙的收取率则提高了５%。
广西农科院生物所杭玲等在《罗汉果茎尖脱毒快繁技术》一文中试验,选择罗汉果青皮果品种,采用种子播种的实生苗，经接花叶病毒而致病的植株，运用茎尖培养与热处理相结合的方法对供试材料进行除病毒,经用生物学指示植物鉴定，脱毒率达1０0%。
据研究,植物体内某一部分组织器官不带病毒的原因是：分生组织的细胞生长速度快,病毒在植物体内繁殖的速度相对较慢，而且病毒的传播是靠筛管组织进行转移或通过细胞间连丝传递给其他细胞,因此病毒的传递扩散也受到一定限制，这样便造成植物体的部分组织细胞没有病毒。
根据这个原理,可以利用茎尖培养来培育无病毒苗木。
2.３抗病毒药剂法２.３.1概述抗病毒药剂法,这是一种新的脱毒方法,运用一些抗病药剂的作用影响病毒RNA的复制形成,干扰病毒的正常生长,从而达到除去病毒的目的。
常用的抗病毒化学药物有三氮唑核苷(病毒唑)，5-二氢尿嘧啶（ＤHＴ)和双乙酰-二氢-５-氮尿嘧啶（ＤＡ－ＤHT)。
这些药物常常通过直接注射到带病毒的植株上，或者加到植株生长的培养基上。
这种方法一般要与茎尖培养相结合应用。
经过抗病毒药剂处理的嫩茎,切取茎尖,再进行组织培养，就会提高脱毒率和成活率。
采用病毒抑制剂与茎尖培养相结合的脱毒方法,可以较容易的脱除多种病毒，而且这种方法对取材要求不严，接种茎尖可大于1ｍm，易于分化出苗,提高存活率。
2．3．2原理抗病毒药剂法的作用原理是抗病毒药剂在三磷酸状态下会阻止病毒RNA帽子结构形成而达到除去病毒的效果。
3.3．3简史罗晓芳等于1９96年曾在培养基中加入病毒唑，脱除了两种苹果潜隐病毒［1]。
除了以上三种脱毒方法以外，花药培养法、茎尖嫁接脱毒、愈伤组织培养法、胚珠培养法也可用于植物组织培养快繁脱毒。
3 脱毒效果的检测方法经过脱毒处理的植株是否还存在病毒,必须经过病毒学检测才能确定。
可靠的病毒检测方法与建立有效的脱毒方法同等重要。
传统上一直沿用的检测方法是目测法,但是这种方法无法剔除潜隐性病毒。
后来出现的指示植物法,扩大了检测范围。
近年来随着生物科学的迅猛发展,免疫学方法,分子生物学方法等许多先进的理化技术的应用，促进了病毒检测技术的改进与发展。
下面简要介绍几种检测脱毒苗的方法。
3.1植株直接测定法直接观察植株茎叶有无某种病毒引起的可见症状,是最简单的测定方法。
不过,由于某些寄主植物感染病毒后需要较长的时间才出现症状,有的并不能使寄主植物出现可见的症状,因而无法快速检验。
3.2指示植物法此法最早是美国的病毒学家Ｈolmes l929年发现的[１］。
利用病毒在其他植物上出现症状的特征,作为鉴别种类的标准。
当原始寄主的症状不明显时,就可用指示植物法，这是因为指示植物比原始寄主更容易表现症状。