定量分析与方法验证研究生

(六) 线性

线性——在设计的“范围”内, 响应值(y)与被测物浓
(x)直接呈正比关系的程度 y = ax + b
度

系列(n≥5) 水平(浓度)标准; 线性回归 (或经数学转换)
定量基础: 含量测定; 杂质/组分/溶出度等定量性检查
(1) 范围系指方法适用的高低限浓度或量的区间 (2) 在试验研究开始前确定验证的范围和方法 (3) 在范围内应能达到一定精密度, 准确度和线性

定量限(limit of quantitation, LOQ )——是指试样 中被测物能被定量测定的最低浓度或量 LOQ是一种定量检验效能指标, 反映方法的灵敏度

(1) 测定结果具有一定准确度和精密度 (验证要求)
(2) 杂质/降解产物用定量方法研究: 应确定LOQ
(3) 测定方法与LOD相同——系数不同, 如S/N=10
2 信噪比法
目视法评价的方法: 化学反应 / TLC ——鉴别的显色法; 杂质检查的TLC 显示信号与噪声水平的方法: HPLC ——S/N=3(2) 时的相应浓度或量 其他分析方法: UV-Vis法
3 标准偏差/ 标准曲线
LOD 3.3 / S δ空白响应偏差
S 标准曲线斜率
(五) 定量限
含量水平
重复性 (RSD%) 重现性 (RSD%)
含量水平
重复性 (RSD%)
重现性 (RSD%)
100%
10% 1% 0.1%
1
1.5 2 3
2
3 4 6
0.01%
10g/g 1g/g 10g/kg)
4
6 8 15
8
11 16 32
(三) 专属性
定义与 应用
鉴别反应

在其他成分(杂质,降解产物,辅料等)可能 存在下,方法能正确测定出被测物的特性
0.1%
90~108
10 g/kg (ppb)
70~125
(二) 精密度

1. 定义:
同一均匀供试品多次取样测定 所得结果之间的 接近程度

相对标准偏差(%, RSD); 置信区间( X ?S )

2. 分类:


重复性: 同一实验室 / 相同环境(仪器, 人员, 批次)
中间精密度: 同一实验室 / 不同环境
重现性(法定方法): 不同实验室 / 不同环境
(二) 精密度

3. 验证方法

重复性——相同条件连续测定所得结果的精密度 中间精密度——不同仪器、人员、分析批(时间) 重现性——不同实验室

操作法: 同准确度, 通常: 3(水平)×3(样品)=9(数据)
(二) 精密度

4. 应用——定量分析

鉴别,杂质检查和含量测定方法
含Hale Waihona Puke Baidu与杂质测定
——含杂质或降解产 物的试样中各峰能 获得分离
空白
结构相似物 或有关物质 呈负反应
(四) 检测限

检测限(limit of detection, LOD)——是指试样中 被测物能被检测出的最低浓度或量

LOD是一种限度检验效能指标, 反映方法的灵敏度
1 直观法

(八) 耐用性

耐用性系指在测定条件有小的变动时, 测定结果不受 影响的承受程度; 体现测定条件的允许变动范围:


一般因素: 溶液的稳定性, 样品提取的次数与时间等
HPLC法典型因素: 流动相的组成和pH值及流速, 不 同厂牌或不同批号的同类型色谱柱, 柱温等 GC法典型因素: 不同厂牌或批号的色谱柱, 固定相, 不同类型的担体, 柱温, 进样口和检测器温度等

也可由所测定的精密度、线性和专属性推算 ——原料药含量HPLC测定法
(一) 准确度

3. 数据要求:
样品中被测成分的含量水平 与回收率限度 要求的关系 含量水平 100 % 10 % 1% 限度(%) 98~101 95~102 92~105 含量水平 0.01 % 10 g/g (ppm) 1 g/g (ppm) 限度(%) 85~110 80~115 75~120
第二节 药物分析方法的验证
需验证的项目

验证的内容
准确度 精密度
重复性 中间精密度 重现性
鉴别试验 杂质检查
含量测定 防腐剂 溶出度,释放度
专属性
检测限 定量限 线性 范围 耐用性
一、分析方法验证的内容
(一) 准确度 (五) 定量限
(二) 精密度
(三) 专属性
(六) 线性
(七) 范围
(四) 检测限
(八) 耐用性
(一) 准确度

1. 定义

准确度系指用该方法测定的结果与真实值 或参考值接近的程度
一般用回收率(%)表示
2. 验证方法 (1) 含量测定
① 基质无(原料药)/可模拟(制剂)
回收率(%)= 测得量 100 加入量
3. 数据要求

② 基质不可模拟(制剂,中药)
测得量 - 本底值 回收率(%)= 100 加入量
(七) 范围

原料药/制剂含量测定: 80%~120% 特殊元素含量测定: 下限-20%~上限+20% 制剂含量均匀度检查: 70%~130% 溶出度/释放度的溶出量测定: 下限-20%~上限+20% 杂质测定: 限度±20% (如果杂质检查与含量测定同 时进行, 杂质限度-20％~含量上限+20%) 校正因子测定: 范围一般应根据其应用对象的测定范 围确定

主成分含量测定

化药原料药/制剂——80%~120%(样品, n=9) 中药材(饮片)/制剂——100%(样品, n=6)
50%~150%(样品, n=9)

杂质定量测定


实际样品(100%水平, n=6)
标准添加(50%~150%限度水平, n=9)
(二) 精密度

5. 数据要求:
样品中被测成分的含量水平 与精密度可接受限度 要求的关系

二、分析验证的设计
验证内容选择的一般原则:
非定量分析方法 如鉴别, 杂质的限度检查法: ——验证“专属性”, “检测限”和“耐用性” 常量定量分析方法 如原料药或制剂的含量测定 及含量均匀度, 溶出度或释放度的测定方法:
——除“检测限”和“定量限”外, 其余均验证

9个测定结果(n=9) 3水平×3样品 化药:
(2) 杂质检查——方法同②

① 80, 100, 120％ ② 1:0.8, 1:1, 1:1.2 中药: 1:0.5, 1:1, 1:1.5
(一) 准确度

2. 验证方法(其他方法)

可与已知准确度的另一方法的测定结果比较
——药典标准方法 / 经过验证的方法