基因工程原理
基因工程基本工作原理
基因工程基本工作原理
基因工程是一种通过改变生物体的基因来改变其性状和功能的技术。
基本工作原理包括以下几个步骤：
1. 选取目标基因：确定想要改变的性状或功能，并找到与其相关的基因序列。
2. 获得DNA序列：获取包含目标基因的DNA序列，可以通
过从细胞中分离DNA或使用现有的DNA库等方法来获得。
3. 基因克隆：将目标基因的DNA序列插入到一个DNA载体（如质粒）中。
质粒是一种环状DNA分子，可以在细胞中自
我复制。
4. DNA转化：将载有目标基因的质粒导入细胞中。
这可以通
过多种方法实现，例如化学处理、电穿孔或使用病毒载体等。
5. 基因整合：目标基因被细胞摄取后，可以将其整合到细胞的染色体中。
这个过程中，目标基因会与宿主DNA进行互补配对，并与染色体连接成一条连续的DNA链。
6. 表达和转录：一旦目标基因被整合到细胞的染色体中，细胞可以开始利用这个基因来合成特定的蛋白质。
这个过程涉及到基因的转录（将DNA转录成RNA）和翻译（将RNA转化为
蛋白质）。
通过以上步骤，基因工程可以实现对生物体基因的改造和定制，
从而赋予其新的性状和功能。
这项技术在农业、医学、工业等领域有着广泛的应用，例如改良作物、生产药物和生物材料等。
基因工程(基因工程的主要技术与原理分子杂交技术)
Southern杂交主要用来判断某 一生物样品中是否存在某一基因， 以及该基因所在的限制性酶切片 段的大小。（DNA水平）
Southern杂交也可检测目的基 因的拷贝数。
CK 1 2 3 4 5
Southern bloting
这种检测方法与其它免疫学方法的不同是，一方面 可以避免非特异性的免疫反应，而且更关键的是可以 检测出目标蛋白质的分子量，从而直观的在滤膜上显 示出目标蛋白。
五、Dot blot hybridization
1、原理：
在Southern杂交的基础上发展起来的用于 快速检测特异核酸分子的杂交技术。将核酸 样品直接转移到适当的滤膜上，然后进行杂 交检测。
凝胶
3）转移并固定到滤膜上
通过毛细管渗吸或电转移或真空转移的方式，将凝 胶上的DNA转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上。最后 通过80℃处理或紫外线照射将DNA固定在滤膜上。
Southern blotting 装置示意图
4）探针的制备及杂交
预杂交：将结合了DNA分子的滤膜先与特定的预 杂液进行预杂交，也就是将滤膜的空白处用鱼精 DNA或牛奶蛋白封闭起来，防止在杂交过程中滤膜 本身对探针的吸附。
当用一个标记的核酸分子与核酸样品杂交, 便可查明该样品中是否存在与该标记核酸分 子具有同源性的核酸分子。这个标记的核酸 分子称为探针(probe)，可以是DNA，也可以 是RNA，或合成的寡核苷酸。
二、基本过程
1、核酸印迹（Nucleic acid blotting): 将核酸样品（DNA、RNA或蛋白质）在凝胶
在1975年，由英国的E. Southern首先设计发明的， 因此又称为Southern杂交（Southern blotting)。
基因工程基本原理
基因工程基本原理
基因工程是通过改变生物体的基因组来实现对其性状的调控的技术。
其基本原理包括以下几个步骤：
1. 基因选择：从目标生物体中选择具有所需性状的基因。
2. 基因克隆：将目标基因从生物体中分离出来，通常通过
PCR等方法进行基因扩增。
3. 基因构建：将目标基因插入到载体DNA中，构建重组DNA。
载体可以是细菌、酵母或其他生物的染色体片段，一
般被称为质粒。
4. 基因转导：将重组DNA导入到宿主生物体中。
这通常使用
基因枪、电穿孔和细菌介导等技术来实现。
5. 检验与筛选：对转导后的宿主生物进行筛选，确认目标基因达到预期效果。
这可能需要对基因表达进行检测，例如通过PCR、基因表达测定等方法。
6. 基因表达：在宿主生物中，目标基因会被表达为蛋白质，进而影响其性状。
这可能需要使用特定的启动子、RBS和终止
子等元件来调控基因表达水平。
基因工程的基本原理就是通过这些步骤来实现对基因组的改造，从而达到人为调控生物性状的目的。
这项技术在农业、医学和
生物工程等领域有广泛应用，例如改良植物品种、生产特定药物和生物材料等。
基因工程的原理与应用
基因工程的原理与应用基因工程是一种高级的生物技术，它主要涉及对基因结构的改变和移植，让某种生物获得新的属性或者提高原有的属性。
在这场技术革命中，科学家们使用一系列复杂的方法和技术，如基因切割、基因重组和基因转移等，来修改生物体的基因。
这种修改可以使生物体的生理功能得到优化，也可以使它们获得全新的功能。
基因工程的原理与应用涵盖了许多领域，总体来看，该技术为人类生活带来了巨大的利益。
一、基因工程的原理基因工程的原理基于分子生物学和遗传学的基本理论。
在基因工程所涉及的一系列技术中，最关键的步骤就是基因重组。
这是一个在生物体的基因之间物质交换的过程，平时我们见到的基因工程产品，其实就是基因重组的结果。
这是一种添加或删除某种生物体的基因的过程，科学家们通过操作DNA分子来实现这一目的。
两种不同物种的基因在经过科学家们精密操作后，会形成一个新的DNA分子。
这就是基因重组的过程，这个全新的DNA分子拥有两种不同生物体的基因特性。
然后，这个新的DNA分子被引入到受体生物的细胞中，然后在细胞内经过一系列复杂的生化反应后形成一种新的遗传特性。
二、基因工程的应用基因工程的应用越来越广，从农业、医疗到工业生产，无处不在。
在农业领域，基础设施的发展使得基因工程在种植业和畜牧业等领域得到了广泛应用，如转基因作物、转基因宠物等。
在医疗领域，基因工程的应用主要集中在医药生物制品、疾病治疗和药物制备等方面。
特别是在生物制药领域，基因工程产生了许多像胰岛素、生长激素、干扰素等重要药物，极大地提高了治疗疾病的效果。
在环保领域，基因工程可以用来改造微生物，使其具有分解污染物的能力，从而清除环境污染。
如改造的油脂分解菌、汞离子分解菌等，都具有很高的环保价值。
三、基因工程的前景随着科技的进步，基因工程的应用前景日益广阔。
它有可能引领新一轮的科技革新，在能源、环保、食品、医疗等许多领域产生深远的影响。
基因工程不仅有可能使我们解决许多传统上难以解决的问题，让生活变得更加便捷，更有可能推动人类社会的进步。
基因工程的原理是什么
基因工程的原理是什么基因工程是一种利用生物技术手段对生物体进行基因组的改造和调控的技术，它的原理主要包括基因定位、基因克隆、基因转移和基因表达调控等几个方面。
基因工程的原理是通过对生物体的基因进行精准的编辑和调控，从而实现对生物体性状的改良和优化。
首先，基因工程的原理之一是基因定位。
基因定位是指通过一系列实验手段来确定目标基因在染色体上的具体位置，包括物理定位和遗传定位两种方式。
通过基因定位，科学家们可以准确地找到目标基因，并为后续的基因编辑和调控奠定基础。
其次，基因工程的原理还包括基因克隆。
基因克隆是指将目标基因从一个生物体中复制出来，并将其插入到另一个生物体中的过程。
通过基因克隆，科学家们可以获取大量目标基因的复制体，并进行进一步的研究和应用。
另外，基因工程的原理还涉及基因转移。
基因转移是指将目标基因从一个生物体转移到另一个生物体中的过程，可以是同种生物体之间的基因转移，也可以是跨种生物体之间的基因转移。
通过基因转移，科学家们可以实现对生物体基因组的改造和调控，从而获得具有特定性状的生物体。
最后，基因工程的原理还包括基因表达调控。
基因表达调控是指通过一系列的调控机制来控制目标基因的表达水平和表达时机，从而实现对生物体性状的精准调控。
通过基因表达调控，科学家们可以实现对生物体特定性状的增强或抑制，为农业、医药等领域的应用提供了可能。
综上所述，基因工程的原理主要包括基因定位、基因克隆、基因转移和基因表达调控等几个方面。
通过这些原理的应用，基因工程技术可以实现对生物体基因组的精准编辑和调控，为人类社会的发展和进步带来了巨大的潜力和可能性。
《基因工程的原理》 讲义
《基因工程的原理》讲义一、什么是基因工程基因工程，简单来说，就是一种在分子水平上对基因进行操作的技术。
它就像是一把神奇的“分子剪刀”，能够让我们按照自己的意愿，对生物的基因进行剪裁、拼接和重组，从而创造出具有新特性的生物。
基因是生命的蓝图，它决定了生物的各种特征和功能。
而基因工程则为我们提供了一种直接干预和改变这些蓝图的手段。
通过基因工程，我们可以将一个物种的基因转移到另一个物种中，赋予后者原本不具备的特性。
二、基因工程的基本工具要实现基因工程，就需要一些特殊的工具，就像工匠需要合适的工具才能打造出精美的作品一样。
1、限制性内切酶限制性内切酶就像是一把极其精准的“分子剪刀”，能够识别特定的核苷酸序列，并在这个位置将 DNA 分子切断。
不同的限制性内切酶识别的序列不同，这使得我们能够在特定的位置对 DNA 进行切割，为后续的基因重组做好准备。
2、 DNA 连接酶当我们把基因片段切割下来之后，需要把它们重新连接起来。
这时候，DNA 连接酶就派上用场了。
它能够将两个 DNA 片段的末端连接起来，形成一个完整的 DNA 分子。
3、载体基因片段很小，很难直接进入细胞发挥作用。
这时候就需要一个载体来帮忙，常见的载体有质粒、噬菌体和病毒等。
载体就像是一辆“小货车”，能够把我们需要的基因片段装载起来，并运输到目标细胞中。
三、基因工程的基本步骤1、目的基因的获取首先，我们要确定需要的基因，也就是目的基因。
这可以通过从生物的基因组中直接分离，或者利用 PCR 技术（聚合酶链式反应）进行扩增得到。
2、基因表达载体的构建将获取的目的基因与载体连接，构建成基因表达载体。
这一步就像是把货物装到货车上，并且要确保货物能够在货车上稳定存在，并且能够在合适的时候被卸载下来。
3、将目的基因导入受体细胞这一步就是要把装载着目的基因的载体“小货车”开到受体细胞里。
常用的方法有农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法等，对于动物细胞，可以采用显微注射法，对于微生物细胞，可以用感受态细胞法。
简述基因工程的基本原理与过程
简述基因工程的基本原理与过程
基因工程是指对生物（动植物）基因进行人工改造，从而改变目标物
种的表型的研究。
基因工程的基本原理是从一个生物体中获取想要的基因，利用质粒或载体将基因定向插入到一个受体生物体中，从而达到特定目的
的一种科学技术。
基因工程的基本过程可以分为四步：
第一步，基因挖掘，即寻找有用的基因，使用某种筛选及分子生物学
技术来获得有用的基因序列；
第二步，基因克隆，即将找到的基因进行复制，可以进行测序，将基
因克隆到载体上；
第三步，转基因，又称基因转移，即将载体上的基因转移到另一个生
物体，以及将病毒中的基因植入到植物体中；
第四步，基因变异，其方法有化学物质诱变、热诱变、物理诱变等，
在把基因转移至另一生物体之后，还可以进行基因变异，以获得不同的表型。
基因工程的原理
二、基因缝纫针：DNA连接酶
2、作用部位：
3、作用条件：
两个DNA分子末端的碱基互补配对。
4、功能：
将两个DNA分子“缝合”起来，恢复被限制性内切酶切开了的磷酸二酯键。
可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， E·coli DNA连接酶 或T4DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键
DNA
A
B
C
D
DNA
HindⅢ
HindⅢ切割位点
A
B
限制酶作用是A处还是B处？
A处
T
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
A
GAATTC
CTTAAG
GAATTC
CTTAAG
G
AATTC
CTTAA
G
G
AATTC
CTTAA
G
G
CTTAA
AATTC
G
双链断开
不同来源的DNA片段结合
1、种类：
E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶
EcoRⅠ
黏性末端
黏性末端
识别特定的脱氧核苷酸序列的特点：中轴线两侧的碱基反向对称重复排列的回文序列。
切割的位点：G、A之间 断裂的化学键是：磷酸二酯键
限制性内切酶对DNA分子的切割
A A G C T T
T T C G A A
A A G C T T
T T C G A A
②检测方法：应用核酸探针
③扩增：用PCR仪扩增
b.反转录法
c.化学合成法
双链DNA (即目的基因)
合成
单链DNA(cDNA)
《基因工程的原理》 讲义
《基因工程的原理》讲义一、什么是基因工程基因工程，简单来说，就是一种在分子水平上对基因进行操作的技术。
它就像是一个极其精细的“基因手术”，通过一系列的技术手段，对生物体的基因进行剪切、拼接、重组和改造，从而实现对生物遗传特性的定向改变。
要理解基因工程，首先得知道基因是什么。
基因是具有遗传效应的DNA 片段，它就像一个神秘的密码本，决定了生物体的各种性状，比如我们的外貌、身高、性格，甚至是容易患上某些疾病的倾向。
而基因工程的出现，让我们有了主动去解读和改写这个“密码本”的能力。
不再是被动地接受自然的遗传安排，而是能够按照我们的意愿，去塑造和优化生物的特性。
二、基因工程的基本工具就像进行任何一项复杂的工程都需要特定的工具一样，基因工程也有它必不可少的“工具包”。
1、限制性内切酶限制性内切酶，也被形象地称为“分子剪刀”。
它能够识别特定的核苷酸序列，并在特定的位点将 DNA 分子切断。
就好像一把精准的剪刀，能够在长长的 DNA 链条上找到我们想要的位置，然后干净利落地剪断。
不同的限制性内切酶识别的核苷酸序列是不一样的，这就为我们在基因操作中提供了多种选择，能够根据具体的需求来剪切 DNA。
2、 DNA 连接酶有了剪断的操作，自然还需要把断开的 DNA 片段重新连接起来。
这时候就轮到 DNA 连接酶登场了，它像是一个“基因胶水”，能够把两个具有相同末端的DNA 片段连接在一起，形成一个完整的DNA 分子。
3、运载体当我们把想要的基因片段剪切并连接好之后，还需要一个“运输工具”把它们送到目标细胞中去，这个“运输工具”就是运载体。
常见的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒等。
运载体就像是一辆辆小货车，它们能够携带我们精心准备的基因片段，顺利地进入到受体细胞中，并且能够在受体细胞中稳定地存在和复制。
三、基因工程的基本操作步骤1、目的基因的获取这是基因工程的第一步，也是关键的一步。
目的基因就是我们想要的那段具有特定功能的基因。
基因工程技术的原理与应用例题和知识点总结
基因工程技术的原理与应用例题和知识点总结一、基因工程技术的原理基因工程，也称为重组 DNA 技术，是一种在分子水平上对基因进行操作和改造的技术。
其基本原理是在体外将不同来源的 DNA 分子进行剪切、拼接和重组，然后将重组的 DNA 分子导入到受体细胞中，使其在受体细胞中表达和遗传。
基因工程的操作主要包括以下几个步骤：1、目的基因的获取从生物体的基因组中直接分离：对于一些结构和功能比较清楚的基因，可以通过限制性内切酶将其从基因组 DNA 中切割下来。
人工合成：如果已知基因的核苷酸序列，可以通过化学方法人工合成目的基因。
PCR 扩增：利用聚合酶链式反应（PCR）技术，以少量的 DNA 为模板，快速扩增出大量的目的基因。
2、基因载体的选择和构建基因载体是能够携带目的基因进入受体细胞的工具。
常用的基因载体有质粒、噬菌体和病毒等。
载体需要具备自我复制能力、多个限制性内切酶切点、标记基因等特点。
3、目的基因与载体的连接通过限制性内切酶切割目的基因和载体，产生相同的黏性末端或平末端。
然后利用 DNA 连接酶将目的基因和载体连接起来，形成重组 DNA 分子。
4、将重组 DNA 分子导入受体细胞常用的导入方法有转化（细菌）、转染（动物细胞）和农杆菌介导转化（植物细胞）等。
5、重组体的筛选和鉴定由于导入受体细胞的重组体中可能存在未成功重组的分子，因此需要进行筛选和鉴定。
常用的筛选方法有抗性筛选、标记基因筛选、核酸分子杂交筛选等。
二、基因工程技术的应用例题1、基因工程在农业领域的应用抗虫棉的培育：将苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因导入棉花细胞中，培育出具有抗虫特性的棉花品种。
举例：某地区常年遭受棉铃虫的侵害，导致棉花产量大幅下降。
科研人员通过基因工程技术，将一种能够编码产生杀虫蛋白的基因导入棉花植株中。
经过筛选和培育，获得了抗虫棉新品种。
在种植过程中，这种抗虫棉能够有效地抵御棉铃虫的危害，减少了农药的使用量，提高了棉花的产量和质量。
基因工程的原理
基因工程的原理
基因工程是指通过改变、插入或删除生物体内的基因来改变其特性的技术。
基因工程的原理是利用基因的特性，将特定的基因插入到生物体内，使其产生新的特性或改变原有的特性。
基因工程的原理包括以下几个方面：
DNA分子的结构和功能：DNA是生命活动的基本单位，它负责储存和传递遗传信息。
DNA分子是由若干条碱基链组成，每条碱基链由若干种碱基构成，碱基之间通过碱基对键来连接。
基因的插入和表达：基因工程的基本原理是将特定的基因插入到生物体内，使其产生新的特性或改变原有的特性。
这通常需要使用含有目标基因的质粒，并利用载体将其插入到生物体内。
插入后，基因可能会被表达，即转录成 RNA 并翻译成蛋白质。
遗传工程技术：遗传工程技术是指在基因工程实验中使用的一系列技术，包括 DNA 合成、PCR 技术、DNA 酶切割和修饰技术、基因转换技术等。
这些技术可以
帮助研究人员操纵基因，使其能够被插入到生物体内。
载体技术：载体技术是指利用载体将目标基因插入到生物体内的技术。
载体可以是质粒、噬菌体、病毒等，它们可以在生物体内复制并传播目标基因。
载体技术是基因工程的重要组成部分，可以帮助研究人员将目标基因插入到特定的生物体内，并控制基因的表达。
染色体工程：染色体工程是指对生物体染色体的操作，包括插入、删除或改变染色体的基因。
染色体工程可以帮助研究人员了解染色体的结构和功能，并使用基因工程技术改变染色体的基因组成。
基因工程在医学、农业、生物制药等领域有广泛的应用，可以帮助研究人员改变生物体的特性，为解决各种问题提供新的思路和方法。
基因工程的基本原理
基因工程的基本原理基因工程的基本原理是在分子水平上直接操作遗传物质，通过改变生物体的基因组成，以获得人们所需的新性状或新产品。
这一技术的核心是DNA重组技术，即将所需的目的基因从供体生物的基因组中分离出来，经过必要的加工和处理后，与载体DNA连接，形成重组DNA分子。
然后将重组DNA分子引入受体细胞，通过筛选和鉴定，获得稳定表达目的基因的重组体克隆。
最后，通过对目的基因的表达和产物的纯化，获得所需的新产品或新性状。
基因工程的基本原理可以概括为以下几个步骤：获得目的基因：这是基因工程的第一步，需要从供体生物的基因组中分离出所需的目的基因。
常用的方法包括化学合成法、PCR扩增法、基因文库筛选法等。
构建重组DNA分子：将目的基因与载体DNA连接，形成重组DNA分子。
载体通常是一种能够自主复制的DNA分子，如质粒、病毒等。
连接过程需要用到限制性内切酶和DNA连接酶等工具酶。
引入受体细胞：将重组DNA分子引入受体细胞，常用的方法包括转化、转染、感染等。
受体细胞可以是原核生物、真核生物或细胞系等。
筛选与鉴定重组体克隆：通过选择性培养基或分子生物学方法，筛选出含有重组DNA 分子的细胞克隆，并进行鉴定。
鉴定方法包括PCR、测序、Southern杂交等。
目的基因的表达与产物纯化：在鉴定出正确的重组体克隆后，需要通过诱导表达或组成型表达等方式，使目的基因在受体细胞中表达。
然后通过对表达产物的分离纯化，获得所需的新产品或新性状。
总之，基因工程是一种在分子水平上直接改造遗传物质的技术，通过改变生物体的基因组成，实现对其性状和功能的定向改造和优化。
这一技术在医学、农业、工业等领域都有广泛的应用前景。
基因工程的原理流程及应用
基因工程的原理流程及应用引言基因工程是一门将基因科学与工程技术相结合的学科，通过技术手段对生物体的基因进行改造和调控，以实现特定的生物功能。
本文将介绍基因工程的原理流程及其在科学研究、农业、医药等领域中的应用。
基本原理基因工程的基本原理是通过对DNA分子进行操作，以改变生物体的遗传信息。
DNA分子是构成生物遗传信息的基本单位，包含了生物体的所有遗传信息。
基因工程主要通过以下几个步骤实现：DNA提取与克隆1.提取源：根据需要研究或改造的生物体，选择相应的组织或细胞作为DNA的来源。
2.细胞破碎：采用物理或化学方法破坏细胞膜，释放DNA分子。
3.分离纯化：通过离心、渗析、电泳等技术，将目标DNA从其他细胞成分中分离出来。
4.克隆：将目标DNA片段插入载体DNA中，形成重组DNA。
常用的载体包括质粒、噬菌体等。
5.转化：将重组DNA转入宿主细胞中，使其成为表达所需基因的工具。
基因编辑与改造1.基因识别：通过生物信息学方法，识别目标基因的DNA序列。
2.基因编辑：利用CRISPR/Cas9等工具，精确地编辑目标基因的DNA序列。
可以实现基因剪接、替换或插入等操作。
3.基因表达：通过基因转录和翻译过程，将编辑后的基因表达为蛋白质，实现特定功能。
应用领域基因工程在科学研究、农业、医药等领域有着广泛的应用。
以下是几个主要应用领域的列举：科学研究1.基因功能研究：通过基因敲除、过表达、静默等方法，揭示基因在生物体发育、代谢、免疫等方面的功能。
2.基因调控研究：通过改变特定基因的表达水平，探索基因调控网络和信号传递机制。
农业1.作物改良：通过导入耐逆性、抗病性、高产性等基因，提高作物品质和产量。
2.遗传改良：通过基因编辑技术，快速培育出更好的品种，提高农作物的抗虫、抗逆性。
医药1.药物研发：利用基因工程技术生产重组蛋白质，用于药物的研发和生产。
2.基因治疗：通过基因编辑和基因传递技术，矫正遗传性疾病、癌症等疾病相关基因的异常。
基因工程原理
绪论第1节 基因概念与基因工程的诞生一、基因工程⒈概念：一般指利用分子生物学的手段，在体外操纵、改造、重建细胞的基因组，从而使生物体的遗传性状发生按人们的意志的定向变异。
⒉特点：基因工程能够打破种属的界限，在基因水平上改变生物遗传性，并通过工程化手段为人类提供有用的产品及服务。
3.理论上的三大发现：DNA遗传物质、DNA双螺旋、遗传密码破译。
4.技术上的三大发明：限制性内切酶、逆转录酶、载体。
T4连接酶。
第二节 基因的现代概念一、移动基因1.概念：在染色体基因组不同位置上移动的基因。
也称跳跃基因。
2.功能：异常基因功能现象的解释。
3.分类:(1)插入序列( insertion sequence，IS)：原核生物中存在，长度2Kb以下。
共同结构特点：①分子末端具有一段反向重复序列；②插入位点两侧为同向重复序列；③转位酶的作用：a.催化转化因子(IS)从IR处切离，b.识别插入染色体的靶点。
(2)转位子（transposons）：由几个基因组成的特定DNA片段，长度大于2Kb，其中含有一个抗菌素抗性基因，广泛存在于原核与真核生物。
二、断裂基因（split gene）--在真核生物核苷酸序列中插入有与氨基酸编码无关的DNA间隔区，使一个基因分隔成不连续的若干区段，此种编码序列不连续的间断基因即断裂基因。
--内含子的一般特点:①不同断裂基因内含子数目差异极大；②不同来源内含子分子大小不同；③内含子长度超过外显子；④并非所有真核生物都有内含子。
--mRNA初级转录本的剪辑：真核细胞mRNA的5'剪辑点GU开始，3'剪辑点AG结尾，为保守序列。
根据生命活动的需要可变剪辑。
三、假基因（pseudogene）--概念：在核苷酸序列上与正常功能基因基本相同，但不具功能活性的失活基因。
--根据假基因序列的特性不同分为：①重复假基因--此类假基因与亲本基因具有较高的同源性，在染色体区段上串联重复而名。
基因工程的原理和技术
③化学方法合成目的基因
人工合成基因的方法
反转录法
根据已知的氨基酸序列 合成DNA
③化学方法合成目的基因
目的基因的mRNA 反转录
单链DNA(cDNA) 合成
双链DNA (即目的基因)
蛋白质的氨基酸序列 推测
mRNA的核苷酸序列 推测
结构基因的核苷酸序列 化学合成
胰岛素生产车间
基因工程干扰素
• 干扰素治疗病毒感染简直是“万能灵药”！ 过去从人血中提取，300L血才提取1mg！ 其“珍贵”程度自不用多说。
干扰素分子结构
干扰素生产车间
SCID的基因工程治疗
• 重症联合免疫缺陷（SCID ）患者缺乏正常的人体免 疫功能，只要稍被细菌或 者病毒感染，就会发病死 亡。这个病的机理是细胞 的一个常染色体上编码腺 苷酸脱氨酶（简称ADA） 的基因（ada）发生了突 变。可以通过基因工程的 方法治疗。
❖ 基因工程药品的生产
• 在传统的药品生产中，某些药品如胰岛素、干扰素直接生 物体的哪些结构中提取？ 药品直接从生物的组织、细胞或血液中提取。
• 传统生产方法的缺点 由于受原料来源的限制，价格十分昂贵。
• 可利用什么方法来解决上述问题？
利用基因工程方法制造“工程菌”，可高效率地生产出各 种高质量、低成本的药品。
基因探针：
基因探针就是一段与目的基因或DNA互补的 特异核苷酸序列。它包括整个基因，或基因的 一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而 来的RNA。
DNA分子杂交示意图
采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单 链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列， 那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双 链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离 的单链。
基因工程实验原理
基因工程实验原理
基因工程实验的原理是基于对生物体基因组的修改和重组，旨在增加或改变生物体的特性。
下面将介绍几种常见的基因工程实验原理：
1. 基因克隆：该实验原理是将所需基因从一个生物体中剪切并插入到另一个生物体的染色体上，使目标基因能够在新宿主中表达。
2. 限制性内切酶消化：该实验原理是利用限制性内切酶切割目标DNA，创建具有粘性末端的DNA片段。
然后，可以通过连接这些片段来构建重组DNA。
3. 反转录和cDNA合成：这个实验原理是利用逆转录酶将RNA转录成DNA，即cDNA（互补DNA），然后将其克隆到表达载体中。
4. 基因敲入和敲除：该实验原理是通过CRISPR/Cas9系统或其他方法，有针对性地切割或改写目标基因，从而敲除或敲入特定的DNA片段。
5. 转基因技术：这是将外源基因导入到目标生物体中，使其表达或增强特定的功能。
转基因技术的原理可以是通过基因枪、农杆菌介导的转化等手段。
这些实验原理是基因工程研究中常用的方法，可以用于改良农
作物、生产药物、开发生物燃料等领域。
在实验过程中，研究人员需要仔细设计实验方案，并根据具体需求选择适当的方法。
基因工程的基本原理
基因工程的基本原理基因工程是一种利用生物技术手段对生物体进行基因改造的技术。
它的基本原理是通过人为干预生物体的基因组，来改变生物体的遗传特征，从而达到改良生物体的目的。
基因工程的基本原理主要包括基因的克隆、基因的修饰和基因的表达等方面。
首先，基因的克隆是基因工程的重要基本原理之一。
基因的克隆是指将感兴趣的基因从一个生物体中分离出来，并通过体外复制技术进行扩增，得到大量的同一基因序列。
这样的基因序列可以用于后续的基因修饰和表达实验。
基因的克隆需要利用DNA重组技术，将目标基因插入到适当的载体中，然后将载体导入到宿主细胞中进行复制。
其次，基因的修饰也是基因工程的重要基本原理之一。
基因的修饰是指对目标基因进行特定的改变，以达到特定的目的。
常见的基因修饰包括基因敲除、基因敲入、基因突变等。
基因的修饰可以通过CRISPR/Cas9等基因编辑技术来实现，这些技术可以精确地对基因进行修改，从而改变生物体的遗传特征。
最后，基因的表达也是基因工程的重要基本原理之一。
基因的表达是指将目标基因导入到宿主细胞中，并使其在细胞内表达出目标蛋白。
基因的表达需要利用适当的启动子和终止子来调控基因的转录和翻译过程，从而实现目标基因的高效表达。
基因的表达可以通过转基因技术来实现，将目标基因导入到植物、动物或微生物中，使其表达出目标蛋白。
综上所述，基因工程的基本原理主要包括基因的克隆、基因的修饰和基因的表达等方面。
通过这些基本原理，可以对生物体的基因进行精确的改造，从而实现对生物体遗传特征的调控。
基因工程技术的发展将为农业、医学、生物制药等领域带来巨大的变革，有望为人类社会带来更多的福祉和发展机遇。
基因工程学的原理
基因工程学的原理
基因工程学的原理是通过改变或操作生物体的基因来实现特定的目标。
主要的原理包括以下几个方面：
1. 基因克隆：通过将特定的基因从一个生物体中提取出来，然后将其插入到另一个生物体的基因组中，实现基因的复制和传递。
2. DNA重组：通过切割和重新组合DNA分子，将不同生物体的基因组合到一起，从而产生具有新特性的基因组。
3. 基因编辑：通过使用特定的工具，如CRISPR-Cas9系统，直接编辑生物体的基因序列，可以添加、删除或修改特定的基因片段。
4. 基因转导：将外源基因导入到目标生物体中，使其表达和产生特定的蛋白质或产物。
这些原理的应用使得科学家可以在生物体中引入新的功能基因，改变生物体的特征，如增强植物对病虫害的抵抗力、提高农作物的产量等。
此外，基因工程还可以用于生物医学研究和治疗，如基因治疗、基因诊断等。
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基因工程原理
1、典型的DNA重组实验通常包括哪些步骤？（20分）
重组DNA技术一般包括四步：①获得目的基因；②与克隆载体连接，形成新的重组DNA分子；③用重组DNA分子转
化受体细胞，并能在受体细胞中复制和遗传；④对转化子筛选和鉴定。
⑤对获得外源基因的细胞或生物体通过培养，
获得所需的遗传性状或表达出所需要的产物。
2、在PCR扩增时，（1）PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或
小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带，为什么？有何对策？
（2）PCR扩增后有时出现涂抹带或片状带，其原因是什么？应该如何改进？
（20分）
(1)其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。
二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，
及PCR循环次数过多有关。
其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。
其对策有：①必要时重新设计引物。
②减低酶量或调换另一来源的酶。
③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。
④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸)。
(2)出现片状拖带或涂抹带
PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。
其原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。
其对策有：①减少酶量，或调换另一来源的酶。
②减少dNTP的浓度。
③适当降低Mg2+浓度。
④增加模板量，减少循环次数。
3、获得一个功能未知的基因克隆后，怎样研究该基因的功能？请提出具体的
研究方案。
（20分）
基因功能的研究思路主要包括:
1.基因的亚细胞定位和时空(发育期或梯度药物处理浓度, 不同组织/器官)表达谱;
2.基因在转录水平的调控(可以通过genome walking PCR或通过已有的资源库寻找该基因的启动子等转录调控区域, 通过单杂交或ChIP
等技术, 寻找该基因的转录调控蛋白)
3.细胞生化水平的功能研究(也就是蛋白蛋白作用复合体的寻找验证,具体方法有酵母双杂交, GST pulldown, co-IP, BRET, FRET, BiFc等等,对该基因的表达产物做一个细胞信号转导通路的定位)
4.gain-of-function & loss-of-function: 也就是分别在细胞和个体水平,做该基因的超表达和knockdown(或knockout), 从表型分析该基因的功能.
功能研究应从完整的分子-细胞-个体三个层次研究, 综合分析.
4、在真核生物基因的DNA序列中，哪些部分的核苷酸序列的变异会影响其编
码的蛋白质的结构和功能？为什么？（20分）
外显子（exons）和启动子：既存在于最初的转录产物中，也存在于成熟的RNA分子中的核苷酸序列。
术语外显子也指编码相应RNA外显子的DNA中的区域。
启动子是基因（g ene）的一个组成部分，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度。
启动子（P romoters）就像“开关”，决定基因的活动。
既然基因是成序列的核苷酸（nucleoti d es），那么启动子也应由DNA组成。
启动子本身并不控制基因活动，而是通过与称为转录（transcription）因子的这种蛋白质（proteins）结合而控制基因活动的。
转录因子就像一面“旗子”，指挥着酶（enzymes）(RNA聚合酶polymerases) 的活动。
这种酶制造着基因的RNA复制本。
基因的启动子部分发生改变（突变），则导致基因表达的调节障碍。
这种变化常见于恶性肿瘤。
启动子是位于结构基因5‘端上游的一段DNA列，能够指导全酶(holoenzyme)同模板正确结合，活化RNA聚合酶，启动基因转录。
5、简述基因敲除的原理及应用价值。
（20分）
基因敲除技术的原理是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，引入的新基因会随基因组DNA的复制而稳定复制，因而可在活体内对某一特定基因的功能进行研究。
基因敲除有以下应用价值：
①．建立生物模型。
基因敲除技术就常常用于建立某种特定基因缺失的生物模型，从而进行相关的研究。
②.疾病的分子机理研究和疾病的基因治疗。
通过基因敲除技术可以确定特定基因的性质以及研究它对机体的影响。
这无论是对了解疾病的根源或者是寻找基因治疗的靶目标都有重大的意义。
③. 提供廉价的异种移植器官。
如果能将产生异源分子的基因敲除，能够很大地降低排异反应。
④. 免疫学中的应用。
同异源器官移植相似，异源的抗体用于人体时或多或少会有一定的免疫排斥，使得人用抗体类药物的生产和应用受阻。
而如果将动物免疫分子基因敲除，换以人的相应基因，那么将产生人的抗体，从而解决人源抗体的生产问题。
⑤改造生物、培育新的生物品种。
细菌的基因工程技术是本世纪分子生物学史上的一个重大突破，而基因敲除技术则可能是遗传工程中的另一重大飞跃。
它为定向改造生物，培育新型生物提供了重要的技术支持。