重庆大学生物化学实验_实验七 蛋白质沉淀反应

2．将上述试管内容物过滤，向滤液中慢慢加入 硫酸铵粉末，每加一次，需要用细玻棒充分搅拌。 直至粉末不再溶解为止，静止数分钟，观察有清 蛋白析出。
3．向上述两试管的沉淀内各加蒸馏水5毫升，观 察沉淀能否复溶？为什么？
II. 用重金属沉淀蛋白质
原 理
？？？
•应注意 ？
在溶液的PH值大于蛋白质的等 电点时，带负电荷的蛋白质与重 金属离子（Ca2+、Hg2+、Ag1+、 Pb2+等）结合成盐而沉淀。
在溶液的PH值小于蛋白质的等电 点时，带正电荷的蛋白质与生物碱 试剂的负离子结合成盐而沉淀。
操作方法
1．取试管三支，于每支试管中加入蛋白 质溶液1毫升。
2．将以上三支试管编号，于第一支试管 中加20%鞣酸溶液数滴；第二支试管中加 入饱和苦味酸溶液数滴；第三支试管中加 入10%三氯醋酸数滴摇匀；观察沉淀的生 成。
可逆沉淀反应： 在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，蛋
白质分子内部结构并未发生显著变化，基本上保持 原有的性质。如除去造成沉淀的因素后，蛋白质沉 淀可再溶于原来的溶剂中。因此，这种沉淀反应称 为可逆沉淀反应
不可逆沉淀反应： 在发生沉淀反应时，蛋白质分子内部结
构，特别是空间结构遭到破坏，失去其天 然蛋白质原来的性质。这种蛋白质沉淀不 再溶解于原来的溶剂中。
问题： 1、为什么Pr在水溶液中成为稳
定的胶体？
2、什么是Pr的沉淀反应？
原理
维持蛋白质胶体稳定的因素有： 一是胶体颗粒所带的电荷 二是与介质（水）形成的水化膜 这种稳定性是有条件的、相对的，在一定
的物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷、 脱水，甚至变性而丧失稳定因素，即以固态形 式从溶液中析出，这种作用称为蛋白质的沉淀 反应。
3%硫酸铜液
3%硝酸银液
结果
2
1 2
数滴
3
1 2
数滴
III．用“生物碱试剂”沉淀蛋白质
问题：1、什么叫生物碱与生物碱试剂？ 2、生物碱有什么生物学意义？ 3、为什么生物碱试剂能沉淀Pr?
原理 ？？？
NH2 N
ClCH2 N+
H3C N
S
CH3 CH2CH2 OH
O
C
HN
NH
H2C S
CH (CH2)4COOH
I．蛋白质的盐析作用
原 理
？？？
用高浓度的中性盐，使蛋白质带电荷 量减少，水化膜破坏蛋白质而从溶液中沉 淀出来。
盐析沉淀蛋白一般不引起蛋白质变性， 故常用于分离各种天然蛋白质。
操作方法
1．取一试管加入盐析用蛋白质溶液和饱和硫酸 铵溶液各5毫升，混匀后静置数分钟，球蛋白即 沉淀析出。
叶酸（VB11）和四氢叶酸(FH4)
四氢叶酸是合成酶的辅酶，其前体是叶酸(又称为蝶酰谷氨酸，属 于维生素B11,绿叶中含量丰富)。
H
N NH
H2N
H
O
N
N
CH2 NH H
C
OH H
(2-氨4-羟6-亚甲基喋呤)
(对氨基苯甲酸)
COOH CH2 CH2 NH CH COOH
(谷氨酸)
百度文库
四氢叶酸的主要作用是作为一碳基团，如-CH3, -CH2-, -CHO 等的载体，参与多种生物合成过程。
操作方法
1．取三支试管各加蛋白质溶液1毫升，及 0.01N氢氧化钠溶液2滴。
2．将上述三支试管编号，于第一管中加入 3%醋酸铅溶液数滴，第二管中加入3%硫 酸铜溶液数滴，第三管中加入3%硝酸银溶 液数滴，观察沉淀的析出。
管号 试剂 蛋白液 (ml) NaOH液 （滴） 3%醋酸铅液
1
1 2 数滴
实验七 蛋白质的沉淀反应
目的要求 1．了解蛋白质的沉淀反应、变性作用
和 凝固作用的原理及它们的相互关系。 2．学习3种蛋白质沉淀反应的实验操作
技术。
变性作用
指在某些物理和化学因素作用下，蛋 白质特定的空间构象被破坏，从而导致其 理化性质的改变和生物活性的丧失的现象 称为蛋白质的变性作用。
管号
1
试剂
蛋白液
1
(ml)
20%鞣酸 数滴 液
饱和苦味酸 液
10%三氯醋 酸液
结果
2
3
1
1
数滴
数滴
思考
1、蛋白质变性一定是沉淀吗？沉 淀的蛋白质一定是变性吗？为什么
2、蛋白质沉淀反应有什么用途？
注意事项
1、试剂滴加问题 2、安全问题 3、盐析作用的操作问题 4、酒精灯加热问题
沉淀反应
蛋白质从溶液中析出的现象称为蛋白质 沉淀反应。
凝固作用
蛋白质经强酸、强碱作用发生变性后，仍能 溶解于强酸或强碱溶液中，若将pH调至等电点， 则变性蛋白质立即结成絮状的不溶解物。
若再加热则絮状物可变成比较坚固的凝块，该 凝块不易再溶于强酸或强碱溶液中，这种现象称 为蛋白质的凝固作用。