几种测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法
最低抑菌浓度的名词解释
最低抑菌浓度的名词解释1. 介绍最低抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration，MIC），是指在体外实验条件下，抗生素或其他抑菌药物能够完全抑制病原微生物（如细菌、真菌等）生长的最低浓度。
MIC是一种衡量抗生素抑菌效果的指标，它可以用于评估药物的抗菌活性、确定临床有效的药物浓度范围，并为个体化药物治疗提供参考。
2. 测定方法测定MIC的常用方法包括四倍稀释法（Broth Dilution Method）和纸片扩散法（Disk Diffusion Method）。
2.1 四倍稀释法四倍稀释法是一种定量测定MIC的方法。
该方法将抗生素或其他抑菌药物通过连续四倍稀释的方式加入含有病原微生物的培养基中，然后观察最低能完全抑制菌落生长的药物浓度。
操作步骤： 1. 准备含有多种不同浓度抗生素的培养基。
2. 用含菌培养基分别接种到含有不同浓度抗生素的试管中。
3. 培养试管并观察菌落生长情况。
4. 确定最低能完全抑制菌落生长的浓度即为MIC。
2.2 纸片扩散法纸片扩散法是一种半定量测定MIC的方法。
该方法将抗生素或其他抑菌药物通过纸片扩散的方式施加到含有病原微生物的琼脂平板上，然后观察形成的抑菌圈直径，进而推算出MIC。
操作步骤： 1. 在琼脂平板上均匀涂抹含有病原微生物的悬浮液。
2. 将含有不同浓度抗生素的纸片放置在琼脂平板表面。
3. 孵育琼脂平板并观察抑菌圈直径。
4. 根据抑菌圈直径的大小推算出MIC。
3. 临床意义MIC在临床抗生素使用中具有重要的意义。
3.1 抗生素选择和疗效评估通过测定细菌对抗生素的MIC可以确定药物的抗菌活性，指导临床合理使用抗生素。
- 当病原菌对某种抗生素的MIC低于规定的临床断点时，该抗生素对该菌株是敏感的，可以选择该抗生素进行治疗。
- 当病原菌对某种抗生素的MIC高于规定的临床断点时，该抗生素对该菌株是耐药的，不应选择该抗生素进行治疗。
琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)资料解读
琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)|琼脂稀释法琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。
本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。
1.培养基制备使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2~7.4。
淋病奈瑟菌使用GC琼脂基础加1%添加剂；其它链球菌使用含5%（V/V）绵羊血的MH琼脂（当试验磺胺药时，使用溶解的马血）。
2.含药琼脂平板制备根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45~50℃水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。
通常按1∶9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。
配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置2~8℃冰箱可贮存5天。
3.接种物制备与接种制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再1∶10稀释，以多点接种器吸取制备好菌液（约1~2μl）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU，形成直径为5~8mm的菌斑。
接种好后置35℃孵育16~20h（甲氧西林耐药葡萄球菌、万古霉素耐药肠球菌孵育时间应满24h），观察结果。
奈瑟菌属、链球菌属细菌置5%二氧化碳、幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。
4.结果判断将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。
在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长，与生长对照比较抑制80%以上细菌生长的最低药物浓度作为终点浓度。
如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上，或低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养物纯度或重复试验。
读书的好处1、行万里路，读万卷书。
2、书山有路勤为径，学海无涯苦作舟。
抗菌和抑菌效果评价方法
抗菌和抑菌效果评价方法引言：随着抗生素的广泛应用和细菌耐药性的不断增强，对抗菌和抑菌效果评价方法的研究变得越来越重要。
本文将介绍几种常用的抗菌和抑菌效果评价方法，以期为相关研究提供参考。
一、最小抑菌浓度（MIC）最小抑菌浓度是指抑制细菌生长所需的最低药物浓度。
常用的MIC 测定方法有两种：管法和板法。
管法采用不同浓度的抗生素溶液与细菌进行反应，观察细菌生长情况以确定最小抑菌浓度。
板法则是将抗生素涂于琼脂培养基上，再将细菌接种于上面，通过观察细菌生长情况来确定最小抑菌浓度。
这两种方法都具有操作简单、结果可靠的特点，被广泛应用于抗菌药物的研究和临床应用。
二、抗菌圈直径法抗菌圈直径法是通过测量药物在琼脂培养基上抑制细菌生长所形成的抗菌圈直径来评价抗菌效果的方法。
该方法适用于各种抗菌药物的评价，操作简单、结果直观，广泛应用于实验室和临床。
通过测量抗菌圈直径，可以判断药物对细菌的抑制程度，进而评估其抗菌效果。
三、抑菌率法抑菌率法是通过将不同浓度的抗生素溶液与细菌进行反应，然后观察细菌生长情况，计算抑菌率来评价抑菌效果的方法。
抑菌率是指抑制细菌生长的百分比，通常使用百分比作为评价指标。
抑菌率法可以较直观地反映药物对细菌的抑制能力，但其结果受到实验条件和操作方法的影响，需要注意标准化实验条件以确保结果的准确性。
四、细菌存活率法细菌存活率法是通过测量抗生素处理后细菌存活的比例来评价抗菌效果的方法。
常用的方法有平板计数法和浊度法。
平板计数法是将处理后的细菌溶液均匀涂布于琼脂平板上，经过一段时间后，计算细菌的存活率。
浊度法则是通过测量细菌溶液的光学密度来评估细菌存活率。
这两种方法都可以较准确地评估抗菌效果，但需要注意操作的严谨性和结果的可靠性。
五、细菌增殖曲线法细菌增殖曲线法是通过测量细菌在不同浓度抗生素处理条件下的生长曲线来评价抗菌效果的方法。
该方法可以直观地反映药物对细菌生长的抑制程度，并且可以确定最佳抑菌浓度。
抗生素最低抑菌浓度
抗生素最低抑菌浓度（MIC）和半数抑菌浓度（MIC）测定方法几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法：1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
抗菌药物直接购自厂商或相关机构。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。
1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
1.1.3. 培养基 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。
测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法
测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
抗菌药物直接购自厂商或相关机构。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。
1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
1.1.3.培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。
最低抑菌浓度(MIC)测定
word附件3.4最低抑菌浓度（MIC）测定1.菌悬液的制备刮取18～20小时的培养物，在管壁上充分研磨后混悬于1ml缓冲液中，借助比浊仪，调菌悬液浓度至104/ml，于1小时用多点接种仪接种（放置室温应大于25℃）。
2.MIC测定(1)抗菌药物储存液制备⏹抗菌药物称量及配制：根据各抗菌药物的纯度称取，以目前所用抗菌药物为例。
抗菌素纯度称量（mg）加溶剂(ml)储存液浓度(μg/ml)四环素100% 3.2 1 3200大观霉素63.4% 40.38 1 25600头孢曲松81.5% 2.45 1 2000环丙沙星84.4 3.8 1 3200⏹分装与保存：每管200μl，-70℃可保存一年。
(2)抗菌药物工作液制备青霉素：四环素:大观霉素：头孢曲松:环丙沙星：(3)抗菌药物梯度培养皿的制备⏹培养皿编号：按各抗菌药物浓度编号。
⏹将配制好的各抗菌药物工作液150μl加到各培养皿中，与15ml 50℃预温的培养基充分混匀，平放在超净台，半开培养皿盖至培养基凝固后，用塑料袋密封保存于4℃冰箱。
(4)菌悬液接种与培养⏹多头接种针以及菌液板用高压法灭菌处理，其他配件用酒精消毒处理；使用前必须确认完全烘干。
⏹按照仪器要求将菌悬液接种于各抗菌药物梯度培养皿，接种菌后置超净台直至菌悬液渗入。
⏹置35℃～36℃、5%～10% CO2一定湿度的环境中培养。
⏹记录放置时间。
⏹培养18～24小时观察结果。
(5)结果判读⏹观察细菌生长情况：-记录结果读取时间。
-在适宜的光线下，观察对照培养皿的菌落生长情况，并对所有菌株进行初步鉴定（涂片染色和氧化酶试验）。
-比较观察对照平皿和抗菌药物平皿，进行判读：接种点有1个以上菌落或呈菌苔状为生长；接种点无任何菌落或呈薄雾印迹为无生长。
⏹MIC判读与记录：-MIC是指抗菌药物能够抑制细菌生长的最小抑菌药物浓度，表示单位为 g/ml 。
-记录各抗菌药物浓度平皿上细菌生长情况，在《WHO参考菌株及MIC 实验结果记录表》用（+）表示生长，（-）表示无生长。
几种测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法
几种测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法近年来，随着抗生素的广泛使用以及细菌耐药性的增加，抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）的测定变得日益重要。
MIC是指抗菌药物能够抑制细菌生长的最低浓度，是评估抗菌药物对细菌耐药性的一种重要方法。
下面介绍几种测定抗菌药物MIC的方法。
1. 琼脂扩散法琼脂扩散法是一种经典的MIC测定方法。
该方法基于抗生素与菌株相互作用抑制菌株生长的原理。
实验中将不同浓度的抗生素溶液加入琼脂平板中，并在琼脂表面均匀涂布细菌悬液。
待菌株在琼脂表面生长形成克隆后，观察克隆周围清晰的无菌区域大小，根据无菌区域所对应的抗生素浓度计算MIC值。
该方法简单易行，但由于该方法目测判断，因此存在主观性差异和读片误差的问题。
2. 荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑）（Alamar blue）法荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑）法是一种高通量及准确性较高的MIC测定方法。
该方法基于菌株呼吸代谢消耗的荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑）的发光信号变化来评估抗生素的MIC值。
实验中将不同浓度的抗生素溶液加入微孔板中，并添加细菌悬液及荧光素二磷酸盐3-（4,5-二苯基噻唑），经过一定时间后读取板上的荧光信号，测算MIC 值。
该方法准确性高，可用于筛选大量样本的抗菌药物敏感性，但需要特殊设备和耗费较多经费。
3. 壳聚糖纳米粒子微滴法壳聚糖纳米粒子微滴法是一种新兴的MIC测定方法。
该方法基于壳聚糖纳米粒子本身具有抑菌作用及微滴原理，实验中将不同浓度的抗生素与含菌液的溶液制成微滴，并添加壳聚糖纳米粒子，待微滴凝胶后进行观察，根据微滴内的细菌生长情况评估折射率值，进而计算MIC值。
这种方法具有较高的准确性和可靠性，但需要特殊仪器和技术支持。
4. 测序MIC法随着测序技术的发展，现已出现测序MIC法。
该方法基于高通量测序技术，对菌株进行全基因组测序，确定细菌株中抗生素耐药基因的编码序列，并进行序列比对和分析，确定抗生素的MIC值。
药敏MIC方法
几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）技术几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）技术1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
抗菌药物直接购自厂商或相关机构。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。
1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
1.1.3. 培养基 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108C FU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。
几种测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)方法
几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
抗菌药物直接购自厂商或相关机构。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。
1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
1.1.3. 培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM 肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。
最低抑菌浓度(mic)测定方法
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抗菌药物临床应用相关指标计算公式
抗菌药物临床应用相关指标计算公式抗菌药物是指对细菌、真菌、病毒等微生物具有治疗或预防作用的药物。
自20世纪50年代开始应用于临床，并逐渐成为现代医学中不可或缺的重要药物之一。
然而，由于滥用抗菌药物所导致的耐药性问题日益凸显，因此在进行抗菌药物治疗时需要遵循一些相关指标以确保药物的安全和有效性。
一、最小抑菌浓度（MIC）最小抑菌浓度（MIC）是指在检测到的抗菌药物能够抑制该菌株生长的最低浓度，是评估药物对菌株敏感性的指标。
通常情况下，MIC测定使用的方法有两种：微量扩散法和肉汤或琼脂平板法。
其中微量扩散法比较常用，可通过“肉眼观察”或计算机读数来确定MIC。
MIC的结果可用于评估药物的抗菌功效及耐药性，为医生选择合适的药物提供可靠的科学依据。
二、药物浓度峰谷比（Cmax/Cmin）药物浓度峰谷比（Cmax/Cmin）是指治疗期间药物在体内浓度的峰值与谷值的比值。
该指标在评估药物治疗效果和使用剂量时比较重要。
如果Cmax/Cmin比率过高，则可能导致药物暴露过度，对肾脏和肝脏等器官造成负担，并可能出现药物副作用。
因此，医生在治疗过程中需要调整药物剂量和给药间隔时间，以保持合理的Cmax/Cmin比率。
三、药物消除半衰期（t1/2）药物消除半衰期（t1/2）是指药物在体内浓度下降到初始浓度的一半所需要的时间。
该指标用于评价药物的代谢速度和药物清除率。
在选择合适的抗菌药物时，了解药物的代谢速度和清除率十分重要，如果药物的清除速度过快，会导致药物浓度过低，反之则会引起药物的过度积蓄。
因此，在治疗过程中，医生需要根据患者的具体情况和药物相关参数定制合适的给药方案。
四、治疗窗口（TD）治疗窗口（TD）是指药物血浆浓度在治疗期间的最低有效浓度和最高安全浓度之间的范围。
该指标一般是根据药物的药效学和耐受性进行计算，并用于评估药物的治疗窗口。
在进行抗菌药物治疗时，了解药物的治疗窗口有助于医生确定合理的药物剂量和给药方案，避免药物过度积蓄或给药不足的情况。
抗菌药物最小抑菌浓度的测定
抗菌药物最小抑菌浓度的测定一、概念：最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）：在特定环境下孵冇24 小时，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度即最小抑菌浓度，用于泄量测立体外抗菌活性。
二、实验目的：通过采用常量稀释法，检测几种抗菌药物对--菌株的最小抑菌浓度（MIC）, 对临床诊断用药有指导作用。
MH液体培养基无菌试管分光光度计0.5麦氏标准比浊管MH琼脂微量加样器蒸饰水吸头接种环0.1 mol磷酸缓冲液(PH6.0)无菌生理盐水无菌平板无菌滤膜0.22无菌针筒抗菌药物金黄色匍萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌四、检验方法：液体稀释法、琼脂稀释法、E试验（Etcst）液体稀释法操作步骤：抗菌药物原液配置0000000000000MH液体试管中抗菌药物梯度稀释观察结果1..抗菌药物原液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000ug/ml(如1280ug/ml)或10倍于最高测左浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280ug/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750ixg/mgo用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg.根据公式讣算所需稀释剂用量为：(182.6 mgX75O u g/ml)/1280 ug/ml= 107.0ml,然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表1。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-20°C环境，并注意抗菌药物的保存期限。
表1稀释法中常用的抗菌药物容积稀释法2.药敏试验用抗菌药物浓度范带|根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范国应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
3.培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton (MH)肉汤，pH7.2~7.4。
琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)
琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50C左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。
本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。
1.培养基制备使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2~7.4。
淋病奈瑟菌使用GC琼脂基础加1% 添加剂；其它链球菌使用含5% （V/V ）绵羊血的MH琼脂（当试验磺胺药时，使用溶解的马血）。
琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）|琼脂稀释法2.含药琼脂平板制备根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45~50C水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。
通常按1 : 9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。
配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置2~8C冰箱可贮存5天。
3.接种物制备与接种制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再1 ： 10稀释，以多点接种器吸取制备好菌液（约1〜2 u 1）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU,形成直径为5〜8mm的菌斑。
接种好后置35°C孵育16〜20h （甲氧西林耐药葡萄球苗、万古霉素耐药肠球菌孵育时间应满24h）, 观察结果。
奈瑟菌属、链球菌属细菌置5%二氧化碳、幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。
4.结果判断将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MICo 在含甲氧节胺曙呢或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长，与生长对照比较抑制80%以上细菌生长的最低药物浓度作为终点浓度。
如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高终点水平的琼脂平板上，或低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养物纯度或重复试验。
抗菌中药mic测定的原理
抗菌中药mic测定的原理
抗菌中药MIC（最低抑菌浓度）测定的原理是通过确定抗菌药物对细菌生长的最低有效浓度来评估其抗菌活性。
MIC测定的常用方法是微量肉汤稀释法。
基本步骤如下：
1. 准备肉汤培养基：将饱和的肉汤培养基稀释到指定浓度，使得培养基中的营养物质和菌落形成所需的物质浓度适中。
2. 准备菌悬液：将待测的细菌菌株培养至对数生长期，然后用无菌生理盐水稀释，使得菌悬液中的细菌浓度适中。
3. 稀释药物：将待测的抗菌药物按一系列浓度进行稀释，通常以二倍递减的方式进行。
4. 配制试验管：将肉汤培养基和菌悬液按一定比例混合并置于试验管中，然后加入不同浓度的抗菌药物稀释液。
5. 孵育：将试验管放入恒温培养箱中，在适当的温度下孵育一定时间，促进细菌生长。
6. 判定MIC：观察试验管的结果，确定最低浓度的抗菌药物能够抑制细菌生长
的最小浓度即为MIC。
通过测定不同抗菌药物的MIC，可以对比不同药物的抑菌能力，评价抗菌药物的抗菌活性，并且可以提供合适的药物浓度来指导临床应用。
测定抗菌药物最低抑菌浓度方法
测定抗菌药物最低抑菌浓度方法抗菌药物最低抑菌浓度是一种测定药物对细菌的抑制能力的方法。
药物的最低抑菌浓度是指能够完全抑制细菌生长的最低药物浓度。
测定抗菌药物的最低抑菌浓度可以帮助医生选择最合适的药物治疗感染疾病，也可以用于判断细菌的耐药性。
下面将介绍一种常用的测定抗菌药物最低抑菌浓度的方法，稀释法。
稀释法是一种常见的测定抗菌药物最低抑菌浓度的方法。
其基本原理是通过将抗菌药物稀释成不同浓度，然后与已知浓度的细菌悬液共同培养，看最低浓度能够抑制细菌生长。
下面是稀释法的具体步骤：1.准备培养基：首先准备含有富集营养物的培养基，如米勒杆菌培养基。
将培养基制备成液体状态。
2.制备细菌悬液：选择已知浓度的细菌悬液，将其制备成适量悬液，浓度一般为约10^5CFU/mL。
3.准备药物浓度梯度：将抗菌药物按需要的浓度逐级稀释，通常是2倍递减。
最低浓度一般从药物的临床最低浓度开始。
4.混合药物和细菌悬液：将各浓度的药物与相同体积的细菌悬液混合，使其浓度达到希望的对数倍稀释。
5.接种培养：将混合液均匀地接种在含有富集营养物的培养基平板上，通常每个平板接种3个不同药物浓度的液滴。
6.培养：将接种的平板放入恒温培养箱中，通常在37℃温度下培养24小时。
7.观察结果：观察不同浓度液滴周围的菌落生长情况，可以看到浓度最低的液滴周围没有菌落生长，即为该抗菌药物的最低抑菌浓度。
稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度具有简单、经济、易于操作等优点，被广泛应用于临床和科研实验室中。
然而，它也存在一些限制。
首先，该方法只能测定药物对细菌的直接抑制作用，不能反映体内药物对细菌的作用情况。
其次，稀释法只能测定其中一时间点的抗菌活性，不能直接反应细菌对药物的耐药性发展情况。
此外，不同细菌对药物的敏感性存在差异，因此测定结果应结合临床经验和文献数据进行解读和分析。
总之，测定抗菌药物最低抑菌浓度是一项重要的实验研究和临床实践中的方法。
通过稀释法可以有效评估药物对细菌的抑制能力，有助于选择适宜的药物治疗感染疾病，并且能够为研究细菌耐药性提供信息。
琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度
琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50C左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。
本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。
1. 培养基制备使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2~7.4。
淋病奈瑟菌使用GC琼脂基础加1%添加剂；其它链球菌使用含5%（V/V ）绵羊血的MH琼脂（当试验磺胺药时，使用溶解的马血）。
2. 含药琼脂平板制备根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45~50 C水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。
通常按1 : 9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。
配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置2~8 C冰箱可贮存5天。
3. 接种物制备与接种制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再 1 : 10稀释，以多点接种器吸取制备好菌液（约1~2卩I）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU，形成直径为5~8mm的菌斑。
接种好后置35C孵育16~20h （甲氧西林耐药葡萄球菌、万古霉素耐药肠球菌孵育时间应满24h）,观察结果。
奈瑟菌属、链球菌属细菌置5%二氧化碳、幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。
4. 结果判断将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。
在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长，与生长对照比较抑制80%以上细菌生长的最低药物浓度作为终点浓度。
如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上，或低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养物纯度或重复试验。
原理：将抗菌药物配制到琼脂培养基中成：128 u g/ml * 64 u g/ml . 32 u g/ml .............................. 0. 06 ug/ml对倍稀释的浓度系列多点接种器将制备好的细菌菌悬液迅速点种到琼脂表面，经35C16-20小时培养肉眼观察细菌生长，以未见细菌生长平板的最低药物浓度为最低抑菌浓度(MIC)抗菌药物保存液的准备1估算抗菌药物最小称量琼脂稀释法最高药物浓度为128 u g/ml 药物和培养基的体积比1： 14,即药物浓度將成15倍稀释，因此保存液为128ug/mlX15 = 1920 u g/ml 如果1次用量为10ml ,则：抗菌药物最小称量二1920ug/ml*10ml抗菌药物的效价抗菌药物保存液的准备2抗菌药物稀释选择合适的抗菌药物稀释液进行药物稀释, 稀释液需要量见下列公式：抗菌药物实际称量*效价稀释液体积二保存液浓度(1920iig/ml)抗菌药物保存液的准备3实际操作:先计算完成一批试验需几次完成，每次用量多少，然后可一起称量，一起稀释亍然后按每次需要量分装在试管中，贴上标签，注明药物名称，浓度,体积数及配制日期，置与＜-20D C保存，备用。
最低抑菌浓度测定方法
最低抑菌浓度测定方法一、前言最低抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration，MIC）是指一种抗菌药物能够抑制细菌生长的最低浓度。
MIC测定是临床微生物学和药理学中的重要实验方法之一，对于评估抗菌药物的疗效和选择合适的治疗方案具有重要意义。
本文将介绍最低抑菌浓度测定方法，包括试验材料、实验步骤和结果判读等内容。
二、试验材料1. 细菌：需测试的细菌株，可选用革兰氏阳性或阴性细菌。
2. 培养基：可选用Mueller-Hinton琼脂培养基或Brain Heart Infusion琼脂培养基等。
3. 抗生素：需测试的抗生素，可选用氨苄西林、头孢呋辛等常见抗生素。
4. 96孔板：用于进行微量稀释法测定MIC值。
5. 稀释液：可选用双倍稀释液（double-strength broth）或盐水等。
6. 恒温箱：用于控制培养温度为37℃。
7. 显微镜：用于观察细菌生长情况。
三、实验步骤1. 制备菌液：取一支革兰氏染色阳性或阴性细菌，接种于含有适当营养成分的培养基中，进行预培养。
待菌液浑浊度达到0.5 McFarland标准时，可用于后续实验。
2. 稀释菌液：将制备好的菌液按一定比例稀释至10^-4或10^-5倍，得到约10^6 CFU/mL的细菌悬浮液。
3. 制备抗生素溶液：将需测试的抗生素按一定比例加入到稀释液中，制备出不同浓度的抗生素溶液。
4. 测定MIC值：将制备好的抗生素溶液加入到96孔板中，并依次加入稀释好的细菌悬浮液。
每个孔内均应包括对照组和实验组。
将孔板放入恒温箱中，在37℃条件下培养18-24小时。
观察各孔内是否有细胞生长，记录最低浓度呈现无细胞生长情况的孔号，即为MIC值。
四、结果判读1. MIC值的判读应根据不同抗生素和细菌株的敏感性标准进行。
2. 一般来说，MIC值越低，说明抗生素对该细菌株的敏感性越强。
3. 当MIC值等于或低于临床常用浓度时，说明该抗生素对该细菌株具有治疗价值。
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几种测定抗菌药物最低抑菌浓度（MIC）方法1.1.常量肉汤稀释法1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。
溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。
抗菌药物直接购自厂商或相关机构。
所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。
例如：需配制100 ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。
用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6 mg。
根据公式计算所需稀释剂用量为：（182.6 mg×750μg/ml）/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6 mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。
制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表5。
配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60℃以下环境，保存期不超过6个月。
1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。
1.1.3. 培养基 NCCLS推荐使用Mueller-Hinton（MH）肉汤，pH7.2~7.4。
需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。
在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%（W/V）氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。
嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
1.1.4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白（MH）肉汤中，35℃孵育2-6h。
增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。
二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。
用MH肉汤将上述菌悬液进行1∶100稀释后备用。
注意应在15分钟内接种完配制好的接种物，并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养，以检查接种物纯度。
1.1.5.稀释抗菌药物的制备及菌液接种取无菌试管（13×100mm）13支，排成一排，除第1管加入1.6mlMH肉汤外，其余每管加入MH肉汤1ml，在第1管加入抗菌药物原液（如1280μg/ml） 0.4ml混匀，然后吸取1ml至第2管，混匀后再吸取1ml至第3管，如此连续倍比稀释至第11管，并从第11管中吸取1ml弃去，第12管为不含药物的生长对照。
此时各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml。
然后在每管内加入上述制备好的接种物各1ml，使每管最终菌液浓度约为5×105CFU/ml。
第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125μg/ml。
1.1.6.孵育将接种好的稀释管塞好塞子，置35℃普通空气孵箱中孵育16~20h；嗜血杆菌和链球菌在普通空气孵箱中孵育20~24h；对可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐万古霉素肠球菌应持续孵育满24h。
1.1.7.结果判断与解释在读取和报告所测试菌株的MIC前，应检查生长对照管的细菌生长情况是否良好，同时还应检查接种物的传代培养情况以确定其是否污染，质控菌株的MIC值是否处于质控范围。
以肉眼观察，药物最低浓度管无细菌生长者，即为受试菌的MIC。
甲氧苄胺嘧啶或磺胺药物的肉汤稀释法终点判断，与阳性生长对照管比较抑制80%细菌生长管药物浓度为受试菌MIC。
根据NCCLS推荐的分界点值标准，判断耐药（resistant, R）、敏感(susceptible, S)或中介（intermediate, I）。
S表示被测菌株所引起的感染可以用该抗菌药物的常用剂量治疗有效，禁忌症除外。
R指该菌不能被抗菌药物的常用剂量在组织液内或血液中所达到的浓度所抑制，或属于具有特定耐药机理（如β-内酰胺酶），所以临床治疗效果不佳。
I是指MIC接近药物的血液或组织液浓度，疗效低于敏感菌。
还表示被测菌株可以通过提高剂量（如β-内酰胺类药物）被抑制，或在药物生理性浓集的部位（如尿液）被抑制。
另外，中介还作为“缓冲域”，以防止由微小的技术因素失控，所导致较大的错误解释。
1.2.微量肉汤稀释法1.2.1.抗菌药物和培养基制备同常量肉汤稀释法。
1.2.2.MIC板制备无菌操作，将倍比稀释后不同浓度的抗菌药物溶液分别加到灭菌的96孔聚苯乙烯板中，第1至第11孔加药液，每孔10μl，第12孔不加药作为生长对照，冰冻干燥后密封，-20℃以下保存备用。
1.2.3.接种物制备将用生长法或直接菌悬液法制备的浓度相当于0.5麦氏比浊标准的菌悬液，经MH肉汤1∶1000稀释后，向每孔中加100μl，密封后置35℃普通空气孵箱中，孵育16~20h判断结果。
当试验嗜血杆菌属，链球菌属时，孵育时间为20~24h，试验葡萄球菌和肠球菌对苯唑西林和万古霉素的药敏试验时孵育时间必须满24h。
此时，第1孔至第11孔药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μg/ml。
1.2.4.结果判断以在小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。
当阳性对照孔（即不含抗生素）内细菌明显生长试验才有意义。
当在微量肉汤稀释法出现单一的跳孔时，应记录抑制细菌生长的最高药物浓度。
如出现多处跳孔，则不应报告结果，需重复试验。
通常对革兰阴性杆菌而言，微量肉汤稀释法测得的MIC与常量肉汤稀释法测得的结果相同或低一个稀释度（1孔或2倍）。
2.琼脂稀释法琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。
本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。
2.1.培养基制备使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2~7.4。
淋病奈瑟菌使用GC琼脂基础加1%添加剂；其它链球菌使用含5%（V/V）绵羊血的MH琼脂（当试验磺胺药时，使用溶解的马血）。
.2.含药琼脂平板制备根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45~50℃水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。
通常按1∶9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。
配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置2~8℃冰箱可贮存5天。
22.3.接种物制备与接种制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再1∶10稀释，以多点接种器吸取制备好菌液（约1~2μl）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU，形成直径为5~8mm的菌斑。
接种好后置35℃孵育16~20h（甲氧西林耐药葡萄球菌、万古霉素耐药肠球菌孵育时间应满24h），观察结果。
奈瑟菌属、链球菌属细菌置5%二氧化碳、幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。
2.4.结果判断将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。
在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长，与生长对照比较抑制80%以上细菌生长的最低药物浓度作为终点浓度。
如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上，或低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养物纯度或重复试验。
3.E试验（E-test） E试验是指浓度梯度琼脂扩散试验，其原理基本同扩散法，即浓度呈连续梯度的抗菌药物从塑料试条中向琼脂中扩散，在试条周围抑菌浓度范围内受试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。
E试验综合了稀释法和扩散法的原理和特点，同时还弥补了二者的一些不足，可以像稀释法一样直接定量测出抗菌药物对受试菌的MIC。
3.1.培养基、菌液制备和接种同纸片扩散法。
3.2.贴E试验条同纸片扩散法，E试验条的刻度面朝上，不得贴反，一旦接触琼脂后不得再移动。
直径150mm的平皿内可放置6根E试验试条，90mm者一般只能放置1根。
3.3.孵育时间和温度同纸片扩散法。
3.4.结果阅读孵育后围绕试条可形成一个椭圆形的抑菌圈，在抑菌圈和试条的横切相交处试条上的读数刻度即是测定抗菌药物对受试菌的MIC。
阅读时应注意的问题见供应商的产品说明书。
目前常用的药敏试验方法如下：1、定性测定的纸片扩散法(disk diffusion test)，K-B法： WHO推荐的全球统一的标准方法。
原理：含有定量抗菌货物的纸睡帖在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。
在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。
质控：标准菌株的抑菌圈直径应落在预期范围内，如果超出该范围，应视为失控而予以纠正。
影响因素：培养基的质量、药敏纸片的质量、接种菌量、试验操作质量、孵育条件、抑菌圈测量工具的精度和质控菌株本身的药敏特性等均能影响试验结果的准确性。
2、定量测定的稀释法(dilution test)，主要测定细菌对某药的最低抑菌浓度，包括肉汤稀释法和琼脂稀释法。
琼脂稀释法：原理：将不同剂量的抗菌药物加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中，制成含有不同递减浓度药物的平板。
接种待没测菌（可在一个平板上做多株测定），35℃孵育16－24h，无细菌生长的最低药物浓度为测试菌的MIC。
本试验特点是可同时做多株菌株的MIC测定，结果的重复性优于肉汤稀释法，且易于发现污染或耐药突变菌，是新药证时常用的外药敏试验经典参照标准。
3、E法(E test)，结合了扩散法和稀释法各自的优点。
是结合了扩散法和稀释法各自的优点，操作简便同扩散法，又可以象稀释法一样直接定量测出抗菌药物对测试菌的最低MIC，结果准确，重复性好，但是价格昂贵。
4、全自动药敏仪法，有Vitek、Microscan、Sensititre ARIS、ATB。
提纯蛋白质后，需要测定其最小抑菌浓度（MIC），有文献提到根据MIC测得的结果计算抑菌率：抑菌率（%）= (阳性对照OD值—试验OD值) / (阳性对照OD值—阴性对照OD值 )X100 样品的MIC与同性质药物和一些常用药物的MIC进行比较才有意义，不能单纯通过自己样品的结果就判断出高低，并且不能只用一种细菌。
要考虑用不同种类的细菌进行实验，还要做质控。
根据抑菌率大小可以判断是否具有抑菌能力。