异氟烷对尖吻蝮的麻醉实验研究

∗基金项目:浙江省科技计划项目(计划编号:２０１１R ０９０４２Ｇ０４)作者简介:黄晓娟,女,本科在读,研究方向:保护生物学.E Ｇm a i l :８６１５２５２４８＠q q．c o m ә通讯作者:E Ｇm a i l :f y s z jt c m＠１６３．c o m 异氟烷对尖吻蝮的麻醉实验研究∗黄晓娟,祖宇瑶,田书心,程雯,华飞平,丁志山,范永升ә(浙江中医药大学医学技术学院,浙江杭州㊀３１００５３)[摘要]㊀目的㊀研究异氟烷对尖吻蝮的麻醉保定作用,为尖吻蝮的实验操作提供安全保障.㊀方法㊀采用窒息实验排除窒息因素;选取２４条体重约５００g 的尖吻蝮随机均分为Z １组㊁Z ２组㊁Z ３组,每组８条,分别置于０．４７％㊁０．７０％㊁０．９４％浓度异氟烷环境下,观察并记录其失去翻正反射时间(T １)㊁完全麻醉时间(T ２)及重新获得翻正反射时间(T ３);将１６条体重约１０００g 的尖吻蝮随机分为Z ４组和Z ５组,每组８条,分别置于０．７０％㊁０．９４％浓度异氟烷环境下,观察并记录其麻醉时间及反应;选取大㊁小型王锦蛇及小型尖吻蝮各８条(W １组㊁W ２组㊁Z ６组),比较不同类型的蛇在相同条件下的麻醉效果.㊀结果㊀处于密闭环境的尖吻蝮在４０m i n 内未出现晕厥现象;浓度为０．４７％的异氟烷不足以麻醉体重为５００g 的尖吻蝮;浓度为０．７０％和０．９４％的异氟烷均可麻醉体重为５００g 或１０００g 的尖吻蝮;不同种类的蛇在相同麻醉条件下的麻醉效果相差较大.㊀结论㊀异氟烷可以作为尖吻蝮麻醉保定的简单方便麻醉剂.[关键词]㊀异氟烷;尖吻蝮;麻醉[中图分类号]㊀R Ｇ３３;R ９７１＋．２㊀[文献标识码]㊀A㊀[文章编号]㊀１００１－５６３９(２０１９)０１－０００５－０３d o i :１０．３９６９/j．i s s n ．１００１－５６３９．２０１９．０１．００２A n e s t h e t i cE x p e r i m e n t o f I s o f l u r a n e o nA gk i s t r o d o nA c u t u s ∗HU A N GX i a o Ｇj u a n ,Z UY u Ｇy a o ,T I A NS h u Ｇx i n ,C H E N G W e n ,HU AF e i Ｇp i n g ,D I N GZ h i Ｇs h a n ,F A NY o n g Ｇs h e n g ә㊀(C o l Ｇl e g e o fM e d i c a lT e c h n o l o g y ,Z h e j i a n g C h i n e s eM e d i c a lU n i v e r s i t y ,H a n g z h o uC i t y ,Z h e j i a n g Pr o v i n c e ,３１００５３,C h i n a )[A b s t r a c t ]㊀O b je c t i v e ㊀T o s t u d y a n e s t h e t i c ef f e c t o f i s o f l u r a n e o nD i e n ag k i s t r o d o na c u t u s ,i no r d e r t o p r o v i d e a s a f e t yg u a r a n Ｇt e e f o r th e e x p e ri m e n t a l o p e r a t i o n o f D i e n a g k i s t r o d o n a c u t u s ．㊀M e t h o d s ㊀S u f f o c a t i o n e x p e r i m e n tw a s u s e d t o r u l e o u t t h e c h o Ｇk i n g f a c t o r s ．T w e n t y Ｇf o u r D i e n a g k i s t r o d o n a c u t u s w e i g h i n g a b o u t ５００g w e r er a n d o m l y d i v i d e d i n t oZ １g r o u p s (８c a s e s ),Z ２g r o u p s (８c a s e s )a n dZ ３g r o u p s (８c a s e s ),a n d p l a c e d i n t h e e n v i r o n m e n t o f ０．４７％,０．７０％,０．９４％i s o f l u r a n e ．I t s l o s i n g r i gh Ｇt i n g r e f l e x t i m e (T １),t o t a l a n e s t h e s i a t i m e (T ２)a n dr e g a i n i n g t h e r i g h t i n g r e f l e x t i m e (T ３)w e r eo b s e r v e da n dr e c o r d e d ．S i x Ｇt e e n D i e n a g k i s t r o d o n a c u t u s w e i g h i n g a b o u t １０００g w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t oZ ４g r o u p s a n dZ ５g r o u p s ,a n d p l a c e d i n t h e e n Ｇv i r o n m e n t o f ０．７０％,０．９４％i s o f l u r a n e ,i t s a n e s t h e s i a t i m e a n d r e a c t i o nw e r e o b s e r v e d a n d r e c o r d e d ．E i g h t l a r g e E l a ph e c a r i n a Ｇt a s ,e i g h t s m a l l E l a p h e c a r i n a t a s a n de i g h ts m a l l D i e n a g k i s t r o d o na c u t u s w e r es e l e c t e di n t ot h r e e g r o u p s (W １g r o u p ,W ２g r o u p ,Z ６g r o u p )t o c o m p a r e t h e a n e s t h e t i c e f f e c t s o f d i f f e r e n t t y pe s of s n a k e s u n d e r t h e s a m e c o n d i t i o n s ．㊀R e s u l t s ㊀T h eD i e n Ｇag k i s t r o d o na c u t u s i n a c o n f i n e d e n v i r o n m e n t d i d n o t sh o ws y n c o p ewi t h i n ４０m i n ．０．４７％i s o f l u r a n ew a s n o t e n o u g h t o a n e s t h e Ｇt i z e ５００g o f D i e n a g k i s t r o d o na c u t u s ．I s o f l u r a n e i n０．７０％a n d０．９４％c o n c e n t r a t i o nc a na n e s t h e t i z e D i e n a g k i s t r o d o na c u t u s w e i g h i n g ５００g o r １０００g ．D i f f e r e n t t y pe sof s n a k e sh a dd i f f e r e n t a n e s t h e t i ce f f e c t su n d e r t h es a m ea n e s t h e t i cc o n d i t i o n s ．㊀C o n c l u s i o n ㊀I s o f l u r a n e c a nb eu s e da s a s i m p l e a n d c o n v e n i e n t a n e s t h e t i c f o r t h e a n e s t h e s i a o f b a r r a m u n d i ．[K e y w o r d s ]㊀I s o f l u r a n e ;D i e n ag k i s t r o d o n a c u t u s ;A n e s th e si a ㊀㊀尖吻蝮(D i e n a g k i s t r o d o n a c u t u s )俗称蕲蛇或五步蛇,属蛇亚目㊁蝮亚科㊁蝰科㊁尖吻蝮属,具有极高的食用㊁药用价值[１].随着现代养殖业的迅速发展,养殖蛇类和饲养宠物蛇的数量日益增加,国内爬行类异宠市场格外兴盛.为保护饲养者的操作安全,在养殖过程中对蛇均有一个保定的要求.而蛇的危险性决定了麻醉是最安全有效的保定手段,选择合适的麻醉方法及麻醉剂显得尤为重要.㊀㊀吸入麻醉又称气体麻醉,是指气体或挥发性液体麻醉剂通过呼吸吸入至肺泡ң扩散进入血液ң再由血液运送到中枢神经系统,从而产生麻醉效果的一种全身麻醉方法[２].吸入麻醉剂在动物麻醉维持方面的优点较多,异氟烷是目前兽医临床使用较为广泛的麻醉剂之一,有良好的麻醉作用,诱导麻醉及苏醒较快[３],有关其药物代谢动力学和药效学已进行了大量的研究[４].本实验采用异氟烷对尖吻蝮蛇进行气体麻醉实验,为尖吻蝮蛇的操作安全提供一定的实验依据.１㊀材料１．１㊀实验动物㊀尖吻蝮蛇㊁王锦蛇,雌雄各半,体重１００~１０００g (由武义刘金蛇类养殖场提供),常规饲养,临床检查健康㊁活动正常㊁营养良好㊁痛觉敏感.在进行麻醉实验７d (一个进食周期)前停止投食,仅给予清水让其排空腹中的食物,５蛇志J o u r n a l o f S N A K E (S c i e n c e&N a t u r e)２０１９年第３１卷第１期V o l ．３１N o ．１,２０１９保持空腹状态.１．２㊀药品与仪器㊀异氟烷(河北一品制药股份有限公司,批号:C００２１７０９０１),电子天平(上海精密科学仪器有限公司),１m l注射器(江苏宇阳医疗器械有限公司)以及计时器,透明密闭塑料箱,捕蛇钩,防刺手套,高筒胶靴,防护服.２㊀方法与结果２．１㊀窒息排除实验㊀为排除透明密闭塑料箱内体积小而导致蛇缺氧晕厥窒息现象,特进行窒息排除实验.于透明密闭塑料箱内灌满水后将其倒出,用量筒测得水的体积为１７L,即得到该箱子的容积为１７L.选取一条体型较大的尖吻蝮蛇(体重为１０２８g)放入透明密闭塑料箱并计时,观察其呼吸肌肉蠕动㊁吐信子的频率等,同时每２~３分钟翻动一次塑料箱以判断其活动是否迟缓.结果显示,尖吻蝮蛇在４０m i n 内未出现晕厥现象,排除了短期内由于透明密闭塑料箱缺氧导致尖吻蝮晕厥窒息的可能.２．２㊀麻醉程度判定指标的确定实验㊀选取体型较小的尖吻蝮蛇(体重为２４３g)进行麻醉实验,将其置于透明密闭的塑料箱内,用１m l注射器迅速吸取０．８m l异氟烷注入塑料箱内,迅速封闭并计时.同时观察箱中尖吻蝮的状态,发现其于４．３３m i n时翻正反射消失,于６．３８m i n时不再出现夹尾反射,进入完全麻醉状态.然后依次出现腹部起伏㊁蛇体翻正的现象,最终于１０．４２m i n出现夹尾反射,表示已苏醒.根据此现象,确定将翻正反射和夹尾反射作为判断指标.２．３㊀不同浓度异氟烷对尖吻蝮的麻醉效果比较实验㊀选取体型相近,状态良好,体重约为５００g的健康尖吻蝮蛇２４条,随机分成Z１组㊁Z２组㊁Z３组,每组８条,分别注入０．４㊁０．６㊁０．８m l的异氟烷(对应浓度分别为０．４７％㊁０．７０％㊁０．９４％),记录失去翻正反射的时间(T１)㊁完全麻醉的时间(T２)以及重新获得翻正反射的苏醒时间(T３).结果从表１中可知,Z１组中７条蛇未完全麻醉,而Z２和Z３组的蛇均被完全麻醉,说明浓度为０．４７％的异氟烷不足以在实验条件下麻醉体重约为５００g的尖吻蝮蛇,而浓度为０．７０％~０．９４％的异氟烷能够麻醉体重约为５００g的尖吻蝮.从Z２组与Z３组比较可见,异氟烷浓度越高,尖吻蝮进入完全麻醉状态的时间越短,其苏醒时间也越短.２．４㊀异氟烷对不同体型尖吻蝮的麻醉效果比较实验㊀选取１６条体型相近,状态良好,体重约为１０００g的健康尖吻蝮,随机分为两组大型尖吻蝮组４㊁大型尖吻蝮组５(Z４组㊁Z５组),分别注入０．６㊁０．８m l的异氟烷(对应浓度分别为０．７０％㊁０．９４％),记录失去翻正反射的时间(T１)㊁完全麻醉的时间(T２)以及重新获得翻正反射的苏醒时间(T３),分别与小型尖吻蝮组２㊁小型尖吻蝮组３(Z２组㊁Z３组)进行比较.由表２可知,处于相同浓度异氟烷环境下,体型大的尖吻蝮相对较活跃,其进入完全麻醉状态所需时间较体型小的尖吻蝮短,同时也更快苏醒.表１㊀不同浓度异氟烷对体重为５００g左右尖吻蝮麻醉效果比较组别体重(g)异氟烷浓度(％)T１(m i n)T２(m i n)T３(m i n) Z１组５１５０．４７///５１００．４７///５０２０．４７///４９５０．４７///４８９０．４７///４５９０．４７///３９１０．４７１８．１８//３７６０．４７６．５５９．２５１４．４７Z２组５３００．７０４．００８．４３１５．７７５１００．７０７．７２９．３０２１．９７５０００．７０１１．１５１５．５０２４．８５４８３０．７０５．４０７．９３２０．７２４８００．７０５．５３８．１５１９．３５４６３０．７０４．４３６．９２１５．９７４２９０．７０８．４８１０．７７１９．６５３９７０．７０６．８８８．３３１７．２５Z３组５８９０．９４３．３２５．９７１５．１３５３２０．９４５．６８７．６５１４．７２５０００．９４５．８２８．１８１３．４５４９７０．９４４．６２６．９７１４．３５４９２０．９４４．４２７．２０１５．６５４９００．９４５．６３７．４５１５．８８４７７０．９４５．５０７．１５１７．４２４１２０．９４６．６８８．５３１３．９２㊀㊀注: / 为未观察到判断指标反射表２㊀异氟烷对不同体型尖吻蝮的麻醉效果比较组别体重(g)条数(条)异氟烷浓度(％)T１(m i n)T２(m i n)T３(m i n)Z４组１０８５~１３１２８０．７０３．８２~６．７２７．９０~１２．７３１０．００~１８．５３Z２组３９７~５３０８０．７０４．００~１１．１５６．９２~１５．５０１５．７７~２４．８５Z５组１０２８~１１４３８０．９４２．４３~６．６２４．４７~９．３０９．９５~１６．６３Z３组４１２~５８９８０．９４３．３２~６．６８５．９７~８．５３１３．４５~１７．４２６蛇志J o u r n a l o f S N A K E(S c i e n c e&N a t u r e)２０１９年第３１卷第１期V o l．３１N o．１,２０１９２．５㊀异氟烷对不同种类蛇的麻醉效果比较实验㊀选取大型王锦蛇(W１组)㊁小型尖吻蝮蛇(Z６组)和小型王锦蛇(W２组)各８条,分为大型王锦蛇组㊁小型尖吻蝮蛇组和小型王锦蛇组.大型王锦蛇组注入０．８m l异氟烷,将其与大型尖吻蝮蛇(Z５组)进行比较;将小型尖吻蝮蛇组与小型王锦蛇组分别置于１L的塑料盒中进行麻醉实验,均注入０．１m l异氟烷.记录失去翻正反射的时间(T１)㊁完全麻醉的时间(T２)以及重新获得翻正反射的苏醒时间(T３).结果从表３可见,处于相同浓度异氟烷环境下,体型相近的王锦蛇与尖吻蝮蛇完全麻醉所需时间相差较大,可见相同条件下,同种麻醉剂对不同种类的蛇麻醉效果不一,差异较大.表３㊀异氟烷对不同种类蛇的麻醉效果比较组别体重(g)条数(条)异氟烷浓度(％)T１(m i n)T２(m i n)T３(m i n) W１组１１７９~１２７２８０．９４１．１３~２．８０３．３０~４．９７７．４３~８．７２Z５组１０２８~１１４３８０．９４２．４３~６．６２４．４７~９．３０９．９５~１６．６３W２组８６~１０７８２．００/３．２０~３．９５５．１５~６．８７Z６组１１４~１９２８２．００１．０２~２．０３２．２３~３．３５６．８５~７．９０㊀㊀注: / 为未观察到判断指标反射３㊀讨论㊀㊀近年来,众多学者研究发现尖吻蝮蛇毒具有凝血㊁溶栓以及抗肿瘤等功效,是当下开发利用的珍贵药用资源[５].尖吻蝮作为蛇亚目蝰蛇科蝮亚科下的一个有毒单型蛇,在人工饲养过程中极可能对饲养者的人身安全造成威胁.因此,研究尖吻蝮的麻醉保定实验显得尤为重要.但目前鲜有文献报道尖吻蝮的麻醉保定,因此本实验通过不同浓度异氟烷环境下对尖吻蝮蛇的状态变化,探讨其麻醉保定作用.有研究发现,爬行类动物的麻醉较为复杂,个体差异大,如中华鳖可用浸泡鱼安定溶液(M SＧ２２２)进行麻醉[６],而蛇类因其全身布满鳞片,不适用于上述方法进行麻醉.此外,蛇类本身的攻击性以及注射剂量的难以把控也决定了其不适用于注射麻醉[７].为此,吸入麻醉不失为最佳选择.㊀㊀异氟烷作为一种常用的吸入麻醉剂,呈无色㊁透明液体,性质稳定,可任意比例与氧混合,不易爆炸,遇光㊁遇碱均不分解,麻醉效果良好,但深度麻醉对循环及呼吸系统均有一定的抑制作用[３].本实验在使用异氟烷对尖吻蝮进行麻醉的过程中,为了降低对蛇的伤害,选用低浓度麻醉剂展开实验,结果发现浓度为０．７０％~０．９４％的异氟烷在７~１０m i n 内即可使体重为５００~１０００g的尖吻蝮进入完全麻醉状态,且在１０m i n内可完全苏醒,该结果可为尖吻蝮短期实验麻醉剂量的选择提供参考.此外,本研究还发现,状态活跃的蛇其麻醉所需时间与苏醒时间均较短,这可能与异氟烷本身的性质有关,其在体内很少被分解,以原形由呼吸道排出为主[３],较为活跃的尖吻蝮由于呼吸频率高,使异氟烷进出体内快,导致其麻醉与苏醒均较快.㊀㊀此外,不同种类蛇的麻醉效果差异较大.本研究发现尖吻蝮蛇与王锦蛇的麻醉差异较大,且个体间的差异也较大.同样,孙晓煜等[７]在用异氟烷麻醉短尾蝮时,发现５％的异氟烷使短尾蝮达到完全麻醉状态的平均时间为３３．０５m i n,而对于异氟烷耐受性强的个体则需要１h才能达到完全麻醉状态.另有文献指出[８],蛇的年龄㊁体重㊁体质状况㊁疾病㊁应激性等均会对麻醉产生一定的影响.㊀㊀总之,影响蛇麻醉的因素众多,对尖吻蝮蛇的异氟烷麻醉保定还需更进一步的实验研究,为五步蛇的安全麻醉选择提供更多的实验依据.[参考文献][１]㊀王义权．蛇类药材的系统研究[D]．南京:南京师范大学,１９９５．[２]㊀王成东,兰景超,杨智,等．大熊猫吸入麻醉操作技术与监护方法[J]．动物医学进展,２００６,２７(６):１１１Ｇ１１５．[３]㊀李泉,李大勇,冉大强,等．异氟烷综述[J]．山东医药工业,２００２,２１(１):３１Ｇ３２．[４]㊀袁占奎,余芳,何丹,等．异氟烷和七氟烷麻醉对犬血气指标的影响[J]．中国兽医杂志,２０１６,５２(２):７６Ｇ７８．[５]㊀胡建国．尖吻蝮蛇毒药理作用的研究进展[J]．中医学报,２０１３,２８(１):７４Ｇ７６．[６]㊀谢全森,李俊伟,杨振才．M SＧ２２２对中华鳖的麻醉效果研究[J]．山西师范大学学报(自然科学版),２００９,２３(１):７８Ｇ８１．[７]㊀孙晓煜,唐业忠,陈勤．短尾蝮蛇异氟烷气体麻醉方法介绍[J]．四川动物,２０１５,３４(５):７０１Ｇ７０６．[８]㊀刘建才,曹婷,于萍,等．速眠新和异氟烷对蟒蛇的全麻效果研究[J]．中国畜牧兽医,２０１２,３９(１):２３０Ｇ２３３．７蛇志J o u r n a l o f S N A K E(S c i e n c e&N a t u r e)２０１９年第３１卷第１期V o l．３１N o．１,２０１９。