环境工程微生物学实验 (2)解析

显微镜的使用
二、对光
3．转动转换器，使低倍物 镜对准通光孔(物镜的前端 与载物台要保持5厘米的距 离)。
显微镜的使用
三、观察
5．把所要观察的玻片 标本放在 载物台上，用 压片夹压住，标本要正 对通光孔的中心。
显微镜的使用
6．转动粗准焦螺旋，使 镜筒缓缓下降，直到物镜 接近玻片标本为止（眼 睛看着物镜，以免物镜碰 到玻片标本）。
显微镜直接计数法
将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具 有确定面积和容积的载玻片上，又称血球计数板， 于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的 方法。
血球计数板的构造
血球计数板的计算方法
血球计数板上刻有一长宽各为1毫米的方形大格，其 体积为0.1mm3。计数板有两种刻度，一种是每大格分为16 个中格，而每中格又分25个小格，每大格为16×25小格 =400小格，而另一种，则是每大格分为25个中格，而每中 格又分为16个小格，则每大格为25×16=400小格（计数板 上的标识为XB·K25）
洋葱鳞叶表皮细胞(10×40)
洋葱鳞叶表皮细胞(10×40)
洋葱鳞叶表皮细胞装片（10 × 40
细胞壁
细胞核 细胞质(液泡)
微生物细胞的计数
目的要求
1.了解血球计数板的结构及计数 原理。
2、掌握使用血球计数板进行微 生物计数的方法。
实验原理
测定微生物数量方法很多，通常采用的有显 微镜直接计数法、平板计数法和光电比浊计数法。
高倍显微镜的使用
（1）是低倍镜还是高倍镜的视野大，视野明亮？为什么？ 低倍镜的视野大，通过的光多，放大的倍数小； 高倍镜的视野小，通过的光少，但放大的倍数高。
（2）为什么要先用低倍镜观察清楚后，把要放大观察的 物像移至视野的中央，再换高倍镜观察?
如果直接用高倍镜观察，往往由于观察的对象不在 视野范围内而找不到。
更換高倍物镜
转动细准焦螺旋至标本 影像清晰为止
移动目标至视 野中央
调节反光镜、 光圈
3.使用显微镜的注意事项
（1）显微镜安放位置， 显微镜应安放在离桌边缘5 cm、镜筒向前，
并讲清显微镜位置稍靠左侧的道理（两眼同时 睁开观察，眼不易疲劳，便于绘图。）
（2） 对光根据光线Baidu Nhomakorabea强弱来选择平面镜或凹 面镜；用低倍镜进行对光，把低倍镜位置放低； 在转动转换器时，物镜到位，光圈调节好，视 野光线均匀、明亮.
计数公式
(1)16×25的血球计数板计算公式： 酵母细胞数／ml=（100小格内酵母细胞个数／
100）×400×10000×稀释倍数
(2)25x16的血球计数板计算公式： 酵母细胞数／ml=（80小格内酵母细胞个数／
80）×400×10000×稀释倍数
实验器材
显微镜、血球计数板、酵母菌液、盖玻 片、吸管、吸水纸。
环境工程微生物学实验
一、显微镜的结构
镜座、镜柱、镜臂、
机械部分 镜筒
倾斜关节、转换器
显微镜
载物台 目镜、物镜
光学部分 遮光器
反光镜
二.显微镜的使用
一、取镜和安放
1．右手握住镜臂，左 手托住镜座
显微镜的使用
2．把显微镜放在实验台上， 略偏左（显微镜放在距实验 台边缘7厘米左右）。安装 好目镜和物镜。
7．向目镜内看，同时反 方向转动粗准焦螺旋，使 镜筒缓缓上升，直到看清 物像为止。再略微转动细 准焦螺旋，使看到的物像 更加清晰。
8、换高倍物镜：如果进一步使用高倍物镜观察，应 在转换高倍物镜之前，把物像中需要放大观察的部分 移至视野中央（将低倍物镜转换成高倍物镜观察时， 视野中的物像范围缩小了很多）。如果换高倍物镜后 物像不一定很清晰，可以转动细准焦螺旋进行调节。 在转换高倍物镜并且看清物像之后，可以根据需要调 节光圈或聚光器，使光线符合要求（一般将低倍物镜 换成高倍物镜观察时，视野要稍变暗一些，所以需要 调节光线强弱）。
计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对 角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格（即100个 小格）的酵母菌数。如果使用25 格× 16格规格的计数室 除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80 个小方格)的酵母菌数。 (6)当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大方格的 上方和左方线上的酵母细胞(或只计数下方和右方线上的 酵母细胞)。
练习：
目镜5X、物镜4X、视野中央有一排 细胞共15个。若把物镜换成10X，则 细胞数目为（ ）个。因为视野中的 细胞数目与放大倍数成反比；若目镜 5X，物镜4X，视野中共有50个细胞， 再把物镜换成10X，则视野中有（ ） 个细胞。因为视野中看到的实物的范 围与放大倍数的平方成反比。
洋葱鳞叶表皮细胞(10×10)
高 倍 镜 的 使 用 1.转动反光镜使视野明亮
2.在低倍镜下观察清楚后，把要 放大观察的物像移至视野中央
3.转动转换器，换成高倍物镜 4.观察并用细准焦螺旋调焦
光学显微镜
取镜和安放 对光（选择低倍镜、反光镜、光圈） 固定装片
转动粗准焦螺旋，载镜物筒台缓上缓升下降（目视物镜与装片之间）
反向转动粗准焦螺旋，载镜物筒台上下升降，直至看到物像
视野中物像与标本移动的关系：
如视野中某观察对象位于左下方如 何移到中央，应将装片或切片向左 下方移动（同向移动）。原因是视 野中物像移动的方向或切片移动的 方向相反
使用高倍镜观察的步骤和要点是：
（1）首先用低倍镜观察，找到要观察的物 像，移到视野的中央。
（2）转动转换器，用高倍镜观察，并轻轻 转动细准焦螺旋，直到看清楚材料为止。
3.使用显微镜的注意事项
• （3）正确使用高倍物镜的方法 由于高倍物镜的工作距离小，镜头易损坏，,
并且把光圈开大。 （4）重视准焦螺旋的使用
在使用高倍物镜时，不要调节粗准焦螺旋， 避免物镜损坏、装片压烂。 （5）不是倍数越大，越清晰
如果目镜倍数过大，得到的放大虚像则很不 清晰。在低倍镜下能看清楚的物像，不必用高 倍镜观察。
因此，需要先用低倍镜观察清楚，并把要放大观察 的物像移至视野的中央，再换高倍镜观察。
（3）用转换器转过高倍镜后，转动粗准焦螺旋行不行？
不行。用高倍镜观察，只需微调即可。 转动粗准焦螺旋，容易压坏玻片。
污点判断： 玻片移，污点移，则污点在玻片上； 物镜换，污点移，则污点在物镜上； 目镜转，污点移，则污点在目镜上