凝胶电泳实验报告模板
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凝胶成像仪；
②聚丙烯酰胺凝胶电泳：垂直板电泳槽，稳压稳流电泳仪，梳子；
3.试剂：琼脂糖，1xTAE缓冲液，载样缓冲液(Loading buffer) ，goldviwe
染料，DL5,000 DNA Marker (Takara)。
三、
核酸凝胶电泳是分子克隆核心技术之一，用于分离、鉴定和纯化DNA或RNA
4.利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、浓度和分子量以及分离大小不同的DNA片
段。
5.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳测定DNA和蛋白分子量大小的方法。
二、实验材料、用具及试剂
1.材料：菌落PCF产物(待检测DNA片段)；
2.用具：①琼脂糖凝胶电泳：电泳仪，水平板型电泳槽，电子天平，微量移液器
(10山)，枪头，三角瓶，点样板，梳子，微波炉，
数是分 子的大小、极性及介质粘度的函数，因此根据分子大小的不同、构成或形 状的差异，以及所带的净电荷的多少，便可以通过电泳将蛋白质或核酸分子混合 物中的各种成分彼此分离开来。在生理条件下，核酸分子的糖-磷酸骨架中的磷
酸基因呈离子状态从这种意义上讲，D NA和RNA多核苷酸链可叫做多聚阴离子(Polyanions)。因此，当核酸分子被放置在电场中时，它们就会向正电极的方 向迁移。由于糖-磷酸骨架结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等
孔径较大适用于分离同工酶及其亚型，大分子核酸等应用较广。琼脂糖和聚丙烯 酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA度大小范围较广，
不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA段。琼脂糖通常用水平 装置在强度和方向恒定的电场下电泳。聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5-500bp)效果 较好,其分辩力极高,甚至相差1bp的DNA段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快,可容纳相对大量的DNA但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂 直装置进行电泳。目前，一般实验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行DNA
且在电泳过程中形成的电位梯度亦不均匀。由此产生的浓缩效应、电荷效应和分 子筛效应。
⑴浓缩效应
样品在电泳开始时，通过浓缩胶被浓缩成高浓度的样品薄层（一般能浓缩几百倍），
然后再被分离。当通电后，在样Baidu Nhomakorabea胶和浓缩胶中，解离度最大的Cl「有效迁移率
最大，被称为快离子，解离度次之的蛋白质则尾随其后，解离度最小的甘氨酸离 子（PI=6.0）泳动速度最慢，被称为慢离子。由于快离子的迅速移动，在其后边形 成了低离子浓度区域，即低电导区。电导与电势梯度成反比，因而可产生较高的 电势梯度。这种高电势梯度使蛋白质和慢离子在快离子后面加速移动。因而在高 电势梯度和低电势梯度之间形成一个迅速移动的界面，由于样品中蛋白质的有效 迁移率恰好介于快、慢离子之间，所以，也就聚集在这个移动的界面附近，逐渐 被浓缩，在到达小孔径的分离胶时，已形成一薄层。
3.1.2聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验室中常采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAG）SDS-PAGE是蛋白分 析中最经常使用的一种方法。它是将蛋白样品同离子型去垢剂十二烷基硫酸钠
（SDS以及巯基乙醇一起加热，使蛋白变性，多肽链内部的和肽链之间的二硫键 被还原，肽链被打开。打开的肽链靠疏水作用与SDS结合而带负电荷，电泳时在
琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动 时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质 和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相当 大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中。
蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，因此跑 的速度不同，根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的pH在6-9之间，离子强度0.02-0.05为最适。常用1%勺琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围 广。普通琼脂糖凝胶分离DNA勺范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达107bp的DNA片段。
电泳。
3.1凝胶电泳的分类
按照分离物质来分凝胶电泳可以分为核酸凝胶电泳和蛋白质凝胶电泳；按照 分离介质来分可以分为琼脂糖凝胶电泳技术和PAG礙胶电泳。本次实验我们采用
按介质的分类方法来学习的。
3.1.1琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他
支持物电泳的最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。
量的净电荷，因而它们能以同样的速度向正电极方向迁移。在一定的电场强度下，
DNA分子的这种迁移速度，亦即电泳的迁移率，取决于核酸分子本身的大小和构 型，分子量较小的DNA分子比分子量较大的DNA分子迁移要快些。这就是应用凝 胶电泳技术分离DNA片段的基本原理。
聚丙烯酰胺凝胶电泳，普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶
电场作用下，肽链在凝胶中向正极迁移。不同的大小的肽链由于在迁移时受到的 阻力不同，在迁移过程中逐渐分开，其相对迁移率与分子量的对数间成线形关系。
SDS- PAGE可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。本实验采用 垂直板状不连续系统，其基本原理如下： 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳包含了两种以上的缓冲液成分、pH值和凝胶孔径，而
片段，具有以下优点：便于分离、便于检测和便于回收。其工作原理相对而言比 较简单、主要用到了物理学的电荷理论。
当一种分子被放置在电场当中时，它们就会以一定的速度移向适当的电极，
这种电泳分子在电场作用下的迁移速度，叫做电泳的迁移率。它同电场的强度和 电泳分子本身所携带的净电荷数成正比。也就是说，电场强度越大、电泳分子所 携带的净电荷数量越多，其迁移的速度也就越快，反之则较慢。由于在电泳中使 用了一种无反应活性的稳定的支持介质，如琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺胶等，从而 降低了对流运动，故电泳的迁移率又是同分子的摩擦系数成反比的。已知摩擦系
重庆大学研究生专业实验教学
实验报告书
实验课程名称：凝胶电泳实验
实验指导教师：
学 院：
专业及类别：生物学
学 号：
姓 名：
实验日期：
成 绩：
重庆大学研究生院制
一、
1.理解凝胶电泳的分类及琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的基本原理。
2.熟练琼脂糖凝胶电泳实验的基本操作。
3.通过实验了解凝胶电泳实验的注意事项并在以后的实验中尽量避免。
②聚丙烯酰胺凝胶电泳：垂直板电泳槽，稳压稳流电泳仪，梳子；
3.试剂：琼脂糖，1xTAE缓冲液，载样缓冲液(Loading buffer) ，goldviwe
染料，DL5,000 DNA Marker (Takara)。
三、
核酸凝胶电泳是分子克隆核心技术之一，用于分离、鉴定和纯化DNA或RNA
4.利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、浓度和分子量以及分离大小不同的DNA片
段。
5.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳测定DNA和蛋白分子量大小的方法。
二、实验材料、用具及试剂
1.材料：菌落PCF产物(待检测DNA片段)；
2.用具：①琼脂糖凝胶电泳：电泳仪，水平板型电泳槽，电子天平，微量移液器
(10山)，枪头，三角瓶，点样板，梳子，微波炉，
数是分 子的大小、极性及介质粘度的函数，因此根据分子大小的不同、构成或形 状的差异，以及所带的净电荷的多少，便可以通过电泳将蛋白质或核酸分子混合 物中的各种成分彼此分离开来。在生理条件下，核酸分子的糖-磷酸骨架中的磷
酸基因呈离子状态从这种意义上讲，D NA和RNA多核苷酸链可叫做多聚阴离子(Polyanions)。因此，当核酸分子被放置在电场中时，它们就会向正电极的方 向迁移。由于糖-磷酸骨架结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等
孔径较大适用于分离同工酶及其亚型，大分子核酸等应用较广。琼脂糖和聚丙烯 酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA度大小范围较广，
不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA段。琼脂糖通常用水平 装置在强度和方向恒定的电场下电泳。聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5-500bp)效果 较好,其分辩力极高,甚至相差1bp的DNA段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快,可容纳相对大量的DNA但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂 直装置进行电泳。目前，一般实验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行DNA
且在电泳过程中形成的电位梯度亦不均匀。由此产生的浓缩效应、电荷效应和分 子筛效应。
⑴浓缩效应
样品在电泳开始时，通过浓缩胶被浓缩成高浓度的样品薄层（一般能浓缩几百倍），
然后再被分离。当通电后，在样Baidu Nhomakorabea胶和浓缩胶中，解离度最大的Cl「有效迁移率
最大，被称为快离子，解离度次之的蛋白质则尾随其后，解离度最小的甘氨酸离 子（PI=6.0）泳动速度最慢，被称为慢离子。由于快离子的迅速移动，在其后边形 成了低离子浓度区域，即低电导区。电导与电势梯度成反比，因而可产生较高的 电势梯度。这种高电势梯度使蛋白质和慢离子在快离子后面加速移动。因而在高 电势梯度和低电势梯度之间形成一个迅速移动的界面，由于样品中蛋白质的有效 迁移率恰好介于快、慢离子之间，所以，也就聚集在这个移动的界面附近，逐渐 被浓缩，在到达小孔径的分离胶时，已形成一薄层。
3.1.2聚丙烯酰胺凝胶电泳
实验室中常采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAG）SDS-PAGE是蛋白分 析中最经常使用的一种方法。它是将蛋白样品同离子型去垢剂十二烷基硫酸钠
（SDS以及巯基乙醇一起加热，使蛋白变性，多肽链内部的和肽链之间的二硫键 被还原，肽链被打开。打开的肽链靠疏水作用与SDS结合而带负电荷，电泳时在
琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动 时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质 和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相当 大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中。
蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，因此跑 的速度不同，根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的pH在6-9之间，离子强度0.02-0.05为最适。常用1%勺琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围 广。普通琼脂糖凝胶分离DNA勺范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达107bp的DNA片段。
电泳。
3.1凝胶电泳的分类
按照分离物质来分凝胶电泳可以分为核酸凝胶电泳和蛋白质凝胶电泳；按照 分离介质来分可以分为琼脂糖凝胶电泳技术和PAG礙胶电泳。本次实验我们采用
按介质的分类方法来学习的。
3.1.1琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他
支持物电泳的最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。
量的净电荷，因而它们能以同样的速度向正电极方向迁移。在一定的电场强度下，
DNA分子的这种迁移速度，亦即电泳的迁移率，取决于核酸分子本身的大小和构 型，分子量较小的DNA分子比分子量较大的DNA分子迁移要快些。这就是应用凝 胶电泳技术分离DNA片段的基本原理。
聚丙烯酰胺凝胶电泳，普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶
电场作用下，肽链在凝胶中向正极迁移。不同的大小的肽链由于在迁移时受到的 阻力不同，在迁移过程中逐渐分开，其相对迁移率与分子量的对数间成线形关系。
SDS- PAGE可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。本实验采用 垂直板状不连续系统，其基本原理如下： 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳包含了两种以上的缓冲液成分、pH值和凝胶孔径，而
片段，具有以下优点：便于分离、便于检测和便于回收。其工作原理相对而言比 较简单、主要用到了物理学的电荷理论。
当一种分子被放置在电场当中时，它们就会以一定的速度移向适当的电极，
这种电泳分子在电场作用下的迁移速度，叫做电泳的迁移率。它同电场的强度和 电泳分子本身所携带的净电荷数成正比。也就是说，电场强度越大、电泳分子所 携带的净电荷数量越多，其迁移的速度也就越快，反之则较慢。由于在电泳中使 用了一种无反应活性的稳定的支持介质，如琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺胶等，从而 降低了对流运动，故电泳的迁移率又是同分子的摩擦系数成反比的。已知摩擦系
重庆大学研究生专业实验教学
实验报告书
实验课程名称：凝胶电泳实验
实验指导教师：
学 院：
专业及类别：生物学
学 号：
姓 名：
实验日期：
成 绩：
重庆大学研究生院制
一、
1.理解凝胶电泳的分类及琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的基本原理。
2.熟练琼脂糖凝胶电泳实验的基本操作。
3.通过实验了解凝胶电泳实验的注意事项并在以后的实验中尽量避免。