3.第三章 细菌感染的实验室诊断(上)
细菌感染的实验室诊断
细菌学检查
细菌抗原成分检测： 细菌或其抗原（未知）+ 抗体（已知） 确定种型 动物实验 药敏试验 其他检测法: PCR 分子杂交技术
血清学诊断
原理： 细菌或其抗原（已知）+ 抗体（未知） 抗体效价
方法：
凝集试验
补体结合试验
中和试验
注意：
取急性期和恢复期双份血，
有4倍以上升高有意义。
用于抗原性较强的病原菌和
病程较长的传染病诊断
细菌感染的实验室诊断
Laboratory Diagnosis of Bacteria Infection 北京大学医学部 病原生物学系 徐国民
细菌感染的实验室诊断
Laboratory Diagnosis of Bacteria Infection
标本的采集
细菌学检查
血清学诊断
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
标本的采集原则
1. 根据感染的特征确定取材部位及内容。 2. 标本采集后应尽快送检，必要时放冰壶内低温送检。
3. 严格无菌操作，对本身带菌标本，如粪便等应加入
高浓度青霉素即链霉素处理。
4. 用于血清学诊断的标本，应在急性其和恢复期各取
一分血清，若恢复期血清抗体效价比急性期增高4倍或 以上才有诊断意义。
细菌学检查
直接涂片镜检
分离培养
病原菌鉴定 形态学检查 涂片染色镜检 生化实验：IMViC 生物学实验：噬菌体分型，细菌素分型， 气液相色谱法
细菌感染的实验室检查
通过检测患者血清中的抗体以确定患者是 否感染某种细菌。
通过病理学方法对感染部位的组织进行观 察和诊断。
实验室检查的流程
样本处理
将采集的样本进行处理，如离 心、过滤等，以提取样本中的 细菌。
药敏试验
对分离鉴定的细菌进行药敏试 验，以确定患者对哪种抗生素 敏感。
采集样本
根据患者的症状和医生的诊断 ，采集患者的血液、尿液、粪 便、分泌物等样本。
推进实验室检查的标准化和规范化
制定行业标准
组织制定实验室检查相关的国际和国内标准，规范实验室检查的 操作流程和质量标准。
培训和教育
加强实验室检查人员的培训和教育，提高他们的专业素养和技术水 平。
质量控制
建立实验室检查的质量控制体系，定期对实验室进行检查评估，确 保实验室检查数据的准确性和可靠性。
THANKS
04
分子生物学检查
分子生物学检查方法
聚合酶链反应（PCR）
是一种常用的分子生物学检查方法， 通过复制目标DNA片段来增加其数量 ，从而进行快速、灵敏的检测。
基因测序
生物芯片技术
利用芯片上的微小点阵列进行多重检 测，可同时检测多种病原菌。
对细菌的基因组进行测序，以识别和 鉴定细菌的种类和亚种。
分子生物学检查结果解读
培养与鉴定
将提取的细菌进行培养、分离 和鉴定，以确定感染的细菌种 类和数量。
结果报告
将实验室检查结果报告给医生 ，以便医生根据结果制定合适 的治疗方案。
02
细菌培养与鉴定
细菌培养方法
01
02
03
常规培养
将样本接种在培养基上， 通过培养观察细菌的生长 情况、形态、染色等特征 ，以确定细菌种类。
西医及临床医学：细菌感染考试资料三
西医及临床医学：细菌感染考试资料三1、单选典型流脑临床表现为（）。
A.剧烈头痛、频繁呕吐、抽搐、颈项强直、脑膜刺激征阳性B.剧烈头痛、恶心、嗜睡、肌肉僵硬，血压升高C.剧烈头痛、发热、腰背部疼痛、四肢（江南博哥）麻木D.头痛、发热、口渴、烦躁不安、四肢发软E.头痛、发热、全身无力、昏迷正确答案：A2、单选流脑暴发型败血症型的发病机制是（）。
A.高热，失水性休克B.急性肾上腺皮质功能衰竭所致C.外毒素引起的多脏器功能衰竭D.内毒素所致的严重微循环障碍，DICE.血管内皮损伤血浆外渗所致低血容量休克正确答案：D3、配伍题细菌性痢疾表现为（）霍乱表现为（）A.洗肉水样腹泻，伴发热，腹痛，无里急后重B.腹泻，黏液脓血样便，伴发热，腹痛，里急后重C.腹泻，大便呈果酱状，伴低热，腹痛，无里急后重D.剧烈腹泻，米泔样大便，无发热，无腹痛及里急后重E.发热，脐周痛，腹泻，大便呈水样，有少量黏液正确答案：B,D4、配伍题流脑实验室检查首选（）阿米巴痢疾实验室检查首选（）A.脑脊液涂片镜检B.血液涂片镜检C.胸水涂片镜检D.痰涂片镜检E.大便涂片镜检正确答案：A,E5、配伍题可减少霍乱腹泻量及缩短排菌时间的治疗是（）霍乱治疗的关键是（）A.抗菌治疗B.补液治疗C.强心治疗D.糖皮质激素的使用E.血管活性药物的使用正确答案：A,B6、配伍题流行性出血热的传染源主要是（）霍乱的传染源主要是（）A.家畜B.患者C.蚊虫D.毛蚶E.鼠类正确答案：E,A7、单选下列检查，对鉴别慢性菌痢与直肠癌最简便而有意义是（）。
A.直肠镜B.大便潜血C.X线钡灌肠D.直肠肛门指诊E.大便常规正确答案：D8、单选患者，男性，20岁。
突起畏寒、发热，伴头痛、呕吐4天，于4月20日来诊。
查体：T39.5℃，全身皮肤黏膜散在出血点，脑膜刺激征阳性。
脑脊液检查呈化脓性改变。
临床诊断为流脑普通型。
下列哪项治疗措施不正确（）A.用物理降温或药物退热B.大剂量青霉素注射C.快速静脉滴注20%甘露醇脱水D.应用低分子右旋糖酐预防休克E.注意补充水及电解质正确答案：D9、单选伤寒杆菌所属的菌属是（）。
细菌感染的实验室诊断（一）
细菌感染的实验室诊断（一）实验室诊断主要包括以检测致病菌及其抗原、产物或核酸为目的的细菌学诊断，以及检测患者血清中特异性抗体为目的的血清学诊断。
一、细菌学诊断（一）标本采集细菌感染性疾病的实验室检查结果主要取决于临床标本的质量、采集时间及方法、实验人员的技术熟练程度及经验。
临床医生应该知道何时和怎样采取标本，需作哪些实验室检查，以及如何解释结果。
为提高致病菌检出率，避免诊断错误或漏检，标本采集与送检过程应遵循下列原则：1．严格执行无菌操作，尽量避免患者正常菌群或外界环境中杂菌污染标本。
采取局部病变标本处，不可用消毒剂，必要时宜以无菌生理盐水冲洗，拭干后再取材。
从呼吸道、消化道、泌尿生殖道、伤口或体表分离可疑致病菌时，应与其特定部位的正常菌群及临床表现一并加以考虑，因为目前内源性感染呈不断上升趋势。
2．根据致病菌在患者不同病期的体内分布和排出部位，采集不同的标本（表7-1）。
例如流行性脑膜炎患者取脑脊液、血液或出血瘀斑；伤寒患者在病程第1～2周内取血液，第2～3周时可取粪便。
尽可能采集病变明显部位的材料。
3．应在疾病早期和使用抗菌药物之前采集标本，否则可能需停药数天后采集，或者在分离培养时加入药物拮抗剂。
4．标本必须新鲜，采集后尽快送检，尤其是检测抵抗力弱的细菌。
若不能立即送检，应将标本置于特殊的转运培养基中，低温保存，以减缓致病菌的死亡，阻止杂菌的过度生长。
送检过程中，除不耐寒冷的脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等要保温外，多数菌可冷藏送运。
（二）致病菌的检验程序主要有直接涂片染色镜检、分离培养、生化试验、血清学试验等，有的尚需作动物试验等。
细菌学快速诊断新技术主要有核酸杂交（nucleic acid hybridization）和聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）等。
敏感性、特异性和检测效率是影响临床诊断程序选择的重要因素。
1．直接涂片染色镜检直接涂片染色镜检法可在显微镜下直接观察致病菌的形态、大小、排列方式和染色特点。
细菌感染的病理学特征与诊断
细菌感染的病理学特征与诊断细菌感染是指人或动物体内寄生有病原微生物，并且这些微生物对其宿主产生了潜在的危害。
本文将详细介绍细菌感染的病理学特征与诊断方法。
一、病理学特征1. 细菌的寄生位置细菌感染可以出现在人体的各个部位，如皮肤、呼吸道、泌尿系统、消化道等。
不同的寄生位置会导致不同的症状和临床表现。
例如，呼吸道感染常见的症状是咳嗽、喉咙痛、发热等，而泌尿系统感染则表现为尿频、尿急等症状。
2. 细菌的毒力细菌的毒力是指细菌对其宿主的伤害能力。
不同的细菌毒力不同，导致的病理学特征和临床表现也不同。
例如，极强毒力的金黄色葡萄球菌感染可以导致化脓性感染和败血症，严重时会危及生命。
3. 细菌的致病机制细菌感染的病理学特征与其致病机制密切相关。
不同的细菌采取的致病机制不同，如产生毒素、侵袭性、侵染性等。
例如，产生毒素的白喉杆菌会导致患者咽喉疼痛、咳嗽和循环功能不稳定等症状。
4. 细菌的耐药性细菌具有比较强的适应性，可能对抗某些药物的作用。
如果细菌对抗药物敏感性较差，则可能导致感染难以治疗。
因此，在病原体检测的同时，实验室医师需要测试细菌对不同抗生素的敏感性，以选择正确的抗生素治疗感染。
二、诊断方法1. 临床表现细菌感染的临床表现各不相同，常见表现为局部红肿、发热、全身乏力等。
医生可以通过患者的病史和症状，结合体格检查来辅助诊断。
2. 实验室检测实验室检测是诊断细菌感染的关键。
包括细菌培养、细菌形态学观察、生物化学试验、药敏试验等。
通过这些检测手段，可以确定细菌的种类和数量，并可以测试细菌对不同抗生素的敏感性。
3. 分子诊断技术分子诊断技术可以通过检测微生物的核酸序列（例如细胞壁、细胞膜、核糖体RNA等），来确诊细菌感染。
分子方法与传统方法相比，更加快速和准确。
其中，PCR技术是常用的分子技术之一，它可以扩增特定的微生物DNA片段，从而检测病原体的存在。
综上所述，细菌感染的病理学特征和诊断方法十分复杂，需要医生和实验室医师共同合作来确诊和治疗。
微生物选择题
绪论1.下列属于微生物属于非细胞型微生物者C．病毒2.下列微生物属于真核细胞型微生物的是B．真菌3.下列属于原核细胞型微生物的是D．衣原体第一篇临床细菌学第一章细菌的形态结构与功能1.下列哪种物质是原核细胞型微生物所特有的化学成分? D.肽聚糖2.下列哪种物质是真核细胞型微生物所特有的化学成分? E.几丁质3.细菌含有多种化学成分，最主要的是A.水4.革兰阳性菌的等电点是A.PH2～35.革兰阴性菌的等电点是C.PH4～56.细菌体内含有一定的渗透压，但细菌却不会崩裂，这与细菌的哪种结构有关?B.细胞膜7.在细菌的糖代谢过程中，最重要最广泛的是E.葡萄糖8.细菌合成细胞组分和获得能量的基质主要是D.糖类9.细菌糖代谢中一个关键性的中间代谢物是C.丙酮酸10.热原质的本质是B.脂多糖第二章细菌的生理与遗传变异1.下列物质不是细菌合成代谢产物的一种是D.抗毒素2.大肠菌素是属于E.细菌素3.人工培养病原微生物的最适宜温度是37℃，但应除外C.浅部真菌4.下列细菌中繁殖速度最慢的是D.结核分枝杆菌5.IMViC试验常用于鉴别A.肠道菌6.消毒是指B.杀死物体上所有病原微生物7.属专性需氧菌的是B.结核分枝杆菌8.不属于生化反应的实验是B.外斐实验9.细菌对糖的分解能力不同，主要是B.酶系统不同10.去除热原质的最好的方法是A.蒸馏法11.下列哪一项不是抗生素范畴?D.只对产生菌有近缘关系菌有杀伤作用12.细菌中合成DNA的酶主要是C．DNA聚合酶III13.具有催化功能的RNA是B.核酶14.细菌的遗传物质包括A.核质和质粒15.与细菌致育性有关的因子是B.F因子16.有关质粒的叙述不正确的是B.质粒是细菌必备结构17.转化过程中受体菌摄取供体菌遗传物质的方式是E.直接摄取第三章细菌感染的病原学诊断1.引起菌群失调的原因是A.生态制剂的大量使用2.致病过程中引起两次菌血症的是B.肉毒梭菌3.病原菌在机体血液中大量繁殖产生毒性物质，并随血流到达其他器官，引起多发性脓肿，称为B.pyemia4.下列哪种结构与细菌侵袭力有关? B.荚膜5.脑膜炎奈瑟菌侵入血流，大量繁殖产生内毒素，引起全身中毒症状，称为B.败血症6.能引起内毒素休克的细菌成分是C.LPS7.细菌代谢产物中，与致病性无关的是D.细菌素8.细菌致病力强弱主要取决于C.侵袭力和毒素9.关于外毒素的叙述，下列错误的是C.耐热，使用高压蒸气灭菌法仍不能将其破坏10.属于神经毒素的是B.肉毒毒素11.机体对结核分枝杆菌的免疫主要是A.细胞免疫第四章抗菌药物敏感试验1.下列作用于细胞壁的药物是A.青霉素2.在联合抑菌实验中，如联合用药的效果是协同则FIC指数是D.<0.53.在联合抑菌实验中，如联合用药的效果是累加则FIC指数是C.0.5-14.检测β-内酰胺酶时，如果用碘淀粉测定法，产酶株在10分钟内使碘淀粉复合物变成B.无色第五章细菌的分类与命名1.测定细菌DNA中G+C的含量百分比可作为B.细菌分类的重要依据之一2.划分细菌的血清型的依据是：E.细菌的抗原结构和抗原性3.有关细菌的分类单位，正确的是C.生物学性状基本相同的细菌群体构成一个种，是细菌分类的基本单位第六章革兰阳性球菌1.以下哪项是金黄色葡萄球菌与表皮葡萄球菌所共有的特点? B.产核糖核酸酶2.能与葡萄球菌A蛋白接合的是C.IgG的Fc段3.新生霉素耐药的菌株是 D.腐生葡萄球菌4.能产生自溶酶的细菌为C.肺炎链球菌5.因休克、败症死亡的患者，尸体解剖心血培养发现有革兰阳性矛头状双球菌生长，该菌可能是D.肺炎链球菌6.A群链球菌的初步鉴定试验是 D.杆菌肽敏感试验第七章革兰阴性球菌1.淋病奈瑟菌能发酵B.葡萄糖2.能产生透明质酸酶的细菌是D.化脓性链球菌第八章肠杆菌科1.沙门菌属中Vi抗原属于C.表面抗原2.伤寒病后带菌者的细菌存留部位通常为C.胆囊3.能阻止菌体抗原与相应抗血清发生凝集反应的抗原是C.Vi抗原4.能产生外毒素的志贺菌是A.痢疾志贺菌5.动力为阴性的肠杆菌科细菌是A.痢疾志贺菌6.能产生志贺样毒素的大肠埃希菌是A.EHEC7.肥达反应有诊断价值的抗体效价，通常是B.O凝集价≥1：80， H凝集价≥1：1608.从一患者痰中分离一株菌，血平板上为灰白色、粘液型菌落，用接种环可拉出长丝。
微生物学各章重点
第一篇细菌学第二章1.细菌的生长繁殖条件是什么？2.细菌生长曲线分哪4个阶段？3.细菌根据对氧的需要程度分为哪几种类型？4.细菌合成代谢产物有哪几种？第三章1、常用的消毒剂有哪些种类?2、简述化学消毒剂的杀菌机制。
3、湿热灭菌有哪些方法? 各有何用途?4、筒述紫外线杀菌的作用机制和注意事项。
5、在温度和时间相同的情况下，为什么湿热灭菌法的效果比干热法好?6、当从事病原生物学安全实验室工作时，应考虑哪些与生物安全相关的问题？第四章1.噬菌体的概念及其特征。
2.毒性噬菌体和温和噬菌体、前噬菌体、溶原性细菌、溶原性转换的概念及特征。
3.溶菌性周期与溶原性周期的区别。
第五章1.细菌基因转移和重组的类型及其主要差异？2.何谓BCG、transposon、R质粒、Hfr、lysogenic conversion和Ames试验？3.影印试验验证何种理论？突变型细菌有哪些？第六章1．简述抗菌药物类型2．抗菌药物作用机制又几种？3．简述细菌耐药性产生机制。
4．控制细菌耐药性策略?第七章1.病原菌对宿主的致病性，是由哪些因素决定的？2.试比较内毒素与外毒素的基本生物学特性?3.细菌的侵袭力，由哪些因素组成？4.请陈述机体抗细菌感染的特点？5.当机体感染病原菌后，感染的发展及其结果可能在机体有哪些方面的表现？6.试述医院感染的基本特点？从医学微生物学角度，怎样预防和控制医院感染？第八章1. 试述检测病原菌的基本程序和原则？2. 对已经分离出的细菌菌落，怎样从微生物学角度去进一步鉴定？3. 试述疫苗研制及其发展的主要阶段？第九章1、简述葡萄球菌的分类及意义。
2、简述链球菌的分类依据及意义。
3、金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌引起化脓性炎症的特点有何不同，为什么?4、哪些方法可以检测金黄色葡萄球菌引起的食物中毒?5、对脑膜炎奈氏菌应如何进行分离培养（为何需要床边接种）？快速诊断方法 ?6、简述淋球菌的致病性。
7、根据涂片染色镜检可作出微生物学初步诊断的病原性球菌有哪些?第十章1.简述肠产毒型大肠埃希菌的致病机制.2.大肠埃希菌肠最常见的道外感染有哪些？3.大肠埃希菌与人类的关系如何？4.归纳志贺菌致病的主要特点。
Mic06微生物感染的实验室诊断
详细描述
分子生物学诊断是一种高灵敏度、高特异性的诊断方法，利用分子生物学技术，如PCR、 基因测序等，检测病原体特异性基因片段，进行快速、准确的诊断。该方法可以检测出
极低浓度的病原体，并且可以在早期感染时进行诊断，为临床治疗提供及时的指导。
MIC06微生物需要在特定的培养 基上培养，如需氧或厌氧培养， 并需要适宜的温度和酸碱度。
MIC06微生物具有特定的抗原结 构，可以用于血清学诊断和分型。
流行病学特性
传播方式
MIC06微生物主要通过直接接触 传播，如接触患者或污染物，也 可通过空气飞沫、水或食物传播。
流行地区与季节
MIC06微生物感染的流行地区和 季节分布与特定微生物的特性有 关，可能存在地区性和季节性差 异。
MIC06微生物感染的重要性
MIC06微生物感染可导致严重的临床 后果，包括死亡和长期并发症。
早期诊断和治疗有助于减少传播、减 轻疾病负担并提高治愈率。
02 MIC06微生物的基本特性
生物学特性
01
形态与染色
培养特性
02
03
抗原结构
MIC06微生物通常呈球形或杆状， 具有特定的染色特性，如革兰氏 染色阳性或阴性。
环境卫生
加强环境卫生管理，保持室内 通风、清洁，定期消毒公共场 所和物品。
食品卫生
严格执行食品安全标准，确保 食品的卫生和质量。
控制策略
监测与预警
建立传染病监测系统，及时发现和报告病例， 采取有效措施控制疫情。
公共卫生干预
采取必要的公共卫生干预措施，如限制人群 聚集、关闭公共场所等。
隔离与治疗
鼠疫传染病知识
鼠疫传染病知识篇一：鼠疫第三章细菌感染第一节鼠疫学习要求：掌握鼠疫的临床表现，诊断及治疗方法，熟悉本病的流行病学、发病机制和预防，了解本病的病原学。
鼠疫（plague）是鼠疫杆菌通过鼠蚤传给人和动物的一种自然疫源性疾病。
临床上以发热、严重毒血症症状、淋巴结肿大、肺炎和出血倾向为主要表现。
该病传染性强、病死率高，是一种危害最为严重的烈性传染病之一，属国际检疫传染病，在我国规定为甲类传染病。
链接鼠疫疫源地分布世界各地。
人间鼠疫至少已有1500年的历史，历史上鼠疫有过三次大流行，死亡数以千万，直到20世纪60年代方才止息。
20世纪80年代中期以来，亚洲及非洲的一些国家，鼠疫又开始活跃，至90年达到高峰。
如停息了26年之久的印度，1994年又重新爆发人间肺鼠疫。
新中国成立后，我国基本控制了人间鼠疫的发生和流行，没有发生大的流行，只有少数散发病例发生。
上世纪90年代以来，与世界其它地区一样，中国的鼠疫自然疫源地再次进入活跃期，一些静息了多年的疫源地重新暴发流行，并向周围蔓延，同时，新疫源不断出现，人间鼠疫流行时有发生。
疫情分布于全国17个省区，主要流行于云南省的南部地区、青海省和内蒙古自治区的某些牧区。
病原学鼠疫杆菌属肠杆菌科耶尔森菌属，又称鼠疫耶尔森菌，为革兰染色阴性兼性需氧短小杆菌，两端染色较深，长约1～μm，宽约～μm。
无鞭毛，不活动，不形成芽孢，在动物体内和早期培养中有荚膜。
最适培养温度为28℃-30℃，在普通培养基生长缓慢，需培养72小时以上。
在陈旧培养基及化脓病灶中呈多形性。
已证实鼠疫杆菌至少有19种抗原，即 A-K、 N、 O 、Q 、R 、S 、T 、V、W，其中FI（Fraction I）、T、V、W为主要抗原。
FI为荚膜抗原，属糖蛋白，有高度免疫原性及特异性，相应抗体有保护作用。
V和W抗原为菌体表面抗原，两者常同时存在，为本菌的毒力因子，与细菌的侵袭力有关，具有强力的抗吞噬细胞吞噬作用。
《医学微生物学》第8章细菌感染的检查方法与防治原则练习题及答案
《医学微生物学》第8章细菌感染的检查方法与防治原则练习题及答案【知识要点】1.掌握：（1）病原菌的常规分离与鉴定方法原则和常用的检测细菌抗原的方法。
（2）人工自动免疫和人工被动免疫的概念。
（3）常用生物制品的概念和特点。
（4）细菌标本的采集与送检的主要原则。
2.熟悉：抗菌药物的主要作用机制。
3.了解：临床感染性疾病用药的基本原则及检测细菌对药物敏感性的常用方法。
【课程内容】第一节细菌感染的诊断一、病原菌检测（一）标本的采集与送检（二）细菌的分离培养与鉴定（三）病原菌抗原的检测（四）病原菌核酸的检测二、血清学诊断第二节细菌感染的特异性预防一、人工主动免疫（一）疫苗（二）类毒素二、人工被动免疫（一）抗毒素（二）抗菌血清（三）胎盘丙种球蛋白（四）其他免疫制剂第三节细菌感染的治疗【应试习题】一、名词解释1．活菌（疫）苗2．死菌（疫）苗3．类毒素4．抗毒素5．人工被动免疫6．人工主动免疫二、填空题1．细菌感染的实验室检测内容，主要包括_______和_______。
2．人工免疫包括_______和_______两种方式。
3．人工自动免疫是给机体注射_______物质，人工被动免疫是给机体注射_______或_______。
4．类毒素是由细菌_______经_______处理后制成。
5．类毒素失去了外毒素的_______，保留了外毒素的_______，刺激机体可产生_______。
6．抗毒素一般是用_______多次免疫马后，从其_______中提取免疫球蛋白精制而成。
7．抗毒素可用于_______和_______由细菌外毒素所致的疾病。
8．白百破三联疫苗由_______________与________________。
_________________混合制成，其英文缩写为______________。
9．_______和_______不能使用减毒活疫苗。
10．减毒活疫苗_______保存，灭活疫苗_______保存。
第三章细菌感染及预防原则
侵袭力
菌毛
荚膜和微荚膜 G-
粘附素 菌毛
粘附于组织细胞 有组织特异性
非菌毛黏附素
膜磷 壁酸
G+
脂磷壁酸（LTA）
侵袭性物质
细菌生物被膜
透明质酸酶 凝固酶 胶原酶 链激酶
SIgA酶
受体 （糖类）
急性感染 慢性感染
局部感染 全身感染
Department of Microbiology, Harbin Medical University
毒血症（toxemia）
细菌在局部繁殖，不入血，仅外毒素入血引起 全身中毒症状
菌血症（bacteremia）
全
病原菌由原发部位侵入血流，但未在血中大量
身
较弱，引起发热、白细胞增多、 微循环障碍、休克、DIC等
强，刺激机体产生抗毒素；脱 弱，抗体作用弱
毒形成类毒素
Department of Microbiology, Harbin Medical University
第三节 感染的发生与发展
Department of Microbiology, Harbin Medical University
经消化、呼吸、创伤等
结核及炭疸杆菌感染
Department of Microbiology, Harbin Medical University
Department of Microbiology, Harbin Medical University
细菌的感染类型
隐性感染 显性感染 带菌状态
外毒素
exotoxin
多数革兰阳性菌和少数革兰阴 性菌在生长繁殖过程中释放到菌
细菌感染的检查方法与防治原则
• 严格掌握抗菌药物应用的适应证 • 正确选择抗菌药物和配伍 • 正确掌握剂量、疗程和给药方法
– 严格执行消毒隔离制度，防止耐药菌的交叉感染 – 寻找新型抗菌药物和新的抗感染方法
44
大家好
1
第6章 细菌感染的实验室检查与 防治原则
Laboratory Diagnosis and Prophylaxis of Bacterial Infection
2
第一节 细菌感染的实验室诊断
3
抗生素 治疗前
样品新鲜 尽快送检
细菌学诊断
标本采集与 送检原则
采集部位
无菌操作
4
基因诊断技术
直接涂片染色镜检
40
EBSL – extended-spectrum β-lactamase
能灭活青霉素类、第一代至第三代头孢菌素和 单环β内酰胺酶类，仅对头霉素和碳青霉烯类抗 生素敏感
41
• 耐药的生化机制
– 灭活作用 – 靶位改变 – 减少药物吸收 – 增加药物排出
42
抗菌药物应用与耐药性策略
• 金黄色葡萄球菌 • 革兰阴性杆菌 • 肠球菌 • 结核分枝杆菌 • 肺炎链球菌 • 流感嗜血杆菌 • 淋病奈瑟菌 • 志贺菌属
39
MRSA - Methicillin resistant Staphylococcus aureus
VRSA - vancomycin resistant Staphylococcus aureus
分离培养： • 优点：阳性率较直接镜检高 • 缺点：需时较久
确诊细菌感染性疾病最可靠的方法 ——金标准
14
生化试验 Biochemical identification
(医学微生物学)8微生物感染的实验室诊断
寄生虫感染
如疟疾、弓形虫感染等。理解寄生虫感染的诊 断和治疗方法。
实验室诊断方法
1
分子生物学方法
通过PCR、DNA测序等。这种方法具有高度的灵敏度和特 异性。
通过培养和观察微生物生长特征，来鉴定
感染的物种。
3
免疫学方法
测量患者体液中的抗体水平以确定感染的 类型和严重程度。
分子生物学方法在实验室诊断中的应用
1 快速检测
PCR技术可以在短时间内检测出微生物感染，缩短了诊断的时间。
2 高度准确
分子生物学方法具有高度的灵敏度和特异性，可以准确地识别微生物的存在。
3 多样性检测
这种方法可以同时检测多个微生物物种，提供更全面和全面的诊断信息。
医学微生物学: 8微生物感 染的实验室诊断
在本课程中，我们将探讨常见微生物感染以及使用实验室诊断方法来准确识 别和处理这些感染。
常见微生物感染
细菌感染
如肺炎、尿路感染等。了解不同类型的细菌感 染可以为诊断提供关键线索。
病毒感染
如流感、流行性感冒等。学习如何快速检测病 毒感染并采取适当的措施。
真菌感染
生化和免疫学方法在实验室诊断中的应用
生化方法
通过观察微生物在特定培养基上的生长特征，可以 精确鉴定感染的微生物物种。
免疫学方法
测量抗体水平以确定感染的类型和严重程度。
诊断结果解读和报告
了解如何正确解读和诊断实验室结果，并生成准确和简明的报告是实验室诊 断中的关键步骤。
细菌感染的病原学诊断
2. 反相间接凝集试验
原理
已知Ab－颗粒性载体 ＋ Ag （致敏颗粒） （未知）
颗粒凝集
方法
常用方法有反相间接红细胞凝集试验和胶乳凝集试 验。
评价
敏感性高且易于观察结果，是一种敏感快速的方法。 可用于检测微量抗原。
（二）荚膜肿胀试验
原理 当特异性抗血清与相应细菌的荚膜抗原 特异性结合，形成复合物时，可使细菌荚膜显 著增大，呈肿胀现象。
用途
用于葡萄球菌的鉴定，常作为鉴定葡萄球菌致病性的 重要指标。
2.胆汁溶菌试验
原理 胆盐或胆汁能溶解肺炎链球菌。
用途
主要用于肺炎链球菌与草绿色链球菌的鉴别。肺 炎链球菌阳性，草绿色链球菌阴性。
血清学试验
血清学检测的原理：
Ag ＋ Ab
Ag-Ab
未知 已知 已知 未知
血清学鉴定（确诊，细菌定种、定型） 血清学诊断（协助诊断）
血平板 鉴别培养基(differential medium) 糖发酵管、KIA、
MIU 选择培养基（selective medium） SS琼脂、麦康凯琼脂 特殊培养基（special medium）厌氧菌培养基、细菌L
型培养基
按物理性状分类
固体（平板、斜面、高层） 半固体 液体
4.甲基红（MR）试验
原理
细菌
葡萄糖
丙酮酸
醇、酮、醛等
培养基 pH＞5.4
甲酸、乙酸、乳酸等 培养基 pH＜4.4
甲基红指示剂 pH＜4.5 变为红色 pH＞5.4 变为黄色
• 用途
主要用于大肠埃希菌和产气肠杆 菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。
5.VP试验
葡萄糖
细菌
丙酮酸
《临床检验病原生物学》试题汇编
《临床检验病原生物学》试题汇编绪论一、名词解释1.微生物【答案】微生物是一群肉眼不能直接看到，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大才能看到的微小生物。
微生物包括细菌、螺旋体、支原体、衣原体、立克次体、放线菌、真菌和病毒等。
二、填空题1.原核细胞型微生物只有原始的核物质（DNA），无、等核结构，具有两类核酸，缺乏细胞器（除外无其他细胞器），以非有丝分裂的方式行繁殖。
2.真核细胞型微生物具有高度分化的核，有、和，具有细胞器，行有丝分裂的低等生物。
包括、藻类和。
【答案】1.核仁，核膜，核糖体，二分裂。
2.核膜，核仁，染色体，真菌，原虫。
三、单选题1.没有细胞壁的原核细胞型微生物是A.细菌 B支原体 C立克次体 D衣原体 E真菌【答案】 B四、问答题1.试述微生物按其结构和组成的分类【答案】（1）原核细胞型微生物只（2）真核细胞型微生物；（3）非细胞型微生物第一章细菌系统分类学概述二、填空题1.系统学就是给活的生物进行分类的科学，故而又称作系统分类学，它包括三个方面：、和。
2.细菌命名法规分为、、和【答案】1.分类，命名，鉴定。
2.总则，原则，规则，辅则。
第二章人体常住微生物及致病微生物一、名词解释1.隐性感染【答案]】当宿主的抗感染的免疫力较强，或侵入的病原菌数量不多、毒力较弱，感染后对机体损害较轻，不出现或出现不明显的临床症状，为隐性感染，或称亚临床感染。
2.潜伏感染【答案]】当宿主与病原菌在相互作用过程中暂时处于平衡状态时，病原菌潜伏在病灶内或某特殊组织中，一般不出现在血液、分泌物或排泄物中，一旦机体免疫力下降，潜伏之病原菌大量繁殖而发病，如结核分枝杆菌有潜伏感染。
侵袭力【答案]】是指细菌突破机体防御功能，在体内定居、繁殖和扩散的能力。
细菌侵袭力与其表面结构和产生的胞外酶有关。
3.毒血症【答案]】是指病原菌在机体局部生长繁殖 , 不侵入血流 , 只是其毒素入血 , 引起特殊的中毒症状。
【答案]】是指病原菌侵入血流，并在其中大量生长繁殖，产生毒性代谢产物，引起严重的全身性中毒症状。
细菌感染的实验室诊断
（二）培养基的种类
1.按培养基的物理性状 （1）液体培养基：增菌 （2）固体培养基：纯化，增菌 （3） 半固体培养基：动力检测，保种
液体培养基
固体斜面培养基
半固体培养基
2. 按营养成分和用途分类
（1）基础培养基：只有基本营养成分
（2）营养培养基：加有血液 、血清等
（3）鉴别培养基：含有特定底物和指示剂
5.负染法 背景着色
肺炎链球菌荚膜染色
墨汁负染法
芽胞染色
第三节 细菌分离培养和鉴定
一、培养基的种类和选择 培养基（culture medium） 由人工方法配制而成的，专供微生物 生长繁殖使用的混合营养物制品。
（一）培养基的组成成分
1. 营养物质 碳源、氮源、无机盐、水、生长因子 （1）蛋白胨 提供氮源
2. 吲哚（indol）试验 原理 色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚 ↑ 吲哚试剂（对二甲基氨基苯甲醛） 培养基 蛋白胨水培养基 结果 阳性：红色
3. 硫化氢试验
原理 含硫氨基酸→ H2S+硫酸亚铁→FeS黑色 醋酸铅→ PbS黑色 培养基 醋酸铅培养基 结果 阳性：黑色沉淀 用途 肠杆菌科菌属间的鉴定
植物胨: 大豆 动物胨：牛肉、动物组织等
（2）肉浸液 碳源、氮源 （3）牛肉膏 氮源 （4）糖（醇）类 碳源和能源
（5）血液 提供特殊生长因子、观察溶血 （6）无机盐类
常用元素：P、S、K、Na、Mg、Ca、Fe等 微量元素：Co、Zn、Mn、Cu、Mu等
（7）鸡蛋与动物血清
用于某些特殊培养基
（8）生长因子
3. 复合染料（中性染料）
碱性染料与酸性染料的复合物，如瑞氏染料、 姬姆萨染料等
4. 单纯染料
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（四）培养基的制备
1. 常用各种器具灭菌前的准备 （1）培养皿：用纸包裹 （2）试管：加塞后用纸包好 （3）吸管和毛细管 （4）三角烧瓶
2. 培养基制备的一般程序
（1）调配
根据培养基组成，准确称取各组分，先加需要蒸 馏水的一部分，再加培养基干粉，最后补足水量。
（2）溶化 液体培养基不需加热 （3）调整pH值 一般7.4~7.6 （4）过滤澄清
液体培养基： 滤纸 固体培养基： 纱布
（5）分装 分装量不超过容器的2/3
平板：灭菌后冷却至50 ℃~ 60℃时倾倒 90mm 25~30ml（4mm）：药敏用 90mm 13~15ml(3mm)：培养用 琼脂斜面：分装量为试管的1/5，灭菌后趁热制 成斜面， 斜面长度2/3 高层、半固体、液体：分装量为试管长度 1/4~2/3
压滴法 悬滴法 毛吸管法 用于检查厌氧菌动力
用途 动力试验——检查细菌有无动力 制动试验——初步鉴定细菌
三、 染色标本的检查
（一）常用染料
色基：决定染料的颜色 助色基：决定染料的酸碱性
1. 碱性染料
电离后色基带正电荷 细菌染色常用，如美蓝、结晶紫、碱性复红等
2. 酸性染料
用于细胞浆染色，如伊红、酸性复红、刚果红
1. 营养物质 碳源、氮源、无机盐、水、生长因子 （1）蛋白胨 提供氮源
植物胨: 大豆 动物胨：牛肉、动物组织等
（2）肉浸液 碳源、氮源 （3）牛肉膏 氮源 （4）糖（醇）类 碳源和能源
（5）血液 提供特殊生长因子、观察溶血 （6）无机盐类
常用元素：P、S、K、Na、Mg、Ca、Fe等 微量元素：Co、Zn、Mn、Cu、Mu等
第三章 细菌感染的病原学诊断
第一节 标本的采集和处理原则
一、标本采集的一般原则
1.早期采集
2.无菌采集
无菌部位:严格无菌操作
有正常菌群部位：明确目的菌；选择合适的 选择培养基
3.采用不同方法采集
需氧菌或兼性厌氧菌 厌氧菌：穿刺法采集 采集有明显病变的标本 根据病程采集不同的临床标本
4.采集适量标本和适当标本
操作技术：涂片和脱色 染色液： 细菌：18~24h培养物为好
（4）意义:
鉴别细菌 选择药物 与致病性有关
2. 抗酸染色法
细菌着色后不被盐酸酒精脱色的染色方法 染料：石炭酸复红、盐酸酒精、美蓝 方法 初染：5%石炭酸复红加热染色5min 脱色：3%盐酸酒精 复染：吕氏美蓝
3.荧光染色 金胺O法 4.特殊染色法
（7）鸡蛋与动物血清
用于某些特殊培养基
（8）生长因子
维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等
2.凝固物质 即赋形剂
（1）琼脂 （2）明胶 动物胶原组织熬制而成
3. 抑制剂和指示剂
（1）抑制剂：胆盐、煌绿、染料、抗生素等 选择培养基：加入一定种类的抑制剂，以抑 制杂菌生长或减少生长，有利于检出菌生长 的培养基。 （2）指示剂： 酚红、中性红、中国蓝等 鉴别培养基：加入特定底物和指示剂
3. 复合染料（中性染料）
碱性染料与酸性染料的复合物，如瑞氏染料、 姬姆萨染料等
4. 单纯染料
如苏丹染料，溶于脂肪溶剂，不溶于水，化 学亲和力低
（二）常用的细菌染色法
单染色法
只用一种染料，如吕氏美蓝
复染色法
用两种或两种以上不同颜色的染料
细菌染色的一般程序
1. 涂片 2. 干燥：自然干燥为好 3. 固定 4. 初染 5. 媒染 媒染剂 6. 脱色 脱色剂 7. 复染
用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运 动观察
3. 相差显微镜
检查不染色活细菌的形态及某~200W的高压汞灯 5. 电子显微镜 光源：电子流
透射电镜：观察细菌内部超微结构 扫描电镜：对细菌表面结构及附件观察
一、 不染色标本的检查
常用方法
5.安全采集
二、标本的处理 1.及时送检 2.运送与保存 1）根据待检菌特点对标本进行冷藏、保 温或保持厌氧状态
脑脊液、血液、厌氧菌保存不能冷藏
2）注意安全防护
第二节 细菌形态学检查
显微镜种类
1.普通光学显微镜（light microscope） 光源：可见光 2. 暗视野显微镜（ darkfield microscope ） 暗背景，菌体发光
临床标本常规选择培养基
1.除粪便标本外常规选择血平板 2.粪便标本选择肠道选择培养基
3.有正常菌群存在的部位除血平板外，另外再选择 1~2种相应的选择培养基
4.骨髓、血液需增菌 5.怀疑奈瑟菌属、嗜血杆菌属感染选择巧克力色血 平板（骨髓、血液、脑脊液）
6.除粪便血液外需涂片提示，特殊培养需临床提示
（二）培养基的种类
1.按培养基的物理性状 （1）液体培养基：增菌
不含琼脂 琼脂：1.5%~2.0%
（2）固体培养基：纯化，增菌
（3） 半固体培养基：动力检测，保种
琼脂：0.3%~0.5%
液体培养基
固体斜面培养基
半固体培养基
2. 按营养成分和用途分类
（1）基础培养基：只有基本营养成分
（2）营养培养基：加有血液 、血清等
（3）鉴别培养基：含有特定底物和指示剂
（4）选择培养基：含有抑制剂
（5）特殊培养基：厌氧、细菌L型
（三）培养基的选择
1.血平板 最常用 2.巧克力血平板 奈瑟菌属、流感嗜血杆菌 3.肠道选择培养基 分离肠道细菌
常用中国蓝、EMB、MAC、SS
4.碱性琼脂或TCBS 分离霍乱弧菌 5.血液增菌培养基 血液、骨髓增菌用 6.营养肉汤 增菌用
1. 革兰染色法（Gram stain） （1）原理
1）细胞壁学说：两种细菌细胞壁通透性不同 2）等电点学说 3）化学学说：两种细菌含有RNA镁盐不同
（2）方法：制片→结晶紫初染→碘液媒染→ 酒精脱色→复红复染→结果
革兰阳性菌﹙G＋﹚：紫色 革兰阴性菌﹙G－﹚：红色
（3）影响染色结果的因素
细胞壁染色、荚膜染色、芽胞染色、 鞭毛染色、 异染颗粒染色
5.负染法 背景着色
肺炎链球菌荚膜染色
墨汁负染法
芽胞染色
第三节 细菌分离培养和鉴定
一、培养基的种类和选择 培养基（culture medium）：由人工方法 配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的 混合营养物制品。
（一）培养基的组成成分