实验九 诱变剂的微核测试

3、污染指标计算： 污染指标计算： 样品实测MCN‰平均值 样品实测MCN‰平均值 MCN‰ 对照组（标准水）MCN‰平均值 对照组（标准水）MCN‰平均值
污染指标（PI） 污染指标（PI）=
可采用如下标准进行分析以确定样品的污染程度： 可采用如下标准进行分析以确定样品的污染程度： MCN‰在10‰以下，表示基本没有污染； MCN‰在10‰以下，表示基本没有污染； 以下 MCN‰在10‰－18‰区间，则表示有轻度污染； MCN‰在10‰－18‰区间，则表示有轻度污染； 区间 MCN‰在18‰－30‰区间 则表示有中度污染； 区间， MCN‰在18‰－30‰区间，则表示有中度污染； MCN‰在30‰以上，则表示有重度污染； MCN‰在30‰以上，则表示有重度污染； 以上
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酸解的作用是去除未固定的蛋白质, 酸解的作用是去除未固定的蛋白质, 同时使胞间层的 的作用是去除未固定的蛋白质 果胶类物质解体，细胞分散而易于观察。 果胶类物质解体，细胞分散而易于观察。
六、实验结果： 实验结果：
1、微核识别： 微核识别： 首先在低倍镜中找到分生组织区细胞分散均匀， 首先在低倍镜中找到分生组织区细胞分散均匀，分裂 相较多的部位，再转高倍镜观察，找到微核。 相较多的部位，再转高倍镜观察，找到微核。 微核识别标准： 微核识别标准： （1）在主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核。 在主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核。 1/3以下 （2）小核着色与主核相当或稍浅。 小核着色与主核相当或稍浅。 （3）小核形态为圆形、椭圆形或不规则形。 小核形态为圆形、椭圆形或不规则形。 2、微核千分率(MCN‰)： 微核千分率(MCN‰)： (MCN‰) 每一处理观察3个根尖，每个根尖计数100个细胞， 每一处理观察3个根尖，每个根尖计数100个细胞， 100个细胞 统计其中含微核的细胞数，计算平均数， 统计其中含微核的细胞数，计算平均数，即为该处理 的MCN‰，即微核千分率。 MCN‰， 微核千分率。
蚕豆根尖微核检测记录表
片 号 第一片
细胞数 微核数
第二片
细胞数 微核数
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第三片
细胞数 微核数
各自观察的细胞 数或微核数 总 计
平均微核千分率
微核
微核
七、思考题： 思考题：
• 1、在植物细胞的微核检测实验中，为什么要 在植物细胞的微核检测实验中， 进行24h的恢复培养？ 24h的恢复培养 进行24h的恢复培养？ • 2、产生微核的根尖细胞在产生前的分裂中期 可能出现什么样的中期分裂图像？ 可能出现什么样的中期分裂图像？
三、实验材料： 实验材料：
大蒜： 大蒜：2n=2x=16 蚕豆： 蚕豆：2n=2x=12
四、实验仪器设备： 实验仪器设备：
显微镜、恒温培养箱、恒温水浴锅、镊子、 显微镜、恒温培养箱、恒温水浴锅、镊子、 载玻片及盖玻片。 载玻片及盖玻片。
五、实验步骤： 实验步骤：
1、幼根的培养： 幼根的培养： 大蒜：提前3 天进行培养， （1）大蒜：提前3～5天进行培养，将大蒜瓣剥去外边膜质枯 下端可见许多微微凸起的根原体， 皮，下端可见许多微微凸起的根原体，将蒜瓣架在烧杯 大小与蒜瓣适宜）口上，杯中盛满清水， （大小与蒜瓣适宜）口上，杯中盛满清水，使蒜瓣的下部 浸入水中，置培养箱中，注意每天换水， 天后， 浸入水中，置培养箱中，注意每天换水，经3～5天后， 即可长出1 2cm嫩根 嫩根。 即可长出1-2cm嫩根。 蚕豆：浸种24h 期间换水2 24h， 25℃催芽 36-48h生根 催芽， （2）蚕豆：浸种24h，期间换水2次，25℃催芽，36-48h生根 2cm。 1-2cm。 2、处理根尖：阳性检测采用0.1g/L硫酸铜（大蒜）、0.5g/L 处理根尖：阳性检测采用0.1g/L硫酸铜（大蒜）、0.5g/L 0.1g/L硫酸铜 ）、 重铬酸钾（蚕豆），对照用自来水处理，处理时间24h ），对照用自来水处理 24h， 重铬酸钾（蚕豆），对照用自来水处理，处理时间24h，处 理液浸没根尖。 理液浸没根尖。 每次2 3min， 3、恢复培养：处理后的根尖用自来水浸洗3次，每次2-3min， 恢复培养：处理后的根尖用自来水浸洗3 24h。 洗净后在水中恢复培养 24h。
4、固定：用甲醇：冰醋酸（3：1）固定液固定24h后弃去 固定：用甲醇：冰醋酸（ 固定液固定24h后弃去 24h 固定液，或换入70 酒精中保存。 70％ 固定液，或换入70％酒精中保存。 5、酸解：弃去固定液，用清水漂洗2-3次，吸净水，加入 酸解：弃去固定液，用清水漂洗2 吸净水， 6M盐酸 于室温解离10min 弃去盐酸，漂洗根尖2 盐酸， 10min， 6M盐酸，于室温解离10min，弃去盐酸，漂洗根尖2-3 彻底洗净盐酸。 次，彻底洗净盐酸。 6、染色：截下1-2mm长的根尖，于载玻片上夹碎捣烂，滴 染色：截下1 2mm长的根尖，于载玻片上夹碎捣烂， 长的根尖 加石炭酸品红染液，染色10min 加盖玻片， 10min， 加石炭酸品红染液，染色10min，加盖玻片，压片观 记录有微核的细胞数目。 察,记录有微核的细胞数目。
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微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正 因此，微核是常用的遗传毒理学指标之一， 相关 ，因此，微核是常用的遗传毒理学指标之一， 指示染色体或纺锤体的损伤。 指示染色体或纺锤体的损伤。微核测试已用于辐射 损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、 损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体 遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。 遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。
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固定是借助于物理方法或化学药剂的作用， 固定是借助于物理方法或化学药剂的作用，迅速透入 是借助于物理方法或化学药剂的作用 组织和细胞将之杀死，并且使其结构和内含物如： 组织和细胞将之杀死，并且使其结构和内含物如： 蛋白质，脂肪，糖类以及核物质与细胞器等， 蛋白质，脂肪，糖类以及核物质与细胞器等，在形 态结构上尽可能保持生活时的完整和真实状态， 态结构上尽可能保持生活时的完整和真实状态，同 时更易于染色， 时更易于染色，可以较清楚的显现细胞在生活时不 易看清的结构。 易看清的结构。
湖州师范学院 生命科学学院生物系
一、实验目的： 实验目的：
• 1、了解细胞微核形成的机理及其形态特点； 了解细胞微核形成的机理及其形态特点； • 2、学习植物根尖细胞的微核检测技术； 学习植物根尖细胞的微核检测技术；
二、实验原理： 实验原理：
微核(micronuclei)简称MCN， 微核(micronuclei)简称MCN，是真核类生物细胞中的一 (micronuclei)简称MCN 种异常结构， 种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产 生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形， 生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核 之外，大小应在主核1/3以下。 1/3以下 之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学 反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。 DNA的能力 反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。 一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断 一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断 产生的，整条染色体或几条染色体也能形成微核。 片产生的，整条染色体或几条染色体也能形成微核。这 些断片或染色体在有丝分裂后期不能向两极移动， 些断片或染色体在有丝分裂后期不能向两极移动，所以 游离于细胞质中，在分裂末期不能进入主核， 游离于细胞质中，在分裂末期不能进入主核，便形成了 主核之外的核块。 主核之外的核块。 细胞进入下一次分裂间期时， 细胞进入下一次分裂间期时，可在主核附近看到一到几 个很小的圆形结构，直径大约是细胞直径的1/20 1/5， 个很小的圆形结构，直径大约是细胞直径的1/20～1/5， 这就是微核。 这就是微核。