氨基酸的反相高效液相色谱分析
高效液相色谱法氨基酸标样的分析实验
一、目的要求1、熟悉高效液相色谱仪的结构、分离原理和操作程序。
2、掌握氨基酸标样的分析方法、原理。
二、实验原理氨基酸与PITC发生反应生成的衍生物，在254nm处有最大吸光值。
氨基酸衍生物进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积可进行定性和定量。
该方法是柱前衍生法中的一种。
PITC方法的反应方程式如下图所示：三、实验仪器和试剂1、仪器：高效液相色谱仪（带紫外检测系统和记录系统）。
2、材料：氨基酸标样3、试剂：衍生液：异硫氰酸苯酯：甲醇：三乙胺：水（V/V）=1：7：1：1正己烷、乙腈、乙酸、乙酸钠以上试剂中乙腈为色谱醇，水为二次蒸馏水，其它为分析醇。
四、实验步骤1、柱前衍生步骤：（1）将100ul衍生液加入100ul氨基酸标样或样品中，震荡使混合均匀，室温放置1小时。
（2）反应液中加入200ul正己烷，充分震荡后放置使分层。
（3）取下层溶液用一次性滤膜过滤器（0.45ul）过滤。
（4）取滤液5ul注入HPLC。
2、分离条件的设定（1）色谱柱：Shim-pack VP-ODS 4.6mm x 15cm保护柱：Shim-pack GVP-ODS4.6 mm x 1cm（2）流动相：A液：0.1M乙酸钠pH6.50（用乙酸调整，500ml乙酸钠中约加2滴乙酸）。
B液：乙腈/水=4/1（3）流量：1ml/min柱温：36℃检测波长：254nm（4）梯度洗脱程序：TIME(min) FUNC VALUE0．01 BCONC 103 BCONC 1021 BCONC 3921.01 BCONC 8025 BCONC 8025.01 BCONC 1035 STOP STOP3、数据采集打开real-time CS analysis软件采集数据并对数据进行分五、实验数据及处理结果六、实验讨论：1、本次实验的注意事项有哪些？结果：①、流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um 或更细的膜过滤)。
氨基酸衍生与高效液相色谱分离
氨基酸衍生与高效液相色谱分离作者姓名（北京科技大学化学与生物工程学院生物科学与技术系，北京，100083）[摘要] 高效液相色谱(HPLC:High Performance Liquid Chromatography)是生物化学、分子生物学学科领域与专业最为重要的分离分析技术，具有分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量精度高，应用范围广等优点。
由于氨基酸对人类生活的重要性，氨基酸分离分析一直是分析领域的重要课题。
运用邻苯二甲醛(OPA)进行氨基酸的衍生化，产物过高效液相色谱，完成氨基酸的分离。
[关键词] 高效液相色谱；氨基酸衍生化；氨基酸分离氨基酸均为伯胺，可以对邻苯二甲醛的醛基进行亲核加成生成醇胺，然后脱水生成席夫碱。
在碱性（PH=9.5）和强还原剂（如硫基乙醇）存在的条件下进一步反应生成氨基酸衍生物，在338nm处可检测出峰。
HPLC系统大致由贮液器，脱气装置，色谱柱及柱温箱，色谱泵，进样器/进样阀及检测器组成。
本实验采用反相色谱，即固定相为非极性，流动相为极性。
HPLC的分离原理是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程。
1 材料和方法1.1 材料缬氨酸、丙氨酸、谷氨酸标准品，邻苯二甲醛(AR)，β-巯基乙醇(AR)，硼酸盐缓冲溶液(0.4mol/L，pH 9.5)。
衍生化试剂：称取邻苯二甲醛0.0500 g，用 1 mL 甲醇溶解, 加入100uL 巯基乙醇，用0.4 mol/ L 硼酸溶液(pH = 9.5，氢氧化钠溶液调制)定容至10 mL，混匀，置于暗处，每隔1 天补加10μL巯基乙醇，每周需重新配制。
氨基酸样品溶液：单标样品为取三种氨基酸样品10 mg分别溶于10 mL超纯水中，4℃保存备用。
混标样品为各取三种氨基酸样品10 mg溶于10 mL超纯水中，4℃保存备用。
岛津SPD-M20A VP 型高效液相色谱仪。
1.2 方法（1）色谱条件：色谱柱：ODS柱(柱径ф250×4.6mm)流动相：醋酸盐缓冲液(0.05mol/L，pH6.4) : 50%乙腈溶液＝65 : 35检测波长：338nm流速：0.8 ml/min进样量：20µL（2）高效液相色谱仪操作步骤：1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
高效液相色谱技术在氨基酸分析中的应用
高效液相色谱技术在氨基酸分析中的应用氨基酸是构成蛋白质的基本组成单元，其在生物体内具有重要的生理功能。
因此，对氨基酸的分析研究十分重要。
高效液相色谱技术（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是一种现代化的色谱分析技术，通过对样品中的化合物进行分离和定量分析，广泛应用于各个领域。
在氨基酸分析中，HPLC技术的应用发挥了重要作用。
首先，HPLC技术在氨基酸分析中具有较高的灵敏度和分辨率。
通过选用合适的色谱柱和优化分析条件，HPLC可以对样品中的氨基酸进行有效的分离和检测。
同时，HPLC技术还具有较高的灵敏度，能够实现对微量氨基酸的定量分析。
这使得HPLC技术能够满足对氨基酸分析中高精度和高灵敏度的要求。
其次，HPLC技术在氨基酸分析中具有较强的选择性。
通过选择不同的色谱柱、流动相和检测方法等，可以实现对不同氨基酸的选择性分离。
这使得HPLC技术能够同时对多个氨基酸进行分析，为氨基酸组分的定量和鉴定提供了可靠的手段。
此外，HPLC技术还可以与其他检测方法（如质谱联用）相结合，进一步提高分析的选择性和准确性。
第三，HPLC技术在氨基酸分析中具有较高的分析效率和快速性。
相比于传统的氨基酸分析方法，HPLC技术具有分析速度快、样品处理简单等优点。
它可以通过自动进样系统实现对多个样品的同时分析，大大提高了分析效率。
同时，HPLC技术还可以借助软件进行数据处理和分析，进一步加快氨基酸的分析速度和结果解释。
最后，HPLC技术在氨基酸分析中还具有较强的应用前景和广泛的应用领域。
随着生物学、医学、化学等领域的发展，对氨基酸的研究需求越来越大。
HPLC技术作为一种灵活、高效的分析方法，与其他分析技术相结合，有望在氨基酸分析中发挥更大的作用。
例如，在食品行业中，HPLC技术可用于分析和监测食品中的氨基酸含量，保证食品的质量和安全。
在医学领域，HPLC技术可用于检测人体内的氨基酸水平，对疾病的诊断和治疗提供重要依据。
氨基酸 hplc
氨基酸 hplc
氨基酸HPLC分析是指使用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）对氨基酸进行分析的方法。
HPLC是一种分离和检测复杂混合物中特定成分的高效技术，广泛应用于生物、制药、食品和化工等领域。
氨基酸HPLC分析的原理是利用不同氨基酸在固定相和流动相之间的吸附、分配和疏水性等相互作用的不同，实现氨基酸的分离。
通过与标准品进行比较，可以确定不同氨基酸的种类和浓度。
在进行氨基酸HPLC分析时，通常需要将样品进行前处理，以去除杂质和提高分离效果。
常用的前处理方法包括柱前衍生化、溶剂萃取、固相萃取等。
其中，柱前衍生化是将氨基酸转化为可被HPLC检测到的衍生物，以提高检测灵敏度。
氨基酸HPLC分析具有高分离效能、高灵敏度和高分辨率等特点，可以同时分离多种氨基酸，并对其进行定性和定量分析。
此外，HPLC还可以与其他检测器联用，如紫外检测器、荧光检测器和电化学检测器等，以提高检测灵敏度和选择性。
在实际应用中，氨基酸HPLC分析主要用于食品、生物制品、药品等领域的氨基酸分析。
例如，在食品工业中，可以用于检测食品中的氨基酸成分，以评估其营养价值和品质。
在生物制药领域，可以用于药物中氨基酸的含量测定和质量控制。
总之，氨基酸HPLC分析是一种高效、灵敏和准确的氨基酸分析方法，具有广泛的应用前景。
随着技术的不断发展和完善，氨基酸HPLC分析将在更多领域发挥重要作用。
氨基酸分析的检测方法评述
文章编号:1004-7964(2004)03-0039-05收稿日期:2003-11-05基金项目:国家高技术研究发展计划(863计划)经费资助,课题编号:2001AA647020四川大学青年基金,课题编号:H2002[9-057]第一作者简介:戴红,女,1966年出生,副教授。
主要研究方向:分析检验。
氨基酸分析的检测方法评述戴红,张宗才,张新申(皮革化学与工程教育部重点实验室(四川大学),四川成都610065)摘 要:对氨基酸分析常用的化学方法、电化学方法、分光光度法(包括可见光分光光度法,紫外光分光光度法和荧光分光光度法)等检测方法进行综述,以期为提高氨基酸分析的灵敏度、准确性,为快速、高效的氨基酸分析方法的建立提供参考。
关键词:氨基酸;检测;分析中图分类号:Q517;Q503 文献标识码:ADetermination M ethods of Amino A cids A nalysisDA I Hong ,ZHA N G Zong 2cai ,ZHA N G Xi n 2shen (Key L aboratory of L eather Chemist ry and Engi neeri ng(S ichuan U niversity ),M i nist ry of Education ,Chengdu 610065,Chi na )Abstract :Determination methods for amino acids ,including chemistry determination ,elec 2tric 2chemistry determination ,spectrophotometer determination and conductivity detection method were reviewed for the sake of improving the analysis sensitivity and accuracy.The paper aimed at providing useful reference to building a fast and effective amino acids aualytic methods.K ey w ords :amino acid ;analysis ;determination 氨基酸是蛋白质的基本结构单位和生物代谢过程中的重要物质,氨基酸分析技术对蛋白质化学、生物化学和整个生命科学研究以及产品开发、质量控制和生产管理等具有重要意义,广泛地应用于化工、轻工、食品加工、医药卫生行业的医药、食品、保健品等的分析,并且用于皮革化学鞣革机理的研究中[1,2,3]。
邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法检测珍珠粉中的氨基酸含量
邻苯二甲醛柱前衍生反相高效液相色谱法检测珍珠粉中的氨基酸含量【摘要】目的测定珍珠粉中的氨基酸含量。
方法邻苯二甲醛（OPA）柱前衍生反相高效液相色谱法，采用荧光检测，梯度洗脱。
结果该法在28 min之内分离出15种氨基酸。
结论该法样品用量少、灵敏度高、线性范围宽、重现性好，适于分离大量样品。
【关键词】高效液相色谱；柱前衍生法；氨基酸；珍珠粉Determination of the Contents of Amino Acids in Pearl Powder by RP-HPLC after Pre��column Derivation with O��Phthaldialdehyde (OPA)Abstract：ObjectiveIn this paper， we determined amino acids in pearl powder. Methods A manual pre-column derivation procedure has been developed by reversed-phase HPLC with O-phthalaldehyde and fluorescence detector. Results More than 15 amino acids were separated within 28 min. Conclusion The method is sensitive， precise and shows good repeatability.Key words：High��performance liquid chromatography；Pre��column derivation； Amino acids； Pearl powder随着生命科学和生物工程的发展，氨基酸作为组成生物大分子的基本单元，其分析方法受到重视。
20世纪70年代以后，反相高效液相色谱技术在氨基酸分析中得到广泛应用，使分离时间缩短。
高效液相色谱法测定氨基酸
脑蛋白水解物溶液氨基酸含量分析方法研究方案1、仪器与试药1.1 仪器1525型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Waters1525型泵，Waters2487型检测器，Waters5CH 型柱温箱，WatersBREEZE数据处理软件，水浴恒温器（精度±0.1℃），旋涡器，微量移液器，衍生专用管；CP225D型分析天平（德国）；4umNora-Pak TM C18（3.9mm×150mm，5μm）色谱柱（美国）1.2 药品与试剂16种氨基酸（门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸）由中国药品生物制品检定所提供。
脑蛋白水解物注射液，云南盟生药业有限公司生产，规格10ml/支。
批号：2013、2013、2013.乙腈（HPLC级）；EDTA（分析纯）；磷酸（分析纯）；二乙胺（分析纯）；三水合乙酸钠（分析纯）。
2、方法与结果2.1色谱条件流动相A为AccQTag醋酸—磷酸盐缓冲液；由AccQTagEluent A浓缩制备AccQTag洗脱液,用前稀释10倍（或按以下方法配制：称19.04g三水合乙酸钠，加1000ml纯化水，搅拌，溶解，用50%H3PO4将pH调至5.2，加入1ml 1mg/ml的EDTA溶液，加入2.37ml二乙胺，用50%H3PO4滴定至pH4.95，用水溶性过滤器过滤，超声，脱气，备用。
）；流动相B为60% HPLC级乙腈，按梯度表梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长为254nm；进样量5μl；柱温38℃。
2.2对照品溶液、供试品溶液的制备分别精密称取16种氨基酸标准品，用纯化水配制成浓度如下表所示的混合溶液。
取上述溶液0.1ml，加纯化水0.9ml，旋涡器混匀，作为对照品溶液；取脑蛋白水解物注射液，加水稀释成含总氮为1mg/ml的溶液，取0.1ml，加纯化水0.9ml,旋涡器混匀，作为供试品溶液。
高效液相色谱化学发光检测法测定氨基酸
高效液相色谱化学发光检测法测定氨基酸1氨基酸氨基酸是类似于蛋白质的有机化合物，也是人体代谢过程中不可或缺的物质，具有重要的生理功能，人们发现它对人体健康有重要作用。
氨基酸分为线粒体氨基酸和细胞质氨基酸，它们可以通过液相色谱（HPLC）和其他技术进行测定。
2高效液相色谱化学发光检测法高效液相色谱化学发光检测法(HPLC-FLD)是一种非常常用的检测方法，是在液相色谱的基础上添加了化学发光探测器。
它具有高灵敏度、高分离度和快速分析等优势，得到了广泛应用。
在研究氨基酸中，HPLC-FLD可以较为准确地检测和分离氨基酸，从而实现对氨基酸浓度的准确测定及调整。
3工作原理HPLC-FLD工作过程是：在分析柱内，将水，乙腈，乙醇等溶剂混合，氨基酸将在柱中混有不同的动力学行为。
当氨基酸离开柱时，经测量氨基酸在化学发光探测器上发出的发光信号，可以计算出它们的相对浓度，从而判断氨基酸含量。
4检测步骤（1）样品准备：样品中含有氨基酸的各种溶液，需经过提取，稀释或洗脱处理等，以便于之后的检测。
（2）色谱层析：把样品按照一定的色谱层析方式，分离不同的成分，从而使不同的成分分离出来。
（3）发光测定：在这一步，人们可以利用HPLC-FLD测定氨基酸。
首先，样品将通过有机溶剂组合作用，激活发光反应，然后将样品通过化学发光探头的发光状态记录下来，并计算概率密度，最终得出样品中氨基酸的含量和比例。
5优势HPLC-FLD在检测氨基酸中有很多优势：（1）可以快速准确地检测氨基酸；（2）可实现高灵敏度和高分离度；（3）化学发光探头具有长寿命、可靠以及易于操作等优势；（4）可克服外界因素对分析结果的影响；（5）可以长时间连续检测，勤奋节约成本。
6结论HPLC-FLD是一种高效的技术，在检测氨基酸方面具有较高的准确性和效率，它不但能够用于氨基酸的检测，还可用于其他有机物分离和测定，在生物和药物领域都有广泛应用。
测AA方法
反相高效液相色谱法测定烟叶中的游离氨基酸氨基酸是烟草中的一类重要化学物质，在烟草调制、醇化或发酵、加工直至燃烧过程中，游离氨基酸与还原糖之间可发生酶催化及非酶催化的棕色化反应，生成多种具有蒸煮、烤香、爆米花香味特征的吡喃、吡嗪、吡咯、吡啶类等杂环化合物，某些氨基酸如苯丙氨酸还可自身分解成香味化合物，如苯甲醇、苯乙醇等。
氨基酸含量与烟草制品的吃味有着密切的关系，氨基酸在燃烧裂解过程中一般形成具有刺激性的含氮化合物，对烟气香吃味产生不良影响，个别氨基酸还产生HCN等危害健康的烟气成分。
一般说来，氨基酸含量太高，烟气辛辣、味苦、刺激性强烈；含量太低时烟气则平淡无味缺少丰满度。
因此对氨基酸的分析是一项很有意义的工作，二十世纪60年代以来，国内外在这方面做了大量的工作[1-5]。
植物游离氨基酸样品的制备，国内外采用的提取剂和纯化方法各不相同。
据文献报道[6-7]，盐酸、不同浓度的乙醇溶液均可以用来提取植物组织中的游离氨基酸；提取液纯化则有用阳离子交换树脂、5%磺基水杨酸、活性炭或乙醚等方法。
本实验对不同的提取方式和不同的纯化方法进行了对比研究，确定提取烟叶中游离氨基酸的较佳提取剂和纯化方法。
提取、纯化后的样品，采用OPA、FMOC联合柱前衍生反相高效液相色谱法对烟叶中的游离氨基酸进行了测定。
该方法使带氨基和亚氨基基团的氨基酸能够被同时测定，且得到较好的定性定量结果。
1 实验1.1 仪器Agilent公司HP1100型高效液相色谱仪(带可变波长紫外检测器和自动进样器)，PE公司Lambda Bio40 紫外-可见分光光度计。
1.2 试剂正缬氨酸（Norvaline，内标），OPA，FMOC，均为色谱纯，Agilent公司提供；硼酸缓冲溶液，Agilent公司提供；醋酸钠(NaAc)，分析纯，中国医药（集团）上海化学试剂公司；三乙胺（TEA），四氢呋喃（THF），乙腈（CH3CN），甲醇(MeOH)，均为色谱纯，Fisher公司试剂；氨基酸标样包括：天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、天冬酰胺（Asn）、谷氨酰胺（Gln）、丝氨酸（Ser）、组氨酸（His）、甘氨酸（Gly）、苏氨酸（Thr）、丙氨酸（Ala）、精氨酸（Arg）、酪氨酸（Tyr）、胱氨酸（Cys）、缬氨酸（V al）、蛋氨酸（Met）、苯丙氨酸（Phe）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、脯氨酸（Pro），均为生化试剂，中国医药（集团）上海化学试剂公司；苯乙烯阳离子交换树脂（732型），天津树脂厂。
高效液相色谱的使用及氨基酸标样的分析
高效液相色谱的使用及氨基酸标样的分析高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种现代化分析仪器，广泛应用于生化分析、药物分析、环境监测等领域。
HPLC相比传统色谱具有分离速度快、分离效果好、选择性高、灵敏度高等特点，可对复杂的混合物进行快速、准确的定性和定量分析。
氨基酸是构成蛋白质的基本单位，HPLC可以快速、准确分析氨基酸，具有重要的科研和实际应用价值。
HPLC的使用可分为以下几个步骤：1.样品制备：样品制备是HPLC分析的重要步骤，包括样品的提取、纯化、前处理等。
而对于氨基酸的分析，通常需要先将样品中的氨基酸转化为荧光染料或二硫醇衍生物，以提高检测灵敏度。
2.柱的选择：根据分析目标和样品性质，选择适合的色谱柱。
常见的色谱柱有反相柱、离子交换柱、大小分子排阻柱等。
对于氨基酸的分析，通常选择反相柱进行分离。
3.流动相：选择合适的流动相是HPLC分析的关键，流动相的组成对分离效果有很大的影响。
对于氨基酸的分析，常用的流动相是缓冲溶液，如甲醛-磷酸盐缓冲液、醋酸-磷酸缓冲液等。
4.梯度洗脱：丰富样品之间的分离效果，可以采用梯度洗脱。
梯度洗脱是通过调节流动相中溶剂的组成和洗脱速率来实现样品的高效分离。
5.检测方法选择：根据不同的分析目标，选择合适的检测方法。
常见的检测方法有紫外检测、荧光检测、电化学检测等。
对于氨基酸的分析，常用的检测方法是荧光检测，因为部分氨基酸具有固有的荧光性质。
6.数据分析：使用专业的色谱软件进行数据分析和结果解读，如峰面积积分、峰高度积分、峰形比较等。
氨基酸的分析常常使用HPLC进行，具体步骤如下：1.样品制备：将氨基酸标样依次溶解在适量的溶剂中。
2.色谱柱选择：根据需要选择合适的色谱柱，如反相柱。
3.流动相制备：根据需要选择合适的缓冲溶液作为流动相。
4.进样：使用自动进样器或手工进样器将样品注入进样口。
5.梯度洗脱：通过调节流动相中溶剂的组成和洗脱速率，进行梯度洗脱。
氨基酸的分析方法
氨基酸的分析方法
氨基酸的分析方法主要包括色谱分析、电泳分析和光谱分析。
1. 色谱分析：氨基酸的色谱分析主要包括气相色谱（GC）和高效液相色谱（HPLC）。
气相色谱通常使用气相色谱质谱联用技术（GC-MS）来鉴定和定量氨基酸。
高效液相色谱可以应用于复杂样品的分离和定量分析。
2. 电泳分析：氨基酸的电泳分析包括毛细管电泳（CE）和聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）。
毛细管电泳是一种高效、快速的氨基酸分析方法，常用于药物、食品等领域的检测。
聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于分析氨基酸的线性序列。
3. 光谱分析：氨基酸的光谱分析主要包括紫外-可见光谱（UV-Vis）、红外光谱（IR）和核磁共振光谱（NMR）。
紫外-可见光谱用于测定氨基酸的吸收特性，红外光谱可用于检测氨基酸的官能团，核磁共振光谱可提供氨基酸的结构信息。
这些方法可以单独应用或联合使用，以提供对氨基酸的定性和定量分析。
反相高效液相色谱定量分析多肽中的氨基酸组成
维普资讯
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澎Ｉ 鼻｝ ２６ 第 期 ｆ 蓉 学 ０ 年 ２ ０
表 １ 流动相梯 度 洗脱表
（ ）方 案 一 。取 氨 基 酸 标 准 储 备 液 （ ８种 氨 １ １
ＰＴ ＩＣ与氨基 酸 和 亚 氨 基 酸 均 能 反 应 ，且 衍 生 产 物
入 ６ｍｌ Ｃ 溶 液 １ Ｉ后 真 空 烧 结 封 口 ，移 入 ｏ ＬＨ １ ／ ０Ｉ １ １ １０Ｃ恒温箱 中加 热 １５ｈ ５￣ ． ，取 出冷 却 。用微 量 注射 器 吸取 ２ ｌ 解液 于 １５ｍ 离 心 管 中 ，真 空 干燥 ０ 水 ． ｌ 备用 。
进 行 了 比较 。 １ 材料 、试 剂与设 备
中最基 本 的 内容 之一 。通过 氨基 酸组成 分析可 以初 步 了解多肽 （ 白质 ） 的化学 结 构特点 ，以及 某些 蛋
特征 活性 氨基酸 的分 布情况 ，对 多肽 （ 白质 ）结 蛋
构与 功能 的研 究提 供 科学 的信 息 。多 肽 （ 白质 ） 蛋
维普资讯
澎江 彳 ２６ 第２ 瘩 于 学 ０年 期 ０
反 相 高 效 液相 色谱 定 量 分析 多肽 中的氨基 酸组 成
吕 艳 ，冯凤 琴
（ 江 大 学 生物 工 程 与 食 品 科 学 学 院 ，浙 江 杭州 ３０２ ） 浙 １０９
摘
干燥 器 、Ｚ Ｂ９ Ｋ ．９型 循 环 水 多 用 真 空 泵 、安 瓿 管 、 万 分之一 电子 天平 、Ｋ ．５ Ｂ型超 声 波 清洗 器 、数 Ｑ２０
氨基酸含量检测主要应用氨基酸 自 动分析仪和
高效 液 相色 谱 （ Ｐ Ｃ 。随着 Ｈ Ｌ ＨＬ） Ｐ Ｃ的发 展 ，使 用 ＨＬ Ｐ Ｃ技 术 分 析 氨 基 酸 获 得 迅 速 发 展 ， 由于 Ｈ Ｌ ＰＣ
高效液相色谱仪测定发酵液中的氨基酸含量
高效液相色谱仪测定氨基酸的含量1 L--色氨酸含量的测定1.1实验仪器与试剂色氨酸样品，甲醇，高效液相色谱仪，0.03%KH2PO4溶液1.2 HPLC色谱分析条件流动相为0.03%KH2PO4溶液（A）-甲醇（B），线性梯度淋洗，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长276nm。
1.2标准溶液的配制精密称取色氨酸标准标准品50mg，置100ml容量瓶中，振摇，用流动相溶解到刻度，作为供试品溶液，另取色氨酸样品适量，同法操作。
1.3标准直线的制作精密称取色氨酸标准样品适量,分别稀释制成每1ml 中含色氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色谱仪，以色氨酸峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，制作回归标准直线。
1.4发酵液中样品中色氨酸含量的测定取发酵液，稀释配制成约500μg/ ml 的溶液，摇匀，过滤，取25μl进样，在高效液相色谱仪下测量，记录峰值面积，作图。
2L-精氨酸含量的测定2.1实验仪器与试剂L-精氨酸标准样品，乙腈，高效液相色谱仪，磷酸二氢铵。
PH计，磷酸，2.2HPLC色谱分析条件流动相: 以磷酸二氢铵溶液( 称取磷酸二氢铵1.15g, 加水800m 溶解后, 用磷酸调节pH 值至2.0±0.1, 加水稀释至1000ml ) - 乙腈为流动相，线性梯度淋洗; 柱温为30℃检测波长为206nm；进样量：25μl。
2.2标准直线的制作精密称取精氨酸标准标准品50mg，置100ml 容量瓶中，振摇，用流动相溶解到刻度，作为供试品溶液，另取色氨酸样品适量，同法操作。
精密称取精氨酸标准样品适量,分别稀释制成每1ml 中含精氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色谱仪，以精氨酸峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，制作回归标准直线。
2.3发酵液中样品中精氨酸含量的测定取发酵液，稀释配制成约500μg/ ml 的溶液，摇匀，过滤，取25μl 进样，在高效液相色谱仪下测量，记录峰值面积，作图。
反相高效液相色谱测定葡萄酒中的氨基酸
反相高效液相色谱测定葡萄酒中的氨基酸李东成;莫燕芳;杨韩丽;郭海鸥;窦智麟;丁青芝;骆琳【摘要】用反相高效液相色谱柱前衍生法测定葡萄酒样品中的氨基酸组成,对方法参数进行了优化.结果表明,流速对分离效果有明显影响,流动相pH在中性偏碱范围内对分离效果无明显影响.荧光和紫外检测联用可以有效的对24种氨基酸进行定性和定量检测,23种氨基酸检出限在3～6 pmol.葡萄酒中氨基酸总含量为9 666.3μmoL/L,其中人体必需氨基酸含量为5 138.2 μmoL/μL.18种氨基酸的加标回收率在85.5％～114.4％之间.【期刊名称】《粮食与食品工业》【年(卷),期】2015(022)003【总页数】8页(P82-88,93)【关键词】反相高效液相色谱;葡萄酒;氨基酸;测定【作者】李东成;莫燕芳;杨韩丽;郭海鸥;窦智麟;丁青芝;骆琳【作者单位】江苏大学食品与生物工程学院镇江212013;江苏大学食品与生物工程学院镇江212013;江苏大学食品与生物工程学院镇江212013;江苏大学食品与生物工程学院镇江212013;江苏大学食品与生物工程学院镇江212013;江苏大学食品与生物工程学院镇江212013;江苏省农产品生物加工与分离工程技术研究中心镇江 212013;江苏大学食品与生物工程学院镇江212013;江苏省农产品生物加工与分离工程技术研究中心镇江 212013【正文语种】中文【中图分类】TS207.3氨基酸是葡萄酒中的非常重要的营养成分，其来源于葡萄汁、蛋白质酶解、酵母发酵过程中代谢产物及发酵完毕后酵母细胞自溶所得的氨基酸［1］。
一般说来，优质葡萄酒中游离氨基酸的含量在1 g／L以上，而游离氨基酸本身会呈现不同的口感［2］。
氨基酸从其旋光性可分为D－型和L－型，但大多数天然存在的氨基酸属于L－型，L－型氨基酸有甜、酸、苦、鲜4种不同的味感，所以游离氨基酸的含量及种类是影响葡萄酒口感非常重要的因素［3］。
高效液相色谱法测定氨基酸含量的优化及应用
高效液相色谱法测定氨基酸含量的优化及应用一、前言氨基酸是构成生物体蛋白质的基本单元，具有重要的生物学功能，如构建细胞结构、参与免疫反应以及转运、储存等多种生命活动。
而测定氨基酸含量的方法有很多种，其中，高效液相色谱法（HPLC）具有高灵敏度、高分辨率、快速分离、定量准确、重现性好等特点，因此被广泛应用于氨基酸分析领域。
本文重点介绍了高效液相色谱法测定氨基酸含量的原理、优化及应用。
二、方法原理高效液相色谱法是利用固体相、液相以及流动相间相互作用的分离技术，它通过改变固体相和液相的化学性质和物理性质，通过不同流动相的渗透能力与氨基酸分子的分子量、极性、结构特征等因素的相互作用，实现对氨基酸化合物分离、检测和定量的目的。
三、优化方案1.色谱柱的选择色谱柱的选择直接影响着 HPLC 法测定氨基酸含量的敏感度和分离效果。
常用的色谱柱有离子交换柱、反相柱、手性柱。
2.氨基酸样品的制备氨基酸的提取方法主要有：硫酸-氯化氢法、热酸解法和酶切法。
其中前两种方法操作简单，容易控制，常用于高精度测定。
3.流动相的优化流动相中添加适量的酸或碱，有利于提高分离度和氨基酸的稳定性。
同时加入有机物质类的前处理，在未来进行样品的提取、清洗等操作，有助于减少基础样品产生。
4.色谱条件的优化尽量缩短柱温度，降低流速，减少相互扰动，提高分辨率。
通常，正向向柱洗液的浓度可逐渐提高，也可采用反向洗液以加速洗脱。
四、实验结果分析实验结果显示，优化后的 HPLC 法测定氨基酸含量其灵敏度、准确度、重现性等指标均有了明显的提高，特别是样品前处理及流动相的优化方案都有利于提高样品的稳定性和可检出性。
五、应用展望高效液相色谱法测定氨基酸含量的优化方案在氨基酸分析领域具有广泛的应用前景。
在临床医学、食品安全、环境污染等领域，测定氨基酸含量对于人类健康与生产活动具有重要意义，因此优化后的 HPLC 法测定氨基酸含量将被广泛应用于相关领域。
总之，高效液相色谱法测定氨基酸含量的优化方案既有理论指导又有实验可行性，为实现准确测定氨基酸含量提供了新思路和新途径。
氨基酸测定方法
氨基酸测定方法一、引言氨基酸是构成蛋白质的基本组成单位，对于生命体的生长和发育起着重要的作用。
因此，准确测定氨基酸的含量和组成对于研究蛋白质结构和功能具有重要意义。
本文将介绍一些常用的氨基酸测定方法，包括色谱法、光谱法和化学法等。
二、色谱法测定氨基酸2.1 气相色谱法气相色谱法是测定氨基酸含量和组成的常用方法之一。
该方法通过将氨基酸样品转化为易挥发的衍生物，然后使用气相色谱仪进行分析。
气相色谱法具有分离效果好、灵敏度高和操作简便等优点。
2.1.1 衍生化反应在气相色谱法中，常用的氨基酸衍生化反应包括酯化、酰化和取代反应等。
这些反应能够将氨基酸转化为易挥发的衍生物，便于后续的气相色谱分析。
2.1.2 气相色谱仪气相色谱仪是进行气相色谱分析的关键设备。
它由进样系统、色谱柱和检测器等部分组成。
进样系统用于将样品引入色谱柱，色谱柱用于分离氨基酸衍生物，检测器用于检测分离后的化合物。
2.2 液相色谱法液相色谱法也是测定氨基酸含量和组成的常用方法之一。
该方法通过将氨基酸样品溶解在溶剂中，然后使用液相色谱仪进行分析。
液相色谱法具有分离效果好、灵敏度高和选择性强等优点。
2.2.1 色谱柱选择在液相色谱法中，选择合适的色谱柱对于分离氨基酸非常重要。
常用的色谱柱包括离子交换柱、反相柱和手性柱等。
不同的色谱柱具有不同的分离机理和选择性，可以根据需要选择合适的色谱柱。
2.2.2 梯度洗脱条件在液相色谱法中，通过调整洗脱溶剂的组成和流速等参数，可以实现对氨基酸的有效分离。
梯度洗脱条件可以根据氨基酸的亲水性和极性等特性进行优化。
三、光谱法测定氨基酸3.1 紫外-可见光谱法紫外-可见光谱法是测定氨基酸含量和组成的常用方法之一。
该方法通过测量氨基酸在紫外-可见光波段的吸收特性，来推断其含量和组成。
紫外-可见光谱法具有操作简便、灵敏度高和选择性强等优点。
3.1.1 吸收峰特征不同氨基酸在紫外-可见光谱中具有不同的吸收峰特征。
通过测量氨基酸的吸收峰强度和位置，可以推断其含量和组成。
分离氨基酸的沃特世c18色谱柱
分离氨基酸通常使用反相高效液相色谱（RP-HPLC）方法，而C18色谱柱是其中常用的一种。
沃特世（Waters）是一家生产色谱柱和相关色谱设备的公司，他们生产了许多种不同类型的色谱柱，包括C18反相色谱柱。
C18是指色谱柱的填料是由碳链长度为18的十八烷基基团组成的，这种柱常用于分离非极性或弱极性的化合物，包括氨基酸。
在RP-HPLC中，C18柱可以通过调整溶剂的极性和流动相的离子强度来实现对氨基酸的分离。
操作RP-HPLC分离氨基酸的步骤通常包括以下几个方面：
1. **前处理（Preparation）：** 包括样品的制备，通常涉及氨基酸的衍生化或者其他适当的前处理步骤。
2. **流动相的选择：** 选择合适的流动相，通常是水和有机溶剂的混合物，可以添加适量的缓冲剂来维持溶液的pH值。
3. **梯度程序（Gradient Program）：** 设置梯度程序，即改变流动相组成的比例，以便在不同时间分离不同的氨基酸。
4. **检测器选择：** 选择适当的检测器，如紫外（UV）检测器，以监测氨基酸的吸收峰。
5. **数据分析：** 对色谱图进行分析，确定氨基酸的相对浓度和峰的分离情况。
请注意，具体的操作条件和方法可能因实验目的、仪器型号和样品特性而有所不同。
在进行实验之前，建议参考仪器和色谱柱的使用手册，并根据具体的实验要求进行优化。
反相高效液相色谱法测定血清氨基酸
反相高效液相色谱法测定血清氨基酸
李忠信;司茂杰
【期刊名称】《天津医药》
【年(卷),期】1994(022)012
【摘要】氨基酸的早期测定方法有茚三酮反应量气法和水合茚三酮反应的比色法,它们只能用于氨基酸总量的测定。
层析法虽可检测单一的氨基酸但敏感度低,分辨力差且费时。
离子交换(IEC)分析法存在着离子交换柱性能不够稳定和流动相平衡时间长等弱点。
60年代以来,国外对氨基酸的气相色谱测定法有许多报道,此法虽有灵敏度高、分辨力好的优点,但氨基酸需酯化和酰化,操作繁琐。
本文采用的反相高效液相色谱法具有灵敏度高、重现性好、快速简便的特点,性能优于其它的经典方法。
【总页数】3页(P755-757)
【作者】李忠信;司茂杰
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R446.112
【相关文献】
1.反相高效液相色谱法分析血清中游离氨基酸 [J], 齐伟
2.反相高效液相色谱法测定血清中的游离氨基酸 [J], 边春香;孙志红;李莉;金伟
3.柱前衍生-反相高效液相色谱法测定阿胶补血口服液中主要氨基酸的含量 [J], 汪
明志; 张华锋; 周坚; 顾炳仁
4.柱前衍生反相高效液相色谱法测定人血清中游离氨基酸 [J], 阳利龙;祝文兵;何周康
5.柱前衍生-反相高效液相色谱法测定血清及脑脊液中氨基酸的含量 [J], 孙考祥;黄丽军;李成军;肖铁树
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反相高效液相色谱分离五种常见的氨基酸
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氨基酸是 蛋 白质 的 最基 本 的组 成单 位 ，可 以合 成 人体 中 酶 、激素和其它 重要 组成物质 ，能 广泛参 与人体各 项生 理活 动
和 二 级 氨 基 酸 迅 速 反 应 ，生 成 具 荧 光 的 衍 生 物 ，既 可 用 荧 光 检 测 ，也可用紫外 （ ｕ Ｖ）检测 。衍生产物非 常稳定Ⅲ 。
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