生物制药第四章 多肽与蛋白质药物共59页
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6．根据蛋白质疏水基团与相应的载体基团结合来 纯化蛋白质。
7．根据蛋白质在溶剂系统中分配的不同来纯化蛋 白质
8．根据蛋白质受物理、化学等作用因素的影响来 纯化蛋白质。
9．根据蛋白质的选择性吸附性质来纯化蛋白质。 10．根据酶对蛋白质的作用来纯化蛋白质。
（三）蛋白质的分离和纯化
1．时间因素 在蛋白质分离和纯化过程中，共同的问题是蛋白 质反应达到平衡所需要的时间，而且为避免蛋白 质的变性、微生物的污染等，操作常在低温环境 中进行。 通常在25℃时，化学反应的速率是低温5℃时的34倍。
甲状旁腺激素（PTH），降钙素（CT）。 ④ 胰岛激素：
胰高血糖素，胰解痉多肽。 ⑤胃肠胃道激素：
胃泌素，胆囊收缩素一促胰激素（CCK-PZ） ⑥ 胸腺激素：
胸腺素、胸腺肽
主要多肽类药物
2．多肽类细胞生长调节因子 表皮生长因子（EGF）、转移因子
（TF）、心钠素（ANP）等。 3．含有多肽成分的其他生化药物
（二）蛋白质提纯的一般方法
（二）蛋白质提纯的一般方法
对蛋白质的离子交换层析，一般多用离子交换纤 维和以葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝 胶等为骨架的离子交换剂，主要是取其具有较大 的蛋白质吸附容量，较高的流速和分辨率等优点。
另外电泳法亦是利用电离性质的不同来分离纯化 蛋白质。
（二）蛋白质提纯的一般方法
9肽，MW857，pI7.5
具有49个氨基酸残基的多肽， MW5562，pI5.7 多肽，MW4200
骨宁、血活素等。
主要多肽类药物制备
（一）胸腺激素 （二）促皮质素（ACTH） （三）降钙素
（一）胸腺激素
胸腺是一个激素分泌器官。对免疫功能有 多方面的影响。
胸腺位于纵隔腔上部，胸骨后方. 胸腺发生于胚胎第二个月。到出生二年内，生长
迅速，体积较大，到青春期仍继续发育，青春期 后发生萎缩。因此胸腺原料必须采自幼龄动物
（五）纯度检查
确定protein 的纯度标准一般为： 分子大小是否均一，电荷是否均一，是否
具有恒定的氨基酸组成，是否具有单一的N 端和C端残基，能否结晶，进一步纯化时生 物活性是否有所提高等。
（五）纯度检查
常用蛋白质纯度检查的方法有： 1．HPLC或FPLC 2．电泳均一性 3．免疫化学法 4．生物测定法
概述
一般将50或50个以下的氨基酸残基组成的化 合物，列入多肽。多数无特定空间构象，某 些多肽也有一定构象，但其构象的坚固性远 不如蛋白质，其构象的浮动性很大。
多肽在生物体内的浓度很低，在血液中一般 为 1010~1012 ,m 但ol它/L 们的生理活性很强，在调 节生理功能时起着非常重要的作用。
2．选择离子交换层析条件的程序
（三）蛋白质的分离和纯化
3.蛋白质分离纯化的可能的技术手段的组合
（三）蛋白质的分离和纯化
分步分离纯化的可能步骤
（四）溶液中蛋白质浓度的测定
1. UV法 （1）280nm光吸收法 （2）280nm和260nm的吸收差法 （3）215nm和225nm的吸收差法 2. 双缩脲法 3. 福林一酚试剂法 4. 考马斯亮蓝G-250染色法
（五）纯度检查
5．分光光度法 （1）UV法 （2）IR法 6．高速离心法 7．可结晶性 8．N端，C端的测定 9．恒定的氨基酸比
Baidu Nhomakorabea
多肽类
概述
由氨基酸缩合而成的化合物称为多肽，它 们是通过一个氨基酸分子的-NH与另一分子 氨基酸的-COOH脱去一分子水形成-CONH-键而相互连接起来的。
主要胸腺激素制剂
名称
胸腺素组分5 猪胸腺素注射液 胸腺素a1
胸腺体液因子 血清胸腺因子 胸腺生成素
胸腺因子X 胸腺刺激素 自身稳定胸腺激素
注：MW＝分子量；pI＝等电点
化学性质
一族酸性多肽，MW1000～15000
多肽混合物，MW15000以下
具有28个氨基酸残基的多肽， MW5562 ，pI4.2 多肽，MW3200，pI5.7
长调节因子。现已发现的细胞生长调节因子已近100种.
概述
许多活性蛋白质，多肽都是由无活性的蛋白质前体，经过 酶的加工剪切转化而来的。它们中间许多有共同的来源， 相似的结构，甚至还保留着若干彼此所特有的生物活性。
研究活性多肽结构与功能的关系及活性多肽之间结构的异 同与其活性的关系 , 将有助于设计和研制新的活性多肽药 物。
（一）材料选择
原料来源包括动物、植物及微生物等。选 择原料时应考虑来源丰富、目的物含量高、 成本低且易于提取的材料。
同时应考虑其种属、发育阶段、生物状态、 来源、解剖部位、生物技术产品的宿主菌 或细胞等因素的影响。
（二）蛋白质提纯的一般方法
1．根据蛋白质等电点的不同来纯化蛋白质。 2．根据蛋白质分子形状和大小不同来纯化蛋白质。 3．根据溶解度的不同来纯化蛋白质。 4．根据电离性质的不同来纯化蛋白质。 5．根据蛋白质功能专一性的不同来纯化蛋白质。
临床上有一些确有疗效的组织提取制剂其有效成分有的还 不十分清楚，从活性肽或细胞生长调节因子的角度去研究 它们的物质基础和作用机制，预计可获得成效
主要多肽类药物
1．多肽激素 ① 垂体多肽激素：
促皮质素（ACTH），促黑激素（MSH） ② 下丘脑激素：
促甲状腺激素释放激素（TRH），生长素抑制激素 （GRIF） ③ 甲状腺激素：
概述
活性多肽主要是从内分泌腺、组织器官、分泌细 胞和体液中产生或获得的。
1953年人工合成了第一个有生物活性的多肽——催产素（OT）。 到了60、70年代神经肽的研究进入高潮。同时，由于很多脑活性肽
也存在于胃肠道组织中，从而推动了胃肠道激素的研究. 到了70年代，生物技术的发展更开拓了多肽药物的新领域——细胞生
（一）胸腺激素
胸腺依赖性的淋巴细胞群——T细胞直接参 与有关免疫反应
骨髓的 迁 干 移 胸 细 腺 胸 胸 腺 激 分 素化T 分 细裂 胞
部 分 留 在 胸 腺 部 分 到 脾 脏 淋 巴 结 等 周 围 免 疫 器 官 中 定 居
T细胞主司细胞免疫（机体在特异抗原的刺 激下，以T细胞为主产生致敏淋巴细胞的免 疫反应称细胞免疫）。
7．根据蛋白质在溶剂系统中分配的不同来纯化蛋 白质
8．根据蛋白质受物理、化学等作用因素的影响来 纯化蛋白质。
9．根据蛋白质的选择性吸附性质来纯化蛋白质。 10．根据酶对蛋白质的作用来纯化蛋白质。
（三）蛋白质的分离和纯化
1．时间因素 在蛋白质分离和纯化过程中，共同的问题是蛋白 质反应达到平衡所需要的时间，而且为避免蛋白 质的变性、微生物的污染等，操作常在低温环境 中进行。 通常在25℃时，化学反应的速率是低温5℃时的34倍。
甲状旁腺激素（PTH），降钙素（CT）。 ④ 胰岛激素：
胰高血糖素，胰解痉多肽。 ⑤胃肠胃道激素：
胃泌素，胆囊收缩素一促胰激素（CCK-PZ） ⑥ 胸腺激素：
胸腺素、胸腺肽
主要多肽类药物
2．多肽类细胞生长调节因子 表皮生长因子（EGF）、转移因子
（TF）、心钠素（ANP）等。 3．含有多肽成分的其他生化药物
（二）蛋白质提纯的一般方法
（二）蛋白质提纯的一般方法
对蛋白质的离子交换层析，一般多用离子交换纤 维和以葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝 胶等为骨架的离子交换剂，主要是取其具有较大 的蛋白质吸附容量，较高的流速和分辨率等优点。
另外电泳法亦是利用电离性质的不同来分离纯化 蛋白质。
（二）蛋白质提纯的一般方法
9肽，MW857，pI7.5
具有49个氨基酸残基的多肽， MW5562，pI5.7 多肽，MW4200
骨宁、血活素等。
主要多肽类药物制备
（一）胸腺激素 （二）促皮质素（ACTH） （三）降钙素
（一）胸腺激素
胸腺是一个激素分泌器官。对免疫功能有 多方面的影响。
胸腺位于纵隔腔上部，胸骨后方. 胸腺发生于胚胎第二个月。到出生二年内，生长
迅速，体积较大，到青春期仍继续发育，青春期 后发生萎缩。因此胸腺原料必须采自幼龄动物
（五）纯度检查
确定protein 的纯度标准一般为： 分子大小是否均一，电荷是否均一，是否
具有恒定的氨基酸组成，是否具有单一的N 端和C端残基，能否结晶，进一步纯化时生 物活性是否有所提高等。
（五）纯度检查
常用蛋白质纯度检查的方法有： 1．HPLC或FPLC 2．电泳均一性 3．免疫化学法 4．生物测定法
概述
一般将50或50个以下的氨基酸残基组成的化 合物，列入多肽。多数无特定空间构象，某 些多肽也有一定构象，但其构象的坚固性远 不如蛋白质，其构象的浮动性很大。
多肽在生物体内的浓度很低，在血液中一般 为 1010~1012 ,m 但ol它/L 们的生理活性很强，在调 节生理功能时起着非常重要的作用。
2．选择离子交换层析条件的程序
（三）蛋白质的分离和纯化
3.蛋白质分离纯化的可能的技术手段的组合
（三）蛋白质的分离和纯化
分步分离纯化的可能步骤
（四）溶液中蛋白质浓度的测定
1. UV法 （1）280nm光吸收法 （2）280nm和260nm的吸收差法 （3）215nm和225nm的吸收差法 2. 双缩脲法 3. 福林一酚试剂法 4. 考马斯亮蓝G-250染色法
（五）纯度检查
5．分光光度法 （1）UV法 （2）IR法 6．高速离心法 7．可结晶性 8．N端，C端的测定 9．恒定的氨基酸比
Baidu Nhomakorabea
多肽类
概述
由氨基酸缩合而成的化合物称为多肽，它 们是通过一个氨基酸分子的-NH与另一分子 氨基酸的-COOH脱去一分子水形成-CONH-键而相互连接起来的。
主要胸腺激素制剂
名称
胸腺素组分5 猪胸腺素注射液 胸腺素a1
胸腺体液因子 血清胸腺因子 胸腺生成素
胸腺因子X 胸腺刺激素 自身稳定胸腺激素
注：MW＝分子量；pI＝等电点
化学性质
一族酸性多肽，MW1000～15000
多肽混合物，MW15000以下
具有28个氨基酸残基的多肽， MW5562 ，pI4.2 多肽，MW3200，pI5.7
长调节因子。现已发现的细胞生长调节因子已近100种.
概述
许多活性蛋白质，多肽都是由无活性的蛋白质前体，经过 酶的加工剪切转化而来的。它们中间许多有共同的来源， 相似的结构，甚至还保留着若干彼此所特有的生物活性。
研究活性多肽结构与功能的关系及活性多肽之间结构的异 同与其活性的关系 , 将有助于设计和研制新的活性多肽药 物。
（一）材料选择
原料来源包括动物、植物及微生物等。选 择原料时应考虑来源丰富、目的物含量高、 成本低且易于提取的材料。
同时应考虑其种属、发育阶段、生物状态、 来源、解剖部位、生物技术产品的宿主菌 或细胞等因素的影响。
（二）蛋白质提纯的一般方法
1．根据蛋白质等电点的不同来纯化蛋白质。 2．根据蛋白质分子形状和大小不同来纯化蛋白质。 3．根据溶解度的不同来纯化蛋白质。 4．根据电离性质的不同来纯化蛋白质。 5．根据蛋白质功能专一性的不同来纯化蛋白质。
临床上有一些确有疗效的组织提取制剂其有效成分有的还 不十分清楚，从活性肽或细胞生长调节因子的角度去研究 它们的物质基础和作用机制，预计可获得成效
主要多肽类药物
1．多肽激素 ① 垂体多肽激素：
促皮质素（ACTH），促黑激素（MSH） ② 下丘脑激素：
促甲状腺激素释放激素（TRH），生长素抑制激素 （GRIF） ③ 甲状腺激素：
概述
活性多肽主要是从内分泌腺、组织器官、分泌细 胞和体液中产生或获得的。
1953年人工合成了第一个有生物活性的多肽——催产素（OT）。 到了60、70年代神经肽的研究进入高潮。同时，由于很多脑活性肽
也存在于胃肠道组织中，从而推动了胃肠道激素的研究. 到了70年代，生物技术的发展更开拓了多肽药物的新领域——细胞生
（一）胸腺激素
胸腺依赖性的淋巴细胞群——T细胞直接参 与有关免疫反应
骨髓的 迁 干 移 胸 细 腺 胸 胸 腺 激 分 素化T 分 细裂 胞
部 分 留 在 胸 腺 部 分 到 脾 脏 淋 巴 结 等 周 围 免 疫 器 官 中 定 居
T细胞主司细胞免疫（机体在特异抗原的刺 激下，以T细胞为主产生致敏淋巴细胞的免 疫反应称细胞免疫）。