第五章 植物胚胎培养技术
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5组织培养第五章 胚胎培养
条件下切开幼果，取出种子，小心分离
出胚乳，接种在培养基上。
培养室温度25-27℃，黑暗或弱光下
桑寄生科 蔷薇亚纲的一科。半寄生性灌木，稀草本， 寄生于木本植物的枝上，少数为寄生于根部 的陆生小乔木或灌木。花以造孢细胞发育成 的胚囊所代替。主要产于世界热带地区，温 带分布较少。中国，大多数分布于华南和西 南各省区；有些种类可供药用，如桑寄生、 广寄生、槲寄生等。根据花的形态、花粉粒 和果的构造不同，分为桑寄生亚科和槲寄生 亚科。
幼胚培养的关键技术：取材时期
幼胚剥离
培养条件的控制
（是否需要特殊处理）
成熟或未成熟子房——70%酒精浸数S——
0.1%升汞或饱和漂白粉浸10-30min——无菌水冲
洗——剖出胚珠——取出完整胚——接种在培养
基上。
一般采用固体培养法。
培养条件：
20-30℃，2000Lx。10-14h
幼胚离体培养的生长发育方式； (1)胚性发育 胚只是在体积上增大甚至超过正常胚大小而不 能萌发成苗。
思考： 1、解释胚胎培养概念 2、说明成熟胚与幼胚对培养基成分的不同 要求 3、什么是胚乳培养？其培养的温度要求一 般在多少范围？ 4、胚乳培养的基本培养基种类是哪些？ 5、简述子房发育成植株的染色体情况 6、胚珠培养和子房培养有何应用？
第一节 胚培养
一、培养类型
所谓胚培养就是采用人工方法把胚从 种子、子房、胚珠中分离出来，放在无菌 条件下让其进一步生长发育、以至形成幼 苗的过程。
1、离体胚培养时期 自养期 异养期 2、离体胚培养类型 ⑴成熟胚培养（子叶形成以后）
⑵幼胚培养（子叶形成之前）
二、培养过程
1、幼胚培养过程
Hanning早在1904年就培养了萝卜和 辣根菜的胚，发现离体胚可以充分发育，并且提前 萌发形成小苗，这是世界上胚培养最早获得成功的 一例。
出胚乳，接种在培养基上。
培养室温度25-27℃，黑暗或弱光下
桑寄生科 蔷薇亚纲的一科。半寄生性灌木，稀草本， 寄生于木本植物的枝上，少数为寄生于根部 的陆生小乔木或灌木。花以造孢细胞发育成 的胚囊所代替。主要产于世界热带地区，温 带分布较少。中国，大多数分布于华南和西 南各省区；有些种类可供药用，如桑寄生、 广寄生、槲寄生等。根据花的形态、花粉粒 和果的构造不同，分为桑寄生亚科和槲寄生 亚科。
幼胚培养的关键技术：取材时期
幼胚剥离
培养条件的控制
（是否需要特殊处理）
成熟或未成熟子房——70%酒精浸数S——
0.1%升汞或饱和漂白粉浸10-30min——无菌水冲
洗——剖出胚珠——取出完整胚——接种在培养
基上。
一般采用固体培养法。
培养条件：
20-30℃，2000Lx。10-14h
幼胚离体培养的生长发育方式； (1)胚性发育 胚只是在体积上增大甚至超过正常胚大小而不 能萌发成苗。
思考： 1、解释胚胎培养概念 2、说明成熟胚与幼胚对培养基成分的不同 要求 3、什么是胚乳培养？其培养的温度要求一 般在多少范围？ 4、胚乳培养的基本培养基种类是哪些？ 5、简述子房发育成植株的染色体情况 6、胚珠培养和子房培养有何应用？
第一节 胚培养
一、培养类型
所谓胚培养就是采用人工方法把胚从 种子、子房、胚珠中分离出来，放在无菌 条件下让其进一步生长发育、以至形成幼 苗的过程。
1、离体胚培养时期 自养期 异养期 2、离体胚培养类型 ⑴成熟胚培养（子叶形成以后）
⑵幼胚培养（子叶形成之前）
二、培养过程
1、幼胚培养过程
Hanning早在1904年就培养了萝卜和 辣根菜的胚，发现离体胚可以充分发育，并且提前 萌发形成小苗，这是世界上胚培养最早获得成功的 一例。
植物胚胎培养
（二） 子房培养 1、子房培养的意义 、
★有效地挽救杂种胚的败育 ★单倍体植株的培育 ★离体授粉的需要 ★离体条件形成果实 ★花被功能研究
2、子房培养的方法 、
授粉前或授 粉后的子房
表面消毒
接种培养
受精后的子房仍需进行表面消毒后再 接种。而未受精子房可将花被表面消毒后， 接种。而未受精子房可将花被表面消毒后， 在无菌条件下直接剥取子房接种。 在无菌条件下直接剥取子房接种。 子房培养只需较简单的培养基即可形 成果实，并含成熟种子。 成果实，并含成熟种子。
（一） 胚珠培养
1、胚珠培养的意义 、
有利于合子和早期原胚的培养 胚分化不全的种子的胚培养 获得杂交后代和优良品种 离体授粉的需要 获得无病毒苗
2、胚珠培养的方法 、
长度小于3mm的胚珠， 的胚珠， 长度小于 的胚珠 难与直接解剖， 难与直接解剖，可先接 种于液体培养基中， 种于液体培养基中，根 据培养情况采取相应培 养条件。 养条件。
培养方法： （三） 培养方法： A、取授粉 、取授粉4-8d后的幼果，常规消毒 后的幼果， 后的幼果 B、无菌条件下切开果实，取出种子，分离出胚乳 、无菌条件下切开果实，取出种子， C、接种在培养基上，在25-27℃和黑暗条件或散射 、接种在培养基上， ℃ 光下培养形成愈伤组织 D、转到分化培养基上，待愈伤组织长出芽后，切下 、转到分化培养基上，待愈伤组织长出芽后， 不定芽 E、插入生根培养基中，光下培养 、插入生根培养基中，光下培养10-15d，切口处长 ， 出白色的不定根
二、胚胎培养的应用
1、克服远缘杂交的不育性，获稀有杂种植物 、克服远缘杂交的不育性， 2、打破种子休眠，提早结实，缩短育种年限 、打破种子休眠，提早结实， 3、使生活力低下或无生活力的种子萌发 、 4、使柑橘类植物合子胚正常发育 、 5、测定种子生活力 、 6、获三倍体或单倍体植株 、 7、快速繁殖特殊植物 、 8、用于理论研究 、
植物胚胎培养
（2）防止幼胚早熟萌发的方法
①提高培养基渗透压。胚龄越小要求的渗透 压（糖浓度）越高，高糖浓度控制幼胚早熟 萌发的效果早已被证实。下述实例阐明不同 胚龄对糖浓度的要求。
②提高无机盐浓度。提高无机盐浓度也是为 了提高培养基渗透压。可加入适量的NaCl 以提高渗透压，浓度一般为0．2％－0．4 ％，超过0．8％对胚有毒害作用。
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（二）幼胚
发育早期的幼胚，由于胚胎发育要求更 为完全的人工合成培养基，而且剥离技 术要求很高，用成熟胚的培养方法很难 成功，可以采用胚珠预培养的方法。
具体做法：将授粉后的子房剥出用药剂
进行表面消毒，在无菌条件下切取胚珠
进行预培养。培养一定时间后，再将胚
从胚珠中剥出，接着培养裸露的胚，使
曼陀罗：5.0一8.1
水稻：5.0
番茄： 6.50
大麦：4.9
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(三) 环境条件对胚性发育的影响
1）光照条件：
由于胚在胚珠内发育是不见光的。一 般认为在黑暗或弱光下培养幼胚比较适 宜。光照对胚胎发育有轻微抑制作用， 离体培养条件下，幼胚正常胚性发育对 光的要求，还应根据植物种类来决定。
③加人甘露醇提高渗透压。甘露醇的浓度为 1．l％－5．5％，以部分地代替蔗糖，使幼 胚在等渗条件下继续胚性发育。
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（二） 培养基酸碱度对胚性发育的影响
培养基酸碱度对胚性发育也是非常重 要的。通常胚培养所用pH值的范围为。 因植物种类不同而有所差异。
如：
荠菜： 5.4－7.5
桃：5.8
（五）克服种子的自然不育性
（六）种子生活力的测定
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内容 3
植物胚胎培养
2．幼胚培养 Hanning早在1904年就培养了萝卜和辣根菜的 胚，发现离体胚可以充分发育，并且提前萌发形成 小苗，这是世界上胚培养最早获得成功的一例。 Laibach在1925～1929年间，通过培养亚麻种 间杂种幼胚，成功地获得了种间杂种，首次证实了 这种方法在实际应用中的价值。 李继侗，1933年在银杏培养中发现了胚乳提取 物能够促进银杏离体胚的生长。这一发现为后人使 用植物胚乳汁液、幼嫩种子及果实提取液等天然物 质促进培养物生长具有启示作用。
1．材料的选择 品种间的差异 胚囊发育时期 大麦胚囊发育时期与花粉发育时期的相关性 花粉发育时期 胚囊发育时期 单核中期 大孢子四分体 单核靠边期 单核至四核胚囊 二核花粉期 八核胚囊 三核花粉期 成熟胚囊
2．培养基 植物激素的影响 百合未授粉子房培养 2,4 - D单独使用诱导 频率为18.87% 2,4 - D＋6-BA 诱导频率为33.73% 2,4 - D＋KT 诱导频率为47.76% 荞麦未授粉子房培养 2,4 - D单独使用诱导 频率为7.6% 2,4 - D＋KT 诱导频率为1.8% 蔗糖浓度 蔗糖浓度多在3～10％之间，因不同植物材 料而异，一般是诱导培养阶段蔗糖浓度要 高一些，分化培养时蔗糖浓度要低一些。
幼胚培养的关键技术：取材时期，幼胚 剥离 ，培养条件的控制（是否需要特殊处理） 和幼胚离体培养的生长发育方式。 幼胚培养中，常见的生长方式有三种： (1)、胚性发育(embryonal development) ：幼 胚接种到培养基上以后，仍然按照在活体内 的发育方式发育，最后形成成熟胚(有时甚至 可能类似种子)，然后再按种子萌发途径出苗 形成完整植株，这种途径发育的幼胚一般一 个幼胚将来就是一个植株。
(2)、早熟萌发(early mature sprouting)： 幼 胚接种后，离体胚不继续胚性生长，而是 在培养基上迅速萌发成幼苗，通常称之为 早熟萌发。在大多数情况下，一个幼胚萌 发成一个植株，但有时会由于细胞分裂产 生大量的胚性细胞，以后形成许多胚状体， 从而可以形成许多植株，这种现象就是所 谓的丛生胚现象。 (3)、愈伤组织(callus) ：在许多情况下，幼 胚在离体培养中首先发生细胞增殖，形成 愈伤组织。一般来讲由胚形成的愈伤组织 大多为胚性愈伤组织，这种胚性愈和授粉后的子房培养。 1942年，La Rue首先对番茄、落地生 根属(Kalanchoe)、连翅属(Forsythia)和驴蹄 草属(Caltha)授粉的花连带一段花梗进行了 培养，在无机盐培养基上得到了正常的果 实。 1949年和1951年Nitsch建立了较完整 的子房培养技术，他培养了小黄瓜、番茄、 菜豆、草莓和烟草等植物授粉前和授粉后 的子房，在含蔗糖的无机盐培养基上，授 粉后的小黄瓜和番茄获得了成熟果实及具 有生活力的种子。
《植物胚胎培养》课件
加大植物胚胎培养技术的研发力度，提高培养效率和成功率，降低成 本。
加强国际合作与交流
积极参与国际合作与交流，引进先进技术和管理经验，推动植物胚胎 培养技术的快速发展。
促进产业化应用
加强技术转化和推广，推动植物胚胎培养技术在农业、林业和园艺等 领域的应用，为可持续发展提供技术支持。
感谢您的观看
THANKS
快速繁殖
02
对于一些繁殖困难或周期长的植物，胚胎培养可以大大缩短繁
殖周期，提高繁殖效率。
远缘杂交
03
胚胎培养技术为远缘杂交提供了可能，有助于打破物种间的生
殖隔离，创造新的植物品种。
在生物技术中的应用
基因工程
通过胚胎培养，可以获得大量转基因植株，用于基因功能研究和 基因改良。
细胞培养
胚胎培养是植物细胞培养的重要基础，有助于研究细胞分化和发 育过程。
胁迫响应机制研究
胚胎培养可以帮助研究植物对各种环境胁迫的响应机制，如干旱、 盐碱、低温等。
05
未来展望与挑战
植物胚胎培养技术的发展趋势
1 2 3
基因编辑技术的广泛应用
利用基因编辑技术，如CRISPR-Cas9系统，对植 物胚胎进行精确的基因修饰，提高植物的抗逆性 、产量和品质。
智能化与自动化技术的融合
选择合适的培养基
根据植物种类和培养目的选择适宜的培养基配方。
培养基制备
按照配方比例配制培养基，确保其营养成分、渗透压等指标符合要求。
胚胎培养的方法与操作
接种
将预处理好的胚胎移植到培养基上，确保其与培养基 充分接触。
培养条件控制
提供适宜的光照、温度、湿度等环境条件，促进胚胎 正常生长。
观察与记录
定期观察胚胎生长情况，记录生长数据，以便进行后 续分析。
加强国际合作与交流
积极参与国际合作与交流，引进先进技术和管理经验，推动植物胚胎 培养技术的快速发展。
促进产业化应用
加强技术转化和推广，推动植物胚胎培养技术在农业、林业和园艺等 领域的应用，为可持续发展提供技术支持。
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THANKS
快速繁殖
02
对于一些繁殖困难或周期长的植物，胚胎培养可以大大缩短繁
殖周期，提高繁殖效率。
远缘杂交
03
胚胎培养技术为远缘杂交提供了可能，有助于打破物种间的生
殖隔离，创造新的植物品种。
在生物技术中的应用
基因工程
通过胚胎培养，可以获得大量转基因植株，用于基因功能研究和 基因改良。
细胞培养
胚胎培养是植物细胞培养的重要基础，有助于研究细胞分化和发 育过程。
胁迫响应机制研究
胚胎培养可以帮助研究植物对各种环境胁迫的响应机制，如干旱、 盐碱、低温等。
05
未来展望与挑战
植物胚胎培养技术的发展趋势
1 2 3
基因编辑技术的广泛应用
利用基因编辑技术，如CRISPR-Cas9系统，对植 物胚胎进行精确的基因修饰，提高植物的抗逆性 、产量和品质。
智能化与自动化技术的融合
选择合适的培养基
根据植物种类和培养目的选择适宜的培养基配方。
培养基制备
按照配方比例配制培养基，确保其营养成分、渗透压等指标符合要求。
胚胎培养的方法与操作
接种
将预处理好的胚胎移植到培养基上，确保其与培养基 充分接触。
培养条件控制
提供适宜的光照、温度、湿度等环境条件，促进胚胎 正常生长。
观察与记录
定期观察胚胎生长情况，记录生长数据，以便进行后 续分析。
植物胚胎培养与离体授粉
ZT 3.0mg/L+2,4-D 1mg/L，愈伤组织再生3倍体植株；
二、影响胚乳培养的因素
1.培养基与培养条件
（1）培养基
在胚乳培养中，常用的基本培养基有White、LS、MS、MT等，
其中以MS使用最多。 生长调节剂：2,4-D、玉米素等；
天然提取物：20%番茄汁、葡萄汁、玉米汁、椰乳、水解酪蛋白、 酵母提取物 促进胚乳培养；
往往有重要的利用价值。
2）胚乳再生植株的倍性
胚乳愈伤组织及再生植株的染色体数常常发生变化。
如苹果（2n=34）胚乳植株根尖细胞染色体数的分布范围是
29-56条，多数是37-56条，3倍体细胞只占2%-3%。
同一植株是不同倍性细胞的嵌合体。
染色体倍性混乱在胚乳培养中是相当普遍的。
但有些植株胚乳培养，如核桃、檀香、橙和柚等，
受精前的障碍 如花粉在柱头上不能萌发； 花粉管生长受抑制而不能进入胚珠， 其原因是花柱太长或花粉管生长缓慢。
受精后的障碍
胚和胚乳之间的不亲和,
或胚乳发育不良，杂种发育不成熟。
离体授粉
将未授粉的胚珠或子房从母体上分离下来，进行无菌培养， 并以一定的方式授以无菌花粉，使之在试管内实现受精的技术， 所以又称离体受精（fertilization in vitro）。
提高发芽率、缩短育种周期或加速良种繁育。
3. 克服多胚品种珠心胚的干扰
仙人掌、柑橘等，除正常有性胚外，还配以从珠心组织发生多个不定胚。
这些不定胚常常侵入胚囊，使合子胚发育受阻，影响了育种效率。
4. 快速繁殖良种砧木
可以产生大量的次生胚，加速良种砧木的繁殖；
而且胚胎发生技术是人工种子的重要基础。
5. 诱导胚性愈伤组织
二、影响胚乳培养的因素
1.培养基与培养条件
（1）培养基
在胚乳培养中，常用的基本培养基有White、LS、MS、MT等，
其中以MS使用最多。 生长调节剂：2,4-D、玉米素等；
天然提取物：20%番茄汁、葡萄汁、玉米汁、椰乳、水解酪蛋白、 酵母提取物 促进胚乳培养；
往往有重要的利用价值。
2）胚乳再生植株的倍性
胚乳愈伤组织及再生植株的染色体数常常发生变化。
如苹果（2n=34）胚乳植株根尖细胞染色体数的分布范围是
29-56条，多数是37-56条，3倍体细胞只占2%-3%。
同一植株是不同倍性细胞的嵌合体。
染色体倍性混乱在胚乳培养中是相当普遍的。
但有些植株胚乳培养，如核桃、檀香、橙和柚等，
受精前的障碍 如花粉在柱头上不能萌发； 花粉管生长受抑制而不能进入胚珠， 其原因是花柱太长或花粉管生长缓慢。
受精后的障碍
胚和胚乳之间的不亲和,
或胚乳发育不良，杂种发育不成熟。
离体授粉
将未授粉的胚珠或子房从母体上分离下来，进行无菌培养， 并以一定的方式授以无菌花粉，使之在试管内实现受精的技术， 所以又称离体受精（fertilization in vitro）。
提高发芽率、缩短育种周期或加速良种繁育。
3. 克服多胚品种珠心胚的干扰
仙人掌、柑橘等，除正常有性胚外，还配以从珠心组织发生多个不定胚。
这些不定胚常常侵入胚囊，使合子胚发育受阻，影响了育种效率。
4. 快速繁殖良种砧木
可以产生大量的次生胚，加速良种砧木的繁殖；
而且胚胎发生技术是人工种子的重要基础。
5. 诱导胚性愈伤组织
植物组织培养技术
植物组织培养技术第一章绪论第二章植物组织培养实验室组成、仪器设备及无菌操作技术第三章植物组织培养基本原理第四章器官培养技术第五章植物胚胎培养第六章花粉及花药培养第七章细胞及原生质体培养第八章组培培养技术在中药学上的应用第一章绪论一、植物组织培养的概念1. 概念植物组织培养（Plant tissue culture）广义上是指无菌条件下，在特定的培养基上对离体的植物器官、组织、细胞和原生质体甚至包括完整植株进行培养的技术。
2.主要特征（1）在培养容器中进行；（2）无菌培养环境，排除了微生物如真菌、细菌以及害虫等的侵入；（3）各种环境因子如营养因子、激素因子以及光照、温度等物理因子处于人工控制之下，并可达到最适条件。
（4）通常打破了正常的植物发育过程和格局；（5）随着单细胞和原生质体培养技术的发展，对植物显微结构进行操作成为可能。
二、植物组织培养类型：根据不同分类的依据可以分为不同类型。
1、根据培养材料不同分为：（1）完整植株培养（Plant Culture）：对幼苗和较大植株等的培养。
（2）胚胎培养（Embryo Culture）：包括成熟胚、幼胚、子房、胚珠等的培养。
（3）器官培养（Organ Culture）：包括离体根、茎、叶、果实、种子、花器官的培养。
（4）组织培养（Tissue Culture）：如分生组织、薄壁组织、输导组织培养。
（5）细胞培养（Cell Culture）：指对单细胞或较小的细胞团进行培养。
（6）原生质体培养（Protoplast Culture）：指对去掉细胞壁后所获得的原生质体进行培养。
2、根据再生途径分为：（1）器官发生途径（Organogenesis）：直接器官发生途径：植物器官可以直接由外植体上诱导。
如茎尖培养。
间接器官发生途径：成熟细胞经过脱分化（dedifferentiation）及再分化（redifferentiation）过程而形成新的组织和器官的过程。
植物胚胎
1、胚珠（子房）的成活率及育龄 离体胚珠（子房）培养的成活率直接 影响试管受精的成功率。 胚珠（子房）离体成活率的关键是培 养基成分的筛选。
2、母体组织的影响 柱头可影响某些植物受精，应切除柱 头和花柱。 而有些植物则需要保留，更有利于离 体受精，如烟草。 3、花粉萌发和花粉管生长 离体花粉萌发率和花粉生长速度直接 影响试管受精成功率。
幼胚离体培养的生长发育方式
(1)、胚性发育(embryonal development) 幼胚接种
到培养基上以后，仍然按照在活体内的发育方式发
育，最后形成成熟胚(有时甚至可能类似种子)，然 后再按种子萌发途径出苗形成完整植株，这种途径 发育的幼胚一般一个幼胚将来就是一个植株。
(2)、早熟萌发(early mature sprou培养条件和营 养的要求都较高。 需要多种的营养和 适宜的培养条件。
影响幼胚培养成功的因素主要包括 幼胚发育时期、培养基及培养条件等。
（1）天然提取物及某些蛋白制品； 1934年银杏幼胚培养中添加银杏胚乳 有促进作用；1941年曼佗罗幼胚培养中 发现添加椰子乳能很好的促进幼胚的发 育(200-500um的幼胚)。 此外，大麦胚乳、麦芽提取物、酵母 提取物、水解酪蛋白等都能促进幼胚的 发育。
★单倍体植株的培育 ★离体授粉的需要 ★离体条件形成果实 ★花被功能研究
2、子房培养的方法
授粉前或授 粉后的子房
表面消毒
接种培养
受精后的子房仍需进行表面消毒后再 接种。而未受精子房可将花被表面消毒后， 在无菌条件下直接剥取子房接种。
子房培养只需较简单的培养基即可形 成果实，并含成熟种子。
影响因素
三、胚的培养
指在无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离 出来，置于培养基上进行离体培养的方法。
2、母体组织的影响 柱头可影响某些植物受精，应切除柱 头和花柱。 而有些植物则需要保留，更有利于离 体受精，如烟草。 3、花粉萌发和花粉管生长 离体花粉萌发率和花粉生长速度直接 影响试管受精成功率。
幼胚离体培养的生长发育方式
(1)、胚性发育(embryonal development) 幼胚接种
到培养基上以后，仍然按照在活体内的发育方式发
育，最后形成成熟胚(有时甚至可能类似种子)，然 后再按种子萌发途径出苗形成完整植株，这种途径 发育的幼胚一般一个幼胚将来就是一个植株。
(2)、早熟萌发(early mature sprou培养条件和营 养的要求都较高。 需要多种的营养和 适宜的培养条件。
影响幼胚培养成功的因素主要包括 幼胚发育时期、培养基及培养条件等。
（1）天然提取物及某些蛋白制品； 1934年银杏幼胚培养中添加银杏胚乳 有促进作用；1941年曼佗罗幼胚培养中 发现添加椰子乳能很好的促进幼胚的发 育(200-500um的幼胚)。 此外，大麦胚乳、麦芽提取物、酵母 提取物、水解酪蛋白等都能促进幼胚的 发育。
★单倍体植株的培育 ★离体授粉的需要 ★离体条件形成果实 ★花被功能研究
2、子房培养的方法
授粉前或授 粉后的子房
表面消毒
接种培养
受精后的子房仍需进行表面消毒后再 接种。而未受精子房可将花被表面消毒后， 在无菌条件下直接剥取子房接种。
子房培养只需较简单的培养基即可形 成果实，并含成熟种子。
影响因素
三、胚的培养
指在无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离 出来，置于培养基上进行离体培养的方法。
植物组织培养教程李浚明(2)
植物生长调节剂：主要以细胞分裂素和生长素的配合 使用,调节外植体的生长和分化.另外ABA、GA、CCC 等也具有不同的作用.
培养基的物理特性：以固体培养较为普遍,也有采用液 体培养,如兰花原球茎的增殖.
三、培养条件：
光照：1000-3000lx,阶段Ⅲ可增强.14-16h/天. 温度：与植物的原产地相应.一般为25±2℃.有时可
成苗数量大、速度快、结构完整.但由于对其发 生及发育过程了解不够,应用上还没有前两种广 泛.
Direct somatic embryogenesis in Brassica napus
菊花花瓣体细胞胚胎发生及体胚发育过程的扫描电镜观察
针叶松体细胞胚及体胚萌发生长
五、原球茎发生型
是兰科植物特有的一种快繁方式.指茎 尖或腋芽外植体经培养产生原球茎的繁 殖类型.原球茎可以增殖形成原球茎丛.
二、丛生芽发生型
是大多数植物快繁的主要方式.指外植体携带的 顶芽或腋芽在适宜培养环境〔含有外源细胞分裂 素〕中不断发生腋芽而呈丛生状芽,将单个芽转 入生根培养基中,诱导生根成苗的繁殖方法.
不经过愈伤阶段,后代变异小,应用普遍,也可用于 无病毒苗的生产.
三、不定芽发生型
指外植体在适宜培养基和培养条件下,形成不定芽, 后经生根培养,获得完整植株的繁殖方法.分为通过愈 伤组织产生不定芽,和直接产生不定芽两种方式.
叶表皮组织不发达的试管苗也不易移栽存活. 移栽要求打开瓶口驯化2-3天；或在瓶内添 加一些生长延缓剂如PP333、CCC等培育壮 苗.
第四节 植物快繁的商业化应用
植物快繁的重要用途是进行植物的商业 化生产.世界上快繁商业化开始于上个世纪 美国的兰花工业.我国的香蕉快繁苗占全国 组培苗的2/3.其次有甘蔗、兰花、马铃薯、 甘薯等.
培养基的物理特性：以固体培养较为普遍,也有采用液 体培养,如兰花原球茎的增殖.
三、培养条件：
光照：1000-3000lx,阶段Ⅲ可增强.14-16h/天. 温度：与植物的原产地相应.一般为25±2℃.有时可
成苗数量大、速度快、结构完整.但由于对其发 生及发育过程了解不够,应用上还没有前两种广 泛.
Direct somatic embryogenesis in Brassica napus
菊花花瓣体细胞胚胎发生及体胚发育过程的扫描电镜观察
针叶松体细胞胚及体胚萌发生长
五、原球茎发生型
是兰科植物特有的一种快繁方式.指茎 尖或腋芽外植体经培养产生原球茎的繁 殖类型.原球茎可以增殖形成原球茎丛.
二、丛生芽发生型
是大多数植物快繁的主要方式.指外植体携带的 顶芽或腋芽在适宜培养环境〔含有外源细胞分裂 素〕中不断发生腋芽而呈丛生状芽,将单个芽转 入生根培养基中,诱导生根成苗的繁殖方法.
不经过愈伤阶段,后代变异小,应用普遍,也可用于 无病毒苗的生产.
三、不定芽发生型
指外植体在适宜培养基和培养条件下,形成不定芽, 后经生根培养,获得完整植株的繁殖方法.分为通过愈 伤组织产生不定芽,和直接产生不定芽两种方式.
叶表皮组织不发达的试管苗也不易移栽存活. 移栽要求打开瓶口驯化2-3天；或在瓶内添 加一些生长延缓剂如PP333、CCC等培育壮 苗.
第四节 植物快繁的商业化应用
植物快繁的重要用途是进行植物的商业 化生产.世界上快繁商业化开始于上个世纪 美国的兰花工业.我国的香蕉快繁苗占全国 组培苗的2/3.其次有甘蔗、兰花、马铃薯、 甘薯等.
第五章植物胚胎培养和离体授粉ppt课件
3、胚在胚乳培养中的作用 （1）旺盛期的未成熟胚乳，在诱导培养基上无需 原胚的参与，就能形成愈伤组织； （2）完全成熟的胚乳，生理活动很弱，在诱导脱 分化前，必须借助于原胚的萌发，使其活化。（胚 在萌发时产生某种物质“胚因子”。外源GA3能部 分取代胚因子。）
4、胚乳再生植株的染色体倍性变异 胚乳愈伤组织及其再生植株的染色体数目常
三、离体授粉的类型
离体子房授粉
离体胚珠授粉
离体授粉还有许多问题需要研究，目前技术还不成熟。
思 考 题
1、胚培养的类型、用途和方法。 2、胚乳发育时期对愈伤组织发育的影响 。
3、胚珠和子房培养中再生植株的染色体情况。
4、为什么要研究离体授粉？离体培养的种类。
胚进行培养，使胚继续发育至成熟，使杂交育种或远缘杂交获得
成功，特别对于败育胚进行早期离体培养，在遗传和育种上均具 有重要意义。
以玉米幼胚培养为例
灭菌
授粉后10-12天的幼胚， 长约1-2.5mm， 70%酒 精雌穗表面灭菌 切去籽粒顶部，用镊子 取出幼胚。 放在固体培养基上，一 周后长出愈伤组织。
三、胚乳培养的方法 胚乳
愈伤组织 形态发生
胚状体发育成苗
柚，柑桔和枣
不定芽苗
大麦, 水稻, 玉米, 苹果, 马铃薯
四、需要说明的几个问题
1、胚乳培养绝大多数经历愈伤组织阶段，极少数
பைடு நூலகம்
从胚乳直接分化器官。
2、胚乳发育的时期对愈伤组织发育有影响
（1）发育早期的胚乳，接种不方便，愈伤组织
的诱导频率很低； （2）处于旺盛生长期的胚乳，离体条件下最易 诱导产生愈伤组织； （3）接近成熟或完全成熟的胚乳，愈伤组织诱 导频率很低。
第五章植物胚胎 培养和离体授粉
植物胚胎培养的类型及应用
植物胚胎培养的类型及应用
植物胚胎培养是一种利用植物单倍体及细胞特性进行无性繁殖的技术，利用培养基，通过植物单倍体的发芽，新体系的形成，及子代的生长发育
的过程，从而获得植物的活细胞和生物体。
植物胚胎培养有多种类型，主
要包括：单胚培养、双胚培养、植株培养、根系培养、离体培养等。
单胚培养是从植物胚胎中取出单一的胚，再在培养基中培养，进行无
性繁殖。
由于胚容易发芽，可以获得大量优良材料，因此被广泛应用于植
物新品种的繁殖。
双胚培养是从双倍体植物中取出2个胚，然后在培养基上培养，以获
得一定的杂种后代。
此方法适用于品种的建立，新基因的检测和育种研究。
植株培养是将植物全株放置在特定的培养基中，在给定的环境条件下
培养，其根、茎、叶及果实等组织都得以生长发育，形成植株，具有多种
特性。
这种培养方式主要用于检测植物耐病性、耐药性、耐抗性等的研究。
根系培养是将植物的根系摘取下来，置于特殊培养基中培养，以便取
得多型系统，加快繁殖效率。
根系培养主要用于种类的品种改良，抗病育
种等工作。
植物组织培养 复习资料
第一章绪论植物组织培养类型根据培养材料不同分为：（1）完整植株培养：对幼苗和较大植株等的培养。
（2）胚胎培养：包括成熟胚、幼胚、子房、胚珠等的培养。
（3）器官培养：包括离体根、茎、叶、果实、种子、花器官的培养。
（4）组织培养：如分生组织、薄壁组织、输导组织培养。
（5）细胞培养：指对单细胞或较小的细胞团进行培养。
（6）原生质体培养：指对去掉细胞壁后所获得的原生质体进行培养。
根据再生途径分为：（1）器官发生途径（2）体细胞胚胎发生人工种子：是指植物离体培养产生的胚状体或不定芽被包裹在含有营养和保护功能的人工胚乳和人工种皮中，从而形成能发芽出苗的颗粒体。
作为繁殖材料。
植物组织培养技术的应用：1、优质种苗的快速无性繁殖1）无性繁殖作物及不易繁殖作物的快速繁殖2）通过茎尖培养生产脱毒健康种苗2、用于植物遗传育种包括种质资源离体保存；花粉花药培养产生单倍体；胚乳培养产生三倍体；胚培养拯救杂种胚克服远缘杂交障碍；原生质体培养进行体细胞杂交；植物体细胞无性系变异诱导和筛选；用于植物基因转移操作等。
3、大规模植物细胞、组织和器官培养生产次生代谢物质4、用于植物生长发育理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等第二章植物组织培养的基本技术组培实验室：包括化学实验室或准备室、接种室以及培养室三部分，并且按顺序排列。
在化学实验室与接种室之间应留有缓冲空间。
（1）准备室：用于培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整理等工作。
冰箱、天平、高压灭菌锅、pH计、干燥箱、实验台、水槽、凉干架、药品柜、离心机、水浴锅、微波炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、移液器、各种玻璃器皿（烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等）及培养基分装用品等。
（2）接种室：植物材料的灭菌、接种以及培养物的继代转接等。
超净工作台、紫外灯、小推车、搁架、磁盘、接种工具（各种镊子、解剖刀、手术剪、普通剪刀接种针、酒精灯、手持喷雾器、细菌过滤器等）等。
第五章 植物胚胎培养技术
第五章 植物胚胎培养技术
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1
一、植物胚胎培养的概念（Embryo
Culture）
包括成熟胚培养、幼胚培养、胚珠培 养、子房培养、胚乳培养、试管受精等 类型。1904年Hanning最早成功培养 萝卜和辣根的胚。
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2
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3
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4
胚胎培养技术的应用：
A.主要用于克服远缘杂交的不 亲合;
B.促进胚的发育; C.克服胚的休眠等; D.用于胚胎学理论研究。
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5
二、植物胚胎培养技术 （一）离体胚培养：包括成熟胚及幼胚的培养。
植物胚胎发生过程： 原胚－－球形胚－－心型胚－－鱼雷胚－－ 子叶胚
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6
期球
球
形
形
胚
胚
前
心
鱼
型
雷
胚
胚
植物离体受精(In vitro fertilization)或植
物试管受精，即在离体的、受人工控制的环 境下，通过技术操作来完成植物雌雄配子体 的融合。
这一技术在60年代随着对受精作用理论研 究的深化和生物技术的发展也迅速发展起来 并取得成功。
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28
离体授粉分为：
（1）离体柱头授粉： （2）离体子房授粉： （3）离体胚珠授粉：
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显花植物花的结构图示
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19
影响胚珠培养的因素： （1）材料选择：
生理状态、基因型、发育时期。 未授粉胚珠：开花前1-6天， 授粉胚珠：授粉后1-120天不等，较晚时期有 利于胚的发育。 （2）材料的消毒：先处理再取出胚珠培养。
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一、植物胚胎培养的概念（Embryo
Culture）
包括成熟胚培养、幼胚培养、胚珠培 养、子房培养、胚乳培养、试管受精等 类型。1904年Hanning最早成功培养 萝卜和辣根的胚。
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胚胎培养技术的应用：
A.主要用于克服远缘杂交的不 亲合;
B.促进胚的发育; C.克服胚的休眠等; D.用于胚胎学理论研究。
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二、植物胚胎培养技术 （一）离体胚培养：包括成熟胚及幼胚的培养。
植物胚胎发生过程： 原胚－－球形胚－－心型胚－－鱼雷胚－－ 子叶胚
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6
期球
球
形
形
胚
胚
前
心
鱼
型
雷
胚
胚
植物离体受精(In vitro fertilization)或植
物试管受精，即在离体的、受人工控制的环 境下，通过技术操作来完成植物雌雄配子体 的融合。
这一技术在60年代随着对受精作用理论研 究的深化和生物技术的发展也迅速发展起来 并取得成功。
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离体授粉分为：
（1）离体柱头授粉： （2）离体子房授粉： （3）离体胚珠授粉：
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显花植物花的结构图示
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影响胚珠培养的因素： （1）材料选择：
生理状态、基因型、发育时期。 未授粉胚珠：开花前1-6天， 授粉胚珠：授粉后1-120天不等，较晚时期有 利于胚的发育。 （2）材料的消毒：先处理再取出胚珠培养。
植物胚胎培养的类型及应用
植物胚胎培养的类型及应用
植物胚胎培养是一种生物技术，广泛运用于植物学、植物育种、植物病理学等研究领域。
它通过从种子中分离或发芽的胚珠，通过一系列的培养和条件调整，来达到植物的再生增殖及遗传育种。
从理论上讲，植物胚胎培养可以分为胚囊培养和胚乳培养两大类型。
胚囊培养是指从种子中取出单个胚珠进行培养，以达到幼苗再生的目的。
胚乳培养则是指在植物表皮上形成的胚乳，胚乳培养包括从植物组织上分离胚乳和从种子卵珠或者籽粒上分离胚乳，它们可以被培养成子叶、幼苗等。
另外，目前还开发出一种新型的植物胚胎培养方法去接种培养，它采用特殊的培养基，以达到取代胚乳培养的目的，使的培养的效率得到提高。
植物胚胎培养的应用非常广泛，其体现在以下几个方面：
一是在植物遗传育种方面。
利用植物胚胎培养可以高效地创造突变体，即从植物中获取新型突变型株，为植物育种提供非常重要的材料。
二是在植物耐受性研究方面。
植物胚胎培养可以调控植物受环境影响的耐受性，通过改变培养基和温度等参数，以增强植物抗病性、抗逆性、适应胁迫环境等能力。
三是在生物医药方面。
利用植物胚胎培养，可以对植物的生长特性、组织形态特征等进行控制，从而获取纯度高的特定生物医药活性物质。
以上是植物胚胎培养的类型及应用情况，可以看出，植物胚胎培养是一种非常重要的技术，它在科学研究、植物育种、生物医药等方面都发挥着重要作用。
未来，植物胚胎培养将发展成更加完善广泛的技术，为科学研究和新型农业发展作出贡献。
植物的胚胎培养
表8-1 荠菜胚胎不同发育时期对营养旳需求（引自Torrey，19
胚发育时期 胚长（μm）营养要求
球形胚早期 22-60 球形胚晚期 61-80
心形胚期 81-450
不不小于40 μm旳胚对营养旳需求不详
基本培养基（大量元素①+微量元素②+维生 素③+2%蔗糖）+IAA（0.1 mg/L）+KT （0.001 mg/L）+硫胺腺嘌呤（0.001 mg/L）
植物旳胚胎培养是指对植物旳胚、子房、胚珠和胚 乳等胚胎组织进行离体培养，使其发育成完整植株 或者离体研究植物胚胎发生机理旳生物技术。
胚乳
胚 子房 胚珠
8.1 离体胚培养 8.2 植物胚珠和子房培养 8.3 离体授粉、受精与合子培养 8.4 胚乳培养
8. 1.1 离体胚培养旳概念 离体胚培养（embryo culture）指从植物种子中分
离体胚培养还可用于许多重大理论问题旳研 究，如胚胎发育过程，影响胚发育旳多种原因， 胚乳作用以及与胚发育有关旳代谢和生理变化等。
(7) 脱分化与再分化培养
以幼胚或成熟胚为外植体诱导愈伤组织，建 立胚性无性系，不但能够应用于研究体细胞胚胎 发生、分离原生质体，还可应用于植物体细胞遗 传饰变和转基因技术旳研究等。
水稻成熟胚培养
欣赏与药用（紫杉醇） 种子有休眠特征
台湾红豆杉成熟胚培养
种子有休眠特征 （种皮与未完毕 后熟旳原因）
牡丹成熟胚旳离体培养与迅速繁殖
Mature embryo culture and rapid propagation of tree peony
8.1.3 幼胚培养（immature embryo culture） 是指对发育早期胚或未成熟胚旳培养，即供给一
实验四 植物胚胎培养技术
四、实验内容：
1.黄瓜幼胚分离和培养： （1）外植体准备：选择新鲜黄瓜果实，用自来水清洗干净后拿到接 种室备用； （2）表面灭菌处理：无菌条件下采用75％的酒精棉球擦拭黄瓜果皮 进行表面灭菌； （3）幼胚分离和接种：将表面灭菌后的黄瓜用手折断（或切开）， 利用无菌的解剖刀和镊子在断面上分离幼胚接种于培养基上，每 个培养皿接种6个； （4）幼胚材料培养：接种后的幼胚置于培养室弱光或黑暗条件下培 养。培养温度25℃。2-3周后可见有幼胚发育并萌发。
接种后的幼胚通常具有以下发育方向：幼胚直接发育为成熟胚并萌发 成苗；幼胚组织脱分化形成胚性愈伤组织并发育成体胚；幼胚组织脱分 化形成愈伤组织并进一步分化出不定芽。幼胚组织脱分化后形成愈伤组 织不分化。 胚胎培养技术主要用于克服远缘杂交障碍等育种研究或直接利用幼胚
和成熟胚获得无菌材料并进行大量繁殖。
3. 化学试剂：75％乙醇，1%次氯酸钠 4. 其他用品：酒精灯，培养皿，灭菌滤纸，镊子，解剖刀等
三、实验原理
植物胚胎培养是指对不同发育阶段的胚胎组织进行培养，包括成 熟胚和幼胚培养。成熟胚培养对培养条件要求相对简单，而幼胚培养 对培养条件要求较高。
影响幼胚培养成功的主要因素包括胚发育阶段和培养基。 通常越接近成 熟的幼胚越容易培养成功，早期幼胚培养不易成功；培养基中添加适当浓 度的细胞分裂素及生长素可以促进幼胚发育；渗透压对幼胚发育具有较大 影响，多采用高渗透压；此外有机添加物等对于幼胚生长发育具有明显促 进作用。
实验四 植物胚胎培养技术
一、实验目的：
1. 学习并掌握植物胚胎培养的原理和方法；
2. 了解植物胚胎培养影响因素及其应用。
二、实验材料
1. 植物材料：黄瓜和番茄幼胚
2. 培养基：MS＋6-BA 0.5 mg/L + NAA 0.05 mg/L + 蔗糖 30g/L + 琼脂 6.5g/L(pH5.8)
第五章 植物的胚胎培养及离体
3．其它成分
氨基酸：谷氨酰胺、水解酪蛋白被广泛。 维生素类：有硫胺素、吡哆醇、烟酸、泛酸钙等。维生素对发 育初期的幼胚的培养来说是必须的。 外源激素：成熟胚生长一般不需要即可萌发，而加入一定量的 激素可显著增加培养物的生长、并利于休眠种胚的萌发。
外源生长物质和植物内源激素之间某种平衡，是维持幼胚胚性生长的关键。 如果激素浓度低，则不能促进其生长；如果激素浓度过高，将会使幼胚发生 脱分化而影响其正常发育。
大麦（Hordeum vulgare）×黑麦(Secale cereale)属间杂交，采用 这种方法有30%～40%的杂种未成熟胚可以发育成苗，而用传统的胚培 养法只有1%能成功。
De lautour等（1980）改良胚乳看护培养（图4-2）。他们把杂种离体幼 胚嵌入到由双亲之一胚乳中，然后把二者一起放在人工培养基上培养。
一、 培养方法
（一）胚乳外植体的制备 将整个果实进行表面消毒，在无菌条件下切开幼果， 取出种子，小心分离胚乳，接种在培养基上培养。
（二）胚乳愈伤组织再生植株 1．愈伤组织的诱导 少数植物可以直接从胚乳分化出器官外，大多数被子 植物的胚乳，无论是未成熟或成熟的，都首先形成愈 伤组织，然后分化植株。 2．器官发生途径 器官发生型和胚胎发生型均有。
三、胚乳培养的应用
1）三倍体幼苗和植株的获得，对于一些无性繁殖的植物具 有重要经济价值。 2）胚乳植株染色体的不稳定性，为染色体工程的研究提供 有效的途径。 3）为研究淀粉、蛋白质和脂肪等产物的生物合成及其代谢， 提供了良好的实验系统。
第三节 植物胚珠和子房培养
一、胚珠培养 胚珠培养是将授粉的子房在无菌的条件下解剖后，取出胚 珠臵于培养基培养的过程。 胚珠是种子植物的大孢子囊，是孕育雌配子体的场所，也是 种子形成的前身。 根据培养胚珠的不同目的，可将胚珠培养分为受精胚珠的培 养和未受精胚珠的培养两种形式。
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二、植物胚胎培养技术 （一）离体胚培养：包括成熟胚及幼胚的培养。
植物胚胎发生过程： 原胚－－球形胚－－心型胚－－鱼雷胚－－ 子叶胚
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球
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形
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胚
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前
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前
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1. 成熟胚培养： 2. 成熟胚为子叶期以后的胚，其在简单的培
3. 养基上即可萌发生长。对营养条件要求不严 格。
B.有机物：添加有机附加物可以促进授粉 胚珠的发育。
C.蔗糖浓度：3-12%，通常5%，高浓度 利于孤雌生殖。
（4）胎座组织的影响：促进胚的发育。
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2、子房培养： 包括授粉子房和未授粉子房培养。 1949年和1951年最早在黄瓜、番茄、菜
豆、草莓、烟草等植物上获得成功。 授粉子房培养形成成熟果实和种子；
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2007年4月28日
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第五章 植物胚胎培养技术
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一、植物胚胎培养的概念（Embryo
Culture）
包括成熟胚培养、幼胚培养、胚珠培 养、子房培养、胚乳培养、试管受精等 类型。1904年Hanning最早成功培养 萝卜和辣根的胚。
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胚胎培养技术的应用： A.主要用于克服远缘杂交的不
亲合; B.促进胚的发育; C.克服胚的休眠等; D.用于胚胎学理论研究。
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（2）渗透压的作用：
胚发育早期要求较高的的渗透压，而随 着胚的发育逐渐降低。
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（3）植物激素及生长调节剂的作用： 加入适当浓度的生长素、细胞分裂素 可以
促进胚的发育，单一激素影响发育。
（4）其他因素： pH值以5.4-5.8适宜多数幼胚。 温度25-30oC 适宜多数植物。
黑暗条件）。
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（四）试管受精：
植物离体受精(In vitro fertilization)或植
物试管受精，即在离体的、受人工控制的环 境下，通过技术操作来完成植物雌雄配子体 的融合。
这一技术在60年代随着对受精作用功。
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离体授粉分为： （1）离体柱头授粉： （2）离体子房授粉： （3）离体胚珠授粉：
影响幼胚培养成功的因素主要包括幼胚发 育时期、培养基及培养条件等。
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（1）天然提取物及某些蛋白制品；
1934年银杏幼胚培养中添加银杏胚乳有促进作用； 1941年曼佗罗幼胚培养中发现添加椰子乳能很好的促 进幼胚的发育(200-500um的幼胚)。
此外，大麦胚乳、麦芽提取物、酵母提取物、水解酪 蛋白等都能促进幼胚的发育。
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（三）胚乳培养：
胚乳在被子植物中是双 受精的产物，由极核和 雄配子结合成的三倍体 组织。
而裸子植物胚乳在受精 前形成，为单倍体。
仅40多种植物进行胚乳 培养研究，20种获得再 生植株，如猕猴桃等。 多存在混倍现象。
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胚乳培养应注意的问题： （1）确定适宜的发育时期（生长旺
盛期）； （2）严格区分胚乳和其他组织； （3）合理使用激素； （4）注意光、温条件（24-280C；
4. 主要用来繁殖不易萌发植物，或研究胚和 胚
5. 乳及子叶的关系等。
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台湾红豆杉实用成文档熟胚培养
牡丹成熟胚的离体培养与快速繁殖
Mature embryo culture and rapid propagation of tree peony
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2.幼胚培养：
幼胚（心形胚阶段）对培养条件和营养的要 求都较高。 需要多种的营养和适宜的培养条 件。
生理状态、基因型、发育时期。 未授粉胚珠：开花前1-6天， 授粉胚珠：授粉后1-120天不等，较晚时期有 利于胚的发育。 （2）材料的消毒：先处理再取出胚珠培养。
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（3）培养基：
A. 植物激素
授粉胚珠：细胞分裂素对胚发育通常有促进作用。
未授粉胚珠：外源激素不利于向日葵孤雌生殖。 矮牵牛未授粉胚珠培养不需激素，其他需要适当添 加。
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（二）胚珠和子房培养： 1、胚珠培养：
包括授粉胚珠和未授粉胚珠的培养。 1942年最早在兰花上获得成功，缩短了授 粉到成熟的时间。 1980年成功培养了未授粉的非洲菊、烟草 的胚珠，获得了单倍体植株。
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显花植物花的结构图示
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影响胚珠培养的因素： （1）材料选择：
未授粉子房培养形成小的无籽果实。
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未授粉子房培养应注意的问题： （1）材料的选择； 基因型、发育时期（接近成熟胚囊易于成功） （2）培养基：基本培养基（禾本科N6）、 植物激素（配合使用）、蔗糖浓度（3-10%） （3）培养方式：直插优于平放。
单倍体胚的来源：多种来源，可以是卵细胞、 助细胞或反足细胞等。
二、植物胚胎培养技术 （一）离体胚培养：包括成熟胚及幼胚的培养。
植物胚胎发生过程： 原胚－－球形胚－－心型胚－－鱼雷胚－－ 子叶胚
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球
球
形
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胚
胚
前
期
心
鱼
型
雷
胚
胚
前
期
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1. 成熟胚培养： 2. 成熟胚为子叶期以后的胚，其在简单的培
3. 养基上即可萌发生长。对营养条件要求不严 格。
B.有机物：添加有机附加物可以促进授粉 胚珠的发育。
C.蔗糖浓度：3-12%，通常5%，高浓度 利于孤雌生殖。
（4）胎座组织的影响：促进胚的发育。
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2、子房培养： 包括授粉子房和未授粉子房培养。 1949年和1951年最早在黄瓜、番茄、菜
豆、草莓、烟草等植物上获得成功。 授粉子房培养形成成熟果实和种子；
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2007年4月28日
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第五章 植物胚胎培养技术
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一、植物胚胎培养的概念（Embryo
Culture）
包括成熟胚培养、幼胚培养、胚珠培 养、子房培养、胚乳培养、试管受精等 类型。1904年Hanning最早成功培养 萝卜和辣根的胚。
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胚胎培养技术的应用： A.主要用于克服远缘杂交的不
亲合; B.促进胚的发育; C.克服胚的休眠等; D.用于胚胎学理论研究。
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（2）渗透压的作用：
胚发育早期要求较高的的渗透压，而随 着胚的发育逐渐降低。
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（3）植物激素及生长调节剂的作用： 加入适当浓度的生长素、细胞分裂素 可以
促进胚的发育，单一激素影响发育。
（4）其他因素： pH值以5.4-5.8适宜多数幼胚。 温度25-30oC 适宜多数植物。
黑暗条件）。
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（四）试管受精：
植物离体受精(In vitro fertilization)或植
物试管受精，即在离体的、受人工控制的环 境下，通过技术操作来完成植物雌雄配子体 的融合。
这一技术在60年代随着对受精作用功。
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离体授粉分为： （1）离体柱头授粉： （2）离体子房授粉： （3）离体胚珠授粉：
影响幼胚培养成功的因素主要包括幼胚发 育时期、培养基及培养条件等。
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（1）天然提取物及某些蛋白制品；
1934年银杏幼胚培养中添加银杏胚乳有促进作用； 1941年曼佗罗幼胚培养中发现添加椰子乳能很好的促 进幼胚的发育(200-500um的幼胚)。
此外，大麦胚乳、麦芽提取物、酵母提取物、水解酪 蛋白等都能促进幼胚的发育。
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（三）胚乳培养：
胚乳在被子植物中是双 受精的产物，由极核和 雄配子结合成的三倍体 组织。
而裸子植物胚乳在受精 前形成，为单倍体。
仅40多种植物进行胚乳 培养研究，20种获得再 生植株，如猕猴桃等。 多存在混倍现象。
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胚乳培养应注意的问题： （1）确定适宜的发育时期（生长旺
盛期）； （2）严格区分胚乳和其他组织； （3）合理使用激素； （4）注意光、温条件（24-280C；
4. 主要用来繁殖不易萌发植物，或研究胚和 胚
5. 乳及子叶的关系等。
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台湾红豆杉实用成文档熟胚培养
牡丹成熟胚的离体培养与快速繁殖
Mature embryo culture and rapid propagation of tree peony
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2.幼胚培养：
幼胚（心形胚阶段）对培养条件和营养的要 求都较高。 需要多种的营养和适宜的培养条 件。
生理状态、基因型、发育时期。 未授粉胚珠：开花前1-6天， 授粉胚珠：授粉后1-120天不等，较晚时期有 利于胚的发育。 （2）材料的消毒：先处理再取出胚珠培养。
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（3）培养基：
A. 植物激素
授粉胚珠：细胞分裂素对胚发育通常有促进作用。
未授粉胚珠：外源激素不利于向日葵孤雌生殖。 矮牵牛未授粉胚珠培养不需激素，其他需要适当添 加。
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（二）胚珠和子房培养： 1、胚珠培养：
包括授粉胚珠和未授粉胚珠的培养。 1942年最早在兰花上获得成功，缩短了授 粉到成熟的时间。 1980年成功培养了未授粉的非洲菊、烟草 的胚珠，获得了单倍体植株。
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显花植物花的结构图示
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影响胚珠培养的因素： （1）材料选择：
未授粉子房培养形成小的无籽果实。
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未授粉子房培养应注意的问题： （1）材料的选择； 基因型、发育时期（接近成熟胚囊易于成功） （2）培养基：基本培养基（禾本科N6）、 植物激素（配合使用）、蔗糖浓度（3-10%） （3）培养方式：直插优于平放。
单倍体胚的来源：多种来源，可以是卵细胞、 助细胞或反足细胞等。