2.1微生物培养技术
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
蛋白胨 10g 碳源、氮源和维 营养物质 生素
NaCl 5g 无机盐 H2O 定容至 氢元素、氧元素 1000mL
3.特殊的培养要求：pH、氧气、特殊营养物质。 (1)培养乳酸杆菌要添加维生素；培养霉菌时将pH调至酸性； 培养细菌时将pH调至中性或微碱性；培养厌氧微生物时要提 供无氧条件。 (2)自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来 自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。 (3)异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必 须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异 养型微生物也可以利用无机氮源。 (4)不是所有微生物培养基中均需加入特殊营养物质。碳源、 氮源、水分、无机盐是微生物生长必需的四大营养成分，有 些微生物可自行合成特殊营养物质，而对那些合成能力有限 或不能合成特殊营养物质的微生物（如乳酸菌），则需在培 养基中添加诸如维生素等物质。
选择培养基
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌
加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌
不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌
不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物
加入青霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞
鉴别培养基
伊红-美蓝培养基:
鉴别大肠杆菌
酚红培养基:
鉴别分解尿素的细菌
培养基
避免周围环境中微生物的污染
实验操作在酒精灯火焰
附近进行
避免已经灭菌处理的材料用具与周围 分区存放
的物品相接触
有些细菌在一定的条件下，细胞里面 形成的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁 很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的 环境有很强的抵抗力。例如，有的细 菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽 孢又小又轻，可以随风飘散。环境适 宜时，芽孢可以萌发，形成一个细菌
营养物 质
定义
能提供 碳源 碳元素
的物质
能提供 氮源 氮元素
的物质
生长因 生长不 子（特 可少的 殊营养 微量有 物质） 机物
作用
主要来源
构成生物体的物 质，异养生物的 能源物质
无机物：CO2、NaHCO3、 CaCO3 有机物：糖类、脂肪酸、
石油、花生粉饼等
合成蛋白质、核 酸以及含氮代谢 产物
无机物：N2、NH3、氨盐、 硝酸盐
制）
工业生产 分类、鉴定
一、培养基分类：
种类
特点
应用
培养、分离出特定微
用 途
选基择培养添 制 所加杂 需菌 微某生生物长物质，，生促长以进抑
生物（培养酵母菌和 霉菌，加入青霉素。 培养金黄色葡萄球菌
加入高浓度食盐等）
根据微生物的代谢
鉴别培养特点，在培养基中
基
加入某种指示剂或
化学药品
鉴别微生物（用伊红美蓝培养基鉴别大肠 杆菌，菌落呈黑色）
三、无菌技术——消毒与灭菌
（一）概念
1.消毒：使用较为温和的物理或化学方法仅杀 死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物 (不包括芽孢和孢子)。 2.灭菌：指使用强烈的理化因素杀死物体内外 所有的微生物包括芽孢和孢子。
实验操作的空间、操作者的衣着和手 清洁和消毒
用于微生物培养的器皿、接种用具和 灭菌
有机物：尿素、牛肉膏、
蛋白胨、核酸等
①酶和核酸的组
成成分
维生素、氨基酸、碱基、
②参与代谢过程 生物素等
中的酶促反应
微生物最常利用的碳源是糖类(特别是葡萄糖)，常利用的氮源 是氨盐、硝酸盐
2.牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成
培养基成分 提供的主要营养
备注
牛肉膏 5g 碳源、氮源、磷 牛肉膏、蛋白胨来源 酸盐和维生素 于动物原料，含有糖 、维生素和有机氮等
刚果红培养基:
鉴别分解纤维素的细菌
二、培养基的基本成分
1.营养成分：碳源、氮源、水、无机盐
⑴碳源 无机碳源：CO2、HCO3-
有机碳源：牛肉膏、蛋白胨等
自养微生物 异养微生物
无机氮源： NO3-、NH4＋（为硝化细菌提
⑵氮源
供N源和能源）
有机氮源： 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿 素等
（3）生长因子： 维生素、氨基酸、碱基等
2.蛋白胨
是微生物培养基的主要基础成分，蛋 白胨是由蛋白质经酶、酸、碱水解而获得 的一种胨、肽、氨基酸组成的水溶性混合 物。主要作用提供氮源,除此处，还可以 提供C源和生长因子。其来源由：动物组 织蛋白、植物组织蛋白、微生物蛋白质。
3、酵母膏
酵母膏实际上是膏状的酵母抽提物，酵母抽 提物是国家行业标准的规定名称。
专题2 微生物的培养与应用
一、基础知识： （一）微生物的结构
病毒 (噬菌体、艾滋病毒)
原核生物界 (细菌、放线菌、蓝藻)
微wk.baidu.com物
真菌界 (酵母菌、霉菌、大型真菌)
原生生物界 (草履虫、变形虫、衣藻)
特点：结构都相当简单,个体多数十分微小。通常 要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚 至没有细胞结构。
一、培养基分类：
种类
特点
应用
液体培养基 不加凝固剂
工业生产
物性理质半基固体培养
加凝固剂，如琼 脂（起凝固作用
，一般不被微生
固体培养基 物利用）
观察微生物的运动、 分类鉴定
微生物分离、鉴定、 活菌计数、菌种保藏
天然培养基
含化学成分不明 的天然物质
化学
培养基成分明确
成分 合成培养基
（用化学成分已 知的化学物质配
酵母抽提物以酵母为原料，采用自溶法或 加酶水解法工艺，经分离、脱色（或精制浓 缩、喷雾干燥）而成的，含氨基酸、肽、多 肽及酵母细胞水溶性成分的产品。包含粉状、 与膏状的产品。
酵母膏可以有食品调味与生物发酵培养基 两大类用途。在生物发酵行业应用还有一种 习惯叫法是酵母浸膏。
4.酪素
• 微生物培养基的氨基酸氮源，由酪蛋白 水解得到，常见商品名称为水解酪素或 酶解酪素。酪蛋白水解后富含21种氨基 酸，氨基酸种类齐全。因此常用于制备 培养基。
（特殊营养物质
1.牛肉膏
采用新鲜牛肉经剔除脂肪、消化、过滤、 浓缩得到的一种棕黄色至棕褐色膏状物。有牛 肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色。
牛肉膏当中含有肌酸、肌酸酐、多肽类、 氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及 维生素类的水溶性物质。广泛应用于生物制药 发酵及各种培养基的制备。
在当中它起的主要作用是补充蛋白胨以及 其它氮源的营养不足。一般的用量为0.3%～ 0.5%。
细菌、原生动物、真菌和 植物等产生的一种有繁殖 作用的生殖细胞。能直接 发育成新个体。
（二）消毒的方法：
1.煮沸消毒法：100℃煮沸5～6min； 2.巴氏消毒法：70～75℃煮30min或80℃煮 15min。巴氏消毒法消毒牛奶，可以杀死牛奶 中的微生物，并且使牛奶中的营养成分不被 破坏； 3.紫外线消毒法：接种室、接种箱或超净工 作台在使用前用紫外线照射30min，以杀死物 体表面或空气中的微生物。 4.化学药剂消毒法：酒精（擦拭双手等）、 氯气（消毒水源等）、石炭酸（苯酚）、煤 酚皂溶液等。
NaCl 5g 无机盐 H2O 定容至 氢元素、氧元素 1000mL
3.特殊的培养要求：pH、氧气、特殊营养物质。 (1)培养乳酸杆菌要添加维生素；培养霉菌时将pH调至酸性； 培养细菌时将pH调至中性或微碱性；培养厌氧微生物时要提 供无氧条件。 (2)自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来 自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。 (3)异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必 须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异 养型微生物也可以利用无机氮源。 (4)不是所有微生物培养基中均需加入特殊营养物质。碳源、 氮源、水分、无机盐是微生物生长必需的四大营养成分，有 些微生物可自行合成特殊营养物质，而对那些合成能力有限 或不能合成特殊营养物质的微生物（如乳酸菌），则需在培 养基中添加诸如维生素等物质。
选择培养基
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌
加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌
不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌
不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物
加入青霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞
鉴别培养基
伊红-美蓝培养基:
鉴别大肠杆菌
酚红培养基:
鉴别分解尿素的细菌
培养基
避免周围环境中微生物的污染
实验操作在酒精灯火焰
附近进行
避免已经灭菌处理的材料用具与周围 分区存放
的物品相接触
有些细菌在一定的条件下，细胞里面 形成的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁 很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的 环境有很强的抵抗力。例如，有的细 菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽 孢又小又轻，可以随风飘散。环境适 宜时，芽孢可以萌发，形成一个细菌
营养物 质
定义
能提供 碳源 碳元素
的物质
能提供 氮源 氮元素
的物质
生长因 生长不 子（特 可少的 殊营养 微量有 物质） 机物
作用
主要来源
构成生物体的物 质，异养生物的 能源物质
无机物：CO2、NaHCO3、 CaCO3 有机物：糖类、脂肪酸、
石油、花生粉饼等
合成蛋白质、核 酸以及含氮代谢 产物
无机物：N2、NH3、氨盐、 硝酸盐
制）
工业生产 分类、鉴定
一、培养基分类：
种类
特点
应用
培养、分离出特定微
用 途
选基择培养添 制 所加杂 需菌 微某生生物长物质，，生促长以进抑
生物（培养酵母菌和 霉菌，加入青霉素。 培养金黄色葡萄球菌
加入高浓度食盐等）
根据微生物的代谢
鉴别培养特点，在培养基中
基
加入某种指示剂或
化学药品
鉴别微生物（用伊红美蓝培养基鉴别大肠 杆菌，菌落呈黑色）
三、无菌技术——消毒与灭菌
（一）概念
1.消毒：使用较为温和的物理或化学方法仅杀 死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物 (不包括芽孢和孢子)。 2.灭菌：指使用强烈的理化因素杀死物体内外 所有的微生物包括芽孢和孢子。
实验操作的空间、操作者的衣着和手 清洁和消毒
用于微生物培养的器皿、接种用具和 灭菌
有机物：尿素、牛肉膏、
蛋白胨、核酸等
①酶和核酸的组
成成分
维生素、氨基酸、碱基、
②参与代谢过程 生物素等
中的酶促反应
微生物最常利用的碳源是糖类(特别是葡萄糖)，常利用的氮源 是氨盐、硝酸盐
2.牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成
培养基成分 提供的主要营养
备注
牛肉膏 5g 碳源、氮源、磷 牛肉膏、蛋白胨来源 酸盐和维生素 于动物原料，含有糖 、维生素和有机氮等
刚果红培养基:
鉴别分解纤维素的细菌
二、培养基的基本成分
1.营养成分：碳源、氮源、水、无机盐
⑴碳源 无机碳源：CO2、HCO3-
有机碳源：牛肉膏、蛋白胨等
自养微生物 异养微生物
无机氮源： NO3-、NH4＋（为硝化细菌提
⑵氮源
供N源和能源）
有机氮源： 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿 素等
（3）生长因子： 维生素、氨基酸、碱基等
2.蛋白胨
是微生物培养基的主要基础成分，蛋 白胨是由蛋白质经酶、酸、碱水解而获得 的一种胨、肽、氨基酸组成的水溶性混合 物。主要作用提供氮源,除此处，还可以 提供C源和生长因子。其来源由：动物组 织蛋白、植物组织蛋白、微生物蛋白质。
3、酵母膏
酵母膏实际上是膏状的酵母抽提物，酵母抽 提物是国家行业标准的规定名称。
专题2 微生物的培养与应用
一、基础知识： （一）微生物的结构
病毒 (噬菌体、艾滋病毒)
原核生物界 (细菌、放线菌、蓝藻)
微wk.baidu.com物
真菌界 (酵母菌、霉菌、大型真菌)
原生生物界 (草履虫、变形虫、衣藻)
特点：结构都相当简单,个体多数十分微小。通常 要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚 至没有细胞结构。
一、培养基分类：
种类
特点
应用
液体培养基 不加凝固剂
工业生产
物性理质半基固体培养
加凝固剂，如琼 脂（起凝固作用
，一般不被微生
固体培养基 物利用）
观察微生物的运动、 分类鉴定
微生物分离、鉴定、 活菌计数、菌种保藏
天然培养基
含化学成分不明 的天然物质
化学
培养基成分明确
成分 合成培养基
（用化学成分已 知的化学物质配
酵母抽提物以酵母为原料，采用自溶法或 加酶水解法工艺，经分离、脱色（或精制浓 缩、喷雾干燥）而成的，含氨基酸、肽、多 肽及酵母细胞水溶性成分的产品。包含粉状、 与膏状的产品。
酵母膏可以有食品调味与生物发酵培养基 两大类用途。在生物发酵行业应用还有一种 习惯叫法是酵母浸膏。
4.酪素
• 微生物培养基的氨基酸氮源，由酪蛋白 水解得到，常见商品名称为水解酪素或 酶解酪素。酪蛋白水解后富含21种氨基 酸，氨基酸种类齐全。因此常用于制备 培养基。
（特殊营养物质
1.牛肉膏
采用新鲜牛肉经剔除脂肪、消化、过滤、 浓缩得到的一种棕黄色至棕褐色膏状物。有牛 肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色。
牛肉膏当中含有肌酸、肌酸酐、多肽类、 氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及 维生素类的水溶性物质。广泛应用于生物制药 发酵及各种培养基的制备。
在当中它起的主要作用是补充蛋白胨以及 其它氮源的营养不足。一般的用量为0.3%～ 0.5%。
细菌、原生动物、真菌和 植物等产生的一种有繁殖 作用的生殖细胞。能直接 发育成新个体。
（二）消毒的方法：
1.煮沸消毒法：100℃煮沸5～6min； 2.巴氏消毒法：70～75℃煮30min或80℃煮 15min。巴氏消毒法消毒牛奶，可以杀死牛奶 中的微生物，并且使牛奶中的营养成分不被 破坏； 3.紫外线消毒法：接种室、接种箱或超净工 作台在使用前用紫外线照射30min，以杀死物 体表面或空气中的微生物。 4.化学药剂消毒法：酒精（擦拭双手等）、 氯气（消毒水源等）、石炭酸（苯酚）、煤 酚皂溶液等。