糖类与蛋白质的分析方法
实验报告：检测糖类脂肪蛋白质
一、实验目的：尝试用化学试剂检测组织中糖类、脂肪和蛋白质。
二、材料用具：
实验材料：苹果或梨匀浆，花生种子，豆浆。
用具：双面刀片，试管，试管夹，大小烧杯，小量筒，三脚架，石棉网，火柴，载玻片，显微镜等。
试剂：斐林试剂，甲液：质量浓度为，乙液：质量浓度为；苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，双缩脲试剂：A液：质量浓度为，B液质量浓度为。
三、方法步骤：
（一）还原糖的检测和观察
①向试管内注入2ml 。
（选择具体材料）
②向试管内注入1ml 斐林试剂，（甲液和乙液再注入。
）
③将试管放入盛有的大烧杯中加热,④观察试管中出现的颜色变化。
（二）脂肪的检测和观察
制作花生子叶临时装片，用显微镜观察花生子叶细胞的着色情况。
①取材：取一粒花生子叶，去掉。
②切片：用刀片在花生子叶的上平行切下若干薄片，放入盛有清水的培养皿中待用。
③制片：从培养皿中选取的切片，用毛笔蘸取放在载玻片中央，在花生子叶薄片上滴2—3滴，染色。
用吸水纸吸去染液，再滴加1—2滴溶液。
洗去浮色，用吸水纸吸去花生子叶周围的酒精，滴一滴，盖上盖玻片，制成临时装片。
④观察：在下找到花生子叶的最薄处，移到，将物象调节清楚，换上观察，视野中央被染成的脂肪颗粒清晰可见。
（三）蛋白质的检测和观察
①向试管内注入2ml （选择具体材料）。
②向试管内注入1ml双缩脲试剂，摇匀。
③向试管内注入3 - 4滴双缩脲试剂，摇匀。
④观察试管中出现的颜色变化。
四、实验结果和分析：。
检测生物组织中糖类脂肪和蛋白质的方法
检测生物组织中糖类脂肪和蛋白质的方法糖类的检测方法：1.放射免疫法：利用放射性同位素标记的抗体或反应物与目标糖类结合，通过测量放射同位素的放射性强度来定量糖类。
2.高效液相色谱法：利用高效液相色谱仪将样品中的糖类分离，并通过检测器测定糖类的浓度。
3.还原糖法：通过还原糖的特性，将还原糖与试剂反应生成有色化合物，通过测量其吸光度来定量糖类的浓度。
4.酶法：利用具有特异性的酶针对特定的糖类进行酶解反应，生成可测定的产物，通过检测产物的浓度来定量糖类。
脂肪的检测方法：1.水解法：将样品中的脂肪水解为脂肪酸和甘油，再通过酶法或化学法测定脂肪酸或甘油的浓度。
2.胆固醇氧化酶法：利用脂肪样品中的胆固醇通过酶催化反应生成可测定的产物，通过测量产物的浓度来定量脂肪。
3.紫外吸收法：利用脂肪样品中的化学结构特性，通过紫外光谱测量脂肪的吸光度来定量脂肪的含量。
4.气相色谱法：通过气相色谱仪将样品中的脂肪分离，并通过检测器测定脂肪的浓度。
蛋白质的检测方法：1.低里氏法：利用低里氏试剂与蛋白质发生反应，形成可测定的复合物，通过测量复合物的吸光度来定量蛋白质的浓度。
2.高效液相色谱法：利用高效液相色谱仪将样品中的蛋白质分离，并通过检测器测定蛋白质的浓度。
3.毛细管电泳法：将样品中的蛋白质在电场作用下在毛细管中分离，根据蛋白质的电荷、大小和形状的差异来测定蛋白质的浓度。
4.射流显色法：利用射流试剂将蛋白质样品中的蛋白胺基酸与试剂反应生成有色产物，通过测量产物的吸光度来定量蛋白质的浓度。
需要注意的是，以上方法中的每一种都有其适用范围和局限性，具体选择方法时需根据实验要求、样本特性和实验设备等因素进行合理选择。
此外，还可结合多种方法进行确认和校准以提高检测结果的准确性和可靠性。
检测生物组织中的糖类 脂肪 蛋白质 淀粉
二：检测生物组织中的脂肪
1实验原理：
脂肪 + 苏丹Ⅲ→橘黄色 或 脂肪 + 苏丹Ⅳ→红 色
2实验材料：花生种子或花生种子匀浆 3试剂：苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ
4 检测的方法步骤
方法一：
①向试管中加入2ml待测组织样液
②向试管中滴加3滴苏丹Ⅲ染液; 观察样液被染色的情况
方法二：
制作子叶临时切片;用显微镜观察子 叶细胞的着色情况课本P18—19
5实验现象
三：检测生物组织中的蛋白质
1实验原理： 蛋白质 + 双缩脲→紫色 2实验材料：豆浆 3试剂：双缩脲试剂 A液：质量浓度为0 1g/mL的NaOH溶液 B液：质量浓度为0 01g/mBiblioteka 的CuSO4溶液 4检测的方法步骤
①向试管内注入2mL待测组织样液
②向试管内注入双缩脲试剂A液1mL ; 摇匀
检测生物组织中的糖类 脂肪和 蛋白质
如何检测定性
某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机 化合物产生特定的颜色反应颜色反应
检测物质 药品
现象
还原性糖 斐林试剂 浅蓝色—棕色—砖红色沉淀
脂肪
蛋白质 淀粉
苏丹III 苏丹IV 双缩尿
碘液
橘黄色 红色 无色—紫色
蓝色
一：检测生物组织中的还原性糖类 1实验原理： 还原糖 + 斐林试剂→砖红色沉淀
2实验材料：苹果汁或梨匀浆
3试剂：斐林试剂 甲液：质量浓度为0 1g/mL的NaOH溶液 乙液：质量浓度为0 05g/mL的CuSO4溶 液
4 检测的方法步骤
①向试管内注入2mL待测组织样液
②向试管内注入1mL斐林试剂甲乙液等量混合 均匀后再注入 ③将试管放入盛有50~65℃温水的大烧杯中加热约 2min ④观察试管中出现的颜色变化 5实验现象
实验检测生物组织中的糖类、脂质和蛋白质
1组成细胞的化合物无机物有机物水无机盐糖类脂质蛋白质核酸脂肪知识回顾斐林试剂苏丹橘黄色红色砖红色沉淀紫色苏丹双缩脲试剂鉴定物质试剂实验现象还原性糖脂肪蛋白质淀粉碘蓝色某些能够使生物组织中的有关产生预习提问
知识回顾 水 无机物 组成细胞 的化合物 有机物 无机盐 糖类 脂质 脂肪 蛋白质 核酸
预习提问：1、实验原理？
●请确定具体的检测实验材料
鉴定物质 还原性糖 脂肪 蛋白质 淀粉 材料
梨匀浆
花生种子匀浆
豆浆 马铃薯匀浆
●请熟悉检测步骤（注：1滴管是1 mL） 一、淀粉的检测和观察(注：淀粉易沉淀，使用前请先混匀） 第一步：向试管内注入2 mL待测组织样液——马铃薯匀浆。 第二步：向试管内滴加2滴碘液，观察颜色变化。 二、还原糖的检测和观察 第一步：向试管内注入2 mL待测组织样液——梨匀浆。 第二步: 向试管内注入1 ml斐林试剂(甲乙液等量混合均匀后再注入) 第三步： 将试管放入盛有50～65℃温水的大烧杯中加热约2 min。 第四步： 观察试管中出现的颜色变化。 三、蛋白质的检测和观察 第一步：向试管内注入2 mL待测组织样液——豆浆。 第二步：向试管内注入双缩脲试剂A液1 mL，摇匀。 第三步：向试管内注入双缩脲试剂B液4滴，边滴边摇。 第四步：观察试管中出现的颜色变化。 四、脂肪的检测和观察 方法一： 第一步：向试管内注入2 mL待测组织样液——花生种子匀浆。 第二步：向试管中滴加3滴苏丹Ⅲ染液，观察样液被染色的情况。
√
√
3、安徽阜阳劣质奶粉事件震惊全国，引起世
人注目。鉴定脱脂淡奶粉是否为伪劣产品，
肯定不需要用到的化学试剂是( A.斐林试剂 C.双缩脲试剂
B
)
B. 红墨水 D.苏丹Ⅳ染液
拓展提高：学案P17
检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质
检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质
要检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质，可以使用以下
几种常见的实验方法：
1. 糖类检测：
- 阳离子交换色谱法（Ion exchange chromatography）：根据糖类的荷电性质，在具有阳离子交换基团的色谱柱上
进行分离和测定。
- 蒽酮法（Anthrone method）：利用蒽酮与糖类形成彩
色产物，测定其吸光度，从而定量分析糖类含量。
2. 脂肪检测：
- 总脂肪测定法（Total lipid assay）：通过提取组织样品
中的脂肪，使用溶剂进行提取，然后通过酶解、酶判定、
光度法或色谱法测定脂肪含量。
- 中性脂肪测定法（Neutral lipid assay）：使用溶剂提取组织中的中性脂肪，然后使用酶判定、高效液相色谱法等进行测定。
3. 蛋白质检测：
- 比色法：如布拉德福酮碱试剂法（Bradford assay）、双酮化合物法（Biuret method）等，根据蛋白质与特定试剂形成复合物，通过光吸收法或比色法测定颜色变化，从而定量分析蛋白质含量。
- 生物素-链霉亲和素（Biotin-streptavidin assay）：通过生物素与链霉亲和素的特异性结合，配合荧光标记物或酶标记物，测定蛋白质含量。
总的来说，具体的方法选择要根据实验目的、仪器设备和实验条件来决定。
另外，还可以结合一些生物学技术，如免疫印迹法、质谱分析和核磁共振等，对糖类、脂肪和蛋白质进行定量和定性分析。
蛋白质与糖类的识别和结合研究
蛋白质与糖类的识别和结合研究蛋白质和糖类在生命科学领域中扮演着重要的角色。
它们之间的识别和结合研究，是研究细胞信号传递、疾病发生和药物研发的关键。
本篇文章将从蛋白质和糖类的性质、识别和结合机制等多个方面展开阐述。
一、蛋白质和糖类的性质1. 蛋白质的性质蛋白质是生命机体中最为基本的一种大分子有机物，具有很强的生物学功能。
蛋白质分子由数十个氨基酸分子组成，形成了不同的高维空间构型。
蛋白质的生物活性与其分子构型紧密相关。
例如，青霉素是一种青霉菌产生的抗生素类药物，它通过与细菌的蛋白质结合，阻止细菌合成细胞壁，从而起到杀菌的作用。
2. 糖类的性质糖类是人体内最基本的能量源，同时也参与了多种生物学过程。
糖类分子中含有带负电的羟基基团和不带电的甲基基团，在水溶液中呈现出很强的极性。
糖类分子与蛋白质的识别与结合机制主要依赖于其部分极性所带来的电荷相互作用。
二、蛋白质和糖类的识别机制1. 糖基化修饰增加糖类与蛋白质的亲和性糖基化修饰是指糖类分子通过酶促反应与蛋白质结合的化学修饰。
糖基化修饰可以增加蛋白质和糖类之间的亲和性，形成稳定的糖蛋白复合物。
糖基化修饰还能够调节细胞内的信号传递、增加蛋白质保护效应和改变蛋白质的活性。
2. 糖类的特异性结合决定了蛋白质和糖类的识别能力糖类分子的结构非常复杂，不同的糖类之间的结构也存在着很大的差异，因此，糖类分子与蛋白质的识别和结合是非常特异的。
具体来说，通过糖类分子上的氢键和范德瓦尔力相互作用，以及特定氨基酸侧链的配合，蛋白质会与不同的糖类呈现出非常特异性的结合方式。
3. 糖类的空间分布和配体结合位点的多样性决定了识别机制的多样性糖蛋白复合物的空间构型非常复杂，不同的组分在空间分布上存在着非常细微的差异。
同时，糖类分子在复合物中的结构和位置也相对复杂。
由此可见，在蛋白质和糖类的识别和结合机制中，空间分布和配体结合位点的多样性决定了其识别机制的多样性。
三、糖蛋白复合物在疾病发生和药物研发中的作用1. 糖蛋白复合物和癌症的关系糖蛋白复合物与肿瘤形成有关，许多肿瘤细胞表面的糖蛋白复合物与正常细胞表面的差异很大。
实验检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质ppt课件
２、安徽阜阳劣质奶粉事件震惊全国，引起
世人注目。鉴定脱脂淡奶粉是否为伪劣产品，
肯定不需要用到的化学试剂是(
B)
A.斐林试剂
B. 红墨水
C.双缩脲试剂
D.苏丹Ⅳ染液
为 深 入 学 习 习近平 新时代 中国特 色社会 主义思 想和党 的十九 大精神 ,贯彻全 国教育 大会精 神,充分 发挥中 小学图 书室育 人功能
2、配制斐林试剂：
→ 甲液
0.1g/mLNaOH
+
乙液 0.05g/mLCuSO4
2
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3、材料用具：
如果植物组织中积累的成分是淀粉 和蔗糖，那就无法检测到还原性糖。 有些植物尽管含有较多的还原性糖， 但如果本身含有叶绿素或其他色素， 这些色素就会影响实验现象起到遮 盖作用。这些都不适宜做实验材料。
将量取的蛋清液和双缩脲试 剂A液分别倒入到试管中，震 荡均匀，此时可见试管内仍 然是透明的。
再向试管中加入4滴双缩脲 试剂B液。
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震荡均匀，此时可见试管内溶液呈紫色，这就表明蛋清 液中含有蛋白质。
可看到溶液呈橘黄色，则 证明样液中含脂肪。
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方法二：制作切片
实验材料
芝麻，脂肪含量丰富，但 种子颗粒太小，不利于切 片制作。 玉米，脂肪含量较少，种 子颗粒也较小，因此也不 适合做实验材料。
检测生物组织中的糖类、脂肪、蛋白质(教学案]
![检测生物组织中的糖类、脂肪、蛋白质(教学案]](https://img.taocdn.com/s3/m/aef6ef3517fc700abb68a98271fe910ef02dae55.png)
检测生物组织中的糖类、脂肪、蛋白质(教学案]
1. 糖类检测：可以采用苏丹红反应法和不定量蓝色磷钼酸法。
苏丹红反应法基于苏丹红与糖类产生的红色复合物，颜色深浅程度可以反映糖类的含量；不定量蓝色磷钼酸法则是利用蓝色磷钼酸与糖类生成蓝色复合物，再根据颜色深浅程度进行糖含量的定量。
2. 脂肪检测：可以采用苏丹三染色法和乙醇提取法。
苏丹三染色法是将组织切片染色，然后进行显微镜观察，染色深的部位表示脂肪含量高；乙醇提取法是用乙醇将脂肪溶解，然后通过温度恒定、有机溶剂飘移法进行脂肪量的测定。
3. 蛋白质检测：可以采用比色法和光度法。
比色法根据蛋白质与某种化学试剂生成的色素深度，来反映蛋白质的含量；光度法则是利用蛋白质与特定光源产生的光学反应，通过光密度来测定蛋白质含量。
需要注意的是，具体选择哪种检测方法要根据样本的类型和检测的目的确定。
同时，检测前要进行适当的样本处理和前处理，以保证检测的准确性和重复性。
检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质实验报告
检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质实验报告实验报告：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质一、实验目的本实验旨在通过生化实验的方法，检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质，以了解这些物质在生物组织中的分布和含量，为生物组织代谢研究提供基础数据。
二、实验原理1.糖类检测：糖类物质在生物组织中广泛存在，包括单糖、低聚糖和多糖。
其中，还原性糖如葡萄糖、果糖等可与斐林试剂发生氧化还原反应，产生砖红色沉淀。
非还原性糖如淀粉、纤维素等则不能与斐林试剂反应。
2.脂肪检测：脂肪是生物组织中重要的储能物质。
在酸性条件下，脂肪可被脂酶分解为脂肪酸和甘油，脂肪酸可与热硫酸反应生成硫酸酯，产生绿色荧光。
3.蛋白质检测：蛋白质是生物组织中功能多样性的基础。
在碱性条件下，蛋白质可与双缩脲试剂发生紫色反应。
三、实验步骤1.准备试剂和样品：分别准备斐林试剂、脂酶、硫酸、双缩脲试剂；选取具有代表性的生物组织样品，如动物肝脏、植物叶片等。
2.制备样品溶液：将生物组织样品研碎，加入适量溶剂制成样品溶液。
3.检测糖类：取样品溶液适量，加入斐林试剂，加热至沸腾，观察颜色变化。
4.检测脂肪：取样品溶液适量，加入脂酶，在酸性条件下加热一定时间，加入热硫酸，观察颜色变化。
5.检测蛋白质：取样品溶液适量，加入双缩脲试剂，搅拌均匀，观察颜色变化。
四、实验结果与分析1.实验结果：通过上述实验步骤，我们得到了生物组织中糖类、脂肪和蛋白质的检测结果。
具体数据如下：2.结果分析：从实验结果可以看出，该生物组织中糖类含量较高，这可能与该生物组织的能量需求有关；脂肪含量相对较低，这可能与该组织的生理功能有关；蛋白质含量适中，表明该组织具备一定程度的生物活性。
此外，通过对不同物质含量的比较分析，我们可以初步推断该生物组织的代谢类型和生理功能。
五、结论本实验通过生化实验方法成功地检测了生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质含量，得到了较为可靠的实验数据。
这些数据为进一步研究生物组织的代谢过程提供了基础资料。
食品中营养成分的测定方法
食品中营养成分的测定方法食品是人体能量和营养的重要来源，而食品中各种营养物质的含量也是不同的。
对于食品厂商和消费者而言，了解食品的营养成分含量显得尤为重要。
而为了准确地测定食品中营养成分的含量，科学家们开发出了许多测定方法。
本文将对食品中营养成分的常见测定方法进行概述。
一、蛋白质测定方法蛋白质是人体内组成骨骼肌、血液、器官等组织的重要成分。
而在食品中，蛋白质含量的测定对于判断食品的质量和营养价值具有重要的意义。
目前，常见的蛋白质测定方法有比色法、滴定法等。
其中，比色法是一种基于标准曲线的颜色衡量法，对于测定多种蛋白质都有一定的适用性。
而滴定法则是利用酸化剂消解食品中的蛋白质，并通过滴定来测定溶液中氨基酸的含量，从而计算出样品中蛋白质的含量。
这些蛋白质测定方法均具有一定的优缺点，在实际中应根据具体情况进行选择和使用。
二、糖类测定方法糖类是人体内的能量来源之一，也是许多食品的主要营养成分之一。
测定食品中的糖类含量对于判断食品的品质和营养价值同样十分重要。
常见的糖类测定方法包括显色法、分光光度法、色谱法等。
其中，显色法是一种基于还原糖物质还原性的测定方法，通常利用费林试剂、巴氏试剂等显色试剂对样品进行反应。
而分光光度法与色谱法则是通过特定光谱特征或色谱图的峰面积来确定样品中糖类的含量，这些方法相对来说测定结果更为准确和可靠。
三、脂肪测定方法脂肪是人体内储存的能量来源之一，同时也是食品中的重要能量和营养来源。
在食品测定中，糖类与脂肪测定方法的原理类似。
常见的脂肪测定方法包括电感耦合等离子体发射光谱法、红外光谱法等。
电感耦合等离子体发射光谱法是一种适用于测定多种元素含量的分析方法，可以通过检测食品样品中的有机元素含量来测定其中脂肪的含量。
而红外光谱法则是利用样品中吸收红外光的特定特征来测定样品中的化学成分含量，其同样对脂肪含量的测定具有一定的优势。
综上所述，食品中营养成分的测定方法涉及多个方面，基于不同的测定原理以及具体的实验要求，科学家们发展出了一系列测定方法，这些方法大大提高了我们对食品质量和营养价值的认识，为工业和消费者提供了科学、可靠的数据支撑。
糖类与蛋白质的检测
4、蛋白质检测实验中需要注意什么？
先加入2mL双缩脲试剂A，再加入5滴双缩脲试剂B； 双缩脲试剂B不能过量，否则会和双缩脲试剂A反应，使溶液变蓝，干扰观察。
5、取上清液时，是否能将上清液全部用完？
不能，需要留下部分上清液与被检测溶液进行对比
检测 还原糖 蛋白质
蓝色
紫色 红 黄 色 沉 淀 Cu2O
预测
＋ ＋
＋ “+”表示有，“—”表示无；
实验步骤
第一步： 将所有的固体材料分别做成匀浆 第二步：分别对所有样本进行检测
淀粉检测： 用试管取2 mL马铃薯匀浆上清液，加入5滴碘-碘化
钾溶液，摇匀后与原上清液比较，观察颜色变化， 并记录。
－
+
-
蓝色
实验步骤
第一步： 将所有的固体材料分别做成匀浆 第二步：分别对所有样本进行检测
糖类与蛋白质检测
碘—碘化钾试剂检测淀粉；
本尼迪特试剂检测还原糖；
葡萄糖、果糖、麦芽糖
双缩脲试剂检测蛋白质；
指示剂： 碘—碘化钾溶液、本尼迪特试剂、 双缩脲试剂A、双缩脲试剂B
溶液：淀粉溶液、葡萄糖溶液、蛋白质溶液
淀粉溶液+ 碘—碘化钾溶液 蛋白质溶液+先加双缩脲A，再加双缩脲B 葡萄糖溶液+本尼迪特试剂 热水浴2~3min
淀粉 油脂
试剂
本尼迪特试剂 双缩脲试剂 碘—碘化钾溶液
苏丹Ⅲ染液
颜色
红黄色沉淀 紫色 蓝色 橙黄色
练习
1、（多选）在生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定实验中，对实验材料的选
择叙述中，正确的是（ BCD ）
A、甘蔗茎的薄壁组织、甜菜的块根等，都含有较多的糖且接近于白色，因此可 以用于进行还原糖的鉴定 蔗糖是非还原糖 B、花生种子含脂肪多且子叶肥厚，是用于脂肪鉴定的理想材料 √ C、大豆种子蛋白质含量高，是进行蛋白质鉴定的理想植物组织材料 √ D、鸡蛋清含蛋白质多，是进行蛋白质鉴定的动物材料 √
检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质【范本模板】
实验一检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质一．实验目的：尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质,阐明实验原理—颜色反应，识记和区分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色，初步掌握鉴定上述化合物的基本方法，学会描述实验现象，掌握NaOH溶液和CuSO4溶液的使用方法。
二．实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。
1．生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖.前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；蔗糖分子内没有,为非还原糖.实验中所用的斐林试剂,只能鉴定生物组织中可溶性还原糖，而不能鉴定可溶性非还原糖。
可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用,可生成砖红色的Cu 2O沉淀。
如:葡萄糖+ 2Cu2+ + 4OH—加热葡萄糖酸+ Cu 2O↓(砖红色）+ H 2O 即Cu 2+被还原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸.用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色沉淀淀粉遇碘变蓝色(直链)或紫（红）色(支链）。
2．脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。
它是构成人体组织的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。
在化学组成上，脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。
脂类的主要功能是氧化供能。
脂肪主要存积于脂肪组织中,并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。
在病理检验中,脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。
脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ,苏丹黑及油红O等。
脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。
经研究认为组织中脂质在液态或半液态时，对苏丹染料着色效果最好。
根据这一原理，适当提高温度（37℃—60℃）对组织切片染色效果是有好处的.脂类染色，用冰冻或石蜡切片，以水溶性封固剂封固，如甘油、明胶和阿拉伯糖胶等。
食品中化学成分的分析方法
食品中化学成分的分析方法食品是人们日常生活中必不可少的一部分，然而，随着全球化进程的加快，食品供应链的复杂性和多样性日益增加，使得人们对食品中含有哪些成分以及这些成分对人体健康的影响越来越关注。
因此，食品中化学成分的分析方法也日益成为研究和监控食品质量、安全的重要手段。
食品中常见的化学成分主要包括糖类、蛋白质、脂质、维生素、矿物质等，下面就这些常见的成分分别介绍其分析方法。
1. 糖类分析方法糖类是食品中最常见的成分之一，包括单糖、双糖、多糖等，其分析方法主要有以下几种：(1) 直接光度法：利用糖类溶液的比色反应，适用于测定浓度较高的单糖。
(2) 高效液相色谱法：利用高效液相色谱仪进行分离和检测，适用于测定各种糖类。
(3) 还原糖法：通过检测还原糖的含量来间接测定糖类浓度，适用于测定浓度较低的单糖和双糖。
(4) 显色光度法：利用显色剂与糖类发生显色反应，测定显色程度来测定糖类的含量。
2. 蛋白质分析方法蛋白质是组成机体各种组织和器官的基本结构单位，其分析方法主要有以下几种：(1) 生物素分析法：利用生物素标记蛋白质，通过检测生物素含量来测定蛋白质的含量。
(2) 紫外吸收法：利用蛋白质中肽键的紫外吸收特性测定蛋白质的含量。
(3) 氨基酸分析法：通过分离和检测蛋白质降解产生的氨基酸来测定蛋白质的含量。
(4) 凝胶电泳法：通过蛋白质在凝胶中的迁移速率和电荷大小来测定蛋白质的含量和类型。
3. 脂质分析方法脂质是身体的重要组成部分，但也是罹患心血管疾病、肥胖等疾病的危险因素之一，因此其分析方法也很重要，主要有以下几种：(1) 水解法：利用化学酶或生物酶水解脂质成游离脂肪酸，测定游离脂肪酸的含量来间接测定脂质的含量。
(2) 气相色谱法：通过气相色谱仪检测脂质分子的蒸汽压和挥发性来测定脂质的含量。
(3) 磷酸化法：利用酶催化磷酸化脂质，检测其在紫外光下吸收的特性来测定脂质的含量。
(4) 红外光谱法：利用不同的红外光谱带来检测或测定脂质分子的含量和类型。
检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质
约2min50~65℃水浴加热三、检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质1.实验原理：某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。
①还原糖+斐林试剂———————>砖红色沉淀②淀粉+碘液→蓝色③脂肪+苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ）→橘黄色（或红色） ④蛋白质+双缩脲试剂→紫色2.实验步骤及实验现象：①还原性糖鉴定：取材→制备组织样液→加斐林试剂1ml →水浴加热煮沸→显色（浅蓝色→棕色→砖红色沉淀） ②淀粉鉴定：取材→制备组织样液（马铃薯匀浆）→滴加碘液→摇匀后变成蓝色③脂肪鉴定：方法一：取材与制备组织样液（花生种子匀浆）→滴加苏丹Ⅲ（苏丹Ⅳ）→摇匀后变成橘黄色（红色） 方法二：取材、切片、制片：花生种子浸泡，将子叶切成薄片→滴加苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ）→用50%酒精洗去浮色→镜检（看到橘黄色或红色的脂肪颗粒）④蛋白质鉴定：取材→制备组织样液（豆浆或蛋清稀释液）→加双缩脲试剂A 液1ml →摇匀→加双缩脲试剂B 液4滴→观察颜色（紫色）3.实验注意事项：（1）从植物器官中提取糖类、脂肪、蛋白质的方法：设法使细胞破碎（如研磨、挤压或切割等），再将这些物质提取出来。
（2）禾谷类的果实、种子中含淀粉较多；甘蔗的茎和甜菜的根含蔗糖较多；花生、芝麻的种子中含脂质较多；大豆种子中含蛋白质较多。
（3）显色反应材料选择时要注意：①材料本身应浅色，以免对实验结果的观察产生干扰； ②材料应含有丰富的相关物质，使现象更显著。
（4）还原性糖鉴定①常见的还原糖有葡萄糖、果糖、半乳糖、麦芽糖、果糖、乳糖等。
②实验材料要选含还原性糖量高，白色或近于白色的组织，如苹果和梨的匀浆。
③不能选用甜菜、甘蔗，因为它们所含的蔗糖属于非还原性糖。
④马铃薯含淀粉较多，也不能作为该实验材料。
⑤西瓜、血液、绿色叶片等材料本身的颜色会对实验结果造成干扰，也不能作为该实验材料。
⑥斐林试剂实际上是Cu(OH)2的悬液，不稳定，如果长时间放置，Cu(OH)2悬液会变成Cu(OH)2沉淀，不易和还原糖发生反应。
检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质(实验课)
第3讲检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质(实验课)1．还原糖的检测2．脂肪的检测(1)方法一：花生种子匀浆＋3滴苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ)染液→橘黄色(或红色)。
(2)方法二：3．蛋白质的检测1．三类有机物检测在操作步骤上的“三个唯一”(1)唯一需要加热——还原糖检测，且必须水浴加热，不能用酒精灯直接加热。
若不加热，则无砖红色沉淀出现。
(2)唯一需要使用显微镜——脂肪检测。
(3)唯一使用酒精——脂肪的鉴定，实验用体积分数为50%的酒精洗去浮色。
2．斐林试剂与双缩脲试剂的“一同、三不同”3．检测生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质实验的四个注意事项1.料均较合理的一组是()A．韭菜叶、豆浆、大豆、洋葱鳞片叶内表皮B．梨、鸡蛋清、花生子叶、人口腔上皮细胞C．苹果、花生子叶、大豆、洋葱鳞片叶外表皮D．番茄、豆浆、花生子叶、人口腔上皮细胞解析：选B由于韭菜叶和番茄都具有颜色，会干扰实验效果，不能用于鉴定可溶性还原糖；花生子叶含脂肪较多而大豆和鸡蛋清含蛋白质较多。
2．(2016·海南高考)下列实验中，加入试剂后不能产生特定颜色的是()A．取成熟香蕉匀浆，用斐林试剂检测还原糖B．黑暗中生长24 h的天竺葵叶片，用碘液检测淀粉C．玉米根尖经甲基绿染色后，在显微镜下观察细胞核D．花生子叶经苏丹Ⅲ染色后，在显微镜下观察脂肪颗粒解析：选B成熟香蕉中含有较多葡萄糖，用斐林试剂检测会出现砖红色沉淀；黑暗中生长24 h的天竺葵叶片，淀粉被消耗，加入碘液不产生蓝色；玉米根尖经甲基绿染色后，在显微镜下观察细胞核呈绿色；花生子叶经苏丹Ⅲ染色后，在显微镜下观察脂肪颗粒呈橘黄色。
3.)①蛋白质鉴定时，将NaOH溶液和CuSO4溶液混合后再加入样液②还原糖鉴定时，进行水浴加热③淀粉鉴定时，直接将碘液滴加到淀粉样液中④鉴定酵母菌是否产生酒精，直接将重铬酸钾加入到酵母菌培养液的滤液中A．①④B．①③C．②③D．③④解析：选A蛋白质鉴定时，先向样液中加双缩脲试剂A液(NaOH溶液)，摇匀后再加双缩脲试剂B液(CuSO4溶液)；用重铬酸钾鉴定酒精时需要在酸性条件下进行。
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糖类与蛋白质的分析方法实验一、糖的呈色反应和定性鉴定目的要求(1) 学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法。
(2) 了解鉴定还原糖的方法及其原理。
Ⅰ. Molish反应——α-萘酚反应实验原理糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍生物与α-萘酚作用形成紫红色复合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称紫环反应。
自由存在和结合存在的糖均呈阳性反应。
此外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸以及丙酮、甲酸和乳酸均呈颜色近似的阳性反应。
因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在。
试剂Molish试剂：取5g α-萘酚用95%乙醇溶解至100mL，临用前配制，棕色瓶保存。
1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。
操作方法取试管，编号，分别加入各待测糖溶液1 mL，然后加两滴Molish试剂，摇匀。
倾斜试管，沿管壁小心加入约1mL浓硫酸，切勿摇动，小心竖直后仔细观察两层液面交界处的颜色变化。
用水代替糖溶液，重复一遍，观察结果。
Ⅱ. 蒽酮反应实验原理糖经浓酸作用后生成的糠醛及其衍生物与蒽酮（10-酮-9，10-二氢蒽）作用生成蓝绿色复合物。
试剂蒽酮试剂：取0.2g 蒽酮溶于100mL 浓硫酸中，当日配制。
待测糖溶液，同Molish试验。
操作方法取试管，编号，均加入1mL蒽酮溶液，再向各管滴加2 ~ 3滴待测糖溶液，充分混匀，观察各管颜色变化并记录。
Ⅲ. 酮糖的Seliwanoff反应实验原理该反应是鉴定酮糖的特殊反应。
酮糖在酸的作用下较醛糖更易生成羟甲基糠醛。
后者与间苯二酚作用生成鲜红色复合物，反应仅需20-30秒。
醛糖在浓度较高时或长时间煮沸，才产生微弱的阳性反应。
试剂Sediwanoff试剂：0.5g 间苯二酚溶于1升盐酸（H2O∶HCl=2∶1）(V/V)中，临用前配制。
1%葡萄糖；1%蔗糖；1%果糖。
操作方法取试管，编号，各加入Sediwanoff试剂1mL，再依次分别加入待测糖溶液各4滴，混匀，同时放入沸水浴中，比较各管颜色的变化过程。
Ⅳ. Fehling试验实验原理费林试剂是含有硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液。
硫酸铜与碱溶液混合加热，则生成黑色的氧化铜沉淀。
若同时有还原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。
为防止铜离子和碱反应生成氢氧化铜或碱性碳酸铜沉淀，Fehlin试剂中加入酒石酸钾钠，它与Cu2＋形成的酒石酸钾钠络合铜离子是可溶性的络离子，该反应是可逆的。
平衡后溶液内保持一定浓度的氢氧化铜。
费林试剂是一种弱的氧化剂，它不于酮和芳香醛发生反应。
试剂试剂甲：称取34.5g硫酸铜溶于500mL蒸馏水中。
试剂乙：称取125g NaOH 137g酒石酸钾钠溶于500mL蒸馏水中，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。
临用前，将试剂甲和试剂乙等量混合。
1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。
操作方法取试管，编号，各加入Fehlin试剂甲和乙1mL。
摇匀后，分别加入4滴待测糖溶液，置沸水浴中加热2 ~ 3min，取出冷却，观察沉淀和颜色变化。
Ⅴ. Benedict试验实验原理Benedict试剂是Fehling试剂的改良。
Benedict试剂利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂，其碱性较Fehling试剂弱，灵敏度高，干扰因素少。
试剂Benedict试剂：将170g 柠檬酸钠和100g 无水碳酸钠溶于800mL水中；另将17g硫酸铜溶于100mL热水中。
将硫酸铜溶液缓缓倾入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅，最后定容至1000mL。
该试剂可长期使用。
1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。
操作方法取试管，编号，分别加入2mL Benedict试剂和4滴待测糖溶液，沸水浴中加热5分钟，取出后冷却，观察各管中的颜色变化。
Ⅵ. Barfoed试验实验原理在酸性溶液中，单糖和还原二糖的还原速度有明显差异。
Barfoed试剂为弱酸性。
单糖在Barfoed试剂的作用下能将Cu2+还原成砖红色的氧化亚铜，时间约为3分钟，而还原二糖则需20分钟左右。
所以，该反应可用于区别单糖和还原二糖。
当加热时间过长，非还原性二糖经水解后也能呈现阳性反应。
试剂Barfoed试剂：16.7g 乙酸铜溶于近200mL水中，加1.5mL冰醋酸，定容至250mL即可。
1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。
操作方法取试管，编号，分别加入2mL Barfoed试剂和2 ~ 3滴待测糖溶液，煮沸2-3分钟，放置20分钟以上，比较各管的颜色变化。
注意事项（1）Molish反应非常灵敏，0.001％葡萄糖和0.0001％蔗糖即能呈现阳性反应。
因此，不可在样品中混入纸屑等杂物。
当果糖浓度过高时，由于浓硫酸对它的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈紫色，需稀释后再做。
（2）果糖与Seliwanoff试剂反应非常迅速，呈鲜红色，而葡萄糖所需时间较长，且只能产生黄色至淡黄色。
戊糖亦与Seliwanoff试剂反应，戊糖经酸脱水生成糠醛，与间苯二酚缩合，生成绿色至蓝色产物。
（3）酮基本身没有还原性，只有在变成烯醇式后，才显示还原作用。
（4）糖的还原作用生成氧化亚铜沉淀的颜色决定于颗粒的大小，Cu2O颗粒的大小又决定于反应速度。
反应速度快时，生成的Cu2O颗粒较小，呈黄绿色；反应速度慢时，生成的Cu2O颗粒较大，呈红色。
溶液中还原糖的浓度可以从生成沉淀的多少来估计，而不能依据沉淀的颜色来判断。
（5）Barfoed 反应产生的Cu2O沉淀聚集在试管底部，溶液仍为深蓝色。
应注意观察试管底部红色的出现。
思考题1. 列表总结和比较本实验六种颜色反应的原理和应用。
2. 运用本实验的方法，设计一个鉴定未知糖的方案。
实验二、总糖和还原糖的测定（一）──费林试剂热滴定法目的要求掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。
实验原理还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。
在碱性溶液中，还原糖能将Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化成糖酸及其他产物。
糖类的这种性质常被用于糖的定性和定量测定。
本实验采用费林试剂热滴定法。
费林试剂由甲、乙两种溶液组成。
甲液含硫酸铜和亚甲基蓝（氧化还原指示剂）；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
将一定量的甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH + CuSO4 = Cu(OH)2+ Na2SO4在碱性溶液中，所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的络合物酒石酸钾钠铜：在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，其反应如下：反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。
Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2O Cu2O + K4Fe(CN)6 +H2OK2Cu2Fe(CN)6 + 2KOH滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。
因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。
根据样液量可计算出还原糖含量。
试剂和器材一、试剂费林试剂：甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000mL。
乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g NaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000mL，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。
0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入1000mL容量瓶中，加入5mL浓HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000mL。
6mol/L HCl：取250mL浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500mL。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100mL蒸馏水中。
6mol/L NaOH：称取120gNaOH溶于500mL蒸馏水中。
0.1%酚酞指示剂。
二、材料藕粉，淀粉。
三、器材试管3.0×20cm（×1）；移液管5mL（×2）；烧杯100mL(×1); 250mL锥形瓶; 调温电炉; 滴定管25mL(×1)。
操作方法一、样品中还原糖的提取准确称取1g藕粉，放在100mL烧杯中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加入约40mL蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。
过滤，将滤液全部收集在50mL的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。
二、样品中总糖的水解及提取准确称取1g淀粉，放在大试管中，加入6mol/L HCl 10mL，蒸馏水15mL，在沸水浴中加热0.5h，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。
如已水解完全，则不呈现蓝色。
水解毕。
冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6mol/L NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100mL，过滤取滤液10mL于100mL容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。
三、空白滴定准确吸取费林试剂甲液和乙液各5.00mL，置于250mL锥形瓶中，加蒸馏水10mL。
从滴定管滴加约9mL葡萄糖标准溶液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以每2s 1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。
记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。
平行操作3次，取其平均值，按下式计算：式中：F──10mL费林试剂（甲液和乙液各5.00mL）相当于葡萄糖的量，mg；C──葡萄糖标准溶液的浓度，mg/mL；V──标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积，mL。
四、样品糖的定量测定(1) 样品溶液预测定：吸取费林试剂甲液及乙液各5.00mL，置于250mL锥形瓶中，加蒸馏水10mL，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液，滴定时要保持溶液呈沸腾状态。
待溶液由蓝色变浅时，以每2s 1滴的速度滴定，直至溶液的蓝色刚好褪去为终点。
记录样品溶液消耗的体积。
(2) 样品溶液测定：吸取费林试剂甲液及乙液各5.00mL，置于锥形瓶中，加蒸馏水10mL，加玻璃珠3粒，从滴定管中加入比与测试样品溶液消耗的总体积少1mL的样品溶液，加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以每2s 1滴的速度继续滴加样液，直至蓝色刚好褪去为终点。
记录消耗样品溶液的总体积。
平行操作3次，取其平均值。
五、结果处理其中：m──样品重量，g；式中：F──10mL费林试剂（甲液和乙液各5.00mL）相当于葡萄糖的量，mg；V──标定时平均消耗还原糖或总糖样品溶液的总体积，mL；V1──还原糖或总糖样品溶液的总体积，mL；1000──mg换算成g的系数。