HE染色教学设计 .ppt
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课件
对策：如果切片不是因为太
厚，脱色、漂白、重新染色， 对于染色和分化时间做些适当 的调整。若太厚则需要重新切 片。
原因：苏木精染色液过度氧化
和切片在苏木精染液染色后返 蓝不足。
切片细胞核棕色， 表明苏木精 没有充分蓝化， 或苏木精过度氧化 失去染色能力
课件
对策：染色前检查苏木精染色液
的染色能力，过渡氧化，应及时 更换。其次，在苏木精染色后， 给切片以足够的蓝化时间。
染色：
（1）苏木素染色
苏木素染色太浅，细胞核 与细胞质颜色对比度差。
原因：染色时间短；苏木 素过度氧化，失去染色能 力；分化时间过长。 对策：切片重新染色。
课件
原因：与图2相反，染色液
时间过长、切片太厚、分化 步骤时间太短。
细胞核过染， 核膜、核仁等不清晰， 细胞质( 尤其是皮肤上皮细胞) 含有大量的 细胞核染色液苏木精， 导致细胞核与细胞 质比例失调。
片在伊红染色时间过长；切片在 伊红染色后经乙醇脱水步骤时过 的太快， 而使乙醇分化伊红的作 用不能产生。
对策：适当稀释伊红染色液，减
少伊红染色时间，或者使切片在 乙醇脱水等步骤时，停留时间相 对均匀。同样， 也要检查切片的 厚度是否合适。
课件
封片：
在显微镜下呈现大量水珠或 云雾状改变
课件
原因：切片经梯度乙醇处理后没
课件
（3） 脱水。染色后通过各级酒精脱水，从低浓度到高浓度。低浓度 酒精对伊红有分化作用，切片经过低浓度时要短，向高浓度逐渐延长 脱水时间，脱水不彻底，使切片发雾，在显微镜下组织结构模糊不清。
（4）透明与封片。切片染色脱水后必须经二甲苯处理，使切片透明， 才能用树胶封片。应引起注意的是，二甲苯纯度不纯使切片透明不够， 会影响切片质量。
染色后有杂质
原因：苏木精染色液中的
金属膜，黏附在玻片上。 对策：每天染色前仔细过 滤苏木精染色液，或建议 使用半氧化苏木精染色液。
课件
（2）伊红着色
切片中央区域伊红染色不均 匀， 可能为弱碱性溶液残留导致 伊红拒染所致
原因：伊红染液的pH 值可能大于
5 ；也可能是蓝化液残留过多；切 片太薄；或切片经伊红染色后在乙 醇脱水时间过长。
二 甲
乙反
醇 Leabharlann Baidu 液
蓝3（0
染 色 （1
乙乙 醇醇 （ （5
乙 醇 （2
苯 （ 次
min
- min
s s
分 化 3（0
），水 洗
），水
3 ），水 洗
× min
）
次
）
10
）
）
洗
3 ×5min
封 片
脱蜡
染色
脱水
透明 封片
染色的时间，应根据室温，及组织的具体情况来确定，
做之前做预实验。
课件
课件
注意事项
原因：盖玻片上可能有封固切
片的封固剂。
对策：移去盖玻片， 重新用干
净的盖玻片封片。
盖玻片上有封固剂所致切片组织模糊不清
课件
封片后镜下则会出现类似色素的 点状结晶或类似“裸核”样的改变
课件
原因：切片封片前放置在
空气中时间太长， 以至于 二甲苯挥发切片干燥所致。
对策：移去组织切片上的
盖玻片和封固剂， 重新处 理。将切片水洗数分钟，然 后重新脱水、透明、封固。 封片过程中要保持组织切片 的轻度湿润，尽量不要让其 干燥。
有完全脱水， 导致二甲苯透明中 性树胶封固后残留大量水分。也可 能是封片的时候出现的气泡。
对策：移去盖玻片， 用二甲苯溶
解封固剂如中性树胶。将切片置入 新鲜的无水乙醇换几道。待切片重 新脱水完全后，用新二甲苯透明， 中性树胶封固。所有用于脱水和透 明的液体，在使用一定时间以后， 应即时更换。将切片浸如二甲苯中， 重新封片。
渗透作用或者 负电荷色酸 弥散作用完成 （染料有色部分）
正电荷色酸 （染料无色部分）
课件
染色
试剂
苏木素染液（细胞核着色） 盐酸乙醇分化液 稀氨水 伊红染液 二甲苯 梯度浓度乙醇
课件
染色步骤
100%
常 规 脱
苏木 素
蜡
染
色
（5
15
- min
），水 洗
80% 30s
盐 酸
氨 水
伊 红
%
90
原因：盖玻片弯曲或不平整；
封固剂含二甲苯过多， 稀释 过度。
对策：移去盖玻片， 重新
找一张盖玻片，用干净的封 固剂封片。如用手工封片法， 每天保证盛装封固剂的容器， 在封固结束的时候盖紧盖子。 尽量使用小的容器盛装封固 剂，一旦封固剂太粘稠，就 可以废弃不再使用。
课件
谢谢！
课件
对策：检查伊红染液的pH值，用
乙酸将其调节在4.6-5.0 之间，使伊 红染色色彩艳丽。确保每次蓝化后， 用自来水冲干净。检查切片的厚度。 脱水时不要让切片在低浓度乙醇停 留时间过长， 因为含水多的低浓度 乙醇会将伊红的颜色分化掉。
课件
伊红深染导致细胞核与细 胞质没有层次，缺乏对比
原因：伊红染色液浓度太高；切
（1）脱蜡。切片脱蜡后才能染色，且脱蜡应彻底。脱蜡好坏主要取 决于二甲苯的温度和时间，如果二甲苯是用过一段时间，切片又比较 厚，室温低应增加脱蜡时间，脱蜡不净是影响染色不良的重要原因之 一。
（2）染色。根据实际情况，通过预实验得到最佳染色时间。一般情 况下新配的苏木素染液中只需染1~3min 左右，应根据染片的多少， 逐步把染色时间延长。分化时间不易过长，分化应在镜下观察，分化 过度，应水洗后重新在苏木素染液中染色，在水洗分化和使切片在自 来水或稀的氨水中充分变蓝（蓝化）。新配的伊红染色块，切片染色 不易过长，应根据染切片的多少逐步延长染色时间，切片使伊红染后， 分化时间要短。
HE染色试验技术及注意事项
课件
HE染色又称苏木素-伊红染色法，是普 通光学显微镜观察与鉴别细胞凋亡与细胞 坏死的一种染色方法。
课件
报告内容
HE染色原理 试剂 染色步骤 注意事项 几种常见的染色问题
课件
HE染色原理
氧化
+铝
正负电荷的 极性吸附
苏木素
苏木红
蓝色色精
染色
细胞核
分化和蓝化
水解 伊红
课件
几种常见的染色问题
脱蜡：
切片中白色的区域脱蜡不彻底，染色液由 于石蜡斑点的残留而不能渗透着色。
课件
原因：①烤( 烘) 片温度
太低，脱蜡前没有充分烤 ( 烘) 干。 ②二甲苯脱蜡时 间不足， 或二甲苯使用过 久，造成脱蜡不尽。
对策：①用无水乙醇去
掉玻璃片上的水分，重新 二甲苯脱去石蜡。 ②切 片需退回到脱蜡步骤，延 长脱蜡时间，或跟换二甲 苯，驼色、漂白、重新染 色。
对策：如果切片不是因为太
厚，脱色、漂白、重新染色， 对于染色和分化时间做些适当 的调整。若太厚则需要重新切 片。
原因：苏木精染色液过度氧化
和切片在苏木精染液染色后返 蓝不足。
切片细胞核棕色， 表明苏木精 没有充分蓝化， 或苏木精过度氧化 失去染色能力
课件
对策：染色前检查苏木精染色液
的染色能力，过渡氧化，应及时 更换。其次，在苏木精染色后， 给切片以足够的蓝化时间。
染色：
（1）苏木素染色
苏木素染色太浅，细胞核 与细胞质颜色对比度差。
原因：染色时间短；苏木 素过度氧化，失去染色能 力；分化时间过长。 对策：切片重新染色。
课件
原因：与图2相反，染色液
时间过长、切片太厚、分化 步骤时间太短。
细胞核过染， 核膜、核仁等不清晰， 细胞质( 尤其是皮肤上皮细胞) 含有大量的 细胞核染色液苏木精， 导致细胞核与细胞 质比例失调。
片在伊红染色时间过长；切片在 伊红染色后经乙醇脱水步骤时过 的太快， 而使乙醇分化伊红的作 用不能产生。
对策：适当稀释伊红染色液，减
少伊红染色时间，或者使切片在 乙醇脱水等步骤时，停留时间相 对均匀。同样， 也要检查切片的 厚度是否合适。
课件
封片：
在显微镜下呈现大量水珠或 云雾状改变
课件
原因：切片经梯度乙醇处理后没
课件
（3） 脱水。染色后通过各级酒精脱水，从低浓度到高浓度。低浓度 酒精对伊红有分化作用，切片经过低浓度时要短，向高浓度逐渐延长 脱水时间，脱水不彻底，使切片发雾，在显微镜下组织结构模糊不清。
（4）透明与封片。切片染色脱水后必须经二甲苯处理，使切片透明， 才能用树胶封片。应引起注意的是，二甲苯纯度不纯使切片透明不够， 会影响切片质量。
染色后有杂质
原因：苏木精染色液中的
金属膜，黏附在玻片上。 对策：每天染色前仔细过 滤苏木精染色液，或建议 使用半氧化苏木精染色液。
课件
（2）伊红着色
切片中央区域伊红染色不均 匀， 可能为弱碱性溶液残留导致 伊红拒染所致
原因：伊红染液的pH 值可能大于
5 ；也可能是蓝化液残留过多；切 片太薄；或切片经伊红染色后在乙 醇脱水时间过长。
二 甲
乙反
醇 Leabharlann Baidu 液
蓝3（0
染 色 （1
乙乙 醇醇 （ （5
乙 醇 （2
苯 （ 次
min
- min
s s
分 化 3（0
），水 洗
），水
3 ），水 洗
× min
）
次
）
10
）
）
洗
3 ×5min
封 片
脱蜡
染色
脱水
透明 封片
染色的时间，应根据室温，及组织的具体情况来确定，
做之前做预实验。
课件
课件
注意事项
原因：盖玻片上可能有封固切
片的封固剂。
对策：移去盖玻片， 重新用干
净的盖玻片封片。
盖玻片上有封固剂所致切片组织模糊不清
课件
封片后镜下则会出现类似色素的 点状结晶或类似“裸核”样的改变
课件
原因：切片封片前放置在
空气中时间太长， 以至于 二甲苯挥发切片干燥所致。
对策：移去组织切片上的
盖玻片和封固剂， 重新处 理。将切片水洗数分钟，然 后重新脱水、透明、封固。 封片过程中要保持组织切片 的轻度湿润，尽量不要让其 干燥。
有完全脱水， 导致二甲苯透明中 性树胶封固后残留大量水分。也可 能是封片的时候出现的气泡。
对策：移去盖玻片， 用二甲苯溶
解封固剂如中性树胶。将切片置入 新鲜的无水乙醇换几道。待切片重 新脱水完全后，用新二甲苯透明， 中性树胶封固。所有用于脱水和透 明的液体，在使用一定时间以后， 应即时更换。将切片浸如二甲苯中， 重新封片。
渗透作用或者 负电荷色酸 弥散作用完成 （染料有色部分）
正电荷色酸 （染料无色部分）
课件
染色
试剂
苏木素染液（细胞核着色） 盐酸乙醇分化液 稀氨水 伊红染液 二甲苯 梯度浓度乙醇
课件
染色步骤
100%
常 规 脱
苏木 素
蜡
染
色
（5
15
- min
），水 洗
80% 30s
盐 酸
氨 水
伊 红
%
90
原因：盖玻片弯曲或不平整；
封固剂含二甲苯过多， 稀释 过度。
对策：移去盖玻片， 重新
找一张盖玻片，用干净的封 固剂封片。如用手工封片法， 每天保证盛装封固剂的容器， 在封固结束的时候盖紧盖子。 尽量使用小的容器盛装封固 剂，一旦封固剂太粘稠，就 可以废弃不再使用。
课件
谢谢！
课件
对策：检查伊红染液的pH值，用
乙酸将其调节在4.6-5.0 之间，使伊 红染色色彩艳丽。确保每次蓝化后， 用自来水冲干净。检查切片的厚度。 脱水时不要让切片在低浓度乙醇停 留时间过长， 因为含水多的低浓度 乙醇会将伊红的颜色分化掉。
课件
伊红深染导致细胞核与细 胞质没有层次，缺乏对比
原因：伊红染色液浓度太高；切
（1）脱蜡。切片脱蜡后才能染色，且脱蜡应彻底。脱蜡好坏主要取 决于二甲苯的温度和时间，如果二甲苯是用过一段时间，切片又比较 厚，室温低应增加脱蜡时间，脱蜡不净是影响染色不良的重要原因之 一。
（2）染色。根据实际情况，通过预实验得到最佳染色时间。一般情 况下新配的苏木素染液中只需染1~3min 左右，应根据染片的多少， 逐步把染色时间延长。分化时间不易过长，分化应在镜下观察，分化 过度，应水洗后重新在苏木素染液中染色，在水洗分化和使切片在自 来水或稀的氨水中充分变蓝（蓝化）。新配的伊红染色块，切片染色 不易过长，应根据染切片的多少逐步延长染色时间，切片使伊红染后， 分化时间要短。
HE染色试验技术及注意事项
课件
HE染色又称苏木素-伊红染色法，是普 通光学显微镜观察与鉴别细胞凋亡与细胞 坏死的一种染色方法。
课件
报告内容
HE染色原理 试剂 染色步骤 注意事项 几种常见的染色问题
课件
HE染色原理
氧化
+铝
正负电荷的 极性吸附
苏木素
苏木红
蓝色色精
染色
细胞核
分化和蓝化
水解 伊红
课件
几种常见的染色问题
脱蜡：
切片中白色的区域脱蜡不彻底，染色液由 于石蜡斑点的残留而不能渗透着色。
课件
原因：①烤( 烘) 片温度
太低，脱蜡前没有充分烤 ( 烘) 干。 ②二甲苯脱蜡时 间不足， 或二甲苯使用过 久，造成脱蜡不尽。
对策：①用无水乙醇去
掉玻璃片上的水分，重新 二甲苯脱去石蜡。 ②切 片需退回到脱蜡步骤，延 长脱蜡时间，或跟换二甲 苯，驼色、漂白、重新染 色。