分光光度法测定芦丁颗粒剂中总黄酮含量
分光光度法测定总黄酮含量的实验条件研究
对差值 ,芦丁为 3219 % ,锦鸡儿为 3016 % ,沙棘为 6611 %。可见 ,乙醇浓度对该方法的最终显色影响很
大 ,所以在实际测定中 ,视样品的溶解性 ,在保证所用乙醇浓度前后严格一致的情况下 ,一般可选用
30 %～60 %的乙醇稀释定容 。
3. 2 显色试剂加入时间 、显色时间对吸光度的影 液后放置 5 min ,然后加入 NaOH 溶液 。
目前确定的用量基础上变化范围在 50 %～150 %之间 ,对吸光度基本无影响 。
4 结果与讨论
4. 1 优化后的总黄酮含量测定实验步骤 取一定量的样品置于 25 mL 容量瓶中 ,用 30 %乙醇稀释至 10 mL ;加入 017 mL 5 % NaNO2 溶液摇匀 ,立刻加入 017 mL10 % Al (NO3 ) 3 溶液摇匀 ,放置 5 min ;加入 5
01477 013082 10217
01553 014384 10916
01623 015582 11116
5 小结
(1) 用 NaNO2 - Al (NO3 ) 3 - NaOH 体系分光光度法测定总黄酮含量时 ,必须严格保证稀释定容用乙 醇的浓度 、试剂加入时间 、显色时间等测试环节前后完全一致 ,否则会出现很大误差 。
总黄酮含量测定方案
总黄酮含量测定一样品溶液的制备70%乙醇溶液，料液比1﹕8 ，80度下回流2h。
取10g样品放入圆底烧瓶中加入80ml 70%乙醇溶液回流2h,抽滤定容至100ml备用。
使用时先离心再用70%乙醇稀释10倍做样品溶液。
二芦丁标准品的配置精密称取芦丁2mg，加无水乙醇定容至10ml。
制得浓度为0.2mg/ml芦丁标准品溶液。
三显色方法的确定1 扫描原液分别取芦丁溶液和样品溶液各1ml，加无水乙醇定容至25ml，空白对照，全波扫描。
2硝酸铝显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加5%亚硝酸钠溶液（1.25g亚硝酸溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中) 1ml, 摇匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液(4,4014g硝酸铝.九水溶于无水乙醇中定容到25ml 容量瓶中) 1ml，摇匀，放置6min，加4%氢氧化钠试液(2g氢氧化钠溶于无水乙醇中定容到50ml容量瓶中）10ml, 再加无水乙醇定容至25ml，摇匀，放置15min，空白对照，全波扫描bb 。
3氯化铝显色法分别取芦丁对照溶液和样品溶液各5ml ,加1%的氯化铝溶液（1g氯化铝溶于无水乙醇中定容到100ml容量瓶中)10ml，摇匀放置10min，空白对照，全波扫描。
4 氢氧化钾显色法分别取芦丁对照品溶液和样品溶液各5ml，加3ml10%氢氧化钾溶液（2.5g氢氧化钾溶于无水乙醇中定容到25ml容量瓶中），充分摇匀显色5min后，用无水乙醇定容至25ml, 摇匀，空白对照，全波扫描。
四显色条件的确定五标准曲线的绘制分别取1ml,2ml,3ml,4ml,5ml,6ml芦丁对照品溶液，按所选的显色方法测定吸光度，绘制标准曲线。
六精密度实验按标准曲线绘制方法，分别准确量取1.0ml芦丁标准液5份，按所选显色剂和所确定的最优显色条件在所选波长下测定吸光度。
次数 1 2 3 4 5吸光度平均值相对标准偏差RSD（%）七重现性实验取火棘果样品5份各10g,按提取步骤制得样品液，按制备标准曲线方法显色后测定吸光度值并计算总黄酮含量。
分光光度法测定芦笋中总黄酮的含量
分光光度法测定芦笋中总黄酮的含量宋元清;王艳平;毛远菁【摘要】黄酮类化合物与铝盐形成配合物,该配合物在紫外可见光区有吸收,选择510 nm为测定波长,芦丁作为对照品,用分光光度法测定芦笋中的总黄酮,平均回收率为97.23%,测定结果的相对标准偏差为2.13%(n=5).【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2005(014)004【总页数】2页(P52-53)【关键词】分光光度法;总黄酮;芦笋【作者】宋元清;王艳平;毛远菁【作者单位】鸡西市人民医院,鸡西,158100;枣庄市市中区人民医院,枣庄,277100;日照市汽车运输总公司医院,日照,276800【正文语种】中文【中图分类】TS2芦笋，又名石刁柏，为百合科植物石刁柏的干燥地下嫩茎。
芦笋有温肺祛痰、活血化瘀作用，用于痰瘀互结、乳腺结块、肿胀疼痛及乳腺小叶增生等疾病的治疗。
芦笋的化学成分主要有黄酮类化合物、游离氨基酸、多种甾体皂苷、维生素、微量元素及其它活性物质 [1]。
其中的黄酮类化合物主要包括槲皮素、香橼素、山柰素和芦丁等,具有消炎、镇痛等多种药理作用。
黄酮类化合物的测定现多用高效液相色谱法[2，3]，该法专属性强，准确度高，但样品处理复杂，仪器昂贵，实验成本较高。
芦笋现主要用作食品及保健品，分光光度法能较快速地测定其中的黄酮类成分，且实验成本较低，易于在食品行业中推广。
1 实验部分1.1 主要仪器与试剂紫外可见分光光度计：UV757CRT型，上海分析仪器总厂；电子精密天平：FA2004型，上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂；芦丁对照品：中国药品生物制品检定所；芦丁对照品溶液：0.28 mg/mL。
精密称取用五氧化二磷干燥至恒重的芦丁对照品7.00 mg，用30%乙醇溶解并定容至25 mL；芦笋样品：市售；芦笋样品溶液：取芦笋样品，研细，精密称取约0.3 g，用80%乙醇回流提取2次(每次用30 mL)，过滤，滤液合并后蒸干，用30%乙醇溶解并定容至10 mL；实验所用试剂均为分析纯；实验用水为二次蒸馏水。
总黄酮含量测试试剂盒 分光光度计法
总黄酮含量测试试剂盒（C002-96T 分光光度计法）一、测定原理黄酮中处于相邻位的羰基、羟基可以共同络合金属而显色。
在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下，黄酮类化合物与铝盐生成螯和物，加入碱溶液后显红橙色，在510nm处有最大吸收峰。
芦丁是公认的黄酮类化合物，常被用作标准品。
二、试剂组成试剂一：无色液体50mL ×1瓶试剂二：无色液体50mL ×1瓶试剂三：显色液 200mL ×1瓶试剂四：1.0mg/mL芦丁标准溶液 5mL×1瓶三、储存条件及有效期试剂一、试剂二4℃保存，试剂三-20℃保存，可保存3个月。
四、试剂的配制试剂四应用液：取2mL试剂四，加入18mL双蒸水，稀释至20mL，得到100μg/mL的芦丁标准液，分别采用移液管移取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL试剂四于空试管中，加入4.0，3.0，2.0，1.0，0mL双蒸水，得到20，40，60，80，100 μg/mL芦丁标准液。
五、操作步骤充分混匀，室温静置6min。
充分混匀，室温静置6min。
充分混匀，室温静置15min，以试剂空白调零，分光光度计510nm处测吸光值。
1必须做标准管，以绘制标准曲线；2一般样品建议做空白管，以消除误差；3试剂三有腐蚀性，请务必戴手套操作，如不慎接触皮肤，参照碱烧伤的方法用流水冲洗，如有条件可用硼酸处理。
六、计算方法1.绘制标准曲线以芦丁应用液浓度0，20，40，60，80，100μg/mL为横坐标，以分光光度计测得的吸光值为纵坐标，在坐标纸上或利用EXCEL绘制标准曲线。
2.计算样品浓度对于坐标纸上绘制的标准曲线，请直接根据坐标求得样品浓度。
对于采用EXCEL计算的，根据方程求得样品浓度。
样品浓度表示为μg/mL总黄酮，也可根据测试溶液浓度计算出样品粉末中含量，表示为mg/g。
七、注意事项1. 试剂可能会有沉淀，请放置至室温后摇匀使用；八、应用举例小明提取得到了一种中草药的粗提物，并将其冻干得到粉末，配制成5mg/mL的溶液，分析其总黄酮含量。
仪器分析：可见分光光度法测定芦丁含量
1.5
1.0
0.5
0.0
1
(ml)
亚硝酸钠 0.15 0.15
溶液(ml)
0.15
0.15
0.15
0.15
0.15
摇匀，放置6min
硝酸铝 0.15 0.15 0.15 0.15 0.15 0.15 0.15 溶液(ml)
摇匀，放置6min
氢氧化钠 2.0 2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
溶液实验原理
➢芦丁又名芸香甙，是维生素P的主要成分 之一，属黄酮类化合物，临床上主要用于治 疗脑溢血，高血压，视网膜出血等疾病。
➢芦丁的含量测定主要有高效液相色谱法、 紫外分光光度法和可见分光光度法。
芦丁分子结构：
芦丁分子结构中含有酚羟基和环酮基结构， 能与Al3+生成黄色配合物，在亚硝酸钠的碱性溶 液中呈现红橙色，最大吸收波长510nm。
➢定量原理： Lambert-Beer’s Law 当入射光波长一定时，溶液对光的吸收 程度只与溶液浓度和液层厚度有关。
A = k c l = -lgT = lgI0 / I
三、实验步骤
项目/编号 1
2
3
4
5
6 测定管
标准溶液 0.0 0.5
1.0
1.5
2.0
2.5 1.5(样品)
(ml)
60%乙醇 2.5 2.0
蒸馏水稀释至5ml，振荡，放置15min，510nm比色。第1管作空白
四、实验记录：见讲义 五、数据处理及结果： 1.以各标准溶液浓度（mg/ml）为横坐标，各
管吸光度值为纵坐标，作图既得标准曲线。 2.根据样品溶液的吸光度查标准曲线得样品
芦丁测定
2. 1样品制备:自头翁汤加减复方以甘草、自头翁、秦皮、南山碴、粉葛根、车前子、黄连、蕾香、地榆、自芍=1 :3:2:4:3:2:115:3:3:2配制。
弄成碎末，加水两次煎熬后提取，浓缩，添加乙醇致含醇量为65 07o .离心去掉沉淀后蒸I-，添加甲醇溶解，离心，取上清液加甲醇定容到原药材量1:1a2. 2参照品溶液制备:取芦丁参照品12毫克，精密称取，置于SOmI瓶中，加70%乙醇溶解并稀释到刻度，得质量浓度为0. 24mg/ml的芦丁参照品溶液。
2. 3紫外一可见分光光度法扫描与标准曲线制备2. 3. 1可见分光光度法:精密称定芦丁参照品溶液1. 00m1,2. OOmI,3. 00m1,4. OOmI, 5. OOmI, 6. OOmI分别置25 ml容量瓶中，均加水到6. OOmI，加5%的N aN 02溶液1. 00 ml，摇匀，放置6分钟，加10%的A1(N03) 3溶液1.00 ml，摇匀，放置6分钟，加4%的N a011溶液10. 00 ml.再加水到刻度，摇匀，放置15分钟。
以相应试剂为空自，在400一800 nm 范围内进行光谱扫描，得510 nm处为可见最人吸收峰。
以空自试剂为参照，将6个标准品溶液分别在510 nm下测定吸光度，得回归方程A=0. 00988 C + 0. 00523 . r = 0. 9997 a芦丁浓度在9. 6一57. 6 mg/L范围线性关系佳。
2.3.2紫外分光光度法:精密称定芦丁参照品溶液0. 10m1,0. 20m1,0.40m1,0. 60m1,0. 80m1,1. OOmI于5 ml容量瓶中，均加甲醇到刻度，摇匀。
以甲醇作为空自试剂参照，在400 - 800 nm范围内进行光谱扫描，得359nm处为紫外最人吸收峰。
以空自试剂为参照，将6个标准品溶液分别在359 nm下测定吸光度，得回归方程A = 0. 02503 C + 0. 02367 . r = 0. 9995 a芦丁浓度在4. 8 -48mg/L范围线性关系佳。
芦丁测定总黄酮的原理
芦丁测定总黄酮的原理
芦丁测定总黄酮的原理是基于芦丁与铝离子在酸性条件下形成稳定的络合物。
总黄酮中的芦丁与铝离子反应生成络合物，络合物的形成使其产生特征性的吸收峰。
通过对样品中络合物吸收峰的测定，可以间接测定样品中总黄酮的含量。
具体的操作步骤如下：
1. 首先，将待测样品进行提取，常用的提取溶剂为70%乙醇。
2. 提取溶液经适当稀释后，将其与一定浓度的铝试剂（如铝氯化物溶液）混合，使芦丁和铝离子发生络合反应。
3. 将生成的络合物经离心分离，废弃上清液。
4. 将沉淀物重新溶解，并使用紫外可见分光光度计测定其吸收峰的强度。
5. 使用空白对照组进行校正，确定络合物吸收峰的强度与样品中总黄酮的含量之间的关系。
总之，芦丁测定总黄酮的原理是利用芦丁与铝离子在酸性条件下形成络合物，通过测定络合物的吸收峰强度来间接测定样品中总黄酮的含量。
紫外分光光度法测定双山颗粒中总黄酮的含量
ｆ ｒｑｕ ｌ ｙ ｃ ｎｔｏ ｏ ａｉ ｏ ｒ ｌｏｆＳｈｕ ｎｇ ｈ ｎ Ｇ ｒ ｎｕ ｅ ． ｔ ａ ｓ ａ ａ ｌｓ Ｋｅ ｒ ｓ： ｐ ｃ ｒ ｐ ｔ ｍ ｅ ｒ ｔ ｔ ｌｆａ ｏ ｅ ， ｏ ｅ ， ｈ ａ ｓ ｎ ｇｒ ｎｕ ｅ ｙ ｗｏ ｄ ｓ ｅ ｔ ｏ ｈｏ ｏ ｔ ｙ，ｏ ａ ｖ ｎ ｓ ｃ ｎｔ ｎｔ ｓ ｕ ｎｇ ｈａ ａ ｌｓ ｌ
（ ａ ｇ ｉ ａ ｉ ｏ ａ ｉ ｅ ｅ Ｍ ｅ ｉａ Ｕｎ ｖ ｒ ｉ Ｎａ ｎ ｎ Ｇｕ ｎ ｘ ， ３ ０ １ Ｃ ｉ ａ Ｇｕ ｎ ｘ Ｔｒ ｄ ｔ ｎ ｌ ｉ Ｃｈ ｎ ｓ ｄ ｃ ｌ ｉｅ ｓ ｙ， ｎ ｉ ｇ， ａ ｇ ｉ ５ ０ ０ ， ｈ ｎ ） ｔ
摘 要 ： 用 紫 外 分 光 光 度 法 ， 芦 丁 为 对 照 品 ， 其 进 行 络 合 显 色 ， ５ ０ ｍ 波 长 处 测 定 吸 光 度 ， 定 双 山 颗 采 以 对 在 ０ｎ 测
胆 固醇 、 冠心 病 、 脑血 管 意外 所致 的偏 瘫 等症 均有 一 定 的疗 效 。 了能够更 好 的控 制 双 山颗粒 剂 的质量 ， 为 本 文采 用紫 外分 光光 度 法对该 制 剂 中总黄 酮 的含 量
进行 测定 。
１ 实 验 部 分
１ １ 仪器 与试 药 ． ８５ ４ ３紫 外一 见 分 光 光 度 计 （ 国 安捷 伦 科 技 可 美
紫 外 分 光 光 度 法 测 定 双 山颗 粒 中 总黄 酮 的 含 量
紫外可见分光光度法在黄酮测定中的应用
紫外可见分光光度法在黄酮测定中的应用发表时间：2011-04-18T15:11:31.563Z 来源：《中外健康文摘》2011年第1期作者：肖逢燕1 陈爱民2 刘永芬3[导读] 黄酮类化合物是广泛存在于植物界的一大类天然产物，种类繁多。
肖逢燕1 陈爱民2 刘永芬3 （1江西吉水县人民医院药剂科 331603) (2江西中医学院基础医学院 330004) (3江西中医学院临床技能中心330004）【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2011)01-0220-02【摘要】黄酮类化合物是广泛存在于植物界的一大类天然产物，种类繁多，大多数黄酮类化合物与葡萄糖或鼠李糖结合成苷，部分为游离态或与鞣质结合存在。
近年来，黄酮类化合物以其广谱的药理作用倍受青睐，人们对含有黄酮的化合物进行大量研究，以期获得黄酮含量较高的中草药，黄酮的含量测定成为研究的关键步骤。
【关键词】紫外可见分光光度法黄酮测定黄酮类化合物是广泛存在于植物界的一大类天然产物，种类繁多，大多数黄酮类化合物与葡萄糖或鼠李糖结合成苷，部分为游离态或与鞣质结合存在。
黄酮化合物系色原烷或色原酮的2-或3-苯基衍生物，一般具有C6-C3-C6的基本骨架结构。
近年来，黄酮类化合物以其广谱的药理作用倍受青睐，人们对含有黄酮的化合物进行大量研究，以期获得黄酮含量较高的中草药。
因此黄酮的含量测定成为研究的关键步骤。
1 紫外—可见分光光度法在药物分析中的应用紫外可见分光光度法以其设备简单、适用性广、准确度和精密度较好等特点，已在中药总黄酮含量分析中发挥着重要作用，并已经成为应用最广泛的分析手段之一[1]。
据统计，在药物分析中，分光光度法占29.1% ，色谱法占25.5% ，荧光、化学发光法占2.4% ，与光度法有关的方法共计占31.5% ，由此可见，光度法是药物分析最常用的方法之一[2]。
研究结果表明，光度法在药物分析中的可靠性可以和色谱法相媲美，但其设备简单、操作方便、价格低廉、易于普及等特点是色谱法难于做到的[3]。
分光光度法测定芦丁颗粒剂中总黄酮含量
分光光度法测定芦丁颗粒剂中总黄酮含量摘要
本文旨在介绍分光光度法测定芦丁颗粒剂中总黄酮的含量。
首先，本实验采用了分光光度法，佐以柱层析-硅胶高效液相色谱技术提取试样中总黄酮，然后，在355 nm处进行检测，通过同位素标记技术以及内参替代法计算结果。
最后，本文还介绍了该项实验的操作步骤，以及结果可靠性的考虑。
关键词：芦丁；总黄酮；分光光度法
Introduction
Materials and Methods
1. 实验药品：本实验采用的芦丁颗粒剂试样，根据质量表中制剂的说明书，每粒含芦丁5mg。
2. 检测设备：本实验采用海德汉HPLC-DAD-20分光光度仪，温度控制在25℃±1℃；色谱柱采用海拉BEH C18（4.6mm，250mm×4.6mm，
5μm）；柱温维持在35℃；流动相A采用0.5%乙酸溶液，流动相B采用乙腈–水（45∶55）；流速为1.0mL/min；检测波长为355nm。
紫外分光光度法测定鸭脚通颗粒中总黄酮的含量
江西……萍乡……337000）采用紫外分光光度法，以芦丁作为对照品，于508nm处测定芦丁对照品在7.5300~45.1810μg/mL（r=0.9999）范围内）；鸭脚通颗粒中总黄酮的含量为10.01~22.39mg/袋。
结论：要含有黄酮类化合物，不含山奈酚、异鼠李素等物质［3-4］。
目前鸭脚通颗粒收录于2007年版《江西省食品药品监督管理局医疗机构制剂标准》，主要质控项目仅为性状、薄层鉴别两个项目，尚未有鸭脚通颗粒的含量测定方法。
随着国家对医院制剂标准的提高和规范化管理的加强［5］，为了保证制剂质量，现建立鸭脚通颗粒中总黄酮的含量测定方法，本方法以芦丁为指标性成分采用紫外分光光度法测定鸭脚通颗粒中总黄酮的含量，经方法学验证，该法简便、快捷、准确，可用于鸭脚通颗粒的质量控制。
1…材料…双光束紫外可见分光光度计TU-1901（北京普析通用仪器有限公司）；ME-204（万分之一天平，梅特勒-托利多国际贸易（上海）有限公司）；CP225D 电子分析天平（十万分之一天平，赛多利斯科学仪器有限公司）。
芦丁对照品（92.6%，批号100080-201409，中国食品药品检定研究院）；水为娃哈哈水；鸭脚通颗粒由萍乡市中医院提供；其他试剂均为分析纯。
2…方法与结果2.1…对照品溶液的制备…取芦丁对照品20mg，精密称定，置100mL量瓶中，加70%乙醇70mL，超声处理使溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得（每1mL中含芦丁0.2mg）。
2.2…供试品溶液的制备…取10袋本品内容物，精密称定，研细，取约2.5g，精密称定，置25mL量瓶中，加70%乙醇20mL，超声处理（功率500W，频率40kHz）20min，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。
2.3…吸收波长的选择…取上述对照品溶液和供试品溶液3.0mL，分别置25mL量瓶中，加水至6mL，加5%亚硝酸钠溶液1mL，混匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液10mL，再加水至刻度，摇匀，放置15min，同法用70%乙醇作空白。
几种中草药中总黄酮含量的测定
几种中草药中总黄酮含量的测定
古丽娜尔·夏依马尔旦
【期刊名称】《新疆师范大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2009(028)001
【摘要】许多中草药中含有丰富的黄酮类化合物,文章采用分光光度法,以芦丁为标准品,测定四种中草药中总黄酮含量.结果表明.地肤子用80%乙醇提取黄酮效果最好,黄酮的含量最高,平均回收率为104.4%.RSD=4.4%.砂仁,水红花子.紫参等三种样品用60%乙醇提取黄酮效果最好,黄酮的含量最高.平均回收率分别为
105.2%,RSD=5.2;103.7%,RSD=3.7%,98.7%,RSD=1.3%.
【总页数】4页(P67-69,82)
【作者】古丽娜尔·夏依马尔旦
【作者单位】新疆师范大学,生命与化学学院,新疆,乌鲁木齐,830054
【正文语种】中文
【中图分类】TS201.2
【相关文献】
1.足浴盐中草药提取物中总黄酮含量测定 [J], 王怡;荀春;杨亚玲
2.中草药、中药制剂中总黄酮类化合物含量测定方法综述 [J], 颜仁梁;刘志刚
3.中草药益生协同剂中总黄酮、绿原酸的含量测定 [J], 陈春林;曹国文
4.中草药提取物中总黄酮含量测定 [J], 易昌华;贺建华;戴求仲
5.猪用中草药饲料添加剂中总蒽醌和总黄酮的含量测定 [J], 张铁英;曹志红;葛长荣
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
总黄酮的提取和测定
总黄酮的提取和测定实验原理黄酮类化合物是植物的重要次生代谢产物，也是一些保健品和中药材的有效成分之一。
黄酮类化合物的定量方法常用的有 HPLC法和分光光度法，在实际生产和科研过程中，对于黄酮单体的定量常采用HPLC法，而对总黄酮的测定，考虑到方法的简便、快捷以及可行性，多采用在碱性介质中加铝盐显色的分光光度法。
在碱性条件下黄酮类化合物与铝盐形成络合物、在500nm波长处有最大吸收峰。
标准品选用芦丁。
试剂和器材一、试剂芦丁标准品。
5％NaNO2；10%A1(NO3)3；5％NaOH；70％乙醇。
二、材料新鲜银杏叶。
三、器材容量瓶10ml（×7），25ml（×1），100ml（×2）；吸管 0.5ml（×2），1ml（×2），2ml（×1），5ml（×1）；分光光度计。
操作方法一、制作标准曲线精密称取芦丁标准品5mg，用70％乙醇溶解，定容于25mL容量瓶中，摇匀，得0．2mg／mL的标准溶液。
精确吸取标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL，分别置于10mL容量瓶中，加入 5％NaNO2 0.4mL，摇匀，放置6min；加入10%A1 (NO3)3 0.4mL，摇匀，放置6min；加入5％NaOH 4.0mL，再加水至刻度，摇匀，放置15min。
以试剂空白作为参比溶液。
用1cm比色皿，在500nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线。
二、总黄酮的提取把新鲜的银杏叶低温烘干，使水分小于8％，制成干粉。
精确称取干粉1．0g，置于 100mL容量瓶中，加入70％乙醇30mL，浸泡24h。
超声波提取30min，过滤，滤液用70％乙醇定容于100mL容量瓶中，得到黄酮提取液，待用。
三、测定吸取黄酮提取液1.00mL, 置于10mL容量瓶中，加入5％NaNO3 0.4mL，摇匀，放置6min；加入10%A1(NO3)3 0.4mL，摇匀，放置6min；加入5％NaOH 4.0mL，再加水至刻度，摇匀，放置15min。
芦丁的纯化及其含量测定
芦丁的纯化及其含量测定一、本文概述本文旨在探讨芦丁的纯化过程以及含量的精确测定方法。
芦丁，作为一种具有广泛应用价值的化合物，其在医药、化妆品和食品工业等领域都有着重要的应用。
然而，芦丁的天然来源有限，且其提取物中常含有其他杂质，因此，对芦丁进行纯化并准确测定其含量就显得尤为重要。
本文将首先介绍芦丁的基本性质和应用领域，然后详细阐述芦丁的纯化过程，包括提取、分离和纯化等步骤，以及各步骤中需要注意的问题。
在此基础上，本文将介绍芦丁的含量测定方法，包括常用的光谱法、色谱法等，并对各种方法的优缺点进行比较和讨论。
通过本文的研究，我们期望能够为芦丁的纯化和含量测定提供一套有效、可行的方法，为芦丁的应用提供更为可靠的质量保证。
我们也期望通过本文的研究，能够推动芦丁提取和纯化技术的发展，为相关产业的发展提供技术支持。
二、芦丁的纯化方法芦丁的纯化是提取过程中的关键步骤，其目的在于从复杂的植物提取物中分离出高纯度的芦丁。
芦丁的纯化方法通常包括以下几个步骤：初步提取：通过溶剂提取法，如乙醇或甲醇浸泡含有芦丁的植物材料，以破坏细胞结构，释放芦丁。
此步骤后，可获得含有芦丁的粗提物。
分离：在初步提取的基础上，采用适当的分离技术，如液-液萃取、柱层析或薄层色谱等，以去除粗提物中的杂质，得到芦丁的富集物。
精制：为了进一步提高芦丁的纯度，可以采用重结晶、制备型高效液相色谱（HPLC）或薄层色谱的精制方法。
这些方法可以进一步去除富集物中的微量杂质，得到高纯度的芦丁。
干燥：将精制后的芦丁进行干燥处理，以去除残留的水分和溶剂，得到最终的芦丁纯化物。
在纯化过程中，需要注意操作条件的控制，如温度、pH值、溶剂选择等，以确保芦丁的稳定性和纯度。
纯化方法的选择和优化也需根据具体的植物来源、芦丁的含量和杂质成分等因素进行调整。
通过以上步骤，可以有效地纯化芦丁，为后续的含量测定和其他研究提供高质量的样品。
三、芦丁的含量测定方法芦丁的含量测定是评估其纯度以及确定其在药物制剂中的准确含量的重要步骤。
分光光度法测定芦丁颗粒剂中总黄酮含量
长处测定 吸光 度 ， 分别 记 为 Ａ 及 ． 在 ２ Ｌ量 ｓ 另 ５ｍ 瓶 中制 备一 不含 黄 酮 的试 剂 空 白 ， 测定 其在 ５６ｎ ０ ｌ ｎ 波长处 的吸收 度 ， 为 ． 以 以 （ 一 ） （ 一 记 并 及 ） 比值计 算总 黄酮含 量 ．
批 样 品 ６次 测 定 值 的 Ｒ Ｄ为 １２ ． 方 法 简 便 、 Ｓ ．％ 本 准确 、 密 ， 于 测 定 芦 丁颗 粒 剂 中总 黄 酮 含 量 ． 精 适
关键词 ：颗粒荆 ； 紫外分光光度 法； 总黄酮
中图 分 类 号 ： ２４ １ Ｒ８． 文 献 标 识码 ： Ａ
Ｏ 引 言
摘 要 ：建立芦丁颗 粒剂中总黄酮分光光度 测定方法 ． 在样品溶液 中分别加入 亚硝酸钠 试液、 溶液及硝酸铝 碱
Байду номын сангаас
试液 ， 置一段 时间后 ， ０ ｍ波长处测定 总黄酮含量 ． 放 于５ ６ａ 总黄 酮浓度在 ８８ ２ ８ —Ｌ 围内， ． ～５ ． Ｔ 范 ｄ 吸光度与浓 度呈 良好线性 关系（＝０９９ ）低 、 高浓度 的平 均空 白加样 回收 率分 别为 １０ ２ １０ ３ ｒ ．９２ ； 中、 ０ ． ％、０ ．％及 ９ ．％； ９ ６ 同一
精 密称 取芦 丁 对 照 品 约 １ ｌ， ５ Ｌ量 瓶 ＯＩ 置 ０ｍ Ｔ ｇ
收稿 日期 ： ０９—１ ５ ２０ ２—１ ． 作者简 介 ： 姚 倩 （９ １ ） 女 ， 士 ， １７ 一 ， 博 副教授 ， 从事 中药新制剂研究 ．
第１ 期
姚
倩 ， ： 光光 度 法测 定芦 丁颗粒 剂 中总黄 酮含 量 等 分
。２ ・ ３
方法操 作 ， 测定其 总黄 酮含 量 ． 样 品总 黄 酮含 量 ６份
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
分光光度法测定芦丁颗粒剂中总黄酮含量
《成都大学学报：自然科学版》2010年第1期 | 姚倩郭晓强张良蕾肖飞何钢黄酮类化合物是广泛存在于植物界的一类天然产物，具有抗氧化及抗自由基作用，可用于心脑血管疾病、肿瘤、炎症等的治疗．槐米中含有大量的黄酮类物质，本研究采用碱提酸沉法从槐米中提取芦丁等黄酮类成分，制成芦丁颗粒剂，并采用分光光度法对所含总黄酮进行了测定．实验结果表明，该方法快速、准确、灵敏，适合于控制所制颗粒剂中有效部位的含量．
1 仪器与材料
1．1 仪器
实验所用仪器包括：2802PC型紫外扫描仪(尤尼柯上海仪器有限公司)，UV一1800型紫外可见分光光度计(苏州莱顿科学仪器有限公司)，CT15RT型台式高速离心机(上海天美科学仪器有限公司)，AS5150A超声波清洗器(天津奥特塞恩斯仪器有限公司)．
1．2 材料
实验所用材料包括：实验用芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供；实验所用试剂均为分析纯，由成都科龙试剂厂生产．
2 方法与结果
2．I 测定方法
2．1．1 对照品溶液的制备．
精密称取芦丁对照品约1O ITlg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品溶液．
2．1．2 供试品溶液的制备．
将芦丁颗粒研细，取约2 g，置50 mL量瓶中，加甲醇20 30 mL，摇匀，超声30 S，用甲醇稀释至刻度，制得供试品溶液．
2．1．3 黄酮含量测定方法．
分别精密量取芦丁对照品溶液与供试品溶液各 3 mL，分置25 mL量瓶中，加5％NaNO~溶液1 mL，摇匀，静置6 min，再加人10％(NO3) 溶液1 mL，摇匀，继续静置6 min，加4％的NaOH溶液5 mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静置15 min，于505 nln波长处测定吸光度，分别记为As及．另在25 mL量瓶中制备一不含黄酮的试剂空白，测定其在506 nln 波长处的吸收度，记为．并以以( 一)及( 一)比值计算总黄酮含量．
2．2 空白干扰试验
取按处方配制的不含芦丁提取物的空白颗粒2 g，按“2．1．2”项下所述方法操作，制成供试品溶液，在10 000 rpm下离心5 min，精密量取上清液3 mL，置25 mL量瓶中，照“2．1．3”项下所述方法操作，于200 600啪波长范围内扫描，结果见图1．另取芦丁对照品溶液，同法操作，A．扫描曲线见图2．由图1、2可知，芦丁在碱性条件下与AP 形成的络合物在505 nln波长处有最大吸收，而空白辅料在此处无吸收，故对黄酮类化合物的测定无干扰．
2．3 线性关系
分别精密量取浓度为0．22 n~CmL的芦丁对照品溶液0、1、2,3、4、5、6 mL，分置于25 mL量瓶中，记为l～7号，按“2．1．3”项下操作，以1号为空白，在506 llla处测定其吸光度．以吸光度A为纵座标，芦丁浓度为横座标，进行线性拟合，得回归方程为，A =5．5356C+0．0059(r=0．9992)．实验表明，总黄酮浓度在8．8—52．8 tcCmL范围内，吸光度与浓度有良好线性关系．
2．4 回收率试验
取芦丁对照品贮备液及空白辅料适量，分别制成芦丁浓度为0．16、0．20、0．24 ncCmL的混合溶液，10000 rpm下离心5 min后，分别精密量取上清液3 mL，置25 mL量瓶中，按“2．1．3”项下所述方法操作，测定其总黄酮含量，以测得量与加入量相比较，计算回收率．低、中、高浓度的平均回收率分别为100．2％、100．3％及99．6％．实验结果表明本方法准确度较高．
2．5 重复性试验
取同一批芦丁颗粒剂6份，按“2．1．3”项下所述方法操作，测定其总黄酮含量．6份样品总黄酮含量分别为3．46、3．4l、3．46、3．5O、3．48、3．40 n1g，g，RSD 为1．20％．实验结果表明本方法精密度良好．
2．6 稳定性试验
分别精密量取芦丁对照品溶液及供试品溶液各 3 mL，分置25 mL量瓶中，按“2．1．3”项下所述方法加入各试剂，最后用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，分别在0、15、30、45、60 min时，于506 nln波长处测定吸收度，结果见表1．由表1可知，对照品溶液和供试品溶液在15 min前的吸光度较为稳定，15 min后吸光度开始下降．
2．7 样品测定
取批号为070301、070302、070303的芦丁颗粒剂，按照本实验所建立的方法测定样品的总黄酮含量，结果分别为3．46、3．4l、3．50 ms／g．
3 讨论
本实验方法的显色原理为：黄酮类化合物含邻苯二酚的结构，在碱性和NaN02存在的条件下，可与Ar 发生络合反应，生成在506nm波长处有最大吸收的络合物．3】．实验结果表明：本方法灵敏、专属性高，可广泛应用于黄酮类化合物的含量测定上．。