分光光度法测定芦丁颗粒剂中总黄酮含量

分光光度法测定芦丁颗粒剂中总黄酮含量

《成都大学学报：自然科学版》2010年第1期 | 姚倩郭晓强张良蕾肖飞何钢黄酮类化合物是广泛存在于植物界的一类天然产物，具有抗氧化及抗自由基作用，可用于心脑血管疾病、肿瘤、炎症等的治疗．槐米中含有大量的黄酮类物质，本研究采用碱提酸沉法从槐米中提取芦丁等黄酮类成分，制成芦丁颗粒剂，并采用分光光度法对所含总黄酮进行了测定．实验结果表明，该方法快速、准确、灵敏，适合于控制所制颗粒剂中有效部位的含量．

1 仪器与材料

1．1 仪器

实验所用仪器包括：2802PC型紫外扫描仪(尤尼柯上海仪器有限公司)，UV一1800型紫外可见分光光度计(苏州莱顿科学仪器有限公司)，CT15RT型台式高速离心机(上海天美科学仪器有限公司)，AS5150A超声波清洗器(天津奥特塞恩斯仪器有限公司)．

1．2 材料

实验所用材料包括：实验用芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供；实验所用试剂均为分析纯，由成都科龙试剂厂生产．

2 方法与结果

2．I 测定方法

2．1．1 对照品溶液的制备．

精密称取芦丁对照品约1O ITlg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品溶液．

2．1．2 供试品溶液的制备．

将芦丁颗粒研细，取约2 g，置50 mL量瓶中，加甲醇20 30 mL，摇匀，超声30 S，用甲醇稀释至刻度，制得供试品溶液．

2．1．3 黄酮含量测定方法．

分别精密量取芦丁对照品溶液与供试品溶液各 3 mL，分置25 mL量瓶中，加5％NaNO~溶液1 mL，摇匀，静置6 min，再加人10％(NO3) 溶液1 mL，摇匀，继续静置6 min，加4％的NaOH溶液5 mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静置15 min，于505 nln波长处测定吸光度，分别记为As及．另在25 mL量瓶中制备一不含黄酮的试剂空白，测定其在506 nln 波长处的吸收度，记为．并以以( 一)及( 一)比值计算总黄酮含量．

2．2 空白干扰试验

取按处方配制的不含芦丁提取物的空白颗粒2 g，按“2．1．2”项下所述方法操作，制成供试品溶液，在10 000 rpm下离心5 min，精密量取上清液3 mL，置25 mL量瓶中，照“2．1．3”项下所述方法操作，于200 600啪波长范围内扫描，结果见图1．另取芦丁对照品溶液，同法操作，A．扫描曲线见图2．由图1、2可知，芦丁在碱性条件下与AP 形成的络合物在505 nln波长处有最大吸收，而空白辅料在此处无吸收，故对黄酮类化合物的测定无干扰．

2．3 线性关系

分别精密量取浓度为0．22 n~CmL的芦丁对照品溶液0、1、2,3、4、5、6 mL，分置于25 mL量瓶中，记为l～7号，按“2．1．3”项下操作，以1号为空白，在506 llla处测定其吸光度．以吸光度A为纵座标，芦丁浓度为横座标，进行线性拟合，得回归方程为，A =5．5356C+0．0059(r=0．9992)．实验表明，总黄酮浓度在8．8—52．8 tcCmL范围内，吸光度与浓度有良好线性关系．

2．4 回收率试验

取芦丁对照品贮备液及空白辅料适量，分别制成芦丁浓度为0．16、0．20、0．24 ncCmL的混合溶液，10000 rpm下离心5 min后，分别精密量取上清液3 mL，置25 mL量瓶中，按“2．1．3”项下所述方法操作，测定其总黄酮含量，以测得量与加入量相比较，计算回收率．低、中、高浓度的平均回收率分别为100．2％、100．3％及99．6％．实验结果表明本方法准确度较高．

2．5 重复性试验

取同一批芦丁颗粒剂6份，按“2．1．3”项下所述方法操作，测定其总黄酮含量．6份样品总黄酮含量分别为3．46、3．4l、3．46、3．5O、3．48、3．40 n1g，g，RSD 为1．20％．实验结果表明本方法精密度良好．

2．6 稳定性试验

分别精密量取芦丁对照品溶液及供试品溶液各 3 mL，分置25 mL量瓶中，按“2．1．3”项下所述方法加入各试剂，最后用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，分别在0、15、30、45、60 min时，于506 nln波长处测定吸收度，结果见表1．由表1可知，对照品溶液和供试品溶液在15 min前的吸光度较为稳定，15 min后吸光度开始下降．

2．7 样品测定

取批号为070301、070302、070303的芦丁颗粒剂，按照本实验所建立的方法测定样品的总黄酮含量，结果分别为3．46、3．4l、3．50 ms／g．

3 讨论

本实验方法的显色原理为：黄酮类化合物含邻苯二酚的结构，在碱性和NaN02存在的条件下，可与Ar 发生络合反应，生成在506nm波长处有最大吸收的络合物．3】．实验结果表明：本方法灵敏、专属性高，可广泛应用于黄酮类化合物的含量测定上．