大肠杆菌的培养(建议收藏)

大肠杆菌种子液的制备

牛肉膏蛋白胨培养基的配方：

液体培养基

牛肉膏3。0g

蛋白胨10.0g

氯化钠 5.0g

水1000ml

pH 7.4—7.6

固体培养基在液体培养基的基础上再加入1。5%－2.0%的琼脂

1 试管斜面与平板的制备

（1）称量按培养基配方比例依次准确称取蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂、水放入烧杯中.

（2）熔化在上述烧杯中先加入少于所需要量的水，用玻璃棒搅匀，然后,在石棉网上加热使其溶解，药品完全溶解后，补充

水到所需的总体积.将称量好的1.8％琼脂放入已溶的药品中，

再加热熔化，最后补充所损失的水分。.....。文档交流

（3）调PH 在未调PH前，先用精密PH试纸测量培养基的原始PH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,

边加边搅拌，并随时用PH试纸测基PH直到PH达到7.4-7.6。

反之用1mol/L HCl进行调节。。....。文档交流

（4）分装将培养基分装入三个试管中和三角烧瓶中。其试管装量不超过管高的1/5，三角烧瓶的量不超过1/2加塞培养基

分装完毕后,在试管口和三角烧瓶口上塞上棉塞。.。。...文档交流

（5）包扎加塞后,将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一道麻绳扎好.用记号笔注明培养基名称、配制

日期。.。。...文档交流

（6）灭菌将上述培养基以0。1Mpa,121℃,15min高压蒸气灭菌。

（7）倒平板，取三个已消毒的培养皿，在无菌操作台上用三角烧瓶中的培养基倒制三个平板培养基,冷却。

（8）搁置斜面将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管口端搁在玻璃棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为

宜。。。。.。.文档交流

2 接种大肠杆菌斜面种子

(1) 取实验室储备的大肠杆菌BL21种子，在酒精灯附近，

用接种环在已制备好的斜面上接种上大肠杆菌.。。。.。。文档交流（2) 将接种好的斜面放入37℃的恒温培养箱子中培养24h.

3 制备平板种子

(1) 在无菌条件下，取一支保存的大肠杆菌的斜面，用无菌生

理盐水将菌种冲洗下来，再用无菌生理盐水将其梯度稀释

为1倍,10倍，100倍和1000倍，用移液枪分别吸取各梯

度的溶液涂布平板（每个梯度涂布三个平板，每次吸取溶

液100ul)，然后在37℃培养箱中过夜。。...。.文档交流

（12) 次日，挑取生长状态好，特征明显的单个菌落，接种于新鲜灭菌的牛肉膏蛋白胨液体培养基中37℃，170r/min恒温振

荡培养18h作种子培养液。。..。。。文档交流

其后的实验中,每次实验前从种子培养液中吸取2ml菌液接种于新鲜灭菌的液体培养基中，37℃，170r/min恒温振荡培养。。..。。文档交流

使用牛肉膏蛋白胨培养基

组成成分：牛肉膏3g,蛋白胨10g,Nacl 5g,琼脂15～20g,水1000mL，PH7.4～7.6。

具体配置步骤：

1。称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量，随后放入热水中，牛肉膏使与称量纸分离,立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。

2。加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中，再加热融化，此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。

3。调pH 检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加lmol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。若偏碱，则用lmol/L HCl进行调节.pH的调节通常放在加琼脂之前.应注意pH 值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。

4.过滤液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利培养的观察。但是供一般使用的培养基，这步可省略.

5。分装按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装

时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。

分装量:固体培养基约为试管高度的l/5,灭菌后制成斜面.分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜.半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.

6。加棉塞试管口和三角瓶口塞上用普通棉花（非脱脂棉）制作的棉塞。棉塞的形状,大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内，以防棉塞脱落。有些微生物需要更好的通气，则可用8层纱布制成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞.

7。包扎加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞.若培养基分装于试管中,则应以5支或7支在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸，用绳扎好。然后用记号笔注明，培养基名称,组别，日期。

8.灭菌将上述培养基于121。3℃湿热灭菌20min。如因特殊情况不能及时灭菌，则应故入冰箱内暂存。

9.无菌检查将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h,无菌生长即可使用，或贮存于冰箱或清洁的橱内，备用.

大肠杆菌的培养：

37摄氏度，恒温培养48到72小时，因为接种时和具体培养条件的不同，其生长一般都在2天外才能长出明显的菌落。

菌落特征：乳白色，圆形,菌落边缘整齐，表面光滑，表面和背面颜色

一致.

大肠杆菌/ 大肠菌群显色培养基是青岛海博生物公司改良的培养基，用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大肠杆菌和大肠菌群的快速检测。大肠杆菌显蓝色至紫色，大肠菌群显红色。

成份(g/L）

特殊营养物质

28。19

混合显色剂

0。31

琼脂

13。0

pH 6。8 ±0.2 25 ℃

此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。

注意