溶血性链球菌的检验.
溶血性链球菌
氏染色阳性，球形或卵圆形，常排列成短链状。
3.3 触酶试验 挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3%
过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β型溶血 性链球菌触酶为阴性。
3.4 链激酶试验 吸取草酸钾血浆0.2 mL于0.8 mL灭菌生理盐水中混
2 分离 将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂平板，
36 ℃±1 ℃厌氧培养18 h～24 h，观察菌落形态。 溶血性链球菌在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典
型菌落形态为灰白色、半透明、光滑、表面突起、 圆形、边缘整齐，并产生β型溶血。 3 鉴定 3.1 分纯培养
挑取可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和接 种TSB增菌液， 36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
3.5 杆菌肽敏感试验
取可疑菌纯培养物，在0.5 mL灭菌生理盐水 中混匀，用棉签沾取TSB增菌液均匀涂布于 哥伦比亚血琼脂平板上，用灭菌镊子夹取 杆菌肽纸片，放于琼脂表面，36 ℃±1 ℃培 养18 h～24 h，如出现抑菌圈即为敏感，同 时用已知敏感菌株作为阳性对照。β型溶血 性链球菌为杆菌肽敏感。
3.6 可选择使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定 卡对可疑菌落进行鉴定。
结果与报告
综合以上试验结果，报告每25 g（mL）检 样中检出或未检出β型溶血性链球菌
亚血琼脂代替了血琼脂平板； —— 完善了操作步骤； —— 在人血浆的基础上增加了兔血浆和绵羊血浆； —— 增加了规范性附录A。
本标准所代替的历次版本发布情况为： GB 4789.11－1984、 GB/T 4789.11－1994、 GB/T 4789.11－2003。
溶血性链球菌检验程序
Байду номын сангаас报告
溶血性链球菌的检验
预防措施
采取积极的预防措施，如 加强个人卫生、避免接触 可能的感染源等，以降低 感染风险。
病情监测
对患者进行密切监测，及 时发现并处理可能出现的 并发症和异常情况，确保 患者安全。
05
注意事项与建议
实验室安全与防护措施
实验室防护
进行溶血性链球菌检验时，实验 操作区域应保持通风，工作人员 需佩戴一次性手套、实验服、口
溶血性链球菌的检验
2023-11-10
contents
目录
• 简介 • 检验方法 • 检验流程 • 结果分析 • 注意事项与建议
01
简介
溶血性链球菌的定义
• 溶血性链球菌是一种常见的革兰氏阳性菌，其特点是在培养过 程中能产生溶血现象。它是人体常见的病原菌之一，可引起多 种感染疾病，包括扁桃体炎、咽炎、丹毒、猩红热等。
03
检验流程
样品采集与处理
采集咽拭子、血液、尿液等样 品，确保采集方法和操作规范 。
将采集的咽拭子放入适量运输 培养基中，血液和尿液可直接 接种培养基。
在运输培养基中保存样品，尽 快送至实验室进行检测。
细菌分离与培养
将咽拭子接种至5%羊血平板和 巧克力平板上，血液和尿液接种
至巧克力平板上。
在35℃、5%CO2的环境中培养 24-48小时，观察细菌生长情况
04
结果分析
数据分析与解读
实验室数据评估
对实验数据进行分析，包括细 胞形态、生化反应、药敏试验 等，以确定溶血性链球菌的特
性。
数据对比与参照
将实验数据与已知的正常值或参考 范围进行对比，以确定是否存在异 常。
综合分析
结合患者的病史、临床症状和实验 室数据，进行综合分析，以确定病 情的严重程度和可能的治疗方案。
中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验.
中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验1 主题内容与适用范围本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。
本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球的检验。
2 引用标准GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 设备和材料3．1 温箱：36±1℃。
3．2 水浴：36±1℃。
3．3 显微镜。
3．4 离心机。
3．5 试管架。
3．6 灭菌平皿。
3．7 灭菌小试管。
3．8 载玻片。
3．9 灭菌吸管：1 mL、10 mL。
3．10 灭菌镊子。
3．11 均质器。
3．12 酒精灯。
3．13 接种环。
4 培养基和试剂4．1 葡萄糖肉浸液肉汤：按GB 4789.28 中4.1 规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。
4．2 肉浸液肉汤：按GB 4789.28 中4.1 规定。
4．3 匹克氏肉汤：按GB 4789.28 中4.62 规定。
4．4 血琼脂平板：按GB 4789.28 中4.6 规定。
4．5 人血浆。
4．6 0.25%氯化钙。
4．7 灭菌生理盐水。
4．8 杆菌肽药敏纸片（含 0.04 单位）。
5 检验程序6 操作步骤6．1 样品处理称取 25 g 固体检样；称取25 mL 液体检样，加入 225 mL 灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。
6．2 一般培养将上述混悬液吸取 5 mL，接种于 50 mL 葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接种于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经 36±1℃培养 24 h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。
6．3 形态与染色本菌呈球形或卵圆形，直径 0.5～1 μm，链状排列，链长短不一，短者4～8个细胞组成，长者 20～30 个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。
溶血性链球菌检验
增菌
培养
检样处理
固体样品：25g（电子天平）
稀释瓶或具 液体样品：25mL（25mL吸量管） 塞广口瓶
+
225mL生理盐水（量筒），混匀。
注意： 液体样品先用无菌NaOH或HCl调节PH至 7.0。
增菌
取上述混合液5mL（吸量管） 50mL葡萄糖肉浸液肉汤 培养（于36℃±1℃培养24h）
葡萄糖肉浸液 肉汤
培养
1. 取已培养好的增菌液1环 血平板划线 培养（于36℃±1℃培养24h）
葡萄糖 肉浸液 肉汤 （阳性）
血平板
开始处
开始处
平板划线示意图
2. 取有典型菌落的阳性血平板（在放阳性
物品处）
灰白色，半透明 或不透明，表面 光滑，周围有透 明圈
血平板划线（分纯）
于36℃±1℃培 养18~24h
革兰氏 染色
在无菌室中固定， 到微生物实训室染 色
典型菌落 （同一菌落）
血平板涂布 贴杆菌肽试纸 （2~3片）
于36℃±1℃ 培养18~24h
革兰氏染色步骤：
涂片—— 火焰固定——结
晶紫初染—— 水洗—— 碘液媒
染—— 乙醇脱色—— 水洗——
吸干—— 番红或沙黄复染—— 水洗—— 干燥—— 镜检
• 涂片：在载玻片中央滴一滴生理盐水，用无
谢谢！
稀释瓶或具取上述混合液5ml吸量管50ml葡萄糖肉浸液肉汤培养于361培养24h葡萄糖肉浸液肉汤培养取已培养好的增菌液1环血平板划线培养于361培养24h葡萄糖肉浸液肉汤阳性血平板开始处开始处取有典型菌落的阳性血平板在放阳性物品处灰白色半透明或不透明表面光滑周围有透血平板涂布贴杆菌肽试纸典型菌落同一菌落于361培养1824h于361培养1824h在无菌室中固定到微生物实训室染染乙醇脱色水洗吸干番红或沙黄复染水洗干燥镜检涂片
溶血性链球菌实验活动生物安全危害风险评估报告
溶血性链球菌实验活动生物安全危害风险评估报告溶血性链球菌所有的实验活动均应在BSL-2实验室操作一、评估对象及分类等级1 溶血性链球菌（Streptococcus hemolyticus）细菌又称乙型溶血性链球菌（β- hemolyticus Streptococcus）和化脓性链球菌（Streptococcus pyogrnes），是链球菌按照是否产生溶血和溶血性质分类，在血平板上产生2~4mm宽的透明溶血环的一类链球菌，可引起人类及灵长类动物多种疾病。
2 根据《中华人民共和国传染病防治法》，由溶血性链球菌引起的传染病列为乙类传染病。
3 在卫生部公布的《人间传染的病原微生物名录》中溶血性链球菌被列为第三类病原微生物。
二、背景资料1 一般生物学特性1．1 形态染色链球菌呈球形或椭圆形，直径0.6-1.0μm，呈链状排列，长短不一，从4-8个至20-30个菌细胞组成不等，链的长短与细菌的种类及生长环境有关。
在液体培养基中易呈长链，固体培养基中常呈短链，由于链球菌能产生脱链酶，所以正常情况下链球菌的链不能无限制的延长。
多数菌株在血清肉汤中培养2-4h易形成透明质酸的荚膜，继续培养后消失。
该菌不形成芽胞，无鞭毛，易被普通的碱性染料着色，革兰氏阳性，老龄培养或被中性粒细胞吞噬后，转为革兰氏阴性。
1．2 培养特性需氧或兼性厌氧菌，营养要求较高，普通培养基上生长不良，需补充血清、血液、腹水，大多数菌株需核黄素、维生素B6、烟酸等生长因子。
最适生长温度为37℃，在20-42℃能生长，最适pH为7.4-7.6。
在血清肉汤中易成长链，管底呈絮状或颗粒状沉淀生长。
在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐、直径0.5-0.75mm的细小菌落，溶血性链球菌形成透明溶血环。
1．3 生化反应分解葡萄糖，产酸不产气，对乳糖、甘露醇、水杨苷、山梨醇、棉子糖、蕈糖、七叶苷的分解能力因不同菌株而异。
一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，触酶阴性。
溶血性链球菌
1.溶血性链球菌
①GB4789.11-2014 《食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验》于
2015年05月01日实施，代替GB/T 4789.11-2003 《食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验》。
注：根据链球菌在血液培养基上生长繁殖后是否溶血及其溶血性质分为三类，α-溶血性链球菌，也称甲型溶血，此类细菌致病力不强，多为条件致病菌。
在人类呼吸道及肠道中有α型溶血链球菌正常寄生，但有时也可引起亚急性心内膜炎等症。
β-溶血性链球菌，这类菌亦称为溶血性链球菌，该菌的致病力强，常引起人类和动物的多种疾病。
具体用途是用于研究和质量控制。
γ-溶血链球菌也称为丙型或不溶血性链球菌，该菌无致病性，常存在于乳类和粪便中，偶尔也引起感染。
②选作项目：链激酶试验：搜索了广东环凯/青岛海博/北京陆桥均没有发现“草酸钾血浆”或者链激酶实验套装在售。
③生化鉴定：搜索了广东环凯/青岛海博/北京陆桥仅在北京陆桥发现“溶血性链球菌荧光定量PCR检测试剂盒“
2.根据GB4789.35-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》可进行双歧杆菌计数嗜热链球菌鉴别乳杆菌鉴别如果对标准理解没有错误的情况下，应该问题不大。
3.若根据GB4789.34-2012 进行双歧杆菌的鉴定，需要气相色谱，这个仪器是微生物检验科所不具备的。
4.总之，从实验条件上，药品检验实验室是否可以用于保健食品的检测，尚不明确；从人员看，微生物检验科实验人员均没有上述检验项目的检验经验。
从检测标准看，除自学外，微生物检验科检验人员均没有相关标准的学习经历。
从仪器设备材料看，溶血性链球菌检验缺少相关试剂及仪器。
溶血性链球菌的检验
溶血性链球菌在自然界分布较广，可存在于水、空气、 尘埃、牛奶、粪便及人的咽喉和病灶中，按其在血平板 上溶血能力分类，可分为甲型溶血性链球菌、乙型溶血 性链球菌、丙型溶血性链球菌和亚甲型溶血性链球菌。 与人类疾病有关的大多属于乙型溶血性链球菌，其血清 型90%属于A族链球菌，常可引起皮肤和皮下组织的化 脓性炎症及呼吸道感染，还可通过食品引起猩红热、流 行性咽炎的爆发性流行。因此，检查食品是否有溶血性 链球菌具有现实意义。
4.链激酶试验
致病性乙型溶血性链球菌能产生激酶素（即溶纤维蛋白酶），此酶能激 活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋 白。
吸取草酸钾血浆0.2ml，加0.8ml灭菌生理盐水，混匀，再加入18h24h，36度培养的链球菌培养物0.5ml及0.25%氯化钙0.25ml，振荡摇 匀，置于36度水浴中10min，血浆混合物自行凝固，然后观察凝固块重 新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h不溶解即为阴性。
食品学院
3、透明质酸酶：又称扩散因子，能分解细胞间质的透明 质酸，故能增加细菌的侵袭力，使病菌易在组织中扩散。 4、链激酶：又称链球菌纤维蛋白溶酶，能使血液中纤维 蛋白酶原变成纤维蛋白酶，具有增强细菌在组织中的扩散 作用，该酶耐热，100℃50分钟仍可保持活性。 5、脂磷壁酸（LTA）：与细菌粘附于宿主细胞表面有关， 大多数LAT位于细胞膜和肽聚糖之间，通过肽聚糖孔伸展 至细菌细胞表面，人类口腔粘膜和皮肤上皮细胞、血细胞 等细胞膜上均有LAT的结合位点。
食品学院
5.杆菌肽敏感试验 挑取乙型溶血性链球菌液，涂布于血平板上，用灭菌镊子 夹取每片含有0.04单位的杆菌肽纸片，放于上述平板上， 于36度培养18-24h，如有抑菌带出现即为阳性，同时用 已知阳性菌株作为对照。
链球菌属及其检验「微生物检验」
链球菌属及其检验「微生物检验」链球菌属(Streptococcus)细菌，呈链状排列的革兰阳性球菌，个别种成双排列。
广泛分布于自然界、人及动物肠道和健康人鼻咽部，大多数不致病，致病菌可引起各种化脓性炎症、猩红热、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏反应性疾病。
下面是yjbys店铺为大家带来的关于链球菌属细菌的知识，欢迎阅读。
⒈分类链球菌的分类方法尚未统一。
常用下列两种方法。
⑴根据溶血现象：分为3类。
①甲型溶血性链球菌(α-hemolytic streptococcus)：菌落周围有1～2mm宽的草绿色溶血环，称甲型溶血或α溶血，该类菌又称草绿色链球菌，为条件致病菌。
②乙型溶血性链球菌(β-hemolytic streptococcus)：菌落周围有2～4mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或β溶血，该类菌又称溶血性链球菌，致病性强，常引起人和动物多种疾病。
③丙型链球菌(γ-streptococcus)：菌落周围无溶血环，因而又称不溶血性链球菌，一般不致病。
⑵根据抗原结构：按链球菌细胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D …等20个群。
同群链球菌间，因表面蛋白质抗原不同又分若干型。
如A群根据其M抗原不同，可分成约100个型;B群分4个型。
对人致病的链球菌菌株，主要是 A群，多数呈现乙型溶血。
⒉细菌特性⑴链球菌① 形态染色球形或椭圆形，直径0.5～1.0μm，链状排列，链的长短与细菌的种类和生长环境有关，在液体培养基中形成的链较长。
无芽胞，无鞭毛。
多数菌株在培养早期(2～4h)形成透明质酸的荚膜。
革兰染色阳性。
②分离培养要求较高，培养基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、维生素等物质。
多数菌株兼性厌氧，少数为专性厌氧。
在液体培养基中呈沉淀生长，在血平板上，37℃18～24h后可形成灰白色、圆形、凸起、光滑、直径为0.5mm～0.75mm的细小菌落，菌落周围出现不同类型的溶血环。
③生化反应触酶阴性、一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，这两特性可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。
常见致病菌检验—溶血性链球菌检验
三、微生物检验
（二）检验操作要点 6、生化鉴定： （2）杆菌肽敏感试验
将分纯的乙型溶血性链球菌接种血平板，在划 线处贴附杆菌肽纸片，37℃18h，出现抑菌带 为阳性，据此可推测为乙型溶血性链球菌。
三、微生物检验
（二）检验操作要点 7、报告： 根据培养后的形态，菌落特征及生化试验可报 告：有乙型溶血性链球菌生长。
2）链激酶（streptokinase；SK）
3） 链道酶（streptodornase；SD）
2. 所致疾病
淋巴管炎， 化脓性感染 蜂窝组织炎，
扁桃体炎等
毒素性疾病 猩红热
超敏反应性疾病 风湿热 急性肾小球肾炎
痈
链球菌感染
金黄色葡萄球菌感染
Ⅱ型超敏反应
溶血性链球菌
肾小球基底膜 共同抗原 急性肾小球肾炎
（2）外毒素类 1）致热外毒素
• 红疹毒素，猩红热毒素 • A群链球菌溶原菌菌株产生 • 引起猩红热
2） 链球菌溶血素
• SLO：对O2敏感。测定SLO抗体含量，可作为链球菌新近感染指 标之一或风湿热及其活动性的辅助诊断
• SLS：对O2稳定，β溶血环
（3）侵袭性酶 1） 透明质酸酶
• 扩散因子 • 分解细胞间质的透明质酸→组织中扩散
1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化 脓性炎症时造成食品的污染；
二、 生物学特性
2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺 炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染； 3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。 溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性 炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以 及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风 湿热、肾小球肾炎等变态反应。
病原学特性
4789.11溶血性链球菌
本标准与GB/T 4789.5-2003相比主要变化
—— 删除了以无菌生理盐水稀释样品的步骤； —— 增菌培养基以改良胰蛋白胨大豆肉汤代替了葡 萄糖肉浸液肉汤和匹克氏肉汤； —— 分离培养基以哥伦比亚CNA血琼脂和哥伦比 亚血琼脂代替了血琼脂平板； —— 完善了操作步骤； —— 在人血浆的基础上增加了兔血浆和绵羊血浆； —— 增加了规范性附录A。
结果与报告
综合以上试验结果，报告每25 g（mL）检 样中检出或未检出β型溶血性链球菌
本标准所代替的历次版本发布情况为： GB 4789.11－1984、 GB/T 4789.11－1994、 GB/T 4789.11－2003。
溶血性链球菌检验程序
样品25g（或mL）+ 225 mL mTSB 36 ℃±1 ℃ 18 h ~ 24 h
划线接种哥伦比亚CNA血琼脂平板 36 ℃±1 ℃
3.3 触酶试验 挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3% 过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β型溶血 性链球菌触酶为阴性。 3.4 链激酶试验 吸取草酸钾血浆0.2 mL于0.8 mL灭菌生理盐水中混 匀，再加入经36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h的可疑菌 的TSB培养液0.5 mL及0.25%氯化钙溶液0.25 mL， 振荡摇匀，置于36 ℃±1 ℃水浴中10 min，血浆混 合物自行凝固（凝固程度至试管倒置，内容物不 流动）。继续36 ℃±1 ℃培养24 h，凝固块重新完 全溶解为阳性，不溶解为阴性。β型溶血性链球菌 为阳性。
18 h～24 h ，平板和TSB 36 ℃±1 ℃
溶血性链球菌检验操作规程
溶血性链球菌检验操作规程溶血性链球菌（英文简称：S. pyogenes）是一种常见的革兰氏阳性球菌，通常引起咽峡炎、皮肤感染和淋巴结炎等疾病。
准确的检测和鉴定溶血性链球菌对于诊断和治疗这些疾病至关重要。
下面是关于溶血性链球菌检验的操作规程。
一、检验前准备1. 检验人员需佩戴好防护用具，如实验手套、隔离眼镜和口罩。
2. 准备好所需的检验试剂和材料，包括培养基、琼脂培养基、草莓牛血琼脂、货架刀等。
3. 仔细核对标本的标签和信息，确保和病人信息一致。
二、标本采集和处理1. 从患者口咽部或其他可疑感染部位采集标本，如咽拭子或分泌物样本。
2. 将标本稀释或切碎，使其与培养基充分混合。
3. 使用棉签或货架刀，将混合好的标本涂抹在琼脂培养基上。
三、培养和鉴定1. 将含有标本的琼脂培养基置于37℃恒温箱中培养18-24小时。
2. 观察培养基上是否有溶血环形形成，表明有溶血性链球菌的存在。
3. 将溶血环形的菌落或单个菌落划取到草莓牛血琼脂上。
4. 再次置于37℃恒温箱中培养18-24小时。
5. 观察草莓牛血琼脂上生长的菌落形态和特征。
6. 进一步进行革兰染色，观察菌形和细胞特征。
四、药敏试验对已鉴定的溶血性链球菌，可以进行药敏试验以确定对何种抗生素敏感。
1. 用细菌悬浮液调整到0.5～0.6麦克法尔兰（McFarland）标准。
2. 使用含有不同抗生素的纸片置于琼脂平板上。
3. 用择菌钳将纸片粘贴于琼脂平板上。
4. 将准备的溶血性链球菌悬液均匀涂抹在琼脂平板上。
5. 将琼脂平板置于37℃恒温箱中培养18-24小时。
6. 观察菌落的生长和抗生素纸片周围的抑制圈，根据直径大小判断菌株的抗药性。
五、结果判定和记录根据溶血环形、菌落形态、革兰染色和药敏试验的结果，判定溶血性链球菌的存在和鉴定结果，并将结果准确记录在检验报告中。
操作规程中的注意事项：1. 检验过程中应严格遵守无菌操作，避免交叉感染。
2. 确保检验室设备和培养基的质量，以及培养温度和时间的准确控制。
溶血性链球菌的检验
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免疫学检测技术如ELISA、免疫荧光等将不断改进，提高检测的灵敏
度和特异性，以便更准确地检测溶血性链球菌的相关抗原和抗体。
03Biblioteka 生物传感器技术生物传感器技术在未来可能会应用于溶血性链球菌的检测，通过设计
特定的生物传感器，实现对溶血性链球菌的快速、灵敏检测。
检测方法的标准化与规范化
标准化
制定统一的检测方法标准和操作流程，提高不同实验室之间的可比性和结果 的准确性。
指导公共卫生措施
通过对溶血性链球菌的检验，可帮助公共卫生部门评估和制定 针对该病的预防控制措施。
05
溶血性链球菌检验的未来 发展趋势
检测技术的改进与创新
01
分子生物学技术
随着分子生物学技术的不断发展，基于PCR、基因测序等技术的检测
方法将更加灵敏、特异，有助于更准确地诊断溶血性链球菌感染。
02
免疫学检测技术
病原体追踪
对于已确诊的溶血性链球菌感染患者，通过对 该菌的检验，可帮助医生追踪病原体的变化， 以便及时调整治疗方案。
流行病学调查
通过对溶血性链球菌的流行病学调查，有助于 了解该病的发病特点、传播途径等，为预防和 控制疾病提供依据。
治疗指导意义
指导抗生素选择
通过对溶血性链球菌的药敏试验，可帮助医生选 择敏感的抗生素进行治疗，提高治疗效果。
采用PCR等分子生物学方法检测细菌基因组中的特定基因片段，以确定是否为溶 血性链球菌感染。
分子生物学检测结果分析：根据扩增产物的大小和序列比对结果，判断是否为溶 血性链球菌感染。
04
溶血性链球菌检验的临床 意义
诊断意义
1 2 3
辅助诊断
β型溶血性链球菌的测定
一、编制目的为规范本单位β型溶血性链球菌的检测编制本作业指导书。
二、适用范围本指导书适用于食品中β型溶血性链球菌的测定。
三、编制依据GB/T 4789.11-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验》四、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a)恒温培养箱：36℃±1℃；b)冰箱：2℃~5℃；c)厌氧培养装置；d)天平：感量0.1g；e)均质器与配套均质袋；f)显微镜：10×～100×；g)无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头h) 三角烧瓶；i)无菌培养皿：直径90mm；j)pH计或pH比色管或精密pH试纸；k)水浴装置：36℃±1℃；l)微生物生化鉴定系统。
五、培养基和试剂5.1.改良胰蛋白胨大豆肉汤5.2 哥伦比亚CNA血琼脂5.3 哥伦比亚血琼脂5.4 革兰氏染色液5.5 胰蛋白胨大豆肉汤5.6 草酸钾血浆5.7 0.25%氯化钙（CaCl2）溶液5.8 3%过氧化氢（H2O2）溶液5.9生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡六、检验程序溶血性链球菌检验程序见图1图1溶血性链球菌检验程序七、操作步骤7.1样品处理及增菌以无菌操作取样25g（ml），加入装有灭菌225mlmTSB的均质杯，用旋转刀片式均质器以8000r/min～10000 r/min均质；或加入装有225ml mTSB的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1min～2min，液体样品振荡混匀即可。
于36℃±1℃，厌氧培养18h～24h。
7.2 分离将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂，36℃±1℃，厌氧培养18h～24h，观察菌落形态。
溶血性链球在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典型菌落形态为直径约2mm~3mm,灰白色、半透明、光滑、表面凸起、圆形、边缘整齐，并产生β型溶血。
7.3 鉴定7.3.1分纯培养挑取5个（如小于5个则全选）可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和TSB增菌液，36℃±1℃，培养18h～24h。
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2个 7支 1支 3支 12支 28套 1支
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食品安全检验技术（微生物部分）
溶血性链球菌检验
第一天后半天 1、样品处理 无菌操作称取检样25g（mL)，加入装有225mL灭菌生 理盐水的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以800010000r/min打碎1min，制成混悬液 。 2、增菌培养 吸取5mL混悬液接种至50mL葡萄糖肉浸液肉汤（如 检样污染严重，可同时接种5mL至匹克氏肉汤）， 36±1℃培养24h。 3、分离培养 混悬液直接划线于血平板36±1℃培养24h。
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二、流行病学与致病性
溶血性链球菌在自然界中分布较广，存 在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物 的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、 空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染， 被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对 人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化 脓性感染部位常成为食品污染的污染源。
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一般而言，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品： 1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓 性炎症时造成食品的污染； 2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜 禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染。 3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。 溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、 呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血 症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等 变态反应。
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（2）杆菌肽敏感试验 将分纯的乙型溶血性 链球菌接种血平板，在 划线处贴附杆菌肽纸片， 36℃，18h，出现抑菌带 为阳性，（可推测为乙 型溶血性链球菌）。
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四、报告
根据培养后的形态，菌落特征及生化试验结果进行报告。
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溶血性链球菌的致病性与其产生的毒素及其侵 袭性酶有关，主要有以下几种： 1、溶血素 2、致热外毒素 3、透明质酸酶 4、链激酶 5、链道酶 6、杀白细胞素 抵抗力： 60℃30min即被杀死，对常用消毒剂敏感。 乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、 磺胺均敏感。
（二）培养特性
1、多数为需氧或兼性厌氧，少数为微需氧或专性厌氧。 2、 对营养要求高，普通培养基不能良好生长，（需加 血清液、腹水等）。 3、最适温度37℃，pH7.4-7.6 4、在液体培养基中，溶血菌株,呈絮状或颗粒状沉淀生 长（上清下浊）；不溶血菌球，均匀浑浊生长，如粪链 菌。 5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、有 乳光圆形突起的细小菌落，直径0.5-0.75mm，针尖大小， 菌落周围出现溶血环。
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一、生物学特性
（一）形态与染色
1、呈球形或卵圆形，直径 0.5um-1um 链状排列（长短不 一）。 2、 革兰氏染色阳性，衰老培养 物常成阴性。 3 、无芽孢、无鞭毛、多数无夹 膜。
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第一天 样品处理和增菌培养
第一天前半天 规格名称 预先准备并灭菌的器材 数量
1、500mL广口瓶 2、13×100mm试管 3、10mL移液管 4、5mL移液管 5、1mL移液管 6、直径为90mm平皿 7、250mL量筒
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（三）生化特性
1、均分解葡萄糖产酸。
2、对乳糖、甘露醇、水杨苷等的分解因菌株而异。
3、能使牛奶产酸而不凝固，不液化明胶、不分解菊糖 （肺炎球菌分解葡萄糖）。 4、 A群菌对杆菌肽敏感。
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第二天 接种平板进行分离培养 从肉汤中接种血平板， 36±1℃培养24h。 第三天 分纯培养 从分离培养的血平板上，挑起乙型溶血圆形突 起的细小菌落，在血平板上分纯 ， 36±1℃培养24h。 血平板上菌落灰白色，半透明或不透明，表面 光滑，有乳光，直径约0.5mm~0.75mm，为圆形突起 的细小菌落，乙型溶血链球菌。周围有2mm~4mm界 限分明，无色透明的溶血圈。
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三、溶血性链球菌的的检验
GB/T4789.11-2003
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（一）实验内容
样品处理→增菌培养→分离培养→ 纯化培养→生化鉴定→报告
（二）实验过程
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食品安全检验技术（微生物部分） 第四天 鉴定
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1、革兰氏染色，阳性，G+链状排列，符合者可做生 化鉴定。 2、生化鉴定 （1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验） 吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水， 混匀，再加入链球菌18-24h36±1℃肉浸液肉汤培养 物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL，混匀，置于 36±1℃水浴10min,血浆混合物自行凝固，观察凝块 重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不 溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已 知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。