马铃薯茎尖脱毒培养关键因子分析
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
养的目的是通过脱除感染马铃薯的病毒和类病毒等 " 使优良品种的种性得以恢复 " 并提供生产无病毒种薯 的基础材料 $ 所以 " 它是一种基于优良品种所实施的 保障种薯质量的技术措施 $ 分生组织培养的标准操作 流程如下 ’
薯是无性繁殖作物 " 体内病毒的积累可使品种种性退 化 % 品质和产量降低 " 对其生产造成严重危害 $ 茎尖培 养是马铃薯脱毒的最主要方法 " 因为大部分病毒不能 感染马铃薯分生组织 $ 因此 " 分离分生组织进行人工 培养 " 生产无病毒植株 $ 再以无病毒植株为材料 " 进行 快速繁殖是目前国际上防治马铃薯病毒病 ! 提高马铃 薯产量和质量的有效方法 $
活和苗分化 ! 浓度一般在 !"#$;B;02 " 有些人认为 ! 培 养基成分和分生组织培养的过程在脱除病原 菌 中 也 起着关键作用 "
#"’"*++ 培养条件为 # 温度 #,$’-. ! 光照时间 #!/01 ! 照 度 ’!!!23 " 培养诱导 %$4 个月 ! 其间用同样培养基转
接 #$’ 次 ! 最后形成小植株 "
待用 $
6454>P’ 将幼苗切段放在 @: 倍双筒解剖显微镜下 " 用解
基金项目 ’ 云南省财政厅农业综合开发办公室 ( 优质马铃薯良种繁育基地建设 ) 项目资助 # 第一作者简介 ’ 林蓉 " 女 "6R9R 年出生 "5::> 级作物栽培学 与耕作学专业在读硕士研究生 # ST?/#- ’ U%--=6;@@V&#$/4+3? # 通信地址 ’ 云南农业大学 Q6W # 通讯作者 ’ 谢世清 # 收稿日期 ’5::@T:6T:K " 修回日期 ’
"
提高马铃薯组培苗脱毒率的有效措施 用标准的茎尖分生 组 织 培 养 流 程 可 以 成 功 地 脱
除马铃薯病原菌 " 但是 ! 其脱毒率通常很低 ’ 尤其对感 染马铃薯 H $) 病毒和类病毒的材料 ! 成功率更低 " 在 实际操作过程中 ! 要结合一些必要的辅助性措施以提 高脱毒效率 "
! 影响马铃薯茎尖培养脱毒的关键因素 !." 茎尖大小及芽的选择 一般茎尖越小 ! 脱毒效果 越 好 ! 但 不 容 易 成 活 ! 合 适 的 离 体 茎 间 应 该 是 带 #$’
8.8 低温处理可增加脱除类病毒的几率 上述三种措
施对脱除马铃薯类病毒几乎无作用 " 一般认为 ! 对材 料进行长时间 7* 个月以上 8 的低温 74$,L8 处理后 ! 再 进行分生组织的剥离和培养 ! 对脱除类病 毒 效 果 较 好"
# 存在的问题与前景展望 9." 存在的问题及改进措施 经过 ’! 多年的研究 ! 中
!.8 培养条件 培 养 室 是 植 物 组 织 培 养 的 重 要 场 所 " 培养室的温度控制在 ’!$’-C ! 高于 ’4D 苗顶端易产
生 烧 苗 现 象 ! 高 于 %%E 苗 停 止 生 产 ! 光 照 强 度 为
".8 病 毒 检 测 诱 导 成 形 的 小 苗 必 须 通 过 电 镜 技 术 $
个叶原基的马铃薯生长点且生长点附近的组 织 要 尽 量少 ! 这样既保证了一定的成活率 ! 又能排除大多数 病毒 " 芽的选择也直接影响离体茎尖的成活率 " 通常 大田植物顶芽和腋芽以及室内萌芽可适于茎 尖 培 养 脱毒 ! 但为了提高离体茎尖培养的成活率 应 选 择 壮 芽 " 研究表明 ! 如果把薯块放在较低的温度 7 约 ’!98 ! 较强的光照下进行萌发 ! 并取其壮芽 ! 就能获得较大 的离体茎尖 " 此外 ! 在甘薯茎尖培养脱毒研究中发
8.! 茎尖分生组织培养结合化学处理 高浓度的生长 素如 ’F*<K 或 A>> 可抑制病毒的增殖 " 但是 ! 绝大多
数学者都反对通过愈伤组织途径脱除马铃薯病毒 7 除 非对材料稀少或脱毒非常困难的品种 8 ! 因为通过愈 伤组织途径获得的植株变异很大 ! 难以保持原来品种 的特性 ’ 有人报道 ! 改变培养基配方 ! 尤其提高培养基 中重金属离子含量 ! 可提高脱毒率 ’ 认为高等植物对 重金属离子的耐性要高于原核生物病毒 " 此外 ! 在培 养基中加入抗生素如将氯苄青霉素和硫酸链 霉 素 联 合应用 ! 具有更加明显的抑菌效果 5,6"
6454577 取 6L5+? 长 的 块 茎 芽 " 放 在 烧 杯 里 " 上 面 盖 好 纱 布 " 用 自 来 水 冲 洗 6" " 然 后 移 入 无 菌 操 作 台 " 先 用 9;M 的 酒 精 浸 6;& " 无 菌 水 洗 5 次 & 再 用 :46N 的 升 汞 浸泡 KL6:?#$O 或用 ;N 的次氯酸钙浸泡 5:?#$E " 无菌 水冲洗 >L; 次 " 每次冲 ;?#$ & 放在灭过菌的培养皿内
摘 要 ’ 对马铃薯茎尖脱毒培养关键因子方面进行了分析 " 综合论述了马铃薯茎尖培养脱毒的原理 " 影响马铃薯茎尖培养脱毒的因素和培养条件的控制 " 并针对脱毒难的问题提出了提高脱毒率诸如结 合化学处理等的有效措施 " 指出了茎尖培养脱毒中尚存在的一些问题以及相应对策 $ 关键词 ’ 马铃薯 & 茎尖脱毒 & 组织培养
":’/0$./; G!4 H-H41 I,-*0JJ4J A4K L-*"/1 /’ "+4 ",JJ04 *0M"014 /L H/"-"/ -’I "+4 ’/’NH/,J/’/0J H/"-"/ /’ "+4 "/H /L J"4= O+-" J+/0MI (4 H-,I -""4’",/’ "/ "+4 H1/*4JJ /L *0M",P-",/’) G/ ,=H1/P4 "+4 ?0-M,"K /L H/"-"/ -’I "+4 ’/’NH/,J/’/0J 4LL4*" /L H/"-"/: "+4 -1",*M4 -MJ/ H0" L/1O-1I "+4 */0’"41 ,’ I4"-,M) +,& <)0=’; 23,%,3: >"4= -H4Q I4"/Q,L,*-",/’: G,JJ04 *0M"014
64546’’ 把马铃薯发芽块茎放入 >9F 恒温培养箱中 " 光 照时间 65"GH " 照度 5:::IJ " 处理 5KH 左右 " 目的是打
破种薯的休眠期后做茎尖剥离 $
! 马铃薯茎尖脱毒原理及方法 5)5 马铃薯茎尖脱毒原理 茎尖培养又叫分生组织培
养 " 是包括马铃薯在内的许多植物脱除病毒的重要手 段 $ 分生组织顶点培养法已发展成为对几乎所有无性 繁殖作物脱除病毒的有效手段 $ 不同病毒在植物体内 分布不均 " 马铃薯的 C 病毒和类病毒感染分生组织 和维管束 " 其余病毒却仅存在于维管系统组织 $ 首先 " 由于分生组织没有维管系统 " 这就使通过维管系统传
!"#$%&%’()*#+,-.,*/-’0+#%$+%’1,--%.#$’23-45678349’5::;’<,-=
’ ’ !"#
!""#$%%&’"()*+,’-./01’-2)34")*3
植物保护科学
国马铃薯组织和细胞培养已经取得了长足的发展 $ 但 与国际上的研究相比 $ 仍存在不少困难尚待进一步的 深入研究 ! 马铃薯试管苗存在的一个突出问题是 % 苗 在培养一定代数后会产生变异 $ 变异苗在田间表现为 叶片细长 $ 部分失绿 $ 呈现花叶状 $ 生长结果不正常 ! 通常试管苗内的变异率随培养代数增加而提高 $ 离体 培养会提高无性系变异的比率 $ 因此 & 增殖培养的代 数越多 $ 变异率越高 ! 经过前人的研究表明 B@C% 马铃薯 的继代培养次数应控制在 9HA 代 ! 另一个重要问题是 脱除病毒是否彻底 ! 剥离的外植体的大小与能否顺利 脱除病毒有直接关系 ! 外植体越小 $ 脱毒率一般越高 $ 但将其培养成苗的难度也越大 $ 较小的外植体有可能 首先分化为愈伤组织再分化成苗 $ 从而使变异的可能 性增加 ! 将分生组织培养分为分化诱导和成苗两步进 行 $ 可最大限度地避开愈伤组织阶段的出现 $ 防止变 异增加 ! 经分生组织培养获得的试管苗必须经过严格 多次的病毒和类病毒检测 $ 证实其不带病原菌之后 $ 方能投入生产使用 !
’’’’’’’’
’’’’ 马铃薯营养丰富 ! 适应性广 ! 增产潜力大 " 是中国
染的病毒不会感染到分生组织 & 其次 " 植物分生组织 代谢活力最强 " 病毒难以在代谢旺盛 % 细胞生长和分 裂快速的分生组织细胞中增殖 & 再次植物分生组织中 生长素的含量 D 或活性 E 一般远远高于其它组织 " 具有 抑制病毒的增殖效果 A5B$
现 ! 靠近顶芽的三个腋芽其分生组织培养成芽率高 ! 距离顶芽越远 ! 成活率就越低 ! 而马铃薯是否也具此 规律 ! 值得研究和探讨 "
5*6
!.! 培养基 谢庆华 $ 王平华等在对自制粉状培养基
研究的研究中发现不同营养含量的培养基对 试 管 苗 生育有影响 ’ 在相同营养含量的培养基中 ! 基质对苗 的生长 $ 快繁起到决定作用 " 蒋菁 ! 何新民等在四种
".9 防止病毒再侵染 在繁育过程中 ! 任一环节都可
能感染病毒而使脱毒马铃薯重新带有病毒 " 根据中国 马铃薯病毒的传播途径和待点 ! 防止病毒的再侵染除 定期喷施灭蚜农药外 ! 在核心原原种繁殖时 ! 要用不 低于 *! 目的呢龙纱网造成网室 ! 进行网内繁殖 " 在生 产 原 种 及 生 产 用 种 时 可 以 在 四 周 -!!& 空 间 范 围 内 无普通马铃薯种植 ! 实行空间隔离 ! 亦以种植高秆作 物 7 如高粱 $ 玉米等 8 实行屏障隔离 ! 集中栽培繁殖 "
5%6
8." 茎尖分生组织培养结合热处理 其依据的原理为
病毒和植物细胞对热处理温度及时间的反映不一样 " 已有报道证实 ! 仅热处理 7%GI8 即可以消除马铃薯块 茎内的马铃薯卷叶病毒 ! 并可大 幅 度 降 低 马 铃 薯 J 病毒的含量 ’ 对其它病毒的作用较小 ! 对类病毒则无 明显效果 " 但是 ! 在分生组织剥离之前或培养过程中 ! 对材料或外植体进行不同温度 $ 不同时间或不同热处 理方法 7 恒温或变温 8 的预热或高温处理 ! 可以非常有 效地提高脱险马铃薯病毒的几率 "
的粮菜兼用作物 # 随着马铃薯综合利用的发展 " 马铃 薯作为工业原料 ! 食品加工原料与饲料的比重日益增 大 " 因此 " 马铃薯又是一种经济作物 $ 中国马铃薯常年 种植面积为 >5: 万 "?5" 鲜薯产量约 @::: 万 . 左右 " 在粮食生产和农村经济中占有重要地位 $ 但是马铃
A6B
5)6 茎尖分生组织培养的操作流程 茎尖分生组织培
!"#$%&%’()*#+,-.,*/-’0+#%$+%’1,--%.#$’23-45678349’5::;’<,-=
* * !!"
Hale Waihona Puke Baidu
!""#$%%&’"()*+,’-./01’-2)34")*3
植物保护科学
马铃薯茎尖脱毒培养关键因子分析
林 蓉 " 谢春梅 " 谢世清
O 云 南 农 业 大 学 农 学 院 " 云 南 昆 明 Q;:5:6E
5::;T:>T:K #
中国农学通报 第 !" 卷 第 # 期 !$$% 年 # 月 植物保护科学
&’’()**+,’-./&0,12345,16.,7’./,
( ( !!"
剖针去掉幼叶 ! 直至露出半光滑的生长点 ! 用解剖刀 从 !"#$!"%&& 处带 #$’ 个叶原基的茎尖切下 ! 随即接 种于已灭菌的 () 培养基上并注明品种日期 "
5-6
附加不同激素浓度的培养基上进行脱毒试管 苗 快 繁 培养研究时发现 546# 不同马铃薯品种需要不同的培养 基而且在诱导与扩繁时最佳培养基所要求的 激 素 浓 度也不一样 " 少量的细胞分裂素有利于离体茎尖成活 和生长 ! 常用 !"!-:;02 的 4<=> " !"#?;02 以下的 @>% 有利于茎尖各部分的生长 ! 但浓度过高或使用时间过 长会产生不利影响 " 生长素对茎尖生长和发育具有重 要 作 用 ! 尤 其 以 A>> 效 果 显 著 ! 常 用 来 控 制 茎 尖 成
血清学技术 $ 聚合酶链反应等病毒检测手段确定不带 病毒 % 或不带主要危害病毒& ! 才能用于大量扩繁和推 广应用 " 病毒检测应贯穿脱毒马铃薯繁育的全过程 "
5#6
’!!!$%!!!23 ! 每天光照 #’/ " 也可以利用自然散射光
作光源 " 用散射光培养的试管苗茎叶粗大 ! 叶片肥厚 $ 深绿 ! 节间短 ! 生长健壮 " 在温室顶部加一层遮阳网 F 充分利用自然散射光 ! 收到良好的组培效果 " 孔繁春 ! 李文刚等研究发现 5G6! 不同培养方式 ! 不同光照对马铃 薯脱毒试管苗离体繁殖有较大的影响 "
"#$%&’(’ )* +,& -$./)0 )# /1, 2/,3 "4,5 6,/)5(*(.$/()# 78%/80, )* 9)/$/) 7,’ 8/’9: ;,4 <+0’=4,: ;,4 >+,?,’9
@!"#$%$ &’()*"+,"(%+ -$)./(0),1: A0’=,’9 B0’’-’ CDE6E5F
薯是无性繁殖作物 " 体内病毒的积累可使品种种性退 化 % 品质和产量降低 " 对其生产造成严重危害 $ 茎尖培 养是马铃薯脱毒的最主要方法 " 因为大部分病毒不能 感染马铃薯分生组织 $ 因此 " 分离分生组织进行人工 培养 " 生产无病毒植株 $ 再以无病毒植株为材料 " 进行 快速繁殖是目前国际上防治马铃薯病毒病 ! 提高马铃 薯产量和质量的有效方法 $
活和苗分化 ! 浓度一般在 !"#$;B;02 " 有些人认为 ! 培 养基成分和分生组织培养的过程在脱除病原 菌 中 也 起着关键作用 "
#"’"*++ 培养条件为 # 温度 #,$’-. ! 光照时间 #!/01 ! 照 度 ’!!!23 " 培养诱导 %$4 个月 ! 其间用同样培养基转
接 #$’ 次 ! 最后形成小植株 "
待用 $
6454>P’ 将幼苗切段放在 @: 倍双筒解剖显微镜下 " 用解
基金项目 ’ 云南省财政厅农业综合开发办公室 ( 优质马铃薯良种繁育基地建设 ) 项目资助 # 第一作者简介 ’ 林蓉 " 女 "6R9R 年出生 "5::> 级作物栽培学 与耕作学专业在读硕士研究生 # ST?/#- ’ U%--=6;@@V&#$/4+3? # 通信地址 ’ 云南农业大学 Q6W # 通讯作者 ’ 谢世清 # 收稿日期 ’5::@T:6T:K " 修回日期 ’
"
提高马铃薯组培苗脱毒率的有效措施 用标准的茎尖分生 组 织 培 养 流 程 可 以 成 功 地 脱
除马铃薯病原菌 " 但是 ! 其脱毒率通常很低 ’ 尤其对感 染马铃薯 H $) 病毒和类病毒的材料 ! 成功率更低 " 在 实际操作过程中 ! 要结合一些必要的辅助性措施以提 高脱毒效率 "
! 影响马铃薯茎尖培养脱毒的关键因素 !." 茎尖大小及芽的选择 一般茎尖越小 ! 脱毒效果 越 好 ! 但 不 容 易 成 活 ! 合 适 的 离 体 茎 间 应 该 是 带 #$’
8.8 低温处理可增加脱除类病毒的几率 上述三种措
施对脱除马铃薯类病毒几乎无作用 " 一般认为 ! 对材 料进行长时间 7* 个月以上 8 的低温 74$,L8 处理后 ! 再 进行分生组织的剥离和培养 ! 对脱除类病 毒 效 果 较 好"
# 存在的问题与前景展望 9." 存在的问题及改进措施 经过 ’! 多年的研究 ! 中
!.8 培养条件 培 养 室 是 植 物 组 织 培 养 的 重 要 场 所 " 培养室的温度控制在 ’!$’-C ! 高于 ’4D 苗顶端易产
生 烧 苗 现 象 ! 高 于 %%E 苗 停 止 生 产 ! 光 照 强 度 为
".8 病 毒 检 测 诱 导 成 形 的 小 苗 必 须 通 过 电 镜 技 术 $
个叶原基的马铃薯生长点且生长点附近的组 织 要 尽 量少 ! 这样既保证了一定的成活率 ! 又能排除大多数 病毒 " 芽的选择也直接影响离体茎尖的成活率 " 通常 大田植物顶芽和腋芽以及室内萌芽可适于茎 尖 培 养 脱毒 ! 但为了提高离体茎尖培养的成活率 应 选 择 壮 芽 " 研究表明 ! 如果把薯块放在较低的温度 7 约 ’!98 ! 较强的光照下进行萌发 ! 并取其壮芽 ! 就能获得较大 的离体茎尖 " 此外 ! 在甘薯茎尖培养脱毒研究中发
8.! 茎尖分生组织培养结合化学处理 高浓度的生长 素如 ’F*<K 或 A>> 可抑制病毒的增殖 " 但是 ! 绝大多
数学者都反对通过愈伤组织途径脱除马铃薯病毒 7 除 非对材料稀少或脱毒非常困难的品种 8 ! 因为通过愈 伤组织途径获得的植株变异很大 ! 难以保持原来品种 的特性 ’ 有人报道 ! 改变培养基配方 ! 尤其提高培养基 中重金属离子含量 ! 可提高脱毒率 ’ 认为高等植物对 重金属离子的耐性要高于原核生物病毒 " 此外 ! 在培 养基中加入抗生素如将氯苄青霉素和硫酸链 霉 素 联 合应用 ! 具有更加明显的抑菌效果 5,6"
6454577 取 6L5+? 长 的 块 茎 芽 " 放 在 烧 杯 里 " 上 面 盖 好 纱 布 " 用 自 来 水 冲 洗 6" " 然 后 移 入 无 菌 操 作 台 " 先 用 9;M 的 酒 精 浸 6;& " 无 菌 水 洗 5 次 & 再 用 :46N 的 升 汞 浸泡 KL6:?#$O 或用 ;N 的次氯酸钙浸泡 5:?#$E " 无菌 水冲洗 >L; 次 " 每次冲 ;?#$ & 放在灭过菌的培养皿内
摘 要 ’ 对马铃薯茎尖脱毒培养关键因子方面进行了分析 " 综合论述了马铃薯茎尖培养脱毒的原理 " 影响马铃薯茎尖培养脱毒的因素和培养条件的控制 " 并针对脱毒难的问题提出了提高脱毒率诸如结 合化学处理等的有效措施 " 指出了茎尖培养脱毒中尚存在的一些问题以及相应对策 $ 关键词 ’ 马铃薯 & 茎尖脱毒 & 组织培养
":’/0$./; G!4 H-H41 I,-*0JJ4J A4K L-*"/1 /’ "+4 ",JJ04 *0M"014 /L H/"-"/ -’I "+4 ’/’NH/,J/’/0J H/"-"/ /’ "+4 "/H /L J"4= O+-" J+/0MI (4 H-,I -""4’",/’ "/ "+4 H1/*4JJ /L *0M",P-",/’) G/ ,=H1/P4 "+4 ?0-M,"K /L H/"-"/ -’I "+4 ’/’NH/,J/’/0J 4LL4*" /L H/"-"/: "+4 -1",*M4 -MJ/ H0" L/1O-1I "+4 */0’"41 ,’ I4"-,M) +,& <)0=’; 23,%,3: >"4= -H4Q I4"/Q,L,*-",/’: G,JJ04 *0M"014
64546’’ 把马铃薯发芽块茎放入 >9F 恒温培养箱中 " 光 照时间 65"GH " 照度 5:::IJ " 处理 5KH 左右 " 目的是打
破种薯的休眠期后做茎尖剥离 $
! 马铃薯茎尖脱毒原理及方法 5)5 马铃薯茎尖脱毒原理 茎尖培养又叫分生组织培
养 " 是包括马铃薯在内的许多植物脱除病毒的重要手 段 $ 分生组织顶点培养法已发展成为对几乎所有无性 繁殖作物脱除病毒的有效手段 $ 不同病毒在植物体内 分布不均 " 马铃薯的 C 病毒和类病毒感染分生组织 和维管束 " 其余病毒却仅存在于维管系统组织 $ 首先 " 由于分生组织没有维管系统 " 这就使通过维管系统传
!"#$%&%’()*#+,-.,*/-’0+#%$+%’1,--%.#$’23-45678349’5::;’<,-=
’ ’ !"#
!""#$%%&’"()*+,’-./01’-2)34")*3
植物保护科学
国马铃薯组织和细胞培养已经取得了长足的发展 $ 但 与国际上的研究相比 $ 仍存在不少困难尚待进一步的 深入研究 ! 马铃薯试管苗存在的一个突出问题是 % 苗 在培养一定代数后会产生变异 $ 变异苗在田间表现为 叶片细长 $ 部分失绿 $ 呈现花叶状 $ 生长结果不正常 ! 通常试管苗内的变异率随培养代数增加而提高 $ 离体 培养会提高无性系变异的比率 $ 因此 & 增殖培养的代 数越多 $ 变异率越高 ! 经过前人的研究表明 B@C% 马铃薯 的继代培养次数应控制在 9HA 代 ! 另一个重要问题是 脱除病毒是否彻底 ! 剥离的外植体的大小与能否顺利 脱除病毒有直接关系 ! 外植体越小 $ 脱毒率一般越高 $ 但将其培养成苗的难度也越大 $ 较小的外植体有可能 首先分化为愈伤组织再分化成苗 $ 从而使变异的可能 性增加 ! 将分生组织培养分为分化诱导和成苗两步进 行 $ 可最大限度地避开愈伤组织阶段的出现 $ 防止变 异增加 ! 经分生组织培养获得的试管苗必须经过严格 多次的病毒和类病毒检测 $ 证实其不带病原菌之后 $ 方能投入生产使用 !
’’’’’’’’
’’’’ 马铃薯营养丰富 ! 适应性广 ! 增产潜力大 " 是中国
染的病毒不会感染到分生组织 & 其次 " 植物分生组织 代谢活力最强 " 病毒难以在代谢旺盛 % 细胞生长和分 裂快速的分生组织细胞中增殖 & 再次植物分生组织中 生长素的含量 D 或活性 E 一般远远高于其它组织 " 具有 抑制病毒的增殖效果 A5B$
现 ! 靠近顶芽的三个腋芽其分生组织培养成芽率高 ! 距离顶芽越远 ! 成活率就越低 ! 而马铃薯是否也具此 规律 ! 值得研究和探讨 "
5*6
!.! 培养基 谢庆华 $ 王平华等在对自制粉状培养基
研究的研究中发现不同营养含量的培养基对 试 管 苗 生育有影响 ’ 在相同营养含量的培养基中 ! 基质对苗 的生长 $ 快繁起到决定作用 " 蒋菁 ! 何新民等在四种
".9 防止病毒再侵染 在繁育过程中 ! 任一环节都可
能感染病毒而使脱毒马铃薯重新带有病毒 " 根据中国 马铃薯病毒的传播途径和待点 ! 防止病毒的再侵染除 定期喷施灭蚜农药外 ! 在核心原原种繁殖时 ! 要用不 低于 *! 目的呢龙纱网造成网室 ! 进行网内繁殖 " 在生 产 原 种 及 生 产 用 种 时 可 以 在 四 周 -!!& 空 间 范 围 内 无普通马铃薯种植 ! 实行空间隔离 ! 亦以种植高秆作 物 7 如高粱 $ 玉米等 8 实行屏障隔离 ! 集中栽培繁殖 "
5%6
8." 茎尖分生组织培养结合热处理 其依据的原理为
病毒和植物细胞对热处理温度及时间的反映不一样 " 已有报道证实 ! 仅热处理 7%GI8 即可以消除马铃薯块 茎内的马铃薯卷叶病毒 ! 并可大 幅 度 降 低 马 铃 薯 J 病毒的含量 ’ 对其它病毒的作用较小 ! 对类病毒则无 明显效果 " 但是 ! 在分生组织剥离之前或培养过程中 ! 对材料或外植体进行不同温度 $ 不同时间或不同热处 理方法 7 恒温或变温 8 的预热或高温处理 ! 可以非常有 效地提高脱险马铃薯病毒的几率 "
的粮菜兼用作物 # 随着马铃薯综合利用的发展 " 马铃 薯作为工业原料 ! 食品加工原料与饲料的比重日益增 大 " 因此 " 马铃薯又是一种经济作物 $ 中国马铃薯常年 种植面积为 >5: 万 "?5" 鲜薯产量约 @::: 万 . 左右 " 在粮食生产和农村经济中占有重要地位 $ 但是马铃
A6B
5)6 茎尖分生组织培养的操作流程 茎尖分生组织培
!"#$%&%’()*#+,-.,*/-’0+#%$+%’1,--%.#$’23-45678349’5::;’<,-=
* * !!"
Hale Waihona Puke Baidu
!""#$%%&’"()*+,’-./01’-2)34")*3
植物保护科学
马铃薯茎尖脱毒培养关键因子分析
林 蓉 " 谢春梅 " 谢世清
O 云 南 农 业 大 学 农 学 院 " 云 南 昆 明 Q;:5:6E
5::;T:>T:K #
中国农学通报 第 !" 卷 第 # 期 !$$% 年 # 月 植物保护科学
&’’()**+,’-./&0,12345,16.,7’./,
( ( !!"
剖针去掉幼叶 ! 直至露出半光滑的生长点 ! 用解剖刀 从 !"#$!"%&& 处带 #$’ 个叶原基的茎尖切下 ! 随即接 种于已灭菌的 () 培养基上并注明品种日期 "
5-6
附加不同激素浓度的培养基上进行脱毒试管 苗 快 繁 培养研究时发现 546# 不同马铃薯品种需要不同的培养 基而且在诱导与扩繁时最佳培养基所要求的 激 素 浓 度也不一样 " 少量的细胞分裂素有利于离体茎尖成活 和生长 ! 常用 !"!-:;02 的 4<=> " !"#?;02 以下的 @>% 有利于茎尖各部分的生长 ! 但浓度过高或使用时间过 长会产生不利影响 " 生长素对茎尖生长和发育具有重 要 作 用 ! 尤 其 以 A>> 效 果 显 著 ! 常 用 来 控 制 茎 尖 成
血清学技术 $ 聚合酶链反应等病毒检测手段确定不带 病毒 % 或不带主要危害病毒& ! 才能用于大量扩繁和推 广应用 " 病毒检测应贯穿脱毒马铃薯繁育的全过程 "
5#6
’!!!$%!!!23 ! 每天光照 #’/ " 也可以利用自然散射光
作光源 " 用散射光培养的试管苗茎叶粗大 ! 叶片肥厚 $ 深绿 ! 节间短 ! 生长健壮 " 在温室顶部加一层遮阳网 F 充分利用自然散射光 ! 收到良好的组培效果 " 孔繁春 ! 李文刚等研究发现 5G6! 不同培养方式 ! 不同光照对马铃 薯脱毒试管苗离体繁殖有较大的影响 "
"#$%&’(’ )* +,& -$./)0 )# /1, 2/,3 "4,5 6,/)5(*(.$/()# 78%/80, )* 9)/$/) 7,’ 8/’9: ;,4 <+0’=4,: ;,4 >+,?,’9
@!"#$%$ &’()*"+,"(%+ -$)./(0),1: A0’=,’9 B0’’-’ CDE6E5F