五鹤续断对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤各脑区一氧化氮含量及一氧化氮合酶活性的影响

五鹤续断对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤各脑区一氧化氮含量及
一氧化氮合酶活性的影响
谭文波陈龙菊（湖北民族学院医学院，湖北恩施445000）
〔摘要〕目的探讨五鹤续断醇提液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中各脑区一氧化氮（NO）浓度及一氧化氮合酶（NOS）活性的影响。

方法用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注动物模型，用比色法测定再灌注后不同时间点脑组织中NO含量和NOS活性。

结果模型组大脑皮质和海马中NO含量和NOS活性明显增高，五鹤续断醇提液可降低大脑皮质和海马中NO含量和NOS活性，各时点NO含量与NOS活性成显著正相关。

结论五鹤续断醇提液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有明显保护作用，其机制可能与降低NO和NOS表达水平有关。

〔关键词〕五鹤续断；脑缺血再灌注损伤；一氧化氮；一氧化氮合酶
〔中图分类号〕R285.5〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2013）01-0142-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2013.01.059
研究表明，在缺血再灌注损伤机制中，一氧化氮（NO）及一氧化氮合酶（NOS）发挥重要作用〔1〕。

目前已证明五鹤续断具有抗炎、抗氧化和神经保护作用〔2〕，其作用机制十分复杂，有关其在脑缺血再灌注损伤中的作用尚无报道，为此，我们采集了本地区五鹤续断探讨其在脑缺血再灌注损伤中可能存在的作用及机制，旨在为进一步研制开发该药提供实验数据。

1材料与方法
1.1药品、试剂与仪器五鹤续断注射液的制备：五鹤续断由湖北省恩施自治州中药材生产质量管理规范（GAP）示范基地提供，采用水提醇沉淀法制成含生药30%的注射液，瓶装密封消毒备用。

NO与NOS试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。

化学药品由附属医院药房提供。

UV-2450分光光度仪，GL-20GII型高速低温离心机，Multikan MK3酶标仪，电子分析天平，内切式组织匀浆机，低温冰箱。

1.2动物分组及给药110只健康清洁级Wistar大鼠，体重300 350g，雌雄不限（华中科技大学同济医学院动物中心提供）。

随机分为假手术组、模型组、五鹤续断组，其中模型组组和五鹤续断组各分为缺血1h再灌注3、12、24、48、72h组，每小组10只。

五鹤续断组术前按6g/kg体重连续腹腔注射五鹤续断注射液3d，每日1次，假手术组和模型组注射等量的生理盐水，第3日给药后1h建立局灶性脑缺血1h再灌注模型。

1.3动物模型用10%水合氯醛（300mg/kg）麻醉，颈部脱毛后仰卧位固定，常规消毒，颈正中切开，分离右侧颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉，结扎颈总动脉、颈外动脉，于颈总动脉分叉处插入直径为0.26mm的尼龙线18mm，经颈内动脉、感觉有阻力即达大脑中脉起始部，完全阻断其血流，结扎颈内动脉。

造模成功1h后轻轻拔出栓线约1cm，造成再灌注。

假手术组仅行颈动脉剥离，不做插线处理。

术后将大鼠分笼饲养。

1.4NO及NOS含量测定按实验要求在各时间点断头取右脑迅速置于冰盘上，分离海马及皮质缺血中心区，分别称重，后置于匀浆机上制成10%的脑匀浆，3000r/min离心10min，取
0.5ml上清液作检测标本按试剂盒说明测定NO及NOS含量。

1.5统计学方法采用SPSS统计软件进行统计学处理，计量资料用xʃs表示，组间比较采用t检验，并对NOS和NO含量进行相关分析。

2结果
表1可见，与假手术组比较，模型组各时点大鼠皮质和海马中NO和NOS含量明显增加（P＜0.05）；与模型组比较，五鹤
表1五鹤续断对缺血再灌注损伤大鼠各脑区NO和NOS影响（xʃs，n=10）组别皮质NO（μmol/g）海马NO（mol/g）皮质NOS（U/g）海马NOS（U/g）
假手术组20.82ʃ1.4419.83ʃ2.5812.65ʃ1.0612.07ʃ0.93模型3h组25.93ʃ1.561）24.61ʃ1.691）16.72ʃ1.261）16.88ʃ1.03模型12h组29.78ʃ1.421）28.15ʃ1.641）20.51ʃ1.321）19.96ʃ1.151）模型24h组32.65ʃ1.381）31.26ʃ2.861）22.38ʃ1.191）21.92ʃ1.071）模型48h组28.92ʃ1.331）27.86ʃ1.411）19.67ʃ1.481）19.56ʃ1.351）模型72h组24.85ʃ1.471）24.02ʃ1.561）15.93ʃ1.341）16.42ʃ1.291）五鹤续断3h组22.07ʃ1.162）21.95ʃ1.572）13.85ʃ1.382）12.97ʃ1.362）五鹤续断12h组24.24ʃ1.082）24.19ʃ1.482）14.94ʃ1.352）14.78ʃ1.232）五鹤续断24h组25.16ʃ1.272）25.05ʃ1.692）15.13ʃ1.242）15.65ʃ1.212）五鹤续断48h组23.41ʃ1.342）23.96ʃ1.362）14.76ʃ1.422）14.25ʃ1.372）五鹤续断72h组20.98ʃ1.232）20.84ʃ1.352）12.985ʃ1.342）12.72ʃ1.362）
与假手术组比较：1）P＜0.05；与模型组比较：2）P＜0.05
第一作者：谭文波（1974-），男，讲师，主要从事延缓衰老的基础研究。

续断组各相应时点大鼠皮质和海马中NO和NOS含量明显降
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·中国老年学杂志2013年1月第33卷
低（P＜0.05）。

模型组和五鹤续断组，大鼠皮质和海马中NO 和NOS含量于再灌注后3h明显升高，24h达高峰，72h接近正常，且在各相应时点大鼠皮质和海马中NO与NOS呈正相关（r=0.85）。

3讨论
NO是一种具有很强氧化还原特性的自由基性质的气体。

生理浓度的NO在中枢神经系统中参与信息传递和细胞保护作用，但NO产生、释放过量或供给过多可通过NO自由基产物使神经细胞氧化而破坏；NO也可直接进入神经胶质细胞，影响线粒体呼吸链和引起核酸的硝基化，损伤胶质细胞；还可介导缺氧时NMDA受体和谷氨酸诱导的神经毒性而致神经元的损害〔3〕。

NO还能通过损伤DNA、干扰能量代谢和与细胞因子作用诱导细胞凋亡〔4〕。

NOS广泛分布于神经元及血管内皮细胞中，可催化精氨酸生成瓜氨酸和NO〔5〕。

本实验说明再灌注损伤后大脑皮质和海马内NO水平的增高可能与NOS诱导有关，由于NOS表达的增加，使NO大量产生，NO的神经毒性作用导致神经细胞坏死和凋亡，由此导致缺血性脑损伤进一步加重。

本研究结果还显示，五鹤续断明显降低了再灌注损伤后各相应时点大鼠皮质和海马中NO和NOS含量，且NO含量与NOS成正相关。

表明五鹤续断能通过抑制脑缺血再灌注后NO和NOS 过度表达发挥对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。

其作用机制可能为抑制NOS的过度表达，从而减少NO的产生，抑制脑缺血损伤中神经细胞凋亡，减轻迟发性神经元坏死，保存神经细胞功能。

4参考文献
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〔2012-01-05收稿2012-05-06修回〕
（编辑曹梦园)
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岳磊等担载丝裂霉素C纳米纤维体内降解机制第1期。