厌氧菌的培养方法
一种嗜黏蛋白阿克曼氏菌的厌氧培养方法与流程
一种嗜黏蛋白阿克曼氏菌的厌氧培养方法与
流程
嗜黏蛋白阿克曼氏菌是一种厌氧菌，其培养方法和流程相对复杂。
以下是一种常见的嗜黏
蛋白阿克曼氏菌的厌氧培养方法和流程：
1. 制备培养基：根据阿克曼氏菌的要求，调配厌氧培养基，如ATCC 1289培养基等。
2. 培养基灭菌：使用自动厌氧培养箱或高压灭菌器将培养基进行灭菌处理，以消除任何外源菌
的污染。
3. 菌种接种：将已培养好的阿克曼氏菌种子接种到灭菌的培养基中。
要确保接种时的无菌条件。
4. 厌氧条件：将接种后的培养基密封，并置于厌氧条件下培养。
可以使用氧气清除剂、气体封
闭袋等方式提供细菌所需的无氧环境。
5. 培养温度和时间：根据菌种的要求，将培养基置于适当的温度下进行培养，并设定培养的时间。
6. 观察菌落生长：在培养过程中，定期观察培养基中菌落的生长情况。
可以使用显微镜观察细
菌的形态。
7. 收获培养物：培养完毕后，收获培养物。
可以通过离心或过滤等方式分离菌体和培养液。
8. 菌体保存：将分离得到的阿克曼氏菌体保存到液氮中，以备后续实验和应用。
总的来说，嗜黏蛋白阿克曼氏菌的厌氧培养方法需要提供合适的培养基和无氧环境，并严格控
制培养的温度和时间。
在培养的过程中，注意观察菌落生长情况，并及时收获培养物进行保存。
厌氧性细菌
3.免疫性:抗毒免疫,吞噬防御功能增强。 4.A及F型可产生肠毒素,引起食物中毒。 (三)微生物学诊断
1.采标本直接涂片镜检 2.分离培养鉴定细菌 3.动物试验
(四)防治原则 1.自动免疫─多价类毒素 2.被动免疫─多价抗毒素
常用的培养方法：
1，厌氧培养法：肉渣汤培养基、巯基乙酸钠培养基即可造成厌氧 环境；
2，焦性没食子酸法： 3，厌氧缸法： 4，气袋法： 5，厌氧箱法：
两类厌氧菌感染的不同点
────────────────────────────
项目
厌氧芽胞杆菌感染
无芽胞厌氧菌感染
────────────────────────────
3000 U。 注意过敏反应：因为TAT马抗毒素。 脱敏疗法： 紧急预防,早用, 量足。
二、产气荚膜杆菌(Clostridium perfringens) (一)生物学特性 1.形态染色:粗短杆菌,芽胞呈梭状,体内形成荚膜
2.培养特性:专性厌氧。
血平板上，菌落较大，灰白色，不透明、边缘锯齿状；多 数菌 株有双层溶血圈，内环完全溶血是 毒素，外层为 毒素，不溶血；
产气荚膜杆菌菌落（溶血）
厌氧芽胞 杆菌检查
接种破伤风杆菌
接种产气荚膜杆菌
肉 牛高
渣 汤 培 养 基
乳 培
糖 琼 脂
养 基
培 养 基
破伤风杆菌 产气荚膜杆菌
(二)致病性与免疫性
1. 致病物质
此酶破坏线立体，死细胞呼吸
α毒素分解 细胞膜上
和高能磷酸化合物合成障碍
红细胞破坏 贫血
毒
卵磷脂酶 组织细胞 组织坏死
肉渣汤培养基：混浊生长，产生气体、肉渣不被消化，肉 色 呈肉红色，
厌氧菌培养驯化
厌氧反应池B-107在正式投用前要进行厌氧菌的培养和驯化,具体方法步骤如下：1、将中活性污泥打入厌氧池中作为接种污泥;打入的污泥量以达到厌氧池正常操作水位的10%为宜;2、启动气浮水提升泵P-101向厌氧池注入污水,注入量以达到正常操作水位的40%左右,即污水量加活性污泥量达到厌氧池正常操作水位的50%;3、启动潜水搅拌器流以保持池内污水处于搅拌状态,不致使污泥沉在池底;然后即使池内厌氧菌自行生长繁殖;每2天启动一次气浮水提升泵P-101向厌氧池内注污水,每次注入5%液位10天后即达到正常操作液位;4、在厌氧菌培养阶段每天分析一次池内污水中的CODcr、氨氮和总磷;保持CODcr在300 mg/L 以上,氨氮在 mg/L以上,总磷在 mg/L以上;如果CODcr低于300 mg/L则立即启动气浮水提升泵P-101向池内注污水,如果氨氮低于 mg/L 则向池内投加尿素以补充氮源,如果总磷低于 mg/L则向池内投加磷酸三钠;投加的数量以达到上述指标为准;5、10天后如分析结果显示池中的CODcr和氨氮比进水降低20%以上,说明厌氧菌已经生成,则进入污泥培养驯化阶段;6、进入污泥驯化阶段时,启动气浮水提升泵P-101向池内连续进水,同时也连续出水;进水量控制在正常进水量的10%左右;每天提高一次进水量,每次提高正常进水量的10%;10天后即达到正常进水量;7、在污泥培养驯化阶段每天分析一次CODcr,和氨氮;如果出水中的CODcr和氨氮比进水中的CODcr和氨氮降低30%以上,说明厌氧菌已形成,可以转入正常操作状态,投入正常运行;如果出水中的CODcr和氨氮基本不降低,说明厌氧菌形成不好,则要减少进水量或暂时停止进水,进一步培养厌氧菌;厌氧菌的培养与驯化一般大约要25-40天;如水温高30-40℃则需要的时间就短,如水温低≤25℃则需要的时间就长,如水温低于15℃则很难培养出厌氧菌;推流曝气池污泥培养与驯化推流曝气池污泥培养与驯化：1 将污泥池内剩余活性污泥倒入推流曝气池作为接种污泥;倒入量以达到推流曝气池正常水位的10%左右为宜;2 厌氧反应池正常出水直接向推流曝气池B-108进水;进水量按正常设计总进水量的10%左右连续进水;同时开启罗茨鼓风机P-110向曝气池内送风;3 当推流曝气池内的水位达到设计水位100%时则停止进水,只向推流曝气池内鼓风,进行污泥的培养,时间3天左右;4 在污泥培养阶段每天分析一次推流曝气池中的CODcr、总氮、总磷、和溶解氧;保持CODcr在300mg/L以上,总氮在L以上,总磷在左右,溶解氧控制在L;如果CODcr低于300mg/L则由厌氧池向推流曝气池内注污水,如果总氮低于L则向曝气池中加入尿素,如果总磷低于L则向推流曝气池内加入磷酸三钠;在污泥培养阶段最好向推流曝气池内加入部分生活污水;5 三天以后则转入污泥培养驯化阶段;由厌氧池向推流曝气池内连续进水,进水量控制在正常总进水量的10%左右为宜;以后每天增加10%进水量,最好同时引入部分生活污水;6 在向推流曝气池连续进水后,同时开启污泥回流泵P-105向推流曝气池内打污泥回流,回流量控制在进水量的50%左右;7 在污泥培养驯化阶段每天分析一次CODcr、总氮、总磷、溶解氧及污泥浓度;当分析推流曝气池的出水CODcr比进水CODcr降低50%以上,污泥浓度达到2000-4000mg/L时,则视为曝气池的污泥培养驯化结束,即将进水量提到正常运行的总进水量,推流曝气池投入正常运行;以上指标为参考指标,实际控制指标需根据污水实际水质情况在操作实际过程中通过实践摸索后加以确定;BAF滤池的操作BAF滤池处在培养微生物污泥驯化阶段污水进水流量要控制在30T/H左右;同时,每天要向池中加磷酸盐磷酸三钠等50～100kg,控制池中污水中总磷含量在～左右;每天取样分析一次,同时分析总N含量,如总N含量低于,则需投加尿素,使总N含量控制在2～5ppm左右;约15天左右待BAF滤池B-111生物膜形成后即可将水量缓慢提到设计水量即200T/H,同时尿素、磷酸盐可以少加或不加;BAF滤池投入正常运行;判断生物膜是否形成可根据BAF滤池B-111的出水分析COD、NH3-N是否比进水降低了50％以上;当液位达正常操作液位后即开启鼓风阀门向BAF滤池供风,此时要观察曝气器运行情况有无示冒气泡的地方;同时调节进风开度调节风量,使BAF滤池内的污水溶解氧控制在2-5ppm,每天取样分析一次;如果鼓风系统故障或其他故障停止了向BAF滤池B-111的供风则应立即关闭鼓风管线阀门并立即开启净化风管线阀门,向池内供净化风;1.厌氧污泥主要来源于已有的厌氧工程,如汉斯啤酒厌氧发酵工程、农村沼气池、鱼塘、泥塘、护城河清淤污泥；好氧污泥主要来自城市污水处理厂,应拉取当日脱水的活性污泥作为好氧菌种;2.一般来讲,好氧正常启动可在10-20d内完成,递增比例为5-10%；而厌氧进水递增比例则要小的很多,一般应控制挥发酸VFA浓度不大于1000mg/L,且厌氧池中PH值应保持在范围内,不要产生太大的波动,在这种情况下水量才可慢慢递增;一般来讲,厌氧从启动到转入正常运行满负荷量进水需要3-6个月才能完成3.对N、P等营养物需求低,好氧工艺要求C：N:P=100:5:1,厌氧工艺为C:N:P=350-500:5:1.水解阶段——含有蛋白质水解、碳水化合物水解和脂类水解;b.发酵酸化阶段——包括氨基酸和糖类的厌氧氧化,以及较高级脂肪酸与醇类的厌氧氧化;c.产乙酸阶段——含有从中间产物中形成乙酸和氧气,以及氢气和二氧化碳形成乙酸;d.产甲烷阶段——包括从乙酸形成甲烷,以及从氧、二氧化碳形成甲烷;废水中有硫酸盐时,还会有硫酸盐还原过程5.厌氧反应的工艺控制条件：1温度：按三种不同嗜温厌氧菌嗜温5-20℃嗜温20-42℃嗜温42-75℃工程上分为低温厌氧15-20℃、中温厌氧30-35℃、高温厌氧50-55℃三种;温度对厌氧反应尤为重要,当温度低于最优下限温度时,每下降1℃,效率下降11%;在上述范围,温度在1-3℃的微小波动,对厌氧反应影响不明显,但温度变化过大急速变化,则会使污泥活力下降,产生酸积累等问题;2 PH：厌氧水解酸化工艺,对PH要求范围较松,即产酸菌的PH应控制4-7范围内；完全厌氧反应则应严格控制PH,即产甲烷反应控制范围最佳范围为低于或高于,甲烷化速降低;3氧化还原电位：水解阶段氧化还原电位为-100～+100mv,产甲烷阶段的最优氧化还原电位为-150～-400mv;因此,应控制进水带入的氧的含量,不能因以对厌氧反应器造成不利影响;4营养物：厌氧反应池营养物比例为C:N:P=350-500:5:1;5有毒有害物：抑制和影响厌氧反应的有害物有三种：a.无机物:有氨、无机硫化物、盐类、重金属等,特别硫酸盐和硫化物抑制作用最为严重；b.有机化合物:非极性有机化合物,含挥发性脂肪酸VFA、非极性酚化合物、单宁类化合物、芬香族氨基酸、焦糖化合物等五类;c.生物异型化合物,含氯化烃、甲醛、氰化物、洗涤剂、抗菌素等;6.好氧污泥所谓活性污泥培养,就是为活性污泥的微生物提供一定的生长繁殖条件,即营养物,溶解氧,适宜温度和酸碱度;1营养物：即水中碳、氮、磷之比应保持100∶5∶1;2溶解氧：就好氧微生物而言,环境溶解氧大于l,正常代谢活动已经足够;但因污泥以絮体形式存在于曝气池中,以直径500μm活性污泥絮粒而言,周围溶解氧浓度2mg/l时,絮粒中心已低于l,抑制了好氧菌生长,所以曝气池溶解氧浓度常需高于3－5mg/l,常按5－10mg/l控制;调试一般认为,曝气池出口处溶解氧控制在2mg/l较为适宜;3温度：任何一种细菌都有一个最适生长温度,随温度上升,细菌生长加速,但有一个最低和最高生长温度范围,一般为10－45oC,适宜温度为15－35oC,此范围内温度变化对运行影响不大;4酸碱度：一般PH为6－9;特殊时,进水最高可为PH 9－,超过上述规定值时,应加酸碱调节7.曝气池控制主要因素：1维持曝气池合适的溶解氧,一般控制1－4mg/l,正常状态下监测曝气池出水端DO 2mg/l为宜;2保持水中合适的营养比,CBODNP＝100513维持系统中污泥的合适数量,控制污泥回流比,依据不同运行方式,回流比在0－100％之间,一般不少于30－50％3|评论。
厌氧菌操作流程
厌氧菌培养操作规程第一部分 标本采集和运送有厌氧菌感染指征时，需进行微生物学诊断。
而标本的采集和运送是否合格，对厌氧菌检验结果影响很大。
要求标本绝对不能被正常菌群所污染。
采集时尽量避免接触空气。
临床在进行厌氧菌培养前还应与实验室联系，做好接种培养的准备，进行床边接种或采用输送培养基。
一、标本采集标本应从正常无菌部位或通过严格无菌技术采集，血液、胸腔液、腹腔液、心包液、关节液、胆汁、脑脊液及通过外科无菌手术抽出的脓液等，与常规方法相同。
用特殊技术或方法采取的标本，采集部位与方法如下：1、肺部 肺部分泌物可经气管在环甲膜平面以下抽取，或用纤维支气管镜。
带有保护取样刷不被正常菌群污染的套管。
将取样刷剪下。
可放入运送培养基或床边直接接种。
2、胸腔 直接胸腔穿刺。
3、尿道 耻骨联合上方经皮肤穿刺膀胱抽尿。
4、脓肿 封闭性脓肿用无菌空针抽取。
如已破溃，用无菌棉拭子擦去表面脓液。
取深部分泌物。
5、女性生殖道 消毒阴道从后穹隆穿刺，取脓液。
若取子宫分泌物则用无菌导管抽取，导管外套以一个保护膜套管，插入子宫后才戳穿保护膜套管，在子宫内取标本。
6、窦道或深部伤口 用空针连着导管，尽可能深入抽取。
伤口底部、边缘和窦道壁上刮下来的组织也是很好的标本，更能反映感染的细菌。
若标本量太少，可适当加少量无菌盐水，冲洗后再吸出。
7、血液标本 毛囊和皮脂腺深部的丙酸杆菌易造成污染。
用碘酊消毒后必须等一定时间，不要立即抽血。
其它注意事项：必须通过用于厌氧菌正常栖居地才能取到的标本，如痰、支气管镜采样（无特殊保护套）、咽拭子、排出的尿及阴道拭子不能做厌氧菌培养，粪便标本厌氧菌培养．只能做难辨梭菌及肉毒杆菌的培养。
在无条件床边采样时，尽快将空针中的气体排尽，用消毒空针抽取厌氧培养标本，将针头插入无菌像皮塞。
必须用棉拭子采集的标本．可立即做床旁接种或插入运送培养基中送细菌室培养二、标本运送1、标本送入厌氧运送装置后，应尽快送到实验室，最迟不超过6小时。
厌氧菌的分离、培养及鉴定
厌氧菌的分离、培养及鉴定1.1实验内容:厌氧菌的分离、培养及鉴定;1.2目的:1掌握厌氧菌的分离、培养及活菌计数的一般方法。
了解厌氧菌菌鉴定的一般方法。
2复习并巩固平时所学的微生物知识与技能。
3培养独立思考、设计和动手实验的能力。
二介绍:厌氧微生物在自然界分布广泛，种类繁多，其生理作用日益受到人们的重视。
专性厌氧菌，对氧气非常敏感，因此，他们的分离、培养及活菌计数的关键是提供无氧和低氧化还原电势的培养环境。
厌氧菌的培养:在培养厌氧菌时，最需要控制的是厌氧条件，在pH=7.0,O2的浓度与1atm 的氧平衡时，O2--O2-反应的电位是0.81V，因此，在-0.33V时，O2浓度是大气压中O2浓度的10-75。
每升饱和了空气的水中含有1.48×10-55个O2。
所以说，要保证厌氧菌培养时的低电位是很重要的。
厌氧菌的培养方法很多，如厌氧箱法、厌氧袋法、厌氧罐法。
这些方法都需要特定的除氧措施，操作步骤多，较繁琐。
本实验介绍的是一种简便的试管培养法--亨盖特厌氧滚管技术，亨盖特厌氧滚管技术是美国微生物学家亨盖特于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术因此他是世界上第一个分离纯化厌氧菌的人。
以后这项技术又经历了几十年的不断改进，从而使亨盖特厌氧技术日趋完善，并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一套完整技术，而且多年来的实践已经证明它是研究严格、专性厌氧菌的一种极为有效的技术。
该技术的优点是:预还原培养基制好后，可随时取用进行试验;任何时间观察或检查试管内的菌种都不会干扰厌氧条件。
三实验材料与设备:3.1分离与培养:3.1.1菌种:待测样品;3.1.2培养基:改良的PRAS培养基(氮素自加)[配方组成--NH4CL1g,MgCl20.1g,K2HPO40.4g,KH2PO40.2g,甲酸钠5g,乙酸钠5g,甲醇3.5ml,Ph值为7.0,蒸馏水1000ml,1%的树脂刃天青(还原指示剂)1ml,121摄氏度灭菌20min.使用前每5ml培养基加入1%Na2S(还原剂)和5%NaHCO3及3000u/ml青霉素液(抑制剂)各0.1ml]3.1.3试剂:冰块Na2SNaHCO33.1.4器材:高纯氮气厌氧管厌氧手套箱注射器恒温培养箱铜柱除氧系统定量加样器厌氧罐超声波破碎仪酒精灯冰块水浴锅记号笔振荡器等3.2菌种的鉴定:3.2.1菌种:待测菌3.2.2培养基;糖发酵培养基、蛋白胨水培养基、淀粉培养基(液体);3.2.3试剂;乙醚吲哚试剂卢戈氏碘液;3.2.4器材:超净工作台恒温培养箱高压蒸汽灭菌锅接种环移液管载玻片显微镜等四、实验方法与步骤:4.1分离与培养4.1.1铜柱系统除氧铜柱是一个内部装有铜丝或铜屑的硬质玻璃管。
厌氧菌的培养方法 ppt课件
2 0.1 0.2
厌氧
无色
残存有氧气
蓝色
10
卢卡斯固体厌氧指示剂
2％硼砂溶液
5毫升
9％硫乙醇酸
1毫升
酚红溶液
0.1～0.2毫升
0.02％美兰溶液
10毫升
琼脂
1％
厌氧
无色
残存有氧气
蓝色
11
布鲁氏指示剂
60％羟甲基氨基甲酯 4％葡萄糖 0.02％美蓝
厌氧
无色
残存有氧气
蓝色
1 1 1
12
疱肉培养基:
牛肉渣
0.5g
牛肉浸液
7ml
液面上加盖3～4mm厚的融化凡士林，灭菌。
生物好氧厌氧培养方法
30
2.7 转管技术和气体喷射培养法
钢瓶进气 除氧气体
微 H2源
360℃
铜柱
（亮黄色）
量
O2
CuO （黑色）
31
2.8厌氧手套箱法
又称厌氧室法
32
33
3 厌氧培养方法的选择
亨格特的预还原灭菌厌氧培养基的转管技术、气体喷射培 养法
Gas-Pak法的使用操作程序 平皿培养基装入平皿架中置厌氧罐内； 打开内盖居中金属网袋，装入触媒钯粒； 打开锡箔纸袋，取出厌氧指示剂片； 剪开气体发生袋一角，注入10毫升水，迅速紧闭
罐盖，置培养箱中培养。 约经5～10分钟后，放入厌氧指示剂片。
注：操作较复杂，需注入水作为触媒。
13
2.2.1 简易厌氧罐
22
氧气指示剂颜色变化图解
1.新鲜指示剂为粉红色（无氧，左）和蓝色（有氧，右）， 重复使）和淡蓝色（有氧，中右）。 2.厌氧培养2-3小时后指示剂颜色变化稳定。
厌氧菌的培养方法
厌氧菌的培养方法厌氧菌是一类不能在氧气存在下生长和繁殖的微生物。
这些微生物在许多领域都具有重要的应用价值，包括环境保护、生物能源生产等。
因此，为了研究和应用这些厌氧菌，科学家们发展了多种厌氧菌的培养方法。
本文将详细介绍常用的三种厌氧菌的培养方法。
一、利用情境气氛培养厌氧菌情境气氛培养是培养厌氧菌的一种常用方法，其原理是通过调节培养基的气氛来控制氧气浓度。
在培养厌氧菌时，一般会采用以下方法之一来制备情境气氛。
1.预氧化法：将培养容器密封，置于28-37°C的恒温灭菌箱中。
然后通过注入一定比例的高纯度二氧化碳-氧气混合气体，使容器内的气氛变为厌氧情境。
这种方法适用于厌氧菌培养基中氧气浓度较低的情况。
2.双液低压法：将培养基分成两个相隔的容器，分别加入不同的培养液。
然后将两个容器封口并贴膜，用胶带封好。
经过一段时间后，在密封的容器内会形成低压情境。
这种方法适用于厌氧菌培养基中氧气浓度较高的情况。
通过以上两种情境气氛培养方法，可以模拟出适合厌氧菌生长的条件。
二、利用厌氧培养器培养厌氧菌厌氧培养器是一种专门用于培养厌氧菌的装置，其原理是通过封闭式容器和气氛控制系统，实现在厌氧情境下的培养。
常用的厌氧培养器有以下两种类型：1.商用厌氧培养器：通常有专门的培养室和压力控制系统，可以产生适合厌氧菌生长的气氛。
在这种培养器中，可以根据菌株的特性进行相应的操作和调节。
2.自制厌氧培养器：由于商用的厌氧培养器设备较为昂贵，对于一些实验室来说并不实际。
因此，一些实验室会开发自己的厌氧培养器。
自制培养器的原理和商用培养器类似，只是在设计和制作上有所差异。
利用厌氧培养器进行培养时，需要注意以下几点：1.气氛控制：厌氧培养器应能够调节培养基的气氛，包括氮气、二氧化碳等气体的供应和排除。
2.温度调节：厌氧培养器应能够保持恒定的培养温度，一般为28-37°C。
3.培养基搅拌：适当的培养基搅拌可以增加氧气的溶解度，并促进菌体的生长和分散。
厌氧菌检验 微生物学实验
实验六、厌氧菌检验一、厌氧培养1、刨肉基法方法：将破伤风梭菌、产气荚膜梭菌分别接种在庖肉培养基中，35℃48h，观察结果。
2、厌氧罐法方法：将破伤风梭菌接种在高渗芽孢培养基中并放置于厌氧罐中；将破伤风梭菌、产气荚膜梭菌分别接种在血平板中并置于厌氧罐中，放厌氧袋，密闭，置35℃48h观察结果。
二、观察厌氧菌培养结果：1、庖肉基1）破伤风梭菌：肉汤混浊，部分消化，微变黑，有少量气体，有腐败性恶臭味。
2）产气荚膜梭菌：产生气体，肉渣呈粉红色，不被消化。
2、血平板1）破伤风梭菌：呈薄膜状生长，菌落半透明、灰白色、边缘疏松呈羽毛状，伴β溶血。
2）产气荚膜梭菌：多数菌株有双层溶血环，内环完全溶血，外环不完全溶血。
3、梭菌平板破伤风梭菌：形成直径1mm 以上不规则的菌落，中心紧密，周边疏松，似羽毛状。
三、涂片、革兰染色镜检：破伤风梭菌产气荚膜梭菌G-，细长，芽胞圆形，比菌体大，G+，粗短大杆菌，两端钝圆，单个或成双排列。
位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状芽胞椭圆形，位于菌体中央或次极端，芽胞直径不大于菌体四、芽孢染色：制片①5%孔雀绿加热3~5min，水洗甩干；②0.5%沙黄水溶液染色0.5~1.0min，水洗甩干干后镜检，如图所示：菌体呈红色，芽孢呈淡绿色。
破伤风梭菌产气荚膜梭菌五、汹涌发酵试验（试教）产气荚膜梭菌：分解乳糖产酸，使酪蛋白变性，同时产生大量气体，将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面上的凡土林层向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势凶猛，为“汹涌发酵”。
六、讨论：1、做生化试验时，有些细菌为致病菌，故实验时要保护好自己，且实验废弃物要妥善处理，以免发生有害菌的感染。
2、所有接种的菌株暴露于有氧环境中不得超过20min3、厌氧菌检验：可据厌氧菌的菌体形态、染色反应、菌落性状以及对某些抗生素的敏感性等作出初步鉴定。
最后鉴定则要进行生化反应及终末代谢产物等项检查。
4、破伤风梭菌微生物检验：根据破伤风的典型临床表现即可作出诊断，故一般不作细菌学检查。
厌氧菌
厌氧菌在有氧的情况下不能生长。
要培养厌氧菌，必须创造一个无氧的环境。
通常用培养基中加入还原剂，或用物理、化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。
如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。
常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。
塑料袋透明而不透气，内装气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。
放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。
先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。
如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育。
3.厌氧手套箱：是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。
它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。
箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。
欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。
箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。
该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。
金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。
我没见过。
6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。
污水处理培养菌种方法
污水处理培养菌种方法一、引言污水处理是保护环境和人类健康的重要工作。
在污水处理过程中，菌种的选择和培养是关键步骤之一。
本文将介绍污水处理中常用的菌种培养方法，以及相应的操作步骤和注意事项。
二、菌种选择在污水处理过程中，常用的菌种有好氧菌、厌氧菌和硝化菌等。
好氧菌主要用于有机物的降解和氧化，厌氧菌用于无氧条件下的有机物降解，而硝化菌则用于氨氮的氧化。
根据实际情况，选择合适的菌种进行培养。
三、菌种培养方法1. 好氧菌培养方法：a. 准备培养基：将适量的蛋白胨、葡萄糖和盐溶解于蒸馏水中，并加热煮沸，然后倒入培养瓶中。
b. 接种菌种：取一定量的菌液，均匀地接种在培养基上。
c. 培养条件：将培养瓶放入恒温培养箱中，温度保持在30-35摄氏度，培养时间为24-48小时。
d. 菌液收获：培养时间结束后，将培养瓶取出，用离心机离心，将上清液收集到离心管中，即可得到好氧菌液。
2. 厌氧菌培养方法：a. 准备培养基：将适量的蛋白胨、葡萄糖和盐溶解于蒸馏水中，并加热煮沸，然后倒入培养瓶中。
b. 接种菌种：取一定量的菌液，均匀地接种在培养基上。
c. 培养条件：将培养瓶密封，放入恒温培养箱中，温度保持在35-40摄氏度，培养时间为24-72小时。
d. 菌液收获：培养时间结束后，将培养瓶取出，用离心机离心，将上清液收集到离心管中，即可得到厌氧菌液。
3. 硝化菌培养方法：a. 准备培养基：将适量的硝酸盐、磷酸盐和盐溶解于蒸馏水中，并加热煮沸，然后倒入培养瓶中。
b. 接种菌种：取一定量的菌液，均匀地接种在培养基上。
c. 培养条件：将培养瓶放入恒温培养箱中，温度保持在25-30摄氏度，培养时间为48-72小时。
d. 菌液收获：培养时间结束后，将培养瓶取出，用离心机离心，将上清液收集到离心管中，即可得到硝化菌液。
四、注意事项1. 培养基的制备过程中要注意无菌操作，避免细菌污染。
2. 培养条件的控制要准确，包括温度、pH值和氧气含量等。
厌氧菌的采集、送检、培养、分离鉴定及注意事项
厌氧菌在有氧的情况下不能生长。
要培养厌氧菌，必须创造一个环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。
如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基，牛心脑浸液培养基等。
常用的厌氧培养方法有许多，可根据实际情况选用。
1.厌氧缸法：接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。
2.厌氧袋：即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。
塑料袋透明而不透气，内装气体发生管、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。
放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。
先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。
如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育（较为推荐）。
3.厌氧手套箱：是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。
它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。
箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。
欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。
箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。
该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。
金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。
4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。
5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物，消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。
我没见过。
6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。
焦性末食子酸与碱反应后耗氧。
水族箱厌氧菌的培养方法
水族箱厌氧菌的培养方法
水晶虾
厌氧菌生存在低氧的环境下，水晶虾、硝化菌都需大量的氧气，水中有充分的氧气，造成培育厌氧菌极为困难，就是有的话也不足需求，所以一般的缸子到硝酸盐氮循环就止，传统下来培养厌氧菌的概念就是铺厚厚的底床，但虾缸用的是土，土不像石或砂，厚土会败坏，不适用来培养厌氧菌。
最佳培养厌氧菌的地方还是在筒子里。
1、Eheim2215串三个（一个马达+二个前置）：用多量的菌类去“消耗”氧气，才能让最后一个筒子有厌氧菌生存的环境。
2、用品质好的滤材：硝化菌越多，最后筒内的氧气会越少。
3、设缸时用品牌好和多量的菌类并维持硝酸盐在最低（太高就换水）
4、处理缸内的有机物质，有机物质的累积会导致硝酸盐过高而无法降低。
厌氧性细菌的分离培养法
厌氧性细菌的分离培养法厌氧菌需有较低的氧化—还原势能才能生长(例如破伤风梭状芽孢杆菌需氧化—还原电势降低至0.11V时才开始生长)，在有氧的环境下，培养基的氧化—还原电势较高，不适于厌氧菌的生长。
为使培养基降低势，降低培养环境的氧压是十分必要的。
现有的厌氧培养法甚多，主要有生物学，化学和物理学3种方法，可根据各实验室的具体情况而选用。
1．生物学方法培养基中含有植物组织(如马铃薯、燕麦、发芽谷物等)或动物组织(新鲜无菌的小片组织或加热杀菌的肌肉、心、脑等)，由于组织的呼吸作用或组织中的可氧化物质氧化而消耗氧气(如肌肉或脑组织中不饱和脂肪酸的氧化能消耗氧气，碎肉培养基的应用，就是根据这个原理)，组织中所含的还原性化合物如谷胱甘肽也可以使氧化—还原电势下降。
另外，将厌氧菌与需氧菌共同培养在一个平皿内，利用需氧菌的生长将氧消耗后，使厌氧菌能生长。
其方法是将培养皿的一半接种吸收氧气能力强的需氧菌(如枯草杆菌)，另一半接种厌氧菌，接种后将平皿倒扣在一块玻璃板上，并用石蜡密封，置37恒温箱中培养2~3d后，即可观察到需氧菌和厌氧菌均先后生长。
2．化学方法利用还原作用强的化学物质，将环境或培养基内的氧气吸收，或用还原氧化型物质，降低氧化—还原电势。
（１）李伏夫(B．M．JIbbob)法此法系用连二亚硫酸纳(Sodium hydrosulphite)和碳酸钠以吸收空气中的氧气，其反应式如下：Na2S204十Na2C03十O2一→Na2SO4十Na2SO3十C02取一有盖的玻璃罐，罐底垫一薄层棉花，将接种好的平皿重叠正放于罐内(如系液体培养基，则直立于罐内)，最上端保留可容纳1~2个平皿的空间(视玻罐的体积而定)，按玻罐的体积每1000cm3空间用连二亚硫酸纳及碳酸钠各30g，在纸上混匀后，盛于上面的空平皿中，加水少许使混合物潮湿，但不可过湿，以免罐内水分过多。
若用无盖玻罐，则可将平皿重叠正放在浅底容器上，以无盖玻罐罩于皿上，罐口周围用胶泥或水银封闭(如图１－５)。
厌氧菌固体培养实验报告
一、实验目的1. 熟悉厌氧菌的培养方法。
2. 掌握厌氧菌在固体培养基上的分离和纯化技术。
3. 观察并记录厌氧菌的生长特征。
二、实验原理厌氧菌是一类在无氧或低氧环境下生长繁殖的微生物。
由于厌氧菌的代谢过程对氧气非常敏感，因此在培养过程中需要采取严格的厌氧条件。
本实验通过在无氧环境中培养厌氧菌，观察其在固体培养基上的生长情况，以达到分离和纯化的目的。
三、实验材料1. 菌种：选择一种已知的厌氧菌作为实验材料。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基。
3. 无氧设备：厌氧箱、厌氧袋、厌氧手套、厌氧操作台等。
4. 工具：接种环、接种针、酒精灯、培养皿、显微镜等。
四、实验方法1. 培养基制备：按照牛肉膏蛋白胨固体培养基的配方，将各成分混合，加热溶解后，调整pH至7.2-7.6，高压灭菌后备用。
2. 无氧环境制备：将厌氧箱、厌氧袋、厌氧手套、厌氧操作台等设备准备好，并按照无氧操作规程进行操作。
3. 接种：将厌氧菌接种于无菌的牛肉膏蛋白胨固体培养基平板上，用接种环或接种针进行划线接种。
4. 培养过程：将接种后的平板放入厌氧箱中，调节温度至适宜范围（一般为37℃），培养一定时间（如24小时）。
5. 观察与记录：观察厌氧菌在固体培养基上的生长情况，记录其菌落形态、颜色、大小等特征。
6. 鉴定：采用显微镜观察厌氧菌的菌落形态，必要时进行生化鉴定。
五、实验结果与分析1. 培养基制备：成功制备了牛肉膏蛋白胨固体培养基，无杂菌污染。
2. 无氧环境制备：厌氧箱、厌氧袋、厌氧手套、厌氧操作台等设备均达到无氧要求。
3. 接种：厌氧菌成功接种于固体培养基平板上。
4. 培养过程：厌氧菌在固体培养基上生长良好，形成明显的菌落。
5. 观察与记录：菌落呈圆形、表面光滑、边缘整齐，颜色为白色。
6. 鉴定：通过显微镜观察，发现厌氧菌菌落形态与已知厌氧菌相似，生化鉴定结果也相符。
六、实验结论本实验成功培养了一种厌氧菌，并对其生长特征进行了观察和记录。
污水处理培养菌种方法
污水处理培养菌种方法一、引言污水处理是保护环境和人类健康的重要环节，其中污水处理中的微生物处理过程起着至关重要的作用。
菌种的选择和培养方法对于污水处理的效果起着决定性的影响。
本文将介绍污水处理中常用的菌种培养方法，以及相应的标准格式文本。
二、菌种的选择在污水处理过程中，常用的菌种有好氧菌、厌氧菌、硝化菌和反硝化菌等。
根据不同的处理要求，可以选择适合的菌种进行培养。
三、菌种培养方法1. 好氧菌培养方法好氧菌是在氧气存在下生长的菌种，对于氧化有机物质具有较高的能力。
其培养方法如下：（1）准备好氧气充足的培养基，如LB培养基。
（2）将菌种接种于培养基上，通常采用无菌的接种环进行接种。
（3）将接种好的培养基放入恒温摇床中，以适当的温度和摇动速度进行培养。
（4）培养一定时间后，可观察到菌落的生长情况。
2. 厌氧菌培养方法厌氧菌是在无氧或微氧环境下生长的菌种，对于降解有机物质具有较高的能力。
其培养方法如下：（1）准备好无氧或微氧条件下的培养基，如厌氧培养基。
（2）将菌种接种于培养基上，通常采用无菌的接种环进行接种。
（3）将接种好的培养基放入无氧或微氧条件下的培养箱中，控制好温度和湿度。
（4）培养一定时间后，可观察到菌落的生长情况。
3. 硝化菌培养方法硝化菌是在氧气存在下将氨氮氧化为亚硝酸盐和硝酸盐的菌种，对于去除污水中的氨氮具有重要作用。
其培养方法如下：（1）准备好含有氨氮的培养基，如氨氮含量为50mg/L的硝化培养基。
（2）将菌种接种于培养基上，通常采用无菌的接种环进行接种。
（3）将接种好的培养基放入恒温摇床中，在适当的温度和摇动速度下进行培养。
（4）培养一定时间后，可观察到亚硝酸盐和硝酸盐的生成情况。
4. 反硝化菌培养方法反硝化菌是在无氧或微氧条件下将硝酸盐还原为氮气的菌种，对于去除污水中的硝酸盐具有重要作用。
其培养方法如下：（1）准备好含有硝酸盐的培养基，如硝酸盐含量为50mg/L的反硝化培养基。
（2）将菌种接种于培养基上，通常采用无菌的接种环进行接种。
厌氧菌的培养方法
D
4
2.1 Gas-pak法
D
5
原理
气体发生袋：
柠檬酸和碳酸氢钠 ＋H2O
CO2
硼氢化钠 111＋11H2O
H2
触媒 ：
钯粒
H2O
厌氧罐中的O2
厌氧指示剂
D
6
厌氧指示剂
亚甲基兰 指示剂 卢卡斯固体厌氧指示剂 布鲁氏指示剂
D
7
亚甲基兰 指示剂
6％葡萄糖水溶液
2
0.1N氢氧化钠水溶液
0.1
1
厌氧 无色 残存有氧气 蓝色
D
10
Gas-Pak罐的使用操作程序
平皿培养基装入平皿架中置厌氧罐内； 打开内盖居中金属网袋，装入触媒钯粒； 打开锡箔纸袋，取出厌氧指示剂片； 剪开气体发生袋一角，注入10毫升水，迅
速紧闭罐盖，置培养箱中培养。 约经5～10分钟后，放入厌氧指示剂片。
D
11
2.2.1 简易厌氧罐
D
28
4.2 冷冻保存：
20％脱脂牛奶0.5ml分注在带螺旋塞的玻 璃瓶中，经110℃、15分钟高压灭菌，冷却后， 先用毛细吸管取半固体高层培养基24～48h生 长茂盛部位的厌氧菌液0.5ml，加入玻璃瓶中， 直接置于－80℃冰库中保存。
厌氧菌较理想的保存方法是液氮保存法。 将108以上浓菌液置脱纤维羊血、脱纤维兔血 或羊血牛奶各半的分散剂中，先在干冰中预 冻，然后连容器一起放入液氮罐中。
厌氧菌的培养方法
祁红兵
D
1
物理方法包括遮断空气法、煮沸法、真空法、空 气置换法、气体喷射法或转管法等
化学方法包括焦性没食子酸法、铁丝绒法、保险 粉法等
生物学方法包括与需氧菌共生好氧法、燕麦发芽 法等
厌氧培养法原理
厌氧培养法原理
厌氧培养法是一种在无氧或极低氧气条件下进行细菌或真菌的培养的方法。
其原理是通过创建一个完全无氧的环境来模拟对某些微生物最有利的生长条件。
在厌氧培养法中，培养基必须经过严格的处理，以去除其中的氧气。
一种常用的方法是将培养基置于密封的容器中，并通过添加化学物质（如还原剂）或使用真空泵来将氧气排除。
另外，厌氧培养箱也可以提供稳定的无氧环境。
厌氧条件下的细菌或真菌在生长中利用其他氧化剂（如硝酸盐或硫酸盐）代替氧气。
这些微生物通常具有特殊的代谢途径，可以在无氧环境下存活和繁殖。
厌氧培养方法可以用于分离和鉴定对氧敏感的微生物，例如肠道菌群中的某些细菌。
在厌氧培养法中，还需要采取其他措施来确保无氧条件的持久性。
例如，一些厌氧培养方法会添加指示剂，当氧气进入培养基时，指示剂会发生变色，以提醒操作人员需要更换无氧环境。
此外，培养过程中的一些操作，如传递和分离菌落，也需要在无氧环境下进行。
总的来说，厌氧培养法通过创建无氧环境来提供最适宜某些微生物生长和繁殖的条件。
这种方法对于研究厌氧菌的生物学特性以及诊断和治疗与氧气敏感相关的疾病都具有重要的应用价值。
厌氧菌的培养实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 熟悉厌氧菌的微生物学特性。
2. 掌握厌氧菌的分离和纯化方法。
3. 学习使用厌氧培养箱进行微生物培养。
4. 了解厌氧菌在生物工程和医学研究中的应用。
二、实验原理厌氧菌是一类在无氧或低氧环境中生长繁殖的微生物。
它们不能进行有氧呼吸，其能量代谢主要通过无氧发酵的方式进行。
厌氧菌在自然界中广泛存在，与人类的健康和疾病密切相关。
本实验旨在通过厌氧菌的分离和培养，了解其生长特性，为后续研究提供基础。
三、实验材料1. 厌氧菌样品：土壤、水体、粪便等。
2. 培养基：厌氧肉汤培养基、血琼脂平板、液体石蜡。
3. 器械：厌氧培养箱、接种环、接种针、无菌试管、锥形瓶、移液器、酒精灯、高压蒸汽灭菌器等。
四、实验方法1. 样品处理- 取一定量的厌氧菌样品，用无菌生理盐水进行稀释。
- 取适量稀释液，分别接种于厌氧肉汤培养基和血琼脂平板。
2. 厌氧环境制备- 将厌氧肉汤培养基和血琼脂平板放入厌氧培养箱中。
- 在厌氧培养箱中注入液体石蜡，覆盖培养基表面，隔绝空气。
3. 培养- 将厌氧肉汤培养基置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
- 观察菌落生长情况，记录菌落形态、颜色等特征。
4. 分离和纯化- 将生长良好的菌落挑取，接种于血琼脂平板。
- 再次放入厌氧培养箱中培养，观察菌落生长情况。
- 重复上述步骤，直至获得纯化的厌氧菌。
五、实验结果1. 菌落形态- 厌氧肉汤培养基中的菌落呈圆形、表面光滑、边缘整齐、颜色为白色。
- 血琼脂平板上的菌落呈圆形、表面光滑、边缘整齐、颜色为白色，周围有溶血现象。
2. 分离和纯化- 通过多次接种和纯化，成功获得纯化的厌氧菌。
六、实验讨论1. 厌氧菌在自然界中广泛存在，对生态环境和人类健康具有重要意义。
2. 本实验成功分离和纯化了厌氧菌，为后续研究提供了基础。
3. 在厌氧菌的培养过程中，厌氧环境至关重要。
本实验通过使用厌氧培养箱和液体石蜡，成功制备了厌氧环境，保证了厌氧菌的生长。
七、实验结论1. 厌氧菌是一类在无氧或低氧环境中生长繁殖的微生物，其能量代谢主要通过无氧发酵的方式进行。
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2.2.1 简易厌氧罐
干燥器容内径（厘米） 容器1 容积（毫升） 硼氢钠
15cm（约2150毫升） 0.6克
容器2
容器3
氯化钴 0.2克 柠檬酸0.6克
或
和
钯粒1.5克 碳酸氢钠0.7克
18cm（约3500毫升） 硼氢钠 1克
氯化钴0.33克 柠檬酸1克
或
和
钯粒2克 碳酸氢钠1.15克
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厌氧菌的培养方法
祁红兵
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物理方法包括遮断空气法、煮沸法、真空法、空 气置换法、气体喷射法或转管法等
化学方法包括焦性没食子酸法、铁丝绒法、保险 粉法等
生物学方法包括与需氧菌共生好氧法、燕麦发芽 法等
混合法包括厌氧罐（袋）法、厌氧手套箱法或厌 氧室法、空气置换铁丝绒法、空气置换钯粒法等。
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2.1 Gas-pak法
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原理
气体发生袋：
柠檬酸和碳酸氢钠 ＋H2O
CO2
硼氢化钠 111＋11H2O
H2
触媒 ：
钯粒
H2O
厌氧罐中的O2
厌氧指示剂
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厌氧指示剂
亚甲基兰 指示剂 卢卡斯固体厌氧指示剂 布鲁氏指示剂
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亚甲基兰 指示剂
6％葡萄糖水溶液
2
0.1N氢氧化钠水溶液
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2.4 焦性没食子酸法
焦性末食子酸粉末， NaHCO3 或NaOH溶液
无菌玻片
已接种细菌的平板倒扣在上面
融化的白蜡封边
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2.5 抽气换气厌氧培养法
玻璃干燥罐 混合气钢瓶:
10％二氧化碳、10％的氢气、80％的氮气
三通阀 触媒:钯粒 / 浸泡钢丝绒 / 氯化钴 厌氧指示剂
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4.2 冷冻保存：
20％脱脂牛奶0.5ml分注在带螺旋塞的玻 璃瓶中，经110℃、15分钟高压灭菌，冷却后， 先用毛细吸管取半固体高层培养基24～48h生 长茂盛部位的厌氧菌液0.5ml，加入玻璃瓶中， 直接置于－80℃冰库中保存。
厌氧菌较理想的保存方法是液氮保存法。 将108以上浓菌液置脱纤维羊血、脱纤维兔血 或羊血牛奶各半的分散剂中，先在干冰中预 冻，然后连容器一起放入液氮罐中。
2.2.2 厌氧袋法
聚碳酸酯（复合塑料膜）制厌氧袋 产气袋 厌氧指示剂 触媒
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2.2.3 保险粉的厌氧罐培养法
二亚硫酸钠（Na2S2O4） 碳酸氢钠 无水硫酸钠
不用触媒
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2.3 钢丝绒法
酸性硫酸铜溶液 钢(铁)丝绒
铜和铁的络合物
O2
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1 液体培养基的厌氧培养法
培养基煮沸：驱气后置流水中急速冷却 添加还原剂：
0.03～0.05％L-盐酸半胱氨酸 0.01～0.02％硫乙醇钠 0.5～1％葡萄糖 0.1％抗坏血酸 其它还原剂 添加琼脂
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2 固体培养基的厌氧培养法
厌氧罐法 简易厌氧罐和厌氧袋法 钢丝绒法 焦性没食子酸法 抽气换气厌氧培养法 生物好氧厌氧培养法 转管技术和气体喷射培养法 厌氧手套箱法 （又称厌氧室法）
0.1
0.05％亚甲基兰水溶液
0.2
厌氧 无色 残存有氧气 蓝色
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卢卡斯固体厌氧指示剂
2％硼砂溶液 9％硫乙醇酸 酚红溶液 0.02％美兰溶液 琼脂
厌氧 无色 残存有氧气 蓝色
5毫升 1毫升 0.1～0.2毫升 10毫升 1％
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布鲁氏指示剂
60％羟甲基氨基甲酯
1
4％葡萄糖
钢瓶进气
360℃
铜柱
除氧气体
微量O2
（亮黄色）
H2源 CuO （黑色）
接种或移植
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2.8厌氧手套箱法
又称厌氧室法
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3 厌氧培养方法的选择
亨格特的预还原灭菌厌氧培养基的转管技 术、气体喷射培养法
厌氧手套箱培养法
用于要求严格的厌氧培养法的微生态学（正常菌群）的研 究工作
1
0.02％美蓝
1
厌氧 无色 残存有氧气 蓝色
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Gas-Pak罐的使用操作程序
平皿培养基装入平皿架中置厌氧罐内； 打开内盖居中金属网袋，装入触媒钯粒； 打开锡箔纸袋，取出厌氧指示剂片； 剪开气体发生袋一角，注入10毫升水，迅
速紧闭罐盖，置培养箱中培养。 约经5～10分钟后，放入厌氧指示剂片。
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谢谢
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厌氧指示剂
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酸性硫酸铜溶液： 将自来水1升加硫酸铜60g，吐温-80
20ml，加热溶解后，又加入2N的硫酸90ml， 最后加水至6升 ； 方法：
取5～6g钢丝绒/ L，于1～1.5升酸性硫 酸铜溶液浸泡30～60s，钢丝绒变成红铜色， 挤净液体置铝质或玻璃容器中，放入厌氧 罐内。随后将厌氧指示剂放入，密封厌氧 罐，1～4h后可达厌氧状态
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1：厌氧培养罐 2：混合气体（CO2：H2：N2=1：1：8）钢瓶 3：压力表 4：三通阀 5：缓冲瓶 6：真空泵
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2.6 生物好氧厌氧培养法
疱肉培养基: 牛肉渣
0.5g
牛肉浸液 7ml
液面上加盖3～4mm厚的融化凡士林，灭菌。
生物好氧厌氧术和气体喷射培养法
厌氧罐(袋)法结合其它厌氧培养方法
不适用于对氧极其敏感的厌氧菌。但是在临床细菌的检验 工作中，可以充分使用此法分离感染症中的厌氧病原菌。
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4 厌氧菌的保存
4.1继代保存： 以GAM半固体流动培养基和TEP半固
体培养基作传代培养保存。用毛细吸管吸 菌进行继代培养，使用白金接种环移菌接 种，可以避免有的菌在操作中接触空气或 氧化物而死亡。数周作一次继代培养。新 分离的的菌种，在几个月内，每3～4星期 传代一次。被保存的菌种，放室温下暗处。 最好是不同菌用不同培养基保存。