新生儿溶血病HDN血型血清学检查标准操作规程

新生儿溶血病HDN血型血清学检查标准操作规程

1、目的

为规范输血科HDN血型血清实验诊断的技术操作，确保检测结果准确，明确HDN诊断及其原因，依据《输血实验室管理程序》4.1.9条款的要求制定本规程。

2、适用范围

本文件适用于本院输血科对HDN进行血型血清学实验诊断及其实验操作技术的规范化管理。

3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。

4、试验方法及原理

4.1试验方法：微柱凝胶卡式法

4.2原理：本微量定型系统凝胶测试法基于生物化学凝胶过滤技术和离心技术及免疫化学抗原抗体特异反应。当抗原抗体反应，抗人球试验时，血细胞发生凝集。离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应，未凝集细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶管底部，呈阴性反应。

5、样本采集和处理

取患儿不抗凝血1-2ml及EDTA-K2抗凝血3～4ml,24小时内送检。将不抗凝血离心分离出血清备用。

6、试剂：

5.1 0.9%的生理盐水；

5.2戴安娜合血卡；

5.3血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）、抗D标准血清；

5.4 5%A、B及0型试剂红细胞盐水悬液；

5.5长春博迅公司的血型定型试剂卡；

7、仪器：

1)XTL-4.7细胞洗涤离心机；

2)DiaMed-ID Incubator 37 SⅠ温育器；

3)DiaMed-ID Centrifuge 12 SⅡ

7.5操作程序：

7.5.1婴儿及母亲ABO血型鉴定是检查第一步，以便考虑以后进一步检查程序。

7.5.2如母子ABO不合（母O子A、B，母A子B、AB，母B子A、AB）则按下列步骤进行患儿血液三项试验：

⑴直接抗人球蛋白试验（DAT）（微柱凝胶卡式法）

1)取患儿不抗凝血离心后，用0.9%的生理盐水配成0.8%的红细

胞悬液。

2)在戴安娜LISS/Coombs卡上标明患儿的姓名或编号，撕开卡

上的铝箔，加入配好的患儿红细胞悬液50μl。

3)将卡放入戴安娜离心机离心10分钟后判读结果。

4)结果观察：

5)阳性：红细胞凝集，在凝胶柱中或表面形成红线。

6)阴性：在微管底部形成密集的细胞扣。

⑵患儿红细胞抗体放散试验

7)患儿红细胞用大量生理盐水洗涤三次，取压积红细胞1ml左

右，加等量的生理盐水混匀。

8)将上面备好的红细胞悬液置57℃的水浴箱中振荡10分钟后取

出，立刻以2000转/分离心2-3分钟。

9)吸上层红色液体（即放射液）于清洁试管中备用。

10)分别取标准红细胞用稀释液配成0.8%的悬液，然后在戴安娜

LISS/Coombs卡上标明患儿的姓名或编号，撕开卡上的铝箔，分别加入50μl备好的标准红细胞悬液，并于各孔均加入25μl放散液。

11)在戴安娜孵育器上孵育15分钟后于戴安娜

离心机上离心10分钟后观察结果。

12)结果判定

阳性：红细胞凝集，在凝胶柱中或表面形成红线。

阴性：在微管底部形成密集的细胞扣。

红细胞放散液抗体检测结果判读

⑶患儿血清中游离抗体测定

13)取患儿不抗凝血离心，吸取血清血备用。

14)分别取标准红细胞用稀释液配成0.8%的悬

液，然后在戴安娜LISS/Coombs卡上标明患儿的姓名或编号，撕开卡上的铝箔，分别加入50μl备好的标准红细胞悬液，并于各孔均加入25μl患儿血清。

15)在戴安娜孵育器上孵育15分钟后于戴安娜

离心机上离心10分钟后观察结果。

16)结果判定：

血浆游离抗体检测结果判读

8、结果分析：

根据三项实验结果综合判断ABO新生儿溶血病（排除O细胞

阳性情况）

9、注意事项：

9.1母亲检出的IgG类红细胞血型抗体，如在新生儿红细胞上缺乏相应的抗原，则与HDN无关。

9.2患儿血清及红细胞放散液中检出了IgG类红细胞血型同种抗体，且患儿红细胞表达相应的红细胞血型抗原、抗体特异性与母体血清中红细胞血型抗体特异性一致，可明确诊断为HDN。

9.3当母亲患有IgG抗体自身免疫溶血性疾病时，IgG抗体可进入胎儿体内引起贫血，患儿DAT也可为阳性，检测母亲DAT为阳性有助于鉴别。

9.4鉴定患儿血型时应注意“遮断现象”影响鉴定结果，如患儿

为RhD阳性且红细胞D抗原已完全被来自母体的IgG抗-D饱和，DAT呈阳性，用IgM抗-D鉴定RhD血型可出现假阴性，此时可用温和的热洗脱法解决RhD血型鉴定困难问题。

9.5当新生儿ABO血型鉴定有困难时，可以根据其父母的血型推测新生儿血型（作为参考）。

9.6使用脐血标本检测ABO血型不合HDN阳性率较高，部分阳性患儿并不出现明显的溶血表现。

9.7一旦怀疑为HDN时，宜尽早采集血标本检测。7天后采集的血标本阳性率明显降低，也有部分HDN患儿出生2周后仍可检出阳性结果。

10、相关文件