碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶对热变性大豆分离蛋白的酶解研究
S9碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白优化条件研究_张鸿雁
研究报告
中国酿造
2010 年 第 7 期
总第 220 期 ·51·
将经过预处理的大豆蛋白调节温度至反应温度，搅 拌15min，调节pH值至反应pH值，加入一定比例S9碱性蛋 白酶，在反应温度进行恒温酶解，酶解过程中要不断搅拌， 同 时 滴 加 0.5mol/L 的 NaOH 溶 液 以 保 持 反 应 体 系 pH 值 恒 定。达到反应预定时间后，记录NaOH溶液的滴加量，计算 水解度（DH）。 1.5 水解条件的初步确定（单因素试验）
本研究是利用从盐碱土中筛选嗜碱细菌所产生的碱 性蛋白酶[3-4]，通过单因素试验和正交试验设计得到酶水解
的最优条件及优化的水解工艺，利用此工艺于实验室小 批量试验，期待能解决一些实际问题。 1 材料与方法 1.1 试验材料
大豆分离蛋白：天圜（新加坡）营养集团有限公司大 庆日月星有限公司生产，测得蛋白质含量为90.01%，水分 含 量 5.20% ，灰 分 含 量 5.1% ；碱 性 蛋 白 酶 ：黑 龙 江 八 一 农 垦 大 学 生 命 学 院 微 生 物 实 验 室 ，酶 活 力 17600U；其 他 试 剂均为AR级。 1.2 测定方法
℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃℃
Biomed Eng, 1986, 33(11): 993-999. [9] GRUNDLER W, KEILMANN F. Nonthermal effects of millimeter mi-
图3 酶用量对水解效果的影响 Figure 3. Effect of enzyme concentration on hydrolysis with S9
alcalase
双酶复合法提取大豆蛋白的工艺研究
西安科技大学硕士学位论文双酶复合法提取大豆蛋白的工艺研究姓名：***申请学位级别：硕士专业：应用化学指导教师：***2011论文题目：双酶复合法提取大豆蛋白的工艺研究专 业：应用化学硕 士 生：陈 敏(签名) 指导教师：蔡会武(签名)摘 要本文以低温脱脂豆粕粉为初始原料，通过选酶实验，筛选出两种使豆粕水解度大的酶进行复合水解，通过单因素试验和正交试验，确定酶解的最佳工艺条件，后选出样品进行分析，确定酶解以后分子量的变化趋势以及官能团特征，并分析了酶解后产品的氨基酸种类及含量，得出以下结论：1. 以蛋白含量和水解度作为酶解实验的评价指标，选择高效蛋白酶和胰蛋白酶进行复合水解。
通过内切酶和外切酶的复合作用，既提高了产物的蛋白含量和水解度，又减轻了产品的苦味，有利于产品在食品工业中的应用。
2. 通过单因素和正交试验，确定大豆豆粕酶解的最佳工艺条件为：加水量600mL，pH7.5，酶解时间8h，加酶间隔时间3h。
反应温度48℃。
3. 通过红外光谱检测酶解以后产品，在产品的IR图谱中，波数在3648cm-1处，是羟基伸缩振动，波数在2931cm-1处，是-NH2中的N-H伸缩振动，1658 cm-1处，是酰胺基团中的C=O伸缩振动所引起，是肽键存在的典型特征。
4. 通过SDS（十二烷基硫酸钠）-PAGE（聚丙烯酰胺）电泳实验分析，得到动态的大豆蛋白的酶水解趋势，将豆粕粉和酶解后的产物进行电泳实验，得出结论：豆粕粉在大分子量处谱带较多，大分子量的蛋白含量较高，而酶解以后，除在29.2KDa处有一条谱带以外，在10000Da的以下的蛋白占绝大份额，说明酶解以后的蛋白分子量很小，大多数是以多肽以及氨基酸的形式存在。
5．通过氨基酸分析，得出各种氨基酸含量，和大豆分离蛋白的氨基酸组成进行比较，得出结论：酶解后产品和大豆分离蛋白的氨基酸组成基本相同，含量略高，氨基酸的组成更加合理，而且具有大豆蛋白所不具有的特性，易于吸收，更适合添加到各种营养食品中。
大豆蛋白改性酶解制备大豆肽的研究
了大豆蛋白质的利用。 近年来， 通过酶法水解大豆蛋 白得到大豆肽已经得到了科学界的重视。 大豆肽分子 量小、 溶解度高、 黏度低、 在体内消化吸收快、 抗原 性低， 而且具有抗疲劳、 抗氧化、 降血压、 降低胆固 醇、 提高免疫力、 抗肿瘤以及控制肥胖等多种生理功 能， 使其应用范围大大扩大， 提高了大豆产品的附加 值。
水解条件： 底物浓度 20g ／ L， 酶和底物比 8 000U ／ g， 温度 50℃， pH 值 7．5。 以水解度为指 标 研 究 2、 3、 4、 5、 6h 的水解时间对水解的影响， 结果如图 3 所示。
图 4 pH 值对水解度的影响 所示。
由 图 4 可 知 ： 在 pH 值 小 于 7．5 时 ， 水 解 度 随 pH 值的升高显著提高； 在 pH 值大于 7．5 时， 水解度随 pH 值 增 加 逐 渐 降 低 ； 在 pH 值 为 7．5 时 ， 水 解 度 达 到 最 大。 这是因为大豆分离蛋白的等电点为酸性， 在中性 偏酸性条件下， 溶解度会进一步降低， 水解度受到酶 催化活性和底物溶解性的双重影响而变化较大； 在偏 碱性条件下， 水解度只受到酶催化活性的影响。 因此， 本试验条件下， 大豆蛋白改性酶水解大豆分离蛋白的 最适 pH 值为 7．5。 2．1．5 水解温度对水解的影响
大豆分离蛋白→调浆→酶解→灭酶→酸沉离心分离→ 上清液冷冻干燥
准确称量大豆分离蛋白加蒸馏水搅拌均匀， 加入 一定量的大豆蛋白改性酶， 在一定的温度和 pH 值条件 下水解， 到达时间后， 90℃灭酶 10min， 冷却至室温后 加入 1mol ／ L HCl 调 pH 值 4．2 沉淀未水解蛋白， 8 000r ／
1 材料与方法
1．1 材料与试剂 大豆分离蛋白， 吉林省通榆蛋白质厂； 大豆蛋白
木瓜蛋白酶水解大豆分离蛋白研究
第 ２ １卷 第 ３期
２ ０ 拄 ０ ２
大
豆 科
学
Ｖｏ ．Ｚ Ｎｏ． １ １ ３ Ａｕ ． ｇ ２ ２ ００
８月
ＳＯＹＢＥＡ Ｎ ＳＣ Ｉ ＥＮ Ｃ Ｅ
木 瓜 蛋 白酶 水 解 大 豆 分 离 蛋 白研 究 。
吴 建 中 赵 谋 明 宁 正 祥 姚 玉 静
讨 了半 胱 胺 酸 、 硫 酸 钠 、 Ｖｃ钠 等 添 加 剂 对 木 瓜 亚 异
经 凯 氏定 氮 法 测 定 ， 品蛋 白质 含量 为 ８ ． 。 样 ７９
２ ２ 酶 活 测 定 ．
依 据 Ｑ／ ＨＮＯ —９ １ ４标 准 ， 定 酶 活 为 ５ 测 Ｏ万 单
位／ 。 克 ２３ 不 同加 酶量 条 件 下反 应 时 间与 水解 度 （ ． ＤＨ）
１ ２ ２大 豆 分 离 蛋 白 中 蛋 白 质 含 量 测 定 ： 氏 定 氮 ．． 凯
法
１ ２ ３ ＤＨ 值 测 定 方 法 ： Ｈ— ｓａ 法 ． ． ｐ ｔｔ
ＤＨ － × ｌ ｏ ０
水 解 的 进 行 ， 作 用 底 物减 少 。（ ） 解 过 程 中酶 受 可 ２水
热 失 活 。 （ ） 瓜 蛋 白 酶 的 自水 解 作 用 。 （ ） ３木 ４ 木瓜 蛋
豆
科
学
３期
白酶 受 重 金 属 离 子 影 响失 活或 被 氧 化 失 活 。然 而 作
豆 蛋 白 浓 度 为 ４ ５ ～ ８ 、 胱 氨 酸 浓 度 ０ ２ 。 ． 半 ．５
关 键 词 大豆 分 离蛋 白 ； 瓜 蛋 白 酶 ； 解 木 水
中 图分 类 号
￥ ６ ． ５ ５１
文献标识码
Ａ
碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白及其抗氧化活性的研究
碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白及其抗氧化活性的研究王鑫1，江连洲1，2，吴瑕1，田瑞红1收稿日期：2010－11－10作者简介：王鑫（1983—），男，硕士研究生，研究方向为粮油及植物蛋白质，E-mail ：wangxin830315@ 通讯作者：江连洲基金项目：国家高技术研究发展计划863项目（2006AA10Z322）原文出处：《东北农业大学学报》，2011Vol.42No.11（1.东北农业大学食品学院，哈尔滨150030； 2.国家大豆工程技术研究中心，哈尔滨150050）摘要：将Plackett －Burman 因素水平设计应用于碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白，以研究大豆分离蛋白酶水解物的抗氧化活性。
通过测定水解产物的亚铁还原能力来确定其抗氧化活性的强弱，以此确定最佳水解工艺条件为：反应温度72ħ，底物浓度9%，酶用量（E /S ）1%，pH 7.0，水解时间5h 。
采用最适水解工艺条件得到水解度为19.78%，制备的水解物亚铁还原能力为：987.13μmol /L 。
同时测定水解物抑制脂质过氧化的能力（TBAＲS 法）以及对DPPH （二苯代苦味肼基）自由基的清除能力。
研究表明，水解物具有较高的抗氧化活性，可以有效抑制脂质过氧化以及较好的清除DPPH 自由基，其抗氧化活性虽然低于化学合成抗氧化剂，但明显高于未水解的蛋白质。
关键词：大豆分离蛋白；碱性蛋白酶；抗氧化活性；酶水解物中图分类号：S565.1文献标志码：A文章编号：1005－9369（2011）11－0024－08Study on alkaline protease hydrolysis of soy protein isolate and its antioxidant activityWang Xin 1，Jiang Lianzhou 1，2，Wu Xia 1，Tian Ｒuihong 1（1.Food Science College of Northeast Agricultural University ，Harbin 150030，China ；2.The National Ｒesearch Center of Soybean Engineering and Technology ，Harbin 150030，China ）Abstract ：The factorial level design of Plackett-Burman was used to study soybean peptides obtained throughhydrolyzing soybean isolated proteins by Alcalase ，and then the antioxidant activities of soy isolate protein hydrolyzate was studied．The antioxidant activity of hydrolysate was detected by measuring its ferrous iron ＇s reducing capacity ，and the optimal hydrolysis conditions were as followings ：reaction temperature of 72ħ，substrate concentration of 9%，enzyme concentration of （E /S ）1%，pH 7.0，hydrolysis time 5h．The hydrolysis degree obtained under the optimum hydrolysis conditions was 19.78%，and the reducing capacity of ferrous iron in prepared hydrolysate was 987.13μmol /L．The study also detected the activity of hydrolyzate in terms of inhibiting overoxidation of lipid peroxidation （TBAＲS ），and eliminated the DPPH free radical．The study showed that hydrolysate had a higher antioxidant activity which could inhibit overoxidation of lipid peroxidation and eliminate the DPPH free radical．Although the antioxidant capacity of hydrolysate was lower than that of chemical synthesized antioxidant ，apparently higher than that of unhydrolyzed proteins．Key words ：soy protein isolate ；alkaline protease ；antioxidant activity ；hydrolysate product 脂质过氧化是诱发衰老的主要原因之一。
大豆分离蛋白酶解产物功能特性的研究
资 源 丰 富 、成 本低 而倍 受 青 睐 ，更 为 重 要 的 是 大 豆 蛋 白还 具 有 与食 品 的 嗜好 性 、加 工 性 等 相关 的
各 种 功 能特 性 ，包 括 乳 化 性 、起 泡 性 、保 水 性 、 凝胶 性 等 多种 功 能特 性 。因此 大 豆蛋 白被广 泛应
加工技柬 ■
中 图分 类 号 ： ５ ６． Ｑ ５￣ ９ 文献 标 志 码 ： Ｂ
文章编号 ：６ ４ ３ ４ （０ ０ — ０ ２ ０ １７ — ５ ７２ １）３ ０ ２ — ７ １
产 大 豆分 离蛋 白 酶解 物 功 能 特 性 的研 究水
陈 靓 ，朱 秀清 ，窦巍巍 ，夏明敬 ，王 玲
决 的问题 。
ｄ ｏｙ ｉ ｍｅ Ｔ ｅ ｒ ｓ ｌ ｈ ｗｅ ａ ｅｓ ｌｂ ｌ ｙ ｅ ｌｉ ｉ ｇ ｒ ｌｓｓｔ ． ｈ ｅ ｕ ｔ ｓ ｏ ｄ ｔ ｔ ｈ ｏｕ ｉ ｔ ， ｍｕ ｓｆ ｎ ， ｉ ｓ ｈ ｔ ｉ ｙ
ｆ ａ ｎｇ ａ ｏｌｂｓ ｒ ｉ ｎ ａ ａ ｉｙ ｏ ｏ ｂ ａ ｐ ｏ ｅｎ ｓ ｌ ｔ ｏ ｍｉ ｎｄ ｉａ ｏ ｐｔｏ ｃ ｐ ｃ ｔ ｆ ｓ ｙ ｅ ｎ ｒ ｔ ｉ ｉｏ ａｅ
ｏ ｏ ｂ ａ ｒｔ ｉ ｓ ｌｔ ｙ ｒ ｌｓ ｔｓ ｂ ａ ａｎ ｗ ｒ ｅｔ ｒ ｆ ｓ ｙ ｅ ｎ ｐ ｏ ｅｎ ｉｏ ａｅ ｈ ｄ ｏｙ ａｅ ｙ Ｐ ｐ ｉ ｅ ｅ ｂ ｔ ｅ ｔ ａ ｏ ｂ ａ ｒ ｔｉ ｏ ａｅｈ ｄ ｏｙ ａｅ ｙＡｌ ａａ ｅ ｈ ｎｓ ｙ ｅ ｎｐ ｏｅｎ ｉ ｌ ｔ ｙ ｒ ｌｓ ｔｓｂ ｅ ｌ ｓ ． ｓ Ｋｅ ｗｏ ｄ ： Ｓ ｙ ｅ ｎ ｉｏ ａｅ ｒ ｔｉ ； Ｅ ｚ ｍａ ｉ ｙ ｒ ｌｓｓ ｙ ｒ ｓ ｏ ｂ ａ ｓ ｌ ｔｄ ｐ ｏｅ ｎ ｎ ｙ ｔ ｈ ｄ ｏｙ ｉ ； ｃ
木瓜蛋白酶与中性蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究
木瓜蛋白酶与中性蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究钟振声，陈钰，文锡莲（华南理工大学化学与化工学院，广东广州 510640）摘要：研究了大豆分离蛋白经过加热预处理后用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶水解的可行性。
以水解度(DH)为指标，考察了单因素水解条件得出：木瓜蛋白酶水解反应的最佳条件为反应底物浓度3.0%，pH 7.0，反应温度55 ℃，酶用量30 μg/g；中性蛋白酶水解反应的最佳条件为反应底物浓度5.0%，pH 7.0，反应温度55 ℃, 酶用量40 μg/g。
在此条件下，大豆分离蛋白水解度分别为3.69%和9.80%。
在一定条件下复合酶分步水解优于单一酶水解。
关键词：木瓜蛋白酶；中性蛋白酶；大豆分离蛋白；水解反应；水解度中图分类号：Q814；文献标识码：A；文章篇号:1673-9078(2009)09-1039-05Hydrolysis of Soybean Protein Isolate by Papain and NeutralProteaseZHONG Zhen-sheng, CHEN Yu, WEN Xi-lian(School of Chemistry and Chemi cal Engineering, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China) Abstract: The feasibility of hydrolysis of heat-treated soybean protein isolate (SPI) by papain and neutral protease was studied. Single factor experiment showed that the optimum conditions for papain catalyzed hydrolysis of SPI were as follows: papain dosage 30 μg/g, mass concentration of substrate 3.0%, hydrolysis temperature 55 ℃ and pH 7.0. For neutral protease catalyzed hydrolysis of SPI, the best conditions were neutral protease dosage 40μg/g, mass concentration of substrate 5.0%, hydrolysis temperature 55 ℃, and pH 7.0. Under the above-mentioned two kinds of conditions the hydrolysis degree of protein reached 3.69% and 9.80%, respectively. It was also found that hydrolysis by mixed enzymes was more efficient than that by single enzyme.Key words: papain; neutral protease; soybean protein isolate; hydrolysis reaction; hydrolysis degree大豆分离蛋白的蛋白质含量高达85%-90%，含有丰富的赖氨酸、亮氨酸、苏氨酸和色氨酸等八种人体必需的氨基酸[1]，应用前景十分广阔。
大豆多肽
大豆肽的①定义、②结构、③特性、④功能、⑤应用、⑥现状、⑦前景、⑧生产工艺技术、⑧代表厂家及产品1引言大豆多肽(soy peptide),即“肽基大豆蛋白水解物”（即peptide-based soy protein hydrolysate的简称）,较之相同组成氨基酸和母体蛋白（parent protein），肽具有无蛋白质变性、无豆腥味、无残渣、易溶于水，在酸性条件下不沉淀、溶液黏度小、受热不凝固等独特的理化性能与生物活性。
近年来，国际科学界研究发现，蛋白质经消化道酶促水解后主要是以小肽类的形式被吸收，且比完全游离氨基酸更易、更快被机体吸收、利用，某些小肽不仅能提供人体生长、发育所需要的营养物质，而且具有独特的生物学功能：可防治血栓、高血压和高血脂，延缓衰老、抵抗疲劳、提高机体免疫力。
有些小肽具有原食品蛋白质或其组成氨基酸所没有的重要的生理功能，这正是生物活性肽引起当今科学界、医学界、营养学界、食品学界广泛重视的主要原因。
生物活性肽具有极强的活性和多样性，随着研究的不断深入，这一领域在世界范围内日益受到关注。
生物活性肽已成为高科技领域及产业的新热点。
由于人体吸收蛋白质主要是以肽的形式吸收的，不是以氨基酸的形式吸收的，同时肽在人体合成蛋白质率较氨基酸高26%，氨基酸只有20种，功能固定，屈指可数，而以氨基酸为基料合成的多肽，则有上百种上千种，其功能具有多样性。
现代生活，人们从食物中吸收的蛋白质、氨基酸已不缺乏，但人体中的肽却很缺少。
因现代文明而给人带来的“负面影响”是人体缺肽的主要原因。
因为肽的缺乏，使现代人出现了“现代病”、“富贵病”、“亚健康”。
人体必需从体外合成的肽中获取肽，以保证人体的健康。
由于组成每种蛋白质的氨基酸数量和连接顺序不同，形成了自然界数十万种不同的蛋白质。
大豆蛋白分子一般都很大，由数万个甚至数十万个氨基酸连接而成。
这么大的分子人体是不能直接吸收的。
因此，普通的豆制品只是给人体提供营养元素和能量，并不直接参与和调节人体的生理活动。
大豆分离蛋白酶法复合改性及在注射型肉制品中应用的研究的开题报告
大豆分离蛋白酶法复合改性及在注射型肉制品中应用的研究的开题报告一、研究背景和意义肉制品是人们日常生活中不可或缺的食品，其中注射型肉制品是一种新型肉制品，其质地细腻、口感好，广受消费者喜爱。
然而，传统注射型肉制品中添加的增稠剂和稳定剂含有大量化学合成剂和转基因成分，严重影响消费者的健康。
因此，研究如何用天然食品添加剂来代替传统的增稠剂和稳定剂，是当前食品研究的重点。
大豆分离蛋白是一种天然的食品添加剂，具有结构稳定、营养丰富、易消化吸收等优点。
本研究将采用酶法分离大豆分离蛋白，对其进行复合改性，研究其在注射型肉制品中的应用。
通过这种方法，可以有效地降低注射型肉制品中化学合成剂和转基因成分的含量，提高产品的营养价值和安全性，符合消费者的健康需求。
二、研究内容和目标本研究将采用酶法分离大豆分离蛋白，并通过接枝、交联等技术进行复合改性，制备出性能稳定、应用性强的大豆分离蛋白复合物。
同时，探究其在注射型肉制品中的应用效果。
研究目标：1.通过酶法分离大豆分离蛋白，并对其进行复合改性，制备出适用于注射型肉制品的大豆分离蛋白复合物；2.通过对复合物进行结构表征和性能测试，探究不同改性方法对大豆分离蛋白质量的影响；3.研究大豆分离蛋白复合物在注射型肉制品中的应用效果，探索其替代传统增稠剂和稳定剂的可行性。
三、研究方法1. 大豆分离蛋白的酶法分离方法：选用细菌碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶等酶进行大豆蛋白分离实验，筛选出最适合的酶种和工艺条件。
2. 大豆分离蛋白的复合改性方法：采用接枝、交联等技术对大豆分离蛋白进行复合改性，制备出稳定性较高的大豆分离蛋白复合物。
3. 大豆分离蛋白复合物的结构表征和性能测试：采用FTIR、XRD、SEM等技术对复合物的结构和形貌进行分析，同时测试其分散性、稳定性和营养价值。
4. 大豆分离蛋白复合物在注射型肉制品中的应用：将大豆分离蛋白复合物添加到注射型肉制品中，并进行感官评价和营养分析，探究复合物在注射型肉制品中替代传统增稠剂和稳定剂的可行性。
木瓜蛋白酶水解大豆分离蛋白研究
第21卷 第3期2002年 8月大 豆 科 学SO Y B EAN SCIENCEVol.21 No.3Aug. 2002 木瓜蛋白酶水解大豆分离蛋白研究Ξ吴建中 赵谋明 宁正祥 姚玉静(华南理工大学食品与生物工程学院,广州510641)摘要 本文研究了木瓜蛋白酶对大豆分离蛋白的有限水解作用,分析了酶浓度、反应时间、温度、底物浓度、半胱氨酸、异Vc钠、亚硫酸钠浓度等因素对大豆蛋白水解作用的影响,试验得出木瓜蛋白酶水解大豆分离蛋白的较佳条件是酶浓度为8000U/g底物、反应时间150～200min、温度50℃、大豆蛋白浓度为4.5%～8%、半胱氨酸浓度0.25%。
关键词 大豆分离蛋白;木瓜蛋白酶;水解中图分类号 S56511 文献标识码 A 文章编号 1000-9841(2002)03-0187-04 大豆分离蛋白中必需氨基酸含量在植物蛋白中较为合理,营养价值较高,有着良好的胶凝、乳化、起泡能力,在肉类制品、饮料和冰淇淋等的生产中具有广泛的应用,但是大豆分离蛋白的使用也存在等电点易沉淀,粘度随浓度增大迅速升高等不利因素,影响了大豆分离蛋白在食品工业中的应用,为此食品科学家试图通过酶改性来改善大豆分离蛋白的理化性质,木瓜蛋白酶价廉易得,改性产品口味较好,适宜于大豆分离蛋白改性,但其酶水解效率较低、易失活。
为充分发挥木瓜蛋白酶的水解效率,本文研究了木瓜蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳条件,并探讨了半胱胺酸、亚硫酸钠、异Vc钠等添加剂对木瓜蛋白酶的保护作用。
1 材料和方法1.1 材料木瓜蛋白酶:选用广东省阳江市港阳食品添加剂香料厂产品大豆分离蛋白:选用哈尔滨市哈高科大豆食品有限公司产品。
1.2 分析方法1.2.1 木瓜蛋白酶酶活力测定方法:Q/HN01-941.2.2大豆分离蛋白中蛋白质含量测定:凯氏定氮法1.2.3DH值测定方法:p H-stat法DH=B×Nα×m×h×100%B:消耗碱量;N:NaOH摩尔浓;α:大豆蛋白氨基的平均解离度,当p H值为6.91时,α=0.365h=7.75。
大豆分离蛋白酶法改性研究进展
Jul. 2019 China Food Safety ·27·食事评论COMMENTS 大豆分离蛋白酶法改性研究进展摘要：本文综述了碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶对大豆分离蛋白各种功能特性影响研究进展，生物酶处理作为一种有效的改性方法，其作用安全性高，专一性强，已成为目前研究的热点。
关键词：大豆分离蛋白；酶；改性大豆分离蛋白（SPI）是常用的食品原料，其功能特性主要有乳化性、水合性、吸油性、胶凝性等，天然的SPI 在一些性能方面存在一定缺陷，如粘度低、凝胶性差等。
目前常用的改性SPI 的生物酶种类较多，例如中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶等。
SPI 经过酶作用后，蛋白内部的非极性氨基酸残基暴露到表面，使蛋白的疏水性增大，发生聚集效应，形成凝胶。
生物酶法改性能改善蛋白的各种功能特性，而且具有安全性高、专一性强、能提高大豆制品的营养价值等优点。
生物酶法作为一种安全有效的改性方法，成为目前研究的热点。
碱性蛋白酶 碱性蛋白酶是作用于中性或碱性底物的蛋白酶类，其分子量为18kDa-34kDa；但一小部分的碱性蛋白酶分子量可达45 kDa -82 kDa；目前发现的最小的碱性蛋白酶分子量只有8 kDa[1]。
碱性蛋白酶对SPI 的改性。
庞美蓉等[2]利用碱性蛋白酶及胃蛋白酶对SPI 进行改性研究。
试验结果表明温度对碱性蛋白酶的水解作用影响较大。
在水解温度为60℃、pH 值8.0、水解时间为60 min 时，SPI 的酶解产物相对分子质量低于20kDa。
且在不同酶类型及酶解条件下酶解产物的质量分布不同。
栾广忠等[3]研究了碱性蛋白酶凝固SPI 形成豆乳的机理。
试验结果表明碱性蛋白酶凝固SPI 主要是通过氢键和疏水作用；而离子键和二硫键对SPI 凝固的过程影响较小。
中性蛋白酶 中性蛋白酶为最适反应pH 在6.0-7.5之间的一类蛋白酶。
其具有催化反应速度快、污染小等优点。
常用的生产菌株是枯草芽孢杆菌，在食品、皮革及饲料工业中应用广泛。
碱性蛋白酶对大豆浓缩蛋白起泡性的影响
碱性蛋白酶对大豆浓缩蛋白起泡性的影响赵欣;孔庆伟【摘要】制取低成本、高蛋白含量的大豆浓缩蛋白时,乙醇产生变性作用,从而降低了大豆浓缩蛋白的功能特性,因此本研究采用碱性蛋白酶对醇法大豆浓缩蛋白进行改性.通过对酶浓度、底物浓度、改性时间与改性温度的单因素实验,针对起泡性进行研究,然后进行正交实验,最终得出碱性蛋白酶提高醇法大豆浓缩蛋白起泡性最佳工艺条件:酶用量(E/S)为6%、底物浓度为(W/V)8%、酶解时间为2h、酶解温度为50℃,在此条件下测得的起泡能力为113.3%,起泡稳定性为56.7%,分别提高到酶改性前的2.5、3.6倍.【期刊名称】《大豆科技》【年(卷),期】2010(000)003【总页数】4页(P24-27)【关键词】大豆浓缩蛋白;碱性蛋白酶;起泡性【作者】赵欣;孔庆伟【作者单位】黑龙江旅游职业技术学院食品工程学院,哈尔滨,150086;黑龙江龙丹乳业科技股份有限公司阿城分公司,黑龙江,阿城,150030【正文语种】中文【中图分类】TS201.2醇浸出法大豆浓缩蛋白（Alcohol Leaching Soy Protein Concentrate简称ALSPC）[1]由于其成本低、生产工艺几乎无污水排放等优点，是目前生产SPC最常用的方法。
但由于乙醇溶液强烈的蛋白质变性作用，使得浓缩蛋白的功能特性大大降低。
因此，通过改性提高大豆浓缩蛋白功能特性具有十分重要的意义。
酶改性技术是利用蛋白酶的内切作用及外切作用将蛋白分子切割成较小的分子，使其蛋白的功能特性有所改变。
蛋白酶解作用具有专一性强、条件温和等特点。
因此在水解过程中底物浓度不同，酶种类、酶用量不同，反应条件不同，则所得的水解度就不同，水解度不同则表现出的功能特性就不同[2]。
并有研究发现，用酶改性来改善大豆蛋白的理化性质效果较好。
因此，本课题选择碱性蛋白酶针对提高大豆浓缩蛋白起泡性进行研究。
1 材料与方法1.1 主要材料与试剂醇法大豆浓缩蛋白：实验室自制（蛋白质含量为74.40%，蛋白溶出率为1.27%）；精制大豆油：市售；碱性蛋白酶（20万u/g）：北京奥博星生物技术责任有限公司。
2007-2(碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶)双酶分步水解玉米蛋白粉制备玉米肽干粉的研究
粮食与饲料工业CEREAL &FEED I NDUS TRY2007,No .215收稿日期:2006-09-07;修回日期:2006-12-18基金项目:吉林省科技厅资助项目(20020211)作者简介:李艳丽(1978-),女,讲师,硕士,从事生物化学与分子生物学的教学和科研工作。
通讯作者:陈 光。
双酶分步水解玉米蛋白粉制备玉米肽干粉的研究李艳丽1,陈 光1,丛建民2(1.吉林农业大学生物技术学院,吉林长春 130118;2.白城师范学院生物系,吉林白城 137000)摘 要:利用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶双酶对玉米蛋白粉进行分步水解,确定制备玉米肽干粉的工艺流程。
对双酶分步水解和单酶单独水解进行了蛋白质收率(X )和水解度(DH )的对比分析,同时对不同活性碳浓度对水解液脱色率和氮回收率的影响进行了讨论。
关键词:碱性蛋白酶;木瓜蛋白酶;水解;玉米蛋白粉;玉米肽;工艺流程中图分类号:TS201.1;TS213.4 文献标识码:A 文章编号:1003-6202(2007)02-0015-02P r epa r a ti on of C or n P ep ti de F lour fr o m C orn P r ote i n F l ou r by Doub le 2En zy m e F ra ctiona l H ydr olysisAB STR AC T :The corn prote i n fl our was hydrol yzed by a fracti ona l hy drol ysis with a l ka li ne protease and ca roi d to pro duce corn pepti de fl our and t he hydrol ys i s technol ogical process was dete r m ined .The prote i n yi e l d (X)of hydrolysate and the degree of hydrol ysi s (D H )were co m pared bet ween double 2enzy m e fracti onal hydrol ysi s and single enzy m e i ndi vidual hydrolysis .The e ffects of d iffe rent concentra 2ti ons of acti ve carbon o n decol ori ng rate and n itrogen recovery rate of hydrol ysate were d i scussed .K EY W OR DS :a l ka li ne protease ;ca roi d ;hydrol ys i s ;corn prote i n flo ur ;corn pepti de ;technol ogica l process 玉米蛋白粉是玉米湿磨法提取淀粉的副产物,包含约60%的蛋白质。
Alcalase2_4L碱性内切蛋白酶改性大豆蛋白的工艺研究
［3］ W U Wu , et al. HydropHobicity, solubility, and emulsifying properties of soy protein peptides prepared by papain modification and ultrafiltration ［J］. J AOCS, 1998 ，75 (7 ): 845- 850 .
1.3.4.2 底物浓度对大豆分离蛋白酶解的影响 按
加酶量为 0.019 2 AU/g SPI，反应温度为 50℃，反应
时间为 1h，pH 值为 7.0，底物浓度为 9%、10%、11%、
12%、13%，以水解度和分散性为指标，探讨底物浓
度对酶解反应的影响。
1.3.4.3 反应温度对大豆分离蛋白酶解的影响 按
大豆蛋白的改性方式可分为物理改性、化学改 性和酶法，其中酶法被认为是较有潜力的一种。在大
豆蛋白酶解研究中，可供选择的酶有动物蛋白酶、植
物蛋白酶以及微生物蛋白酶三大类，其中动物蛋白 酶如胃蛋白酶、胰蛋白酶等价格昂贵、副反应多，胃 蛋白酶的水解条件固然温和，但反应时间太长，水解 效率较低，而且水解产物的苦味会随着水解时间的 延长而增加。植物蛋白酶如木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶 来源少、效率低，不适合工业化生产[2- 3]。随着生物技 术的进步，微生物蛋白酶的生产技术日趋成熟，价格 逐渐降低，而且来源广泛，是一种比较理想的酶源。 其中的碱性蛋白酶（Alkaline protease）是 1945 年瑞 士 Dr.Jaag 等人在地衣芽孢杆菌中发现的。碱性蛋白 酶来源较广，广泛存在于动、植物及微生物中，这些 酶除可以水解肽键外，还具有水解酯键、酰胺键和转 酯及转肽的能力[4]。由于碱性蛋白酶具有价格低廉、 来源广、产量高、菌体易于培养等特点，所以广泛应 用于食品、洗涤及制革等行业中，因此，微生物碱性 蛋白酶的研究一直被人们所关注[5]。本文以大豆分离 蛋白为原料，采用碱性蛋白酶 Alcalase 2.4L 对其进 行酶解，试图揭示酶解条件对大豆蛋白功能特性的 影响，探索出一条适合于工业化生产的专用型大豆 分离蛋白加工工艺，实现一条生产线生产两种或多 种大豆蛋白产品的加工方式。 1 材料与方法 1.1 主要材料和试剂
碱性蛋白酶酶解高温豆粕技术的研究
碱性蛋白酶酶解高温豆粕技术的研究裴云生;况楠;王喜刚;史永革【摘要】Taking high temperature bean pulp as raw material, single factor test, orthogonal. to the visual analysis and variance analysis to determine the alkaline protease enzyme optimal tem- perature conditions for soybean meal. Degree of hydrolysis of soybean peptide as an indicator of temperature, time, PH, enzyme amount, substrate concentration on the impact of the degree of hydrolysis. Optimization of hydrolysis conditions." temperature: 55 ℃, time: 4 h, pH: 9.0, en- zyme dosage: 9 600 U. g^-1 (substrate), substrate concentration: 10%. In this condition, the high temperature hydrolysis to confirm the test meal obtained soybean peptide hydrolysis was 34.93 %.%以高温豆粕为原料，通过单因素试验、正交试验进行直观分析和方差分析，确定碱性蛋白酶酶解高温豆粕的优化条件。
以大豆肽水解度为指标，考察温度、时间、pH、加酶量、底物浓度等因素对水解度的影响。
优化的酶解条件为：温度55℃、酶解时间为4h、pH为9．0、加酶量为9600U／g （底物）、底物浓度为10%，在此条件下做验证试验得到的大豆肽水解度为34．93％。
2709碱性蛋白酶酶解大豆分离蛋白的研究
酶解温度：取 ４ ％（ｗ／ｖ）的 ＳＰＩ 溶液 ２００ ｍＬ，经预处理 后在４０℃￣６０℃酶解 ３０ ｍｉｎ。其他条件为 ｐＨ１０．０、４０００Ｕ／ｇＳＰＩ。
预处理时间：配制浓度为 ４％（ｗ／ｖ）的 ＳＰＩ 溶液各２００ｍＬ 于 最 适 预 处 理 温 度 处 理 ５ｍｉｎ￣２５ｍｉｎ ，然 后 酶 解 。在 ５０℃、ｐＨ １０．０ 、４０００ Ｕ／ｇＳＰＩ 酶解 ３０ｍｉｎ。
１．２．３ ２７０９ 碱性蛋白酶最佳酶解条件的确定 ＤＩＮＡＫＡＲ ＰＡＮＹＡＭ 等［８］研究发现，在酶解过程中，
酶解时间：取 ４ ％（ｗ／ｖ）的 ＳＰＩ 溶液 ２００ ｍＬ，经预处理 后在 ５０℃酶解 ０．５ｈ￣４．５ｈ。其他条件为 ｐＨ １０．０、４０００ Ｕ／ｇＳＰＩ。 １．２．４ 最佳酶解条件的确定
为优化酶解条件，对底物浓度、加酶量、温度和酶解时 间 ４ 因素进行 Ｌ１（６ ４５）正交试验和方差分析［９－１０］。 ２ 结果与分析 ２．１ 预处理条件对酶解的影响
底物浓度、加酶量、酶解温度、酶的特异性等对酶解有影 响，所以设置底物浓度、加酶量、酶解温度和时间作为影响 因素并进行正交试验和方差分析。
底物浓度：配制浓度为 ２％￣６ ％（ｗ／ｖ）的 ＳＰＩ 溶液各 ２００ ｍＬ 并进行预处理，然后在 ５０℃、ｐＨ １０．０、４０００Ｕ／ｇ ＳＰＩ 酶解 ３０ｍｉｎ。
解度最大（约 ２４．３％），可能是由于碱性蛋白酶水解能力较 强。加酶量 ＞５０００ Ｕ／ｇ ＳＰＩ 后上升速度减慢。 ２．２．３ 酶解温度对酶解的影响
木瓜蛋白酶对大豆分离蛋白的水解作用
木瓜蛋白酶对大豆分离蛋白的水解作用
黄惠华;梁汉华
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】1999(020)001
【摘要】木瓜蛋白酶对大豆分离蛋白的酶解结果表明，木瓜蛋白酸疼的反应动力学参数ｋｍ值为０．３４％，酶的最适反应ｐＨ值为７．５，在ＰＨ９．０的碱性条件下有较好的适应性。
酶的最大反应温度为６０℃，在此温度条件下，温浴１００ｍｉｎ的仍然保持７０％的酶活。
２．０－２．５％的大豆分离蛋白溶液经木瓜蛋白酶水解后，丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸、组氨酸、蛋氨酸等游离氨基酸含量明显增加，大平多肽每１００ｍｌ提高９２－９４ｍｇ，等电
【总页数】4页(P22-25)
【作者】黄惠华;梁汉华
【作者单位】华南理工大学食品与生物工程学院;香港理工大学应用生物与化学技术系
【正文语种】中文
【中图分类】TQ936.16
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4.碱
性蛋白酶和木瓜蛋白酶对热变性大豆分离蛋白的酶解研究5.木瓜蛋白酶对罗非鱼下脚料的水解作用
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碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶对热变性大豆分离蛋白的酶解研究李婷;赵沙沙;阮奇珺;孔祥珍;华欲飞【摘要】The heat-denaturized soy protein isolate was hydrolyzed by Alcalase and Papain respectively, and the effects of enzymolysis temperatures of two kinds of proteases on the enzymolysis result of soy pro-tein isolate were investigated. The results showed that the enzymolysis of soy protein isolate with Alcalase at 60℃ was deeper than that at 70℃, more low relative molecular weight peptides were obtained and the degree of hydrolysis of soy protein isolate was 14.73%;while temperature had little effect on the hydroly-sis of soy protein isolate with Papain;more small peptides could be obtained by the hydrolysis of soy pro-tein isolate with Alcalase than that with Papain.%采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶对热变性大豆分离蛋白进行酶解，研究两种蛋白酶酶解温度对大豆分离蛋白酶解效果的影响。
结果表明：碱性蛋白酶在60℃时比在70℃时对大豆分离蛋白的酶解更彻底，得到的相对分子质量小的肽段更多，大豆分离蛋白的水解度较高(14.73%)；酶解温度对木瓜蛋白酶酶解大豆分离蛋白的效果影响不明显；与木瓜蛋白酶相比，碱性蛋白酶酶解大豆分离蛋白可以得到更多的小分子肽段。
【期刊名称】《中国油脂》【年(卷),期】2014(000)004【总页数】4页(P35-37,38)【关键词】大豆分离蛋白;木瓜蛋白酶;碱性蛋白酶;酶解【作者】李婷;赵沙沙;阮奇珺;孔祥珍;华欲飞【作者单位】江南大学食品学院，食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡214122;江南大学食品学院，食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡214122;江南大学食品学院，食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡214122;江南大学食品学院，食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡214122;江南大学食品学院，食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡214122【正文语种】中文【中图分类】TQ936.2;Q51大豆蛋白分子结构复杂，相对分子质量较大，不利于生物体的消化和吸收。
而蛋白质的酶解是改善蛋白质特性的一种有效方法，大豆蛋白经酶解后利于消化和吸收，营养价值提高，且酶解生成的多肽具有多种生物功能[1-3]。
天然大豆蛋白分子结构紧密，大量酶切位点埋藏于蛋白质分子内部，很难被蛋白酶酶解，必须对大豆蛋白进行变性处理，才能使酶切位点大大增加。
常用的变性方法是热处理，其特点是经济方便、变性彻底、不易回复[4]。
课题组前期研究发现，通过控制酶解条件，特定的蛋白酶能选择性地酶解某些蛋白，如胃蛋白酶能选择性地酶解大豆11S蛋白。
在前期研究基础上，本研究进一步考察了碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、酶解温度对大豆分离蛋白酶解物的影响。
研究结果可为碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解过程条件的控制和不同酶解物的获取提供一定的理论依据。
1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 原料与试剂全脂豆粕:山东万德福有限公司；木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶:诺维信生物技术有限公司；Marker标准蛋白：上海生工生物工程有限公司；三硝基苯磺酸(TNBS)、二硫代二硝基苯甲酸(DTNB):Sigma公司；乙腈:色谱纯；其他试剂均为分析纯。
1.1.2 仪器与设备LGJ-10冷冻干燥机，高速冷冻离心机， ECP3000三恒电泳仪，Waters600高效液相色谱仪，FA1004型分析天平，85-2型恒温磁力搅拌器，868型pH计。
1.2 实验方法1.2.1 大豆分离蛋白(SPI)的制备先用95%乙醇浸洗全脂豆粕，以去除多糖、异黄酮等杂质，得醇洗豆粕。
在醇洗豆粕中按1∶15的料液比加入去离子水充分溶解，用2 mol/L的NaOH溶液调节pH至7.0，室温下低速搅拌1 h，以10 000 r/min 在4℃离心30 min，弃去沉淀。
上清液用2 mol/L的HCl溶液调节pH至 4.5，以10 000 r/min 在4℃离心30 min，弃去上清液，得到的蛋白质凝乳经水洗后，加入去离子水并用2 mol/L 的NaOH溶液调节pH至7.0，经搅拌充分溶解后，在4℃以10 000 r/min离心30 min，弃去少量不溶物质，上清液经透析(采用截留相对分子质量为8 000 Da 的透析袋)24 h除盐后冷冻干燥，得到大豆分离蛋白，在4℃条件下保存备用。
1.2.2 蛋白酶酶解大豆分离蛋白取6 g大豆分离蛋白分散于120 g水中，沸水浴加热10 min，冷却，调节pH(碱性蛋白酶pH 8.0，木瓜蛋白酶pH 7.0)，在一定的酶解温度下搅拌预热10 min，加入1%蛋白酶，酶解30 min，酶解过程中保持pH恒定。
控制酶解温度分别为60、70℃。
酶解完成后，碱性蛋白酶采用PMSF灭酶活，木瓜蛋白酶采用加热灭酶活，然后调节pH为中性。
取部分酶解液样品冻干，剩下的酶解液样品调节pH 至4.8终止反应，以10 000 r/min 在4℃离心10 min，分别调节上清液与沉淀pH至7.0，收集上清液和沉淀，冷冻干燥分别获得酸可溶酶解物和酸不溶酶解物，分别在4℃条件下保存备用。
1.2.3 水解度的测定水解度的测定采用pH-stat法[5-6]。
1.2.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)大豆分离蛋白及其酶解物的电泳采用SDS-PAGE，根据Laemmli[7]的方法在DYCZ-24B型垂直电泳槽制胶。
分离胶、浓缩胶的浓度分别为12.5%和4%。
1.2.5 酶解物相对分子质量分布的测定采用分子排阻色谱法(SE-HPLC)测定大豆分离蛋白酶解物的相对分子质量分布。
色谱条件：TSKgel 2000SWXL(300 mm×7.8 mm)色谱柱，流动相为乙腈-水-三氟乙酸溶液(体积比45∶55∶0.1)，紫外检测波长220 nm，流速0.5 mL/min，柱温30℃。
相对分子质量校正曲线所用标准品：细胞色素C(12 500 Da)、抑菌肽(6 500 Da)、杆菌肽(1 450 Da)、Gly-Gly-Arg-Tyr(451 Da)、Gly-Gly-Gly(189 Da)。
2 结果与讨论2.1 碱性蛋白酶酶解大豆分离蛋白采用碱性蛋白酶分别在60℃和70℃条件下对经加热煮沸变性处理的大豆分离蛋白酶解30 min，所得大豆分离蛋白的水解度测定结果见表1，大豆分离蛋白及碱性蛋白酶酶解物的SDS-PAGE图谱见图1，碱性蛋白酶酶解物的相对分子质量分布测定结果见表2。
表1 大豆分离蛋白的水解度酶解温度/℃水解度/% 6014.73 70 9.79由表1可知，相同酶解时间下60℃的大豆分离蛋白水解度比70℃时的大，这可能是由于60℃是碱性蛋白酶的最适酶解温度。
与庞美蓉[8]研究得到的酶解未加热变性的大豆分离蛋白的水解度(60℃时为9.012%，70℃时为4.901%)相比，本研究所得大豆分离蛋白水解度明显增大。
这可能是因为加热煮沸处理使得大豆分离蛋白的空间结构遭到破坏，发生去折叠，从而暴露了更多的酶切位点，使得水解度增大。
注：1.Marker；2.SPI；3.60℃总酶解物；4.60℃酸可溶酶解物；5.60℃酸不溶酶解物；6.70℃总酶解物；7.70℃酸可溶酶解物；8.70℃酸不溶酶解物。
下同。
图1 大豆分离蛋白及碱性蛋白酶酶解物的SDS-PAGE图谱由图1可知，碱性蛋白酶在60、70℃下进行酶解时，大豆分离蛋白的7S亚基(α，α′，β)以及11S亚基(A肽链及B肽链)均被酶解完全。
酶解温度为60℃时大豆分离蛋白酶解物的相对分子质量主要分布在30 kDa以下。
而酶解温度为70℃时大豆分离蛋白酶解物的相对分子质量主要分布在40 kDa以下。
同时，酶解过程中产生了大量相对分子质量小于40 kDa的肽段。
表2 碱性蛋白酶酶解物的相对分子质量分布 %样品>10 000 Da5 000～10 000 Da1 000～5 000 Da500～1 000 Da<500 Da60℃酸可溶酶解物0.192.0125.2731.0438.9660℃酸不溶酶解物3.4616.6343.1216.5620.2460℃总酶解物2.5410.0826.0827.2334.0870℃酸可溶酶解物1.1916.2232.6228.9325.0470℃酸不溶酶解物11.16 19.2735.8815.6218.0670℃总酶解物5.1810.8339.1623.0521.78由表2可知，碱性蛋白酶在60、70℃下酶解30 min 后，大豆分离蛋白酶解物中的肽段主要分布在5 000 Da以下，70℃时所得酶解物中肽段的相对分子质量高于60℃时的，这与SDS-PAGE结果符合。
但值得注意的是，由于酶解物中肽段的相对分子质量较小，致使SE-HPLC与SDS-PAGE结果不尽相同(相对分子质量较小的肽段跑出SDS-PAGE图谱边界，而SE-HPLC对大分子和小分子肽段均有保留)。
原因可能主要是由于相对分子质量较小(5 000 Da以下)的肽段未能在SDS-PAGE图谱上很好地固定显色，而这部分肽段在酶解物中的比例很大，为80%～90%。
2.2 木瓜蛋白酶酶解大豆分离蛋白采用木瓜蛋白酶分别在60℃和70℃条件下对经加热煮沸变性处理的大豆分离蛋白酶解30 min，所得大豆分离蛋白的水解度测定结果见表3，大豆分离蛋白及木瓜蛋白酶酶解物的SDS-PAGE图谱见图2，木瓜蛋白酶酶解物的相对分子质量分布测定结果见表4。
表3 大豆分离蛋白的水解度酶解温度/℃水解度/% 6010.12 70 9.63图2 大豆分离蛋白及木瓜蛋白酶酶解物的SDS-PAGE图谱表4 木瓜蛋白酶酶解物的相对分子质量分布 %样品>10 000 Da5 000～10 000 Da1 000～5 000 Da500～1 000 Da<500 Da60℃酸可溶酶解物3.786.1737.7628.5823.7060℃酸不溶酶解物10.3126.2941.6411.879.8960℃总酶解物10.4920.7937.9217.9412.8670℃酸可溶酶解物3.306.5138.8829.3321.9970℃酸不溶酶解物9.6124.8144.5612.418.6170℃总酶解物10.8621.3738.7815.0014.93由表3可知，相同酶解时间下60℃的大豆分离蛋白水解度与70℃的相差不大。