【医学免疫学知识学习】_免疫学检测技术+疫苗及防疫接种
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测未知抗原或抗体的方法。
免疫印迹技术 （Western blotting)
SDS-PAGE (聚丙烯酰胺凝胶电泳)
Marker
-
Sample
浓缩胶
分离胶
M Sample
-
+
+ PAGE：PolyAcrylamide Gel Electrophoresis
转转印膜
M
8KD
胶
膜
免疫学检测
硝
酸
一抗（特异性抗体）
Six weeks later, Jenner inoculated James with smallpox – he developed no symptoms of disease!
Edward Jenner inoculating James Phipps with cowpox （1796）
双向琼脂扩散：抗原抗体的定性分析 免疫电泳：分析样品的成分及其性质，常用于血清蛋白的组分
分析
Ab in gel
单
Ag
Ag
Ag
Ag
向
琼
脂
扩
散
Diameter2
Ag Concentration
双向琼脂扩散
补体参加的反应 原理： 抗体+红细胞
补体 红细胞裂解
免疫标记技术
将抗原抗体反应与标记技术结合，提高了抗 原抗体反应的灵敏度，可定性、定量、定位。
பைடு நூலகம்
酶免疫测定法（enzyme immunoassay, EIA)
酶标记抗体进行的抗原抗体反应
酶联免疫吸附试验(ELISA)： （enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)
将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反 应在固相表面进行。它将抗原抗体反应的特异性与酶的高 效催化作用相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。
天花的流行情况：
The principle behind the smallpox vaccine
疫苗的基本要求:
• 安全：灭活疫苗应彻底灭活，避免无关蛋白和
直接凝集反应
1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512
间接凝集反应 +
沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体结合出现肉眼
可见的沉淀物。
速率散射比浊法/免疫比浊法：可检测样品中多种分子，
并进行精确定量
单向琼脂扩散：可用于检测血清中Ig或其他可溶性抗原的定
量测定
第二十二章 免疫学检测技术的基本原理
第一节 体外抗原抗体反应
（血清学反应）
抗原抗体反应的特点：
1、 高度特异性：
http://www.med.sc.edu:85/chime2/lyso-abfr.htm
2、表面化学基团之间的可逆结合：
结合：非共价键
氢键, 静电引力，范德华力, 疏水键
解离：抗体亲和力
Ag Tissue Section
间接免疫荧光
Unlabeled Ab
Fluorochrome Labeled Anti-Ig
Ag Tissue Section
放射免疫测定法：用放射性核素标记抗原或抗体进行的
免疫测定
化学发光免疫技术：将化学发光分析和免疫反应相结合
免疫胶体金技术：用胶体金颗粒标记抗体或抗原，以
纤
维
膜
洗涤，辣根过氧化物酶标记的二抗
底物
第三节 免疫细胞功能的检测
免疫细胞的分离与类型鉴定
外周血单个核细胞的分离： 密度梯度离心 淋巴细胞及其亚群的分离：
磁珠分离：抗体与磁珠交联 流式细胞术（FACS）
Cytofluorimetry
磁珠分离法
免疫细胞功能测定：
T细胞功能测定 B细胞功能测定
直接法 间接法 双抗体夹心法
双抗体夹心法（sandwich ELISA)
免疫荧光法：荧光素与抗体连接 荧光抗体
直接免疫荧光：荧光素标记的抗体直接作标本染色
间接免疫荧光：一抗与标本中的抗原结合，再用荧 光素标记的二抗染色。既可检测抗 原，也可检测抗体。
直接免疫荧光
Fluorochrome Labeled Ab
T细胞功能测定
T 细胞增殖试验 细胞毒试验 细胞因子检测 迟发型超敏反应(DTH)的检测
淋巴细胞转化
杀伤实验
产生细胞因子的细胞频数的检测： ELISPOT Assay
迟发型超敏反应的检测
DTH (Delayed-Type Hypersensitivity)
检测抗原肽特异的T细胞频数---Tetramer (四聚体)
Biotin
B细胞功能测定
B细胞增殖试验 抗体形成细胞测定: 溶血空斑试验
第二十三章 疫苗及预防接种
第一节 免 疫 预 防
特异性免疫的获得：自然免疫和人工免疫 人工免疫： 人工主动免疫
人工被动免疫
人工被动免疫（artificial active immunization)
给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂, 以治疗或紧急预防感染的措施。
受温度、酸碱度和离子强度的影响
亲 和 力（affinity）
Keq =
104 Affinity
亲和力
High Affinity
Low Affinity
Ab
Ab
Ag
Ag
亲合力
106 Avidity
1010 Avidity
3、适宜的抗原抗体浓度和比例
Ab excess
Ag excess
Equivalence – Lattice formation
种类：抗毒素 ，免疫球蛋白，细胞因子与单克隆抗体
人工主动免疫 （artificial passive immunization)
用疫苗接种机体使之产生特异性免疫,从而预防感染的措 施。
疫苗的起源
Edward Jenner 1749-1823
1796 - Local milkmaid, Sarah Nelmes, diagnosed with cowpox. Jenner scratched material from pocks onto the arm of 8-year-old James Phipps. Showed mild symptoms & recovered.
4、抗原抗体反应的两个阶段
抗原抗体特异性结合阶段 可见反应阶段
抗原抗体反应的影响因素：
• 电解质 • 温度: 37℃ • 酸碱度: pH 6 – 8 之间
第二节 检测抗原和抗体的体外实验
检测抗原或抗体的方法：
凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体在电解质存在的 条件下结合，出现肉眼可见的凝集团块
直接凝集反应：颗粒性抗原+相应抗体 间接凝集反应：可溶性抗原+颗粒载体+相应抗体
免疫印迹技术 （Western blotting)
SDS-PAGE (聚丙烯酰胺凝胶电泳)
Marker
-
Sample
浓缩胶
分离胶
M Sample
-
+
+ PAGE：PolyAcrylamide Gel Electrophoresis
转转印膜
M
8KD
胶
膜
免疫学检测
硝
酸
一抗（特异性抗体）
Six weeks later, Jenner inoculated James with smallpox – he developed no symptoms of disease!
Edward Jenner inoculating James Phipps with cowpox （1796）
双向琼脂扩散：抗原抗体的定性分析 免疫电泳：分析样品的成分及其性质，常用于血清蛋白的组分
分析
Ab in gel
单
Ag
Ag
Ag
Ag
向
琼
脂
扩
散
Diameter2
Ag Concentration
双向琼脂扩散
补体参加的反应 原理： 抗体+红细胞
补体 红细胞裂解
免疫标记技术
将抗原抗体反应与标记技术结合，提高了抗 原抗体反应的灵敏度，可定性、定量、定位。
பைடு நூலகம்
酶免疫测定法（enzyme immunoassay, EIA)
酶标记抗体进行的抗原抗体反应
酶联免疫吸附试验(ELISA)： （enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)
将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反 应在固相表面进行。它将抗原抗体反应的特异性与酶的高 效催化作用相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。
天花的流行情况：
The principle behind the smallpox vaccine
疫苗的基本要求:
• 安全：灭活疫苗应彻底灭活，避免无关蛋白和
直接凝集反应
1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512
间接凝集反应 +
沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体结合出现肉眼
可见的沉淀物。
速率散射比浊法/免疫比浊法：可检测样品中多种分子，
并进行精确定量
单向琼脂扩散：可用于检测血清中Ig或其他可溶性抗原的定
量测定
第二十二章 免疫学检测技术的基本原理
第一节 体外抗原抗体反应
（血清学反应）
抗原抗体反应的特点：
1、 高度特异性：
http://www.med.sc.edu:85/chime2/lyso-abfr.htm
2、表面化学基团之间的可逆结合：
结合：非共价键
氢键, 静电引力，范德华力, 疏水键
解离：抗体亲和力
Ag Tissue Section
间接免疫荧光
Unlabeled Ab
Fluorochrome Labeled Anti-Ig
Ag Tissue Section
放射免疫测定法：用放射性核素标记抗原或抗体进行的
免疫测定
化学发光免疫技术：将化学发光分析和免疫反应相结合
免疫胶体金技术：用胶体金颗粒标记抗体或抗原，以
纤
维
膜
洗涤，辣根过氧化物酶标记的二抗
底物
第三节 免疫细胞功能的检测
免疫细胞的分离与类型鉴定
外周血单个核细胞的分离： 密度梯度离心 淋巴细胞及其亚群的分离：
磁珠分离：抗体与磁珠交联 流式细胞术（FACS）
Cytofluorimetry
磁珠分离法
免疫细胞功能测定：
T细胞功能测定 B细胞功能测定
直接法 间接法 双抗体夹心法
双抗体夹心法（sandwich ELISA)
免疫荧光法：荧光素与抗体连接 荧光抗体
直接免疫荧光：荧光素标记的抗体直接作标本染色
间接免疫荧光：一抗与标本中的抗原结合，再用荧 光素标记的二抗染色。既可检测抗 原，也可检测抗体。
直接免疫荧光
Fluorochrome Labeled Ab
T细胞功能测定
T 细胞增殖试验 细胞毒试验 细胞因子检测 迟发型超敏反应(DTH)的检测
淋巴细胞转化
杀伤实验
产生细胞因子的细胞频数的检测： ELISPOT Assay
迟发型超敏反应的检测
DTH (Delayed-Type Hypersensitivity)
检测抗原肽特异的T细胞频数---Tetramer (四聚体)
Biotin
B细胞功能测定
B细胞增殖试验 抗体形成细胞测定: 溶血空斑试验
第二十三章 疫苗及预防接种
第一节 免 疫 预 防
特异性免疫的获得：自然免疫和人工免疫 人工免疫： 人工主动免疫
人工被动免疫
人工被动免疫（artificial active immunization)
给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂, 以治疗或紧急预防感染的措施。
受温度、酸碱度和离子强度的影响
亲 和 力（affinity）
Keq =
104 Affinity
亲和力
High Affinity
Low Affinity
Ab
Ab
Ag
Ag
亲合力
106 Avidity
1010 Avidity
3、适宜的抗原抗体浓度和比例
Ab excess
Ag excess
Equivalence – Lattice formation
种类：抗毒素 ，免疫球蛋白，细胞因子与单克隆抗体
人工主动免疫 （artificial passive immunization)
用疫苗接种机体使之产生特异性免疫,从而预防感染的措 施。
疫苗的起源
Edward Jenner 1749-1823
1796 - Local milkmaid, Sarah Nelmes, diagnosed with cowpox. Jenner scratched material from pocks onto the arm of 8-year-old James Phipps. Showed mild symptoms & recovered.
4、抗原抗体反应的两个阶段
抗原抗体特异性结合阶段 可见反应阶段
抗原抗体反应的影响因素：
• 电解质 • 温度: 37℃ • 酸碱度: pH 6 – 8 之间
第二节 检测抗原和抗体的体外实验
检测抗原或抗体的方法：
凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体在电解质存在的 条件下结合，出现肉眼可见的凝集团块
直接凝集反应：颗粒性抗原+相应抗体 间接凝集反应：可溶性抗原+颗粒载体+相应抗体