细胞工程知识点及重点难点总结

第一章绪论

1、细胞工程的概念，广义的细胞工程，狭义的细胞工程，

⏹细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的方法，通过类似于工程学的

步骤，在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或一定细胞产品的一门综合性科学技术。

⏹广义的细胞工程包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术，

狭义的细胞工程则是指细胞融合和细胞培养技术。

2、细胞工程的研究内容（研究生物类型，实验操作对象）

⏹根据研究生物类型不同，细胞工程可分为动物细胞工程、植物细胞工程、

微生物细胞工程。

⏹动物细胞工程包括：细胞培养技术（包括组织培养、器官培养）；细

胞融合技术；胚胎工程技术（核移植、胚胎分割等）；克隆技术（单细胞系克隆、器官克隆、个体克隆）。

⏹植物细胞工程包括：植物组织、器官培养技术；细胞培养技术；原生

质体融合与培养技术；亚细胞水平的操作技术等。

3、细胞工程的重要应用（植物、动物）

⏹植物细胞工程的应用：

脱毒和快速繁殖

细胞工程育种：利用培养变异，筛选优良突变体

利用远缘杂交幼胚培养，获得杂种植株，克服其杂交不亲和性

利用细胞融合技术，克服远缘杂交不亲和性

倍性育种

离体种质保存

细胞培养生产有用物质

⏹动物细胞工程的应用

动物细胞培养生产医药产品（单克隆抗体）

新品种培育

试管动物与婴儿

组织工程

珍稀动物资源的保存与保护

第二章细胞工程基础

1、细胞分化：个体细胞发育过程中，后代细胞在形态、结构和生理功能上发生差异的过程。

2、发育潜能：指细胞分化能力的强弱。

3、细胞全能性：指细胞具有发育成完整个体的潜能。

4、细胞多能性：指随着胚胎发育，有的体细胞失去全能性，具有分化出多种组织的潜能。

5、去分化：又称脱分化，指某些条件下分化细胞不稳定，又回到未分化状态的这一过程

6、愈伤组织：脱分化后的细胞，经过细胞分裂，产生无组织结构、无明显极性的、松散的细胞团称为愈伤组织。

愈伤组织的种类

胚性愈伤组织（Embryonenic callus）：表面光滑、组织结构紧凑、细胞小、再生力强。

胚性愈伤组织容易形成胚状体，所以被称为胚性愈伤组织。

非胚性愈伤组织：表面粗糙、组织结构疏松、细胞大。

第三章细胞工程实验室及实验基本操作（教材第二章）

1、什么是灭菌？是么是消毒？（P18）

灭菌是指杀灭或者去除物体表面和孔隙内的所有微生物，包括抵抗力极强的细

菌芽胞。

消毒是指杀死物体上的病原微生物，但细菌芽胞和非病原微生物可能还存活。

2、常用的灭菌和消毒方法有哪些？

物理法

（一）紫外线

直接照射、表面灭菌、可消毒空气和培养用具（如塑料器皿），消毒的效力和距离有密切关系，故无菌室天花板一般不宜太高。一般石菌室内空气、桌椅以及培养用具在紫外线有效消毒距离内，照射30分钟，可达到灭菌效果。紫外线照射使用方便、消毒效果好；缺点是能产生臭氧，污染空气，且对未直接照射的部分无消毒效果。

（二）干热消毒

主要用于消毒玻璃器四周，干热、消毒的器皿干燥，易贮存。但干热传导慢，需加温到160℃，保持90~120分钟，才能杀死芽孢，达到消毒目的。消毒后不要立即打开箱门，防止冷空气忽然进入影响消毒效果和损坏玻璃器皿。金属器械和橡胶制品不能用于干热消毒等。

（三）湿热消毒

即高压蒸气消毒，是最有效的一种方法。布类、胶塞、金属器械、玻璃器皿以及某种液体都可以用这种方法。

（四）滤过消毒

不能高温高压灭菌的液体可以用此法，如动物组织的人工合成培养液、小牛血清、胰蛋白酶系。须选一定规格的滤器，液体滤过速度，且保证除菌效果的关键。一般以肉眼可见液滴滴下为。滤过后及时分装。

（五）煮沸消毒

急需要时的常规方法，金属器械、胶塞在水中煮沸20~30分钟，趁热倒去水分即可使用。

化学法

（一）消毒剂灭菌

来苏尔、新洁尔灭（1%）、70~75%酒精、安替福氏、贝氯酸钙、乳酸蒸气、环氧乙烷。

（二）抗菌素灭菌：

（三）熏蒸灭菌

3、什么是平衡盐溶液（BSS）？

平衡盐溶液（Balanced Salt Solution；BSS）

又称生理盐水或盐溶液。具有维持渗透压，控制酸碱度的平衡作用，同时也能供给细胞中生存所需的能量和无机盐离子，用作冲洗组织和细胞，配制各种培养用液的基础溶液，也可用于短暂培养。

成分：水，无机盐，葡萄糖组成。

4、什么是生物安全实验室？目前，生物安全实验室的种类有哪些，各有什么特点。

5、动物细胞培养的天然培养基有哪些？

天然培养基

1．血浆

最常用的是鸡血浆，它具有一定的营养，与少量鸡胚浸出液混合后，有良好

的凝固作用，利于支持细胞的生长。

缺点易液化，一般常用作各种细胞生长的基质。

2．鼠尾胶原

对维持细胞生长有良好作用。由于鸡血浆存在一定缺点，人们曾试用了很多化药品，其中鼠尾胶原较好。它能促进组织和细胞的附着，改善生长表面药性。

来源：燃尾键，豚鼠真皮，牛的真皮和牛眼的水晶体，实验室常用大鼠尾制胶原。

3．胚胎浸出液

主要成分是大分子核蛋白和小分子氨基酸，有刺激细胞生长的作用。在动物、细胞培养中应用最早，但由它而作了变到使用合成培养液，并渐渐被合成培养液所代替，但在研究中仍有应用价值。常用的有鸡胚和牛胚。

4．血清

是动物用量最大的天然培养基。血清含有丰富的营养物质，包括大分子的蛋白质和核酸。动物细胞的生长和增殖需要血清。实验证明血清对细胞附着和保护尚有明显作用，且能中和有毒物质的毒性，使细胞不受伤害。

血清种类很多，其中有小牛血清、胎牛血清、马血清、人胚胎血清等，胎牛血清比较理想，但不易得到。目前各实验室多采用小牛血清。目前已有出售小牛商品血清。人血清一般都采用AB型血清，但价格昂贵，很少用。

5．血清代用品

血清的来源比较困难，而且成分复杂，人们努力寻找其替代品，其中有聚乙烯、吡咯咆酮（P、V、P）、蛋白胨、水解乳蛋白等，但都不如血清，因而没广泛使