熏肉制品中亚硝酸盐的检测(分光光度法)
盐酸萘乙二胺分光光度法测定肉制品中的亚硝酸盐
盐酸萘乙二胺分光光度法测定肉制品中的亚硝酸盐姓名：班级：食物科学学号：一目的要求1 通过实验强化对紫外—可见分光光度法定量分析原理的明白得；2 了解以紫外—可见分光光度法为基础的检测方式的成立思路；3 直观了解紫外—可见分光光度计的结构；4 把握紫外－可见吸收光谱的测定方式；5 把握利用标准曲线法进行定量分析的方式。
二实验原理亚硝酸盐在食物生产顶用作发色剂和防腐剂，许诺用于肉及肉制品的生产加工中，使得肉与肉制品呈现良好的色泽。
其呈色机理是，亚硝酸盐与肌肉中的乳酸作用产生亚硝酸，而亚硝酸不稳固易分解产生一氧化氮，然后一氧化氮与肌红蛋白结合产生红色的亚硝基肌红蛋白，使肉制品产生稳固的红色。
可是过量的亚硝酸盐能够引发高铁血红蛋白症，致使组织缺氧，还可使血管扩张、血压降低。
在酸性条件下，亚硝酸盐可与对氨基苯磺酸通过重氮化反映定量生成重氮盐，该重氮盐可进一步与盐酸萘乙二胺通过偶联反映生成紫红色偶氮染料，在特定波优势产生较强吸收：；通过测定该偶氮染料在特定波长下的吸光度，利用朗伯-比尔定律（A=KLc）可确信样品中亚硝酸盐的质量浓度。
采纳标准曲线法进行定量分析时，可对亚硝酸盐标准溶液系列进行上述反映，通过测定该系列的吸光度，利用excel回归标准曲线，取得浓度和吸光度的关系，再将样品中亚硝酸盐测得的吸光值带到方程中算出其中亚硝酸盐的浓度。
三仪器与试剂1 仪器Cary Eclipse型紫外-可见分光光度计；BS 124S电子分析天平。
2 试剂亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]、乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]、硼砂 [Na2B4O7·10H2O]、对氨基苯磺酸、盐酸萘乙二胺，均为分析纯试剂。
四实验步骤1 试剂配制亚铁氰化钾溶液：称取106.0 g 亚铁氰化钾，溶解于水后稀释至1000mL。
乙酸锌溶液：称取220.0 g 乙酸锌，加30 mL冰乙酸溶于水，稀释至1000mL。
熏肉制品中亚硝酸盐含量的测定实验报告剖析
熏肉制品中亚硝酸盐含量的测定华南师范大学09化一摘要：肉制品是一类深受人民群众喜爱的食品，在其生产过程中多采用亚硝酸盐作为发色剂，它不仅能使肉制品保持良好的色泽，还能抑制肉毒梭状芽孢杆菌，保证肉制品的后熟风味。
但近年来由于亚硝酸盐摄入量过多引起的食物时中毒时有发生，且加硝处理过的肉制品中的亚硝酸盐可与胺类生成强致癌物亚硝胺，对人体健康产生潜在的危害。
本实验用紫外分光光度法测定熏肉制品中亚硝酸盐的含量。
关键字：熏肉制品亚硝酸盐紫外分光光度法标准曲线法盐酸-萘乙胺引言盐的性质:亚硝酸和硝酸的钠盐和钾盐常被加入用于腌肉的混合物中，用来产生和保持色泽、抑制微生物和产生特殊的风味。
此外，亚硝酸盐（150-200mg/kg）可抑制罐装碎肉和腌肉中的梭状芽孢杆菌。
亚硝酸盐的抗微生物作用为它使用于可能生成长肉毒梭状芽孢杆菌的腌肉中提供了正当的理由。
亚硝酸盐含量只要控制在安全范围内使用不会对人体造成危害。
肉制品中，亚硝酸盐含量不得超过30mg/kg，这是因为亚硝酸盐的中毒剂量是200毫克以上，而正常膳食中的亚硝酸盐即使是大量用亚硝酸盐做食品添加剂的肉类，也不会超过50毫克。
中毒后症状：亚硝酸盐是不会蓄积在体内的，膳食中绝大部分亚硝酸盐随尿排出，不会对人体造成危害。
过量亚硝酸盐进入人体，会氧化血液中的血红蛋白为高铁血红蛋白，后者无携氧功能，导致组织缺氧，引起肠原性青紫症，皮肤青小时后，3分钟至10紫是本病的特征，尤以口唇青紫最为普遍。
口服亚硝酸盐．可出现头晕、恶心、呕吐等症状。
严重者出现意识丧失、昏迷、呼吸衰竭，甚至死亡。
亚硝酸盐作用机理NHHN22发色机理NCOOH(CH) HOOC(CH)2222（亚铁）当血红蛋白中的铁处于+2CHCH33NN部位时，6并且缺乏配体键合所需的第FeN N CH3HC它被称为肌红蛋白，是由珠蛋白和血红CH CH HC22CH素组成的络合物，位居血红蛋白中央的3)HO(O22图血红蛋白结构图1. 4吡咯环上的氮原子占据，个分别被6具有个配位部位，其中4第铁原子(d2sp3)5个配位部位与珠蛋白的组氨酸残基键合，剩余的第6个配位部位可与各种配基提供的电负性原子络合。
熏肉制品中亚硝酸盐含量的测定实验报告
熏肉制品中亚硝酸盐含量的测定华南师范大学09化一摘要：肉制品是一类深受人民群众喜爱的食品，在其生产过程中多采用亚硝酸盐作为发色剂，它不仅能使肉制品保持良好的色泽，还能抑制肉毒梭状芽孢杆菌，保证肉制品的后熟风味。
但近年来由于亚硝酸盐摄入量过多引起的食物时中毒时有发生，且加硝处理过的肉制品中的亚硝酸盐可与胺类生成强致癌物亚硝胺，对人体健康产生潜在的危害。
本实验用紫外分光光度法测定熏肉制品中亚硝酸盐的含量。
关键字：熏肉制品亚硝酸盐紫外分光光度法标准曲线法盐酸-萘乙胺引言盐的性质:亚硝酸和硝酸的钠盐和钾盐常被加入用于腌肉的混合物中，用来产生和保持色泽、抑制微生物和产生特殊的风味。
此外，亚硝酸盐（150-200mg/kg）可抑制罐装碎肉和腌肉中的梭状芽孢杆菌。
亚硝酸盐的抗微生物作用为它使用于可能生成长肉毒梭状芽孢杆菌的腌肉中提供了正当的理由。
亚硝酸盐含量只要控制在安全范围内使用不会对人体造成危害。
肉制品中，亚硝酸盐含量不得超过30mg/kg，这是因为亚硝酸盐的中毒剂量是200毫克以上，而正常膳食中的亚硝酸盐即使是大量用亚硝酸盐做食品添加剂的肉类，也不会超过50毫克。
中毒后症状：亚硝酸盐是不会蓄积在体内的，膳食中绝大部分亚硝酸盐随尿排出，不会对人体造成危害。
过量亚硝酸盐进入人体，会氧化血液中的血红蛋白为高铁血红蛋白，后者无携氧功能，导致组织缺氧，引起肠原性青紫症，皮肤青紫是本病的特征，尤以口唇青紫最为普遍。
口服亚硝酸盐10分钟至3小时后，可出现头晕、恶心、呕吐等症状。
严重者出现意识丧失、昏迷、呼吸衰竭，甚至死亡。
亚硝酸盐作用机理发色机理当血红蛋白中的铁处于+2（亚铁）并且缺乏配体键合所需的第6部位时，它被称为肌红蛋白，是由珠蛋白和血红素组成的络合物，位居血红蛋白中央的铁原子(d2sp3)具有6个配位部位，其中45个配位部位与珠蛋白的组氨酸残基键合，剩余的第6个配位部位可与各种配基提供的电负性原子络合。
亚硝酸盐为强氧化剂，进人人体后，可使血中低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，失去运氧的功能，导致组织缺氧。
亚硝酸盐;肉制品;紫外-可见分光光度法
亚硝酸盐；肉制品；紫外-可见分光光度法
亚硝酸盐是一种常用的食品添加剂，尤其常用于肉制品的腌制和保鲜过程中。
然而，过量的亚硝酸盐会对人体健康造成危害，如致癌、致畸等。
因此，对肉制品中亚硝酸盐的含量进行准确检测具有重要意义。
紫外-可见分光光度法是一种常用的亚硝酸盐检测方法。
该方法利用亚硝酸盐吸收紫外-可见光的特性，通过测量样品吸收光线的强度来确定亚硝酸盐的含量。
该方法具有检测灵敏度高、准确度高、操作简单等优点，已被广泛应用于食品、环境等领域。
熏肉制品中亚硝酸盐含量的测定报告
实验题目熏肉制品中亚硝酸盐含量的测定20092401081一、目的与要求：1、明确亚硝酸盐的测定与控制成品质量的关系。
2、明确与掌握盐酸萘乙二胺法的基本原理与操作方法。
二、引言(一)亚硝酸盐的介绍亚硝酸盐是作为发色剂使用于腌制香肠、腊肉和火腿等肉制品中，因其可缓慢的分解释放出氧化氮（NO），使肉中的肌红蛋白亚硝基化形成稳定的亚硝基肌红蛋白色素，从而保持肉制品中的固有色泽；另一方面，亚硝酸盐还具有防腐作用，能够抑制肉毒梭状芽孢杆菌，防止肉类制品的腐败变质。
但是，亚硝酸盐不仅本身具有毒性，往往因使用过量或使用方法不当而导致食物中毒发生。
因为进入体内的亚硝酸盐常常与蛋白分解生成的胺类结合成强致癌物亚硝胺。
若熟肉制品中亚硝酸盐残留量过高，必然导致这种潜在危险的增大。
硝酸盐及亚硝酸盐被用于肉类食品中，硝酸盐本身具有一定杀菌作用，大部分的应用可能会转化少量的亚硝酸盐。
（二）亚硝酸盐的测定方法(1) 分光光度法分光光度法目前广泛采用的是盐酸素二胺分光光度法和酚二磺酸分光光度法。
这2种方法均为水质分析方法标准，最低检出浓度亚硝酸盐为0.003mg/L （试份体积为50ml），硝酸盐最低检出浓度为0.02mg/L（试份体积50ml），水样中某些共存离子对测定产生干扰，需作适当前处理以消除对测定的影响。
此外，所用试剂如盐酸萘乙二胺等有毒性，且操作较繁琐。
近年来，许多分析工作者致力于高灵敏度亚硝酸盐和硝酸盐的分析方法研究。
（2）紫外分光光度法紫外分光光度法测定硝酸盐和亚硝酸盐，人们关注的研究课题之一是探索不经任何分离而同时测定NO3-和NO2-。
该法具有较好的准确度和精密度，操作简便，计算准确，速度快，是一种很有应用前景的方法。
荧光光度法灵敏度高，近年来对荧光光度法测定NO2-和NO3-的研究增多。
（4）催化动力学法高甲友等研究了亚硝酸根对溴酸钾氧化罗丹明B的催化效应，提出了一个新的测定痕量的NO2催化荧光和催化光度法。
分光光度法测定火腿肠中亚硝酸盐的含量1
分光光度法测定火腿肠中亚硝酸盐的含量引言：亚硝酸盐作为一种食品添加剂，能够保持眼肉制品等的色香味，并具有一定的防腐性。
但同时也具有较强的致癌作用，过量食用会对人体产生危害。
因此，食品加工中需严格控制亚硝酸盐的加入量。
实验原理：样品经沉淀蛋白质，除脂肪后，在弱酸性溶液中亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮反应，生成的重氮化合物与盐酸萘乙二胺偶联成紫色的偶氮染料，可用分光光度法测定，仪器：小型多用食品粉碎机，分析天平，烧杯，玻璃棒，250mL 容量瓶，50mL容量瓶（7只），漏斗，滤纸，滴管， 2.00mL移液管试剂：饱和硼砂溶液，，，150 亚铁氰化钾水溶液，，蒸馏水材料：火腿肠样品（双汇王中王骨香风味）实验步骤试样预处理1）取样，在分析天平上称取一定量火腿肠样品，样品质量为5.0984g，将称得的样品放入粉碎机中，加入一定量水后将样品绞碎。
2）将绞碎后的试样倒入烧杯中，加入12.5mL 硼砂饱和溶液搅拌均匀。
3) 将烧杯中的试样用玻璃棒全部转移到250mL 容量瓶中，并用少量水洗涤玻璃棒和烧杯1~2 次，并将容量瓶放在沸水浴中加热15min.4) 取出容量瓶，在轻轻摇动下慢慢滴加 2.5mLZnSO4 溶液沉淀出蛋白质，冷却至室温后，用蒸馏水稀释至刻度，定容，摇匀。
5 放置10min 中左右，撇去上层油脂，将清液在小漏斗上过滤，需去除最初的10mL 滤液，剩下的留测定用。
标准曲线的绘制1) 准确移取NaNO2溶液0，0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2.0mL分别置于50mL 的容量瓶中，再各加入30mL 水，然后分别加入2mL 对氨基苯磺酸溶液，摇匀，静置3min.2) 分别加入1mL 盐酸萘乙二胺溶液，加水稀释至刻度，摇匀。
3) 放置15min 分钟后用1cm 吸收池，以试剂空白为参比，于波长540nm 处测定各试液的吸光度。
4) 以NaNO2 溶液的加入量为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
肉类产品中亚硝酸盐含量的检测与分析
2.1 样品预处理
把 香 肠 放 在 绞 肉 机 内 搅 碎。 称 取 绞 碎 后 混 合 均 匀 试 样 10 g 放 置 于 100 mL 的烧杯中，加入 15 mL 的硼砂 饱和溶液，200 mL 80 ℃的蒸馏水，先 用玻璃棒搅和均匀，再倒入 500.00 mL 的 容 量 瓶 中， 放 于 在 沸 水 浴 中 加 热 15 min，取出后加入 5 mL 亚铁氰化钾 溶液，轻轻晃动摇匀，再加入 10 mL 乙酸锌溶液。冷却后定容，在室温下 放置 2 min，去掉悬浮的脂肪，取滤液 备用。 2.2 确定最大吸收波长
肉制品中亚硝酸盐含量 =
C × 25 × 500 ×10−3
20 m ×10−3
=3.35mg/kg
4 结果与讨论
本实验在确定紫外分观光度计最 佳实验条件下对肉类产品中亚硝酸盐 的含量进行检测，得到标准方程式， 得到了香肠中亚硝酸盐的含量为 3.35 mg/kg，低于国家标准 5 mg/kg。可 放心食用。紫外分光光度法所用仪器 简单、廉价，分析操作也简便。而且 有较高的准确度和分析速度。因此， 应用广泛，既可进行定性分析，也可 进行定量分析。 参考文献
将 1.0 mL 亚硝酸钠标准溶液移入 100.00 mL 容量瓶中，加入 5.0 mL 对 氨基苯磺酸溶液（0.4%），轻轻摇匀， 后静置 5 min， 再移入 5 mL 0.2% α萘胺溶液（0.2%），摇匀后室温下静 置 12 min， 放在 1 cm 比色皿中，然 后用同样方法用蒸馏水配置空白溶液， 在 500~600 nm 扫描。得到吸光度分
[1][ 甘振威 , 张娅婕 , 谢林 , 等 . 长 春市市售香肠亚硝酸盐的含量分析 [J]. 中国卫生工程学 ,2008,7(5):320-321.
肉制品中亚硝酸盐的测定
肉制品中亚硝酸盐的测定一、目的与要求： 1、明确亚硝酸盐的测定与掌握成品质量的关系。
2、明确与把握盐酸萘乙二胺法的基本原理与操作方法。
二、原理：样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，生成的重氮化合物，再与萘基盐酸二氨乙烯偶联成紫红色的重氮染料，产生的颜色深浅与亚硝酸根含量成正比，可以比色测定。
反应式如下：三、试剂与仪器1、亚铁氰化钾溶液：称取106克亚铁氰化钾[K4Fe9(CN)5.3H2O]，溶于水后，稀释至1000毫升。
2、乙酸锌溶液：称取220克乙酸锌[Zn(CH2C00)22H20]，加30毫升冰乙酸溶于水，并稀释至1000毫升。
3、饱和硼砂溶液：称取5克硼酸钠(Na2B0710H20)，溶于100毫升热水中，冷却后备用。
4、0.4％对氨基苯磺酸溶液：称取0.4克对氨基苯磺酸，溶于100毫升20％的盐酸中，避光保存。
5、0.2％盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2克盐酸萘乙二胺，溶于100毫升水中，避光保存。
6、亚硝酸钠标准溶液：精密称取0.1000克于硅胶干燥器中干燥24小时的亚硝酸钠，加水溶解移入500毫升容量瓶中，并稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于200微克亚硝酸钠。
7、亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00毫升，置于200毫升容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5微克亚硝酸钠。
8，小型绞肉机。
9、分光光度计。
四、操作方法：1、样品处理：称取5.0克经绞碎混匀的样品，置于50毫升烧杯中，加工2.5毫升饱和溶液，搅拌匀称，以70℃左右的水约30毫升将样品全部洗入500毫升容量瓶中，置沸水浴中加热15分钟，取出后冷至室温，然后一面转动一面加入5毫升亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5毫升乙酸锌溶液以沉淀蛋白质，加水至刻度，混匀，放置0.5小时，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤弃去初滤液30毫升，滤液备用。
2、测定吸取40毫升上述滤液于50毫升比色管中，另吸取0.00、0.20、0．40、0．60、0.80、1.00、1.50、2.00、2.50毫升亚硝酸钠标准使用液(相当于0、1、2、3、5、7、10、12.5微克亚硝酸钠)，分别置于50毫升比色管中，于标准与样品管中分别加入2毫升0.4％对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3-5分钟后各加入1毫升0.2％盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15分钟，用2厘米比色杯，以零管调整零点，于波长538nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。
分光光度法测定火腿中亚硝酸盐的含量
电子 分析 天平 ， 水浴 箱 ， 绞碎机 ， 精密 数显酸 度计 。亚铁 氰化
钾 溶 液 ． 酸 锌 溶 液 ， 和 硼 砂 溶 液 ，． 乙 饱 ０４％对 氨 基 苯 磺 酸 溶 液 ，－ ０２％盐 酸 萘 乙 二 胺 溶 液 。 亚 硝 酸 钠 标 准 贮 备 液 （ ａ Ｏ ＮＮ ２ ０Ｉ ／ ） ０ ｇｍＬ ：精 确 称 取 １００ｍｇ于 硅 胶 干 燥 器 干 燥 ２ ￣ ０． ４ｈ的 亚 硝 酸 钠 ， 水 溶 解 移 入 ５ ０ｍＬ容 量 瓶 中 ， 定 容 至 刻 度 ； 加 ０ 并 亚 硝 酸 钠 标 准 应 用 液 （ ａ Ｏ ５Ｉ ／ ） 准 确 吸 取 亚 硝 酸 钠 Ｎ Ｎ ： ｇｍＬ ： ￣ 标 准 贮 备 液 ５０ｍＬ置 于 ２ ０ｍＬ容 量 瓶 中 。加 水 稀 释 至 刻 ． ０
Ａｂ ｔａ ｔＴｈｏ ｇ ｓｎ 一（ 一 ａ ｈｈ １ ｔｙｅ ｅ ｉｍｉｅ ｄｈ ｄｏ ｈｏｉｅ ａ ｏｏ － ｅ ｅｏ ｉｇ ａｅ ｔ ｅ ｅ ｐｏｅ ｈ ｐｉ ｍ ｓｒ ｃ ： ｒｕ ｈ ｕ ｉｇ Ｎ １ ｎ ｐ ｔｙ ）ｅｈ ｌｎ ｄａ ｎ ｉｙ ｒｃ ｌｒ ｓ ｃｌｒ ｄ ｖ ｌｐｎ ｇ ｎ，ｗ ｘ ｌｒｒｔｅ ｏ ｔ ｄ ｍｕ
摘 要 ： 盐 酸 萘 乙二 胺 为 显 示 剂 ， 讨 了分 光 光 度 法 测 定 火 腿 中亚 硝 酸 盐 含 量 的 条 件 和 分 析 方 法 。 亚 硝 酸 盐 含 量 的 线 以 探
性 范围为 ００ ￣ ． 咖 Ｌ 回收 率为 ９ ． ．２ ０２ ５ ， ３ ８％， 变异 系数 为 ７ ． ９％。该 方法用 于火腿 中亚硝 酸钠 含量 的测定 ， 果满意 。 结
关 键 词 ： 腿 ； 硝 酸 盐 ； 光 光 度法 ； 酸 萘 乙二 胺 火 亚 分 盐 中 图 分 类 号 ：Ｓ ５ ． Ｔ ２１ ７ 文献 标 识 码 ： Ａ 文 章 顺 序 编 号 ：６ ２ ５ ９ （０ ０ ０ — ０ 一 １ １７ — １０ ２ １ ）１ ０６ Ｏ ４
紫外_可见分光光度法测定肉制品中亚硝酸盐
由图 4 可知 : 待测溶液于 15~ 25
, 其吸光度改变不超过 0 . 008 , 故认为其在室温显色稳定。
Hale Waihona Puke 2 . 4 显色剂用量对亚硝酸盐测定结果的影响 分别以 0 . 5 、 1 、 1 . 5 、 2 、 2 . 5 、 3 mL 的 0 . 2% - 萘胺溶液, 配制待测溶液, 测其在 523 n m 处的吸光度, 绘制显色剂量 - 吸光度曲线, 如图 5 。
表 2 样品 测定及标准加入回收实验 样品名称 肉脯 香肠 腊肉 测得值 ( mg /kg ) 8 . 24 6 . 00 5 . 87 加标 NO - 2 量 加标测得量 (m g /kg) 10. 00 10. 00 10. 00 ( m g /kg) 18. 12 15. 95 15. 76 回 收率 (% ) 平均回收率 ( % ) 98. 8 99. 5 98. 9 99. 1
[ 参考文献 ] [ 1] 李艳灵 , 王素芳 . 淮北市连 续 3 起亚硝酸盐食 物中毒的调查和思考 [ J]. 河南 预防医学杂志 , 2010( 1) : 75- 77. [ 2] 龚正君 , 陈国和 , 肖新峰 , 等 . 流动注 射 光度法测定亚硝酸盐 [ J]. 西南交通大学学报 , 2010( 1) : 156- 159 . 学刊 , 2009( 8): 54- 57 [ 3] 刘晓艳 , 白卫东 . 食品中亚 硝酸盐的测定方法研究进展 [ J]. 农产品加工 2002: 268- 274.
表 1 标准 亚硝酸钠浓度对应吸光值 亚硝酸钠浓度 ( m g /L) 吸光度 A 0. 20 0. 093 4 0. 40 0 . 186 1 0. 50 0. 231 4 0 . 60 0 . 278 8 0. 70 0. 327 0 . 80 0 . 380 5
食品中亚硝酸盐的检测
食品中亚硝酸盐的检测前言大家都知道过量的亚硝酸盐会对我们的身体造成一定的损害，甚至会致癌。
亚硝酸盐经常存在于过夜的饭菜，腌制的泡菜或者肉及肉制品之中。
我国食品添加剂的标准规定在肉制品中亚硝酸盐的使用量不得超过0.15g/kg，残留量不得超过50mg/kg。
那么亚硝酸盐到底该如何检测呢，下面我们就一起来看看吧!亚硝酸盐的检测（分光光度法，）试剂配制1.亚铁氰化钾溶液（106g/L）:称取106.0g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100ml。
2.乙酸锌溶液（220g/L）：称取220.0g乙酸锌，先加20mL冰乙酸溶解，用水稀释至1000mL。
3.饱和硼砂溶液（50g/L）：称取5.0g硼酸钠，溶于100mL热水中，冷却后备用。
4.盐酸（20%）：量取20ml盐酸，用水稀释至100ml。
5.对氨基苯磺酸溶液（4g/L）：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于20%盐酸中，混匀放棕色瓶中避光保存。
6.盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）:称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100ml水中，混匀后放入棕色试剂瓶避光储存。
样品处理1.称取5g样品(精确至0.001g),置于250ml具塞锥形瓶中，加12.5ml 50g/L 饱和硼砂溶液，70℃左右的热水约150ml，混匀后放沸水浴中加热15分钟后取出放入冷水中冷却，冷却至室温。
2.将试液全部移入200ml的容量瓶中，加5ml的106g/l亚铁氰化钾溶液，混合均匀后再加220g/ml的乙酸锌溶液5ml混匀（沉淀样品中蛋白质）。
定容后摇晃均匀静置30分钟（沉淀脂肪）。
3.上清液用滤纸过滤，弃去初滤液30ml，滤液备用。
4.吸取40.0ml滤液于50ml带塞比色管中，另取0.00ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml亚硝酸盐标准溶液分别置于50ml 比色管中，加2ml的4g/l对氨基苯磺酸溶液，混匀后静置3-5分钟加1ml的2g/l 盐酸萘乙二胺溶液加水至刻度并混合均匀静置15分钟。
分光光度法测定肉制品中亚硝酸盐含量的分析
分光光度法测定肉制品中亚硝酸盐含量的分析目的：探讨肉制品中亚硝酸盐的测试方法。
方法：采用分光光度法，对肉制品中亚硝酸盐进行测试。
结果：检出限其检测限为 3.68x10-3g/ml。
结论：测定亚硝酸根含量是肉制食品中重要的分析项目之一，分光光度法是其测定的行之有效的方法。
标签：分光光度法；亚硝酸盐；肉制品；分析亚硝酸盐(N023作为食品防腐剂和发色剂，能改善食品的色泽和口感，有发色、防腐双重功效，是国家列入允许使用的食品添加剂之一。
但亚硝酸盐能与胺类化合物作用生成致癌性很强的N-亚硝基化合物，长期摄入可导致消化道癌症，影响人体健康。
还可使血红蛋白变性，使其失去携氧功能。
尽管亚硝酸盐对人体不利，但目前无更好的物质所替代，所以仍在使用。
作为防范亚硝酸盐危害，向消费者提供安全食品的最后屏障，测定亚硝酸根含量是肉制食品中重要的分析项目之一。
目前关于亚硝酸盐测量较好的方法有导数紫外光度法，离子色谱紫外光度法，气体分子吸收光度法等。
利用重氮化反应测定NO，由于测定时多使用如Ot-萘胺和N-(1一萘基)乙二胺等毒性很大的试剂，且线性范围窄(0-0.2 mg／L)，所用试剂较复杂，不宜用于肉制品的测定；氧化还原光度法也因干扰因素较多不常被使用。
为此，尝试探索一种既不会对测定人员身体造成伤害，又保证较高灵敏度且适用于此样品的简易快速测定的方法，十分必要。
本法采用分光光度法来测定肉制品中亚硝酸盐含量，收到良好效果，现将结果报道如下：1材料与方法1.1材料试验仪器为WFZ800-D分光光度计，分析天平、组织捣碎机。
试验药剂为亚硝酸钠标准溶液(0.5g／L)、依文思蓝但vansBlue，Fluka试剂，进口分装)溶液0.1 mol／L、磷酸1.0mol／L、氯化钠溶液l mol／L、蒸馏水(二蒸液)。
试验药品均为分析纯。
1.2方法1.2.1样品制备①亚硝酸钠标准溶液(0.5g/L)：准确称取亚硝酸钠粉末0500 0 g于烧杯中，加少量水溶解后，转入1000 ml容量瓶中，用水稀释至刻度定容，瓶身用黑纸包裹。
实验四肉制品中亚硝酸盐含量的测定.doc
实验四肉制品中亚硝酸盐含量的测定——重氮化偶合比色法一、实验目的掌握肉制品中亚硝酸盐含量的测定方法和卫生评定。
二、实验原理亚硝酸盐在酸性溶液中与格氏试剂中的对氨基苯磺酸重氮化作用，生成的重氮化合物与α—萘胺发生偶合反应，生成紫红色的偶氮化合物。
颜色的深浅与亚硝酸盐含量成正比，故可以其显色度与已知量的亚硝酸盐标准溶液比较定量。
三、器材与试剂分光光度计、纳氏比色管；饱和升汞溶液；格氏试剂；亚硝酸盐标准使用液（2μg/mL）；盐酸四、操作方法1、样液的制备准确称取剪碎的样品约5.0g，置于250mL烧杯中，加100mL水，混匀，加热至约80℃，移入250mL容量瓶中，用水数次洗涤烧杯，洗液注入容量瓶中，加水至容量瓶的2/3容积，置沸水浴中加热1h，不时振摇，然后加5mL饱和升汞溶液，冷却，再加水至刻度，混匀，过滤，滤液备用。
2、测定取6支清洁干燥的50mL纳氏比色管，编号后5个标准管中分别加入0、1、2、3、4mL 亚硝酸钠标准使用液（相当于0、2、4、6、8μg亚硝酸钠），样品管中加入5mL上述滤液，各管均加水至50mL刻度处混匀。
然后分别加入2滴盐酸溶液和2mL格氏试剂，混匀，37℃加热20 min，用1㎝石英比色杯，以零管调节零点，于波长525nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。
3、计算11121115010001000m A V V m A X ⨯=⨯⨯⨯=式中：X 1——样品中亚硝酸盐含量（mg/㎏）；m 1——样品质量（g ）；A 1——从标准曲线测得样液中亚硝酸盐含量（μg ）； V 1——样品处理滤液总体积（mL ）； V 2——测定时取用样品滤液体积（mL ）。
4、判定标准香肠（腊肠）、香肚、广式腊肉、火腿≤20mg/kg 肉灌肠、肴肉、咸猪肉≤30mg/kg腌腊肉制品罐头（包括午餐肉、咸牛肉、咸羊肉、火腿猪肉、猪肉香肠等）≤50mg/kg 西式蒸煮、烟熏火腿、西式火腿罐头≤70mg/kg 五、结果分析与讨论1、 数据结果（吸光度值）2、 制作标准曲线3、 计算样品中亚硝酸钠含量4、 综合判定。
熏肉中亚硝酸盐的测定设计实验报告
一、实验题目：熏肉制品中亚硝酸盐含量的测定二、1．摘要：以α- 萘胺为显色剂, 利用紫外可见分光光度计, 测定了广州市售的熏肉中亚硝酸盐的含量。
本实验进一步探究了实验的最佳条件: 最大吸收波长、参比溶液、酸度、显色剂的用量和显色时间。
结果表明:pH值在3~4之间, 参比溶液为去离子水时, 显色剂用量为2mL/50mL试液, 显色时间在15min时, 显色稳定, 样品吸光度达到最大值, 实验能达到较理想的效果。
2．关键词：熏肉; 亚硝酸盐; 紫外- 可见分光光度法三、引言亚硝酸盐作为一种食品添加剂被广泛用于肉制品加工中。
它的发色、防腐、抗微生物作用至今仍无法用其它的物质所替代。
但它对于人体健康的危害是众所周知的。
为了有效的控制其毒性, 检测其在食品中的残留量, 目前常采用的测定方法主要有光度法、色谱法、电化学法。
其中光度法又分为盐酸萘乙二胺法、格里试剂比色法、催化光度法、紫外光度法；色谱法中有离子色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法；电化学法又分为示波极谱法、伏安法。
还有一些新的方法如化学发光法、荧光法、原子吸收光谱法等。
而分光光度法以其设备简单、操作快捷、灵敏度高、结果直观的优点, 深受欢迎[1]。
本实验研究了以α- 萘胺为显色剂, 利用紫外可见分光光度计测定肉制品中的亚硝酸盐的含量的方法。
结果证明, 此方法简单、快捷、准确, 是一种食品检测的好方法。
1、光度法1．1 盐酸萘乙二胺法-与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物后，再与盐酸萘在弱酸性溶液中，NO2乙二胺偶联生成紫红色的偶氮染料，用分光光度法在540 nm处测定，与标准曲线比较定量。
1．2 格里试剂比色法GB5009．033—2003测定方法中，其中一种方法就是格里试剂比色法，其原-，然后用亚铁氰化钾和乙酸锌沉理是在弱碱性条件下，用热水从样品中提取NO2-与对氨基苯磺酸发生重氮化后，再和N—1淀蛋白，过滤后，在弱酸条件下，NO2—萘基乙二胺耦合形成红色偶氮染料，最大吸收波长为538 nm，所选择的显色剂不一样，最大吸收波长也有所不同。
熏肉制品中亚硝酸盐的检测(分光光度法)
2011-2012仪器分析综合设计性实验报告熏肉制品中亚硝酸盐的含量测定熏肉制品中亚硝酸盐的含量测定【摘要】亚硝酸和硝酸的钠盐和钾盐常被加入用于腌肉的混合物中，用来产生和保持色泽、抑制微生物和产生特殊的风味。
此外，亚硝酸盐（150-200mg/kg）可抑制罐装碎肉和腌肉中的梭状芽孢杆菌。
本实验就是利用紫外分光光度法对熏肉制品中的亚硝酸盐进行定量测定。
本实验法对亚硝酸盐有很好的选择性，测量的灵敏度高。
【关键词】紫外分光光度法，熏肉制品，亚硝酸盐含量【引言】分光光度法同时测定多组分体系具有不需进行化学分离和引入过多试剂以及操作简便等优点而日益受到关注，用各种化学计量学方法和借助导数输出等方式解析重叠光谱是目前发展最快的领域之一。
用光度法测定肉制品中硝酸根及亚硝酸根，文献报道的有：紫外检测－离子色谱法、标准加入—偏最小二乘导数分光光度法、一阶导数分光光度法、比光谱导数法等。
【实验部分】一、方法原理：（α-萘胺法）自样品中抽提分离出亚硝酸盐，亚硝酸盐在酸性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与α-萘胺试剂发生偶合反应，生成紫红色偶氮化合物。
其颜色的深度与样液中亚硝酸含量成正比，可比色测定。
反应式如下：N H 2SO 3HN+N SO 3HNO 2-H +OH 2+++NSO 3HNNH 2N+NSO 3H+NH 2肉制品中亚硝酸盐含量==50150020100010001⨯⨯⨯⨯m X （mg/kg ）式中：X 为由测得的吸光度什在标准曲线上对应的亚硝酸钠质量浓度（μg/mL ）；m 为样品质量（g ）。
也就是样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，用分光光度计测量含量。
二、主要试剂及仪器（1） 亚铁氰化钾溶液：称取10.6克亚铁氰化钾[K 4Fe(CN)6·3H 2O]溶于水，并稀释至100mL 。
（2） 乙酸锌溶液：称取22.0克乙酸锌[Zn(CH 3COO)2·2H 2O]，加3mL 冰醋酸溶于水，并稀释至100mL 。
肉制品中亚硝酸盐的检测
肉制品中亚硝酸盐的检测作者：李春生来源：《科学与财富》2016年第14期摘要：亚硝酸盐是肉制品发色剂中的主要成分，其具有一定毒性，如果肉制品存在较多的亚硝酸盐残留，则会对食用者的健康以及生命安全造成威胁。
本文对肉制品中亚硝酸盐的检测方法进行了介绍，还分析了肉制品中亚硝酸盐的控制方法，希望可以提高肉制品加工的安全性，从而保证我国食品安全。
关键词：肉制品；亚硝酸盐；检测；控制在对肉制品进行加工处理时，会采用发色剂，而发色剂的主要成分是亚硝酸盐与硝酸盐，其可以保证肉制品具有鲜红的颜色，还可以使肉制品散发出独特的香味，适当使用发色剂，还可以达到抑菌的作用。
在肉制品中，5-10%的亚硝酸盐会与肌肉蛋白发生反应，部分会被氧化成硝酸盐，还有部分会以亚硝酸盐的形式存在，人体如果摄入过多的亚硝酸盐，会形成致癌物质，严重威胁着人类的健康。
所以，在进行食品安全检测时，一定要加强对亚硝酸盐的检测，控制好亚硝酸盐的含量。
1 亚硝酸盐的毒性亚硝酸盐是一种白色或淡黄色的颗粒或粉末物质，其具有一定咸味，外观与食用盐较为相似，容易发生潮解，也容易溶于水，其属于强氧化剂，在进入人体血液后，会与血红蛋白结合，形成高铁血红蛋白，使血红蛋白失去携氧的能力，从而发生缺氧现象。
亚硝酸盐还会导致周围的血管发生扩张现象，在与胺合成后，还会形成致癌物质，对人体的健康有着威胁。
2 亚硝酸盐在肉制品中的应用亚硝酸盐经常应用在肉制品的加工中，其可以抑制肉毒梭状芽孢杆菌的生长，还会抑制一些腐败菌生长。
肉毒梭状芽胞杆菌对热稳定，所以在对肉制品进行热加工时，并不能杀死这种细菌，使用亚硝酸盐可以抑制芽胞的生长，抑制毒素的产生。
亚硝酸盐还具有良好的呈色作用，在腌制肉类时，使用亚硝盐会形成NO，NO与血红素类化合物作用后，又会形成亚硝酰基蛋白，增加了肉类鲜艳的红色，也提高了肉制品的价值。
亚硝酸盐还具有良好的抗氧化作用，可以提高肉制品的稳定性，避免脂肪发生氧化，从而延缓肉类的腐败。
亚硝酸盐测定分光光度法
亚硝酸盐测定分光光度法引言：亚硝酸盐是一种常见的无机化合物，广泛应用于食品加工、水处理和医药等领域。
准确测定亚硝酸盐的含量对于确保产品质量和保护环境具有重要意义。
分光光度法是一种常用的测定亚硝酸盐含量的方法，本文将介绍亚硝酸盐测定分光光度法的原理、操作步骤以及应用范围。
一、原理：亚硝酸盐在紫外光下可以与苯酚类化合物（如萘酚）发生偶联反应生成偶氮化合物，其最大吸收波长位于430-540nm的黄色区域。
根据比尔-朗伯定律，偶氮化合物的吸光度与其浓度成正比关系。
因此，通过测定偶氮化合物的吸光度，可以间接测定亚硝酸盐的含量。
二、操作步骤：1. 样品制备：将待测样品中的亚硝酸盐与酸性条件下的苯酚类化合物进行偶联反应，生成偶氮化合物。
根据样品的特性，选择合适的萘酚类化合物和酸性条件，并进行样品的预处理。
确保样品中没有干扰物质的存在。
2. 建立标准曲线：根据所选用的萘酚类化合物，在一定浓度范围内制备一系列标准溶液。
使用分光光度计测定每个标准溶液的吸光度，并绘制标准曲线。
标准曲线应包括至少5个点，覆盖待测样品的浓3. 测定样品吸光度：根据样品的特性，选择合适的测定波长。
将样品溶液置于分光光度计的测量池中，读取吸光度值。
4. 计算亚硝酸盐含量：根据标准曲线，将测得的样品吸光度值转化为亚硝酸盐的浓度值。
根据样品的稀释倍数和酸性条件，进行相应的浓度修正。
三、应用范围：亚硝酸盐测定分光光度法广泛应用于食品、环境和医药等领域。
以下列举几个常见的应用案例：1. 食品安全检测：亚硝酸盐是一种潜在的致癌物质，在食品中的含量受到严格限制。
通过分光光度法测定食品中亚硝酸盐的含量，可以确保食品的安全性。
2. 水质监测：亚硝酸盐是水体中常见的污染物之一，其含量的高低直接影响水质的安全性。
利用分光光度法对水样中的亚硝酸盐含量进行测定，可以及时监测水质的变化。
3. 药物分析：亚硝酸盐在某些药物中作为反应中间体存在，其含量的测定对于药物的质量控制至关重要。
紫外分光光度法测定肉制品中亚硝酸盐
紫外分光光度法测定肉制品中亚硝酸盐实验部分1 、仪器与主要试剂Cary 50紫外分光光度计；pHS-3C型数字酸度计。
饱和硼砂溶液;22g/L的ZnSO4溶液;10g/L的亚铁氰化钾溶液。
显色剂溶液:将 1.0g间苯二酚和 1.1g ZrOCl2·8H2O溶于25mL 3.7mol/L的HCl溶液中,然后转移至500mL棕色容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度。
硫酸钠和醋酸钠混合溶液:将 1.0g Na2SO4和 1.5g NaC2H3O2·3H2O溶于少量蒸馏水中,然后转移至500mL棕色容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度。
NO-2标准溶液的配制(500μg/mL):准确称取0.3749g已用浓H2SO4干燥过的亚硝酸钠,将其溶于少量蒸馏水,然后转移至500mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度。
使用时稀释至所需浓度。
2、试验方法（1）样品制备先用食品加工机研碎样品,再准确称取20.0g试样,用约150mL蒸馏水分数次将试样洗于烧杯中,搅拌,浸泡。
依次加入10mL饱和硼砂溶液、4.0mL 22g/L ZnSO4溶液和2.0mL 10g/L的亚铁氰化钾溶液,摇匀,静置,使蛋白质沉淀,再将其过滤至250mL容量瓶中,并用少许蒸馏水分数次冲洗沉淀物,定容后待用。
（2）样品的测定取一定量的样品溶液于25mL容量瓶中,依次加入3.5mL显色剂溶液和3.5mL硫酸钠和醋酸钠混合溶液,用蒸馏水定容并摇匀。
放置10min 后,用1cm比色皿,以试剂空白作参比,在紫外分光光度计上于波长342nm处测定吸光度（此时吸光度值最大）。
样品测定及标准加入回收实验样品名称测得值(μg)加标NO-2量(μg)加标测得量(μg)回收率(%)猪肉18.74 10.00 27.95 92.10 午餐肉20.15 10.00 29.78 96.30 腊肠32.50 10.00 41.98 94.80 火腿肠 5.32 10.00 15.08 97.60。
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2011-2012仪器分析综合设计性实验报告熏肉制品中亚硝酸盐的含量测定熏肉制品中亚硝酸盐的含量测定【摘要】亚硝酸和硝酸的钠盐和钾盐常被加入用于腌肉的混合物中，用来产生和保持色泽、抑制微生物和产生特殊的风味。
此外，亚硝酸盐（150-200mg/kg）可抑制罐装碎肉和腌肉中的梭状芽孢杆菌。
本实验就是利用紫外分光光度法对熏肉制品中的亚硝酸盐进行定量测定。
本实验法对亚硝酸盐有很好的选择性，测量的灵敏度高。
【关键词】紫外分光光度法，熏肉制品，亚硝酸盐含量【引言】分光光度法同时测定多组分体系具有不需进行化学分离和引入过多试剂以及操作简便等优点而日益受到关注，用各种化学计量学方法和借助导数输出等方式解析重叠光谱是目前发展最快的领域之一。
用光度法测定肉制品中硝酸根及亚硝酸根，文献报道的有：紫外检测－离子色谱法、标准加入—偏最小二乘导数分光光度法、一阶导数分光光度法、比光谱导数法等。
【实验部分】一、方法原理：（α-萘胺法）自样品中抽提分离出亚硝酸盐，亚硝酸盐在酸性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与α-萘胺试剂发生偶合反应，生成紫红色偶氮化合物。
其颜色的深度与样液中亚硝酸含量成正比，可比色测定。
反应式如下：N H 23HN+N SO 3HNO 2-H +OH 2+++NSO 3HNNH 2N+NSO 3H+2肉制品中亚硝酸盐含量==50150020100010001⨯⨯⨯⨯m X （mg/kg ）式中：X 为由测得的吸光度什在标准曲线上对应的亚硝酸钠质量浓度（μg/mL ）；m 为样品质量（g ）。
也就是样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，用分光光度计测量含量。
二、主要试剂及仪器（1） 亚铁氰化钾溶液：称取10.6克亚铁氰化钾[K 4Fe(CN)6·3H 2O]溶于水，并稀释至100mL 。
（2） 乙酸锌溶液：称取22.0克乙酸锌[Zn(CH 3COO)2·2H 2O]，加3mL 冰醋酸溶于水，并稀释至100mL 。
（3） 饱和硼砂溶液：5.0克硼酸钠（Na 2BO 4·10H 2O ）溶于100mL 热水中，冷却备用。
（4） 0.4%对氨基苯磺酸溶液（4g/L）。
（5） 0.2%α-萘胺溶液(2g/L) 。
（6）亚硝酸钠标准溶液（200μg/mL）：精确称取0.1000克于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠（优级纯），加水定容到500mL。
（7）亚硝酸钠标溶液（5μg/mL）：临用前，吸取此溶液25mL，用水定容到1000mL。
（8）仪器：①研钵，②分光光度计，③分析天平，④2mL、5mL、10mL移液管各2支，⑤漏斗1个，⑥25mL容量瓶1个，⑦500mL容量瓶2个，⑧50mL 容量瓶12支，⑨滤纸若干。
三、实验操作(1)样品处理样品中硝酸盐及亚硝酸盐的提取：称取经搅拌混合均匀的样品5克于50mL烧杯中，加入硼砂饱和溶液12.5mL，以玻璃棒搅拌，然后用70℃左右的水约300mL，将其稀释转移到500mL容量瓶，沸水浴中加热15分钟，取出，加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。
冷却到室温，用水定容，摇匀。
放置片刻，去除上层脂肪，清液用滤纸过滤。
(2)最大吸收峰的波长的确认——α-萘胺—亚硝酸钠吸收曲线的绘制用移液管吸取亚硝酸钠标准溶液(5μg/mL)1.0mL(含5μg 亚硝酸钠)于50mL容量瓶中，加水至25mL，分别加2mL0.4%对氨基苯磺酸溶液，摇匀，静置3—5min 后，各加入1mL 0.2%α-萘胺溶液，并用水定容到50mL，摇匀。
静置15min后，用20mm比色皿，用分光光度计在450nm，460nm，470nm，480nm，490nm，500nm，510nm，520nm，530nm，535nm，540nm，545nm，550nm，555nm，560nm，570nm，580nm，590nm，600nm，610nm波长下测定吸光度，以蒸馏水为空白。
以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制α-萘胺—亚硝酸钠吸收曲线，找出最大吸收峰的波长。
(3)显色剂α-萘胺溶液最佳用量的确定用移液管精确吸取四份亚硝酸钠标准液(5μg/mL) 1.0mL(含5μg 亚硝酸钠)分别于50 mL 容量瓶中，各加水至25mL，各加2mL0.4%对氨基苯磺酸溶液，摇匀，静置3—5min 后，分别加入0.5mL，1.0mL，1.5mL，2.0mL0.2%α-萘胺溶液，并用水定容到50mL，摇匀。
静置15min后，用20mm 比色皿，用分光光度计在最大吸收峰的波长下测定吸光度，以蒸馏水为空白。
记录每个用量对应的吸光度，找出最大吸光度所对应的α-萘胺溶液用量。
(4)获得最大吸光度的最佳显色时间的确定用移液管吸取亚硝酸钠标准溶液(5μg/mL)1.0mL(含5μg 亚硝酸钠)于50mL容量瓶中，加水至25mL，分别加2mL0.4%对氨基苯磺酸溶液，摇匀，静置3—5min 后，各加入最佳用量的 0.2%α-萘胺溶液，并用水定容到50mL，摇匀。
分别静置5min，10min，15min，20min后，用20mm比色皿，用分光光度计在最大吸收峰的波长下测定吸光度，以蒸馏水为空白。
记录每个时间所对应的吸光度，找出最大吸光度所对应的显色时间。
(5)亚硝酸钠标准曲线的绘制用移液管精确吸取亚硝酸钠标准液(5μg/mL) 0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.5，2.0mL(各含0，1，2，3，4，5，7.5，10μg 亚硝酸钠)于一组50 mL 容量瓶中，各加水至25mL，分别加2mL0.4%对氨基苯磺酸溶液，摇匀，静置3—5min 后，各加入最佳用量的0.2%α-萘胺溶液，并用水定容到50mL，摇匀。
静置15min后，用20mm比色皿，用分光光度计在最大吸收峰的波长下测定吸光度，以蒸馏水为空白。
以测得的各比色液的吸光度对应的亚硝酸浓度作曲线。
比色液中亚硝酸钠浓度为0～0.30μg/mL时，两者呈线性关系。
本法的标准偏差为±3.0%。
(6)亚硝酸盐的测定另取20mL待测液于25mL容量瓶中，加1mL0.4%对氨基苯磺酸溶液，摇匀。
静置3～5分钟后，加入二分之一最佳用量的0.2%α-萘胺溶液，比色测定，记录吸光度。
根据标准曲线方程算得相应的亚硝酸钠浓度（μg/mL），计算试样中亚硝酸盐（以亚硝酸钠计）的含量。
四、实验结果1. 最大吸收峰的波长的确认——α-萘胺—亚硝酸钠吸收曲线的绘制记录不同波长对应的吸光度，并绘制吸收曲线。
波长与吸光度对应数据见表1—1 吸收曲线见图1—1波长/λ450460470480490500510520530535吸光度A 0.004 0.008 0.014 0.023 0.035 0.048 0.063 0.078 0.086 0.088波长/λ 540 545 550 555 560 570 580 590 600 610吸光度A 0.091 0.092 0.0890.085 0.0800.066 0.048 0.022 0.007 0.001（表1—1）00.010.020.030.040.050.060.070.080.090.1440460480500520540560580600620α萘胺——亚硝酸钠吸收曲线波长/λ吸光度/A吸光度A（图1—1）2.显色剂α-萘胺溶液最佳用量的确定α-萘胺溶液用量与吸光度关系见表1—2α-萘胺溶液用量0.5mL 1.0mL 1.5mL 2.0mL 吸光度A 0.072 0.073 0.071 0.071（表1—2）由以上数据可知，α-萘胺溶液最佳用量为1.0mL。
3.获得最大吸光度的最佳显色时间的确定最大吸光度与显色时间关系见表1—3显色时间5min10min15min20min 吸光度A 0.071 0.075 0.074 0.071（表1—3）由以上数据可知，获得最大吸光度的最佳显色时间为10min。
4.亚硝酸钠标准曲线的绘制亚硝酸钠标准液用量与吸光度关系，数据见表1—4亚硝酸钠标准液用量与吸光度关系，吸收曲线见图1—2亚硝酸钠标准液0.000.200.400.600.80 1.00 1.50 2.00用量（mL)吸光度A 0.000 0.013 0.027 0.045 0.057 0.072 0.105 0.144（表1—4）g15.220mL25mLg/mL534.0μμ=⨯⨯mL0.050.10.150.200.51 1.52 2.5亚硝酸钠标准曲线y = 0.0717x-0.0004R^2 = 0.9991亚硝酸钠标准液用量/mL吸光度/A吸光度A线性 (吸光度A)（图1—2）因此，标准曲线的线性回归方程为y=0.0717x-0.00045.亚硝酸盐的测定20mL待测液于25mL容量瓶吸光度A 0.024把0.024代入y，则x=0.34mL，则待测液（1）中亚硝酸钠含量为可见肉制品中亚硝酸盐含量（mg/kg）为11.29mg/kg。
五、实验结论可见肉制品中亚硝酸盐含量（mg/kg）为11.29mg/kg。
根据国家标准肉制品中亚硝酸盐残余量均应≤ 30mg/kg，可知受监测的熏肉符合标准。
六、分析与讨论1、亚硝酸盐在肉制品中的作用以及使用规范亚硝酸盐是国家允许限量使用的食品添加剂。
肉制品中亚硝酸盐主要来源为食品添加剂亚硝酸钠，其在食品加工行业中主要起保色和防腐作用。
亚硝酸盐可与肉品中的肌红素结合而更稳定，所以常被添加在香肠和腊肉中，使肉品鲜红，维持良好外观。
亚硝酸盐能够有效地抑制肉毒芽孢梭菌(Clostridium botulinum)的生长，而后者产生的肉毒毒素是已知最剧烈的神经外毒素，对人致死量为0.1ug。
此外亚硝酸盐对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)等多种微生物有抑菌效果，因此有防腐作用。
亚硝酸盐对人的致死量为22毫克每公斤体重。
在烹调或其他条件下，肉品内的亚硝酸盐可与氨基酸降解反应，生成有强致癌性的亚硝胺。
根据GB2760-2007国家食品添加剂使用卫生标准，在腌腊肉制品类、酱卤肉制品类、熏烧烤肉类、油炸肉类、西式火腿类、肉灌肠类、发酵肉制品类、肉罐头等各类熟肉制品的生产过程中，亚硝酸盐的最大使用量均为0.15g/kg，以亚硝酸钠计，残留量除西式火腿类应≤ 70mg/kg，肉罐头类应≤ 50mg/kg外，其余品类肉制品中残余量均应≤ 30mg/kg。
2、实验讨论本实验是多人大组，两人小组完成实验，可以避免试剂的浪费，但是也减少了我们实际操作的机会，比如我们平时较少接触到的蛋白质的沉降，以及浑浊液的冷却过滤，在本实验中也只是一个小组有机会操作。