病毒检验技术课堂
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（二）病毒数量及病毒感染性测定 1．血凝试验 2．中和试验 3．空斑形成试验 4．半数感染量（ID50）和组织培养半数感染量（TCID50）
第二节 病毒的分离与鉴定
二、病毒增殖的观察
（一）病毒在细胞内增殖的鉴定指标 1．细胞形态的改变 （1） 细胞病变效应（cytophathic effect，CPE）
第二节 病毒的分离与鉴定
1．细胞形态的改变
（3）包涵体
某些病毒感染宿主细胞后， 细胞内出现一种光学显微镜下 可见的蛋白质结构，多为圆形、 卵圆形或不定形。一般是由完 整的病毒颗粒或尚未装配的病 毒亚基聚集而成，称为包涵体。
第二节 病毒的分离与鉴定
二、病毒增殖的观察
2．红细胞吸附 有些病毒感染细胞后,细胞膜上 可镶嵌着病毒基因编码产生的 糖蛋白,其中有些能吸附特定种 类的红细胞,或将细胞培养单层 刮下后,经过适当处理,可以凝 集特定种类的红细胞,此类糖蛋 白在细胞表面形成刺突,称为血 凝素。
? 主要有 细胞培养法、鸡胚培养法、动物接种 法等,而对细胞、鸡胚不敏感 ,又没有合适动 物模型的病毒 ,可采用基因克隆的方法。
第二节 病毒的分离与鉴定
一、 病毒的分离培养
组织细胞培养 2.鸡鸡胚胚培培养养
原代细胞培养 二倍体细胞培养 传代细胞
羊膜腔接种 尿囊腔接种 卵黄囊接种 绒毛尿囊膜接种
是将离体活组织块或 分散的组织细胞加以 培养的技术总称，为 病毒分离鉴定中的最 常用的基本方法。
尿囊腔接种 常用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒 和新城疫病毒的适应和传代培养
羊 膜 腔
羊膜腔接种
常用于临床流感病毒初次分离
第二节 病毒的分离与鉴定
2. 鸡胚培养
羊膜腔
人工气室
气室
尿囊腔
卵
绒毛尿囊膜
黄
囊
卵白
绒毛尿囊膜
卵黄囊接种
主要用于虫媒病毒、衣原体及立 克次体的分离和繁殖。
绒毛尿囊膜接种
常用于牛痘病毒、天花病 毒、单纯疱疹病毒的分离
1. 采集时间：发病早期或急性期尽快采集。 很多急性病毒感染，症状出现前病毒已经开始释放，症状初期病 毒量即迅速达到峰值，之后平缓下降至疾病痊愈，不过也有例外。
第一节 标本的采集、处理与运送
一、标本的采集与处理
2.采集部位：取决于临床症状和所怀疑感染的病毒。 从病原体入侵部位取材 从病原体感染的靶器官取材 根据病原体的排泄途径取材 从环境中采集标本
动物接种
第二节 病毒的分离与鉴定
（一）组织细胞培养
细胞培养瓶
鸡成纤维细胞
Vero细胞
Hep-2细胞
1.原代细胞
原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞。原代细胞的 培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培 养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时 的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然 保留二倍体数。
二、标本的运送与保存
1.标本的运送 尽快送检 冷冻、冷藏运输 防漏、专人、标记 2.标本的保存 -70℃可较长时间保存 可加入甘油或二甲基亚砜（ DMSO）、Hanks液或小牛血清等以防 病毒失活
第二节 病毒的分离与鉴定
?不同的病毒分离时采用不同的分离方法 ,这主 要取决于目的 病毒的生物学特性 。
第二节 病毒的分离与鉴定
3.动物接种
? 常用的实验动物有小白鼠、乳鼠、豚鼠、家兔、猴和鸡等 ? 常用的接种途径包括皮下、皮内、腹腔、静脉、角膜、鼻腔及
脑内接种等方式
第二节 病毒的分离与鉴定
二、病毒增殖的观察
（一）病毒在细胞改变
如：流感病毒感染------鼻咽拭子 乙型脑炎病毒感染------脑脊液 轮状病毒感染------粪便 乙型肝炎病毒感染------血液
第一节 标本的采集、处理与运送
一、标本的采集与处理
3.采集方法与处理 提高病毒的分离率，防止标本污染。
采集时无菌操作,可加入抗生素以杀死杂菌
第一节 标本的采集、处理与运送
第十七章 病毒检验技术
本章内容
1 第一节 标本的采集、处理与运送 2 第二节 病毒的分离与鉴定 3 第三节 病毒学检测及诊断
学习目标及重点
学习目标： 掌握病毒标本采集和送检应遵循的原则；病毒检验鉴定常用技 术 熟悉病毒血清学诊断常用的方法 了解病毒感染的实验室快速诊断 学会病毒的培养基本操作 本章重点： ★病毒标本采集和运送原则。 ★病毒学诊断及鉴定常用方法。 ★病毒培养的基本操作。
2.二倍体细胞
是指原代细胞在体外分裂50代以后仍能保持其二倍染色体 数目。二倍体细胞株来源于正常人胎儿组织，主要用于培 养病毒制备疫苗等。
3.传代细胞
传代细胞来源于肿瘤细胞或细胞株传代过程中变异的细胞 称为传代细胞，它们能在体外无限期地传代。大多是肿瘤 细胞或突变的二倍体细胞。
常用的传代细胞株有Hela细胞（人宫颈癌细胞），Hep-2 （人喉上皮癌细胞）、Vero（非洲绿猴肾细胞）等。
第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的动物病毒的一种 培养方法，此方法可用以进行多种病毒的分离、培养，毒 力的滴定，中和试验以及抗原和疫苗的制备等。
第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
一般选用9～14d的鸡胚
优点：
来源充足、 组织分化程度低、 本身很少携带病毒和细菌、 对接种病毒不产生抗体及 病毒较易增殖等
第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
不同病毒在鸡胚的 不同部位的生长特 性差异很大
选择不同的接种部位是病毒分离成功的关键
常用的主要有： 尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种
第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
常用接种途径： 尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种
尿 囊 腔
第二节 病毒的分离与鉴定
是指某些病毒特别是无包膜的病毒感染组织细胞后，正常生 长的梭形细胞变圆、变性、坏死、溶解及从培养瓶壁脱落， 细胞堆积形成葡萄状
正常细胞
病变细胞
第二节 病毒的分离与鉴定
1．细胞形态的改变 （2）多核巨细胞
多见于有包膜的病毒， 如呼吸道合胞病毒、麻 疹病毒等，由感染细胞 融合而成多核巨细胞
病毒学检验技术是用实验室检验方法对临床和流行病学现场送 检的标本（如人或宿主的血液、组织、尿、粪便和组织液等） 进行病毒学的定性和定量分析，为病毒感染和病毒性疾病的诊 断、治疗和预防提供科学依据。
检验程序包括标本的采集、分离培养鉴定、快速诊断。
第一节 标本的采集、处理与运送
一、标本的采集与处理
第二节 病毒的分离与鉴定
二、病毒增殖的观察
（一）病毒在细胞内增殖的鉴定指标 1．细胞形态的改变 （1） 细胞病变效应（cytophathic effect，CPE）
第二节 病毒的分离与鉴定
1．细胞形态的改变
（3）包涵体
某些病毒感染宿主细胞后， 细胞内出现一种光学显微镜下 可见的蛋白质结构，多为圆形、 卵圆形或不定形。一般是由完 整的病毒颗粒或尚未装配的病 毒亚基聚集而成，称为包涵体。
第二节 病毒的分离与鉴定
二、病毒增殖的观察
2．红细胞吸附 有些病毒感染细胞后,细胞膜上 可镶嵌着病毒基因编码产生的 糖蛋白,其中有些能吸附特定种 类的红细胞,或将细胞培养单层 刮下后,经过适当处理,可以凝 集特定种类的红细胞,此类糖蛋 白在细胞表面形成刺突,称为血 凝素。
? 主要有 细胞培养法、鸡胚培养法、动物接种 法等,而对细胞、鸡胚不敏感 ,又没有合适动 物模型的病毒 ,可采用基因克隆的方法。
第二节 病毒的分离与鉴定
一、 病毒的分离培养
组织细胞培养 2.鸡鸡胚胚培培养养
原代细胞培养 二倍体细胞培养 传代细胞
羊膜腔接种 尿囊腔接种 卵黄囊接种 绒毛尿囊膜接种
是将离体活组织块或 分散的组织细胞加以 培养的技术总称，为 病毒分离鉴定中的最 常用的基本方法。
尿囊腔接种 常用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒 和新城疫病毒的适应和传代培养
羊 膜 腔
羊膜腔接种
常用于临床流感病毒初次分离
第二节 病毒的分离与鉴定
2. 鸡胚培养
羊膜腔
人工气室
气室
尿囊腔
卵
绒毛尿囊膜
黄
囊
卵白
绒毛尿囊膜
卵黄囊接种
主要用于虫媒病毒、衣原体及立 克次体的分离和繁殖。
绒毛尿囊膜接种
常用于牛痘病毒、天花病 毒、单纯疱疹病毒的分离
1. 采集时间：发病早期或急性期尽快采集。 很多急性病毒感染，症状出现前病毒已经开始释放，症状初期病 毒量即迅速达到峰值，之后平缓下降至疾病痊愈，不过也有例外。
第一节 标本的采集、处理与运送
一、标本的采集与处理
2.采集部位：取决于临床症状和所怀疑感染的病毒。 从病原体入侵部位取材 从病原体感染的靶器官取材 根据病原体的排泄途径取材 从环境中采集标本
动物接种
第二节 病毒的分离与鉴定
（一）组织细胞培养
细胞培养瓶
鸡成纤维细胞
Vero细胞
Hep-2细胞
1.原代细胞
原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞。原代细胞的 培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培 养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时 的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然 保留二倍体数。
二、标本的运送与保存
1.标本的运送 尽快送检 冷冻、冷藏运输 防漏、专人、标记 2.标本的保存 -70℃可较长时间保存 可加入甘油或二甲基亚砜（ DMSO）、Hanks液或小牛血清等以防 病毒失活
第二节 病毒的分离与鉴定
?不同的病毒分离时采用不同的分离方法 ,这主 要取决于目的 病毒的生物学特性 。
第二节 病毒的分离与鉴定
3.动物接种
? 常用的实验动物有小白鼠、乳鼠、豚鼠、家兔、猴和鸡等 ? 常用的接种途径包括皮下、皮内、腹腔、静脉、角膜、鼻腔及
脑内接种等方式
第二节 病毒的分离与鉴定
二、病毒增殖的观察
（一）病毒在细胞改变
如：流感病毒感染------鼻咽拭子 乙型脑炎病毒感染------脑脊液 轮状病毒感染------粪便 乙型肝炎病毒感染------血液
第一节 标本的采集、处理与运送
一、标本的采集与处理
3.采集方法与处理 提高病毒的分离率，防止标本污染。
采集时无菌操作,可加入抗生素以杀死杂菌
第一节 标本的采集、处理与运送
第十七章 病毒检验技术
本章内容
1 第一节 标本的采集、处理与运送 2 第二节 病毒的分离与鉴定 3 第三节 病毒学检测及诊断
学习目标及重点
学习目标： 掌握病毒标本采集和送检应遵循的原则；病毒检验鉴定常用技 术 熟悉病毒血清学诊断常用的方法 了解病毒感染的实验室快速诊断 学会病毒的培养基本操作 本章重点： ★病毒标本采集和运送原则。 ★病毒学诊断及鉴定常用方法。 ★病毒培养的基本操作。
2.二倍体细胞
是指原代细胞在体外分裂50代以后仍能保持其二倍染色体 数目。二倍体细胞株来源于正常人胎儿组织，主要用于培 养病毒制备疫苗等。
3.传代细胞
传代细胞来源于肿瘤细胞或细胞株传代过程中变异的细胞 称为传代细胞，它们能在体外无限期地传代。大多是肿瘤 细胞或突变的二倍体细胞。
常用的传代细胞株有Hela细胞（人宫颈癌细胞），Hep-2 （人喉上皮癌细胞）、Vero（非洲绿猴肾细胞）等。
第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的动物病毒的一种 培养方法，此方法可用以进行多种病毒的分离、培养，毒 力的滴定，中和试验以及抗原和疫苗的制备等。
第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
一般选用9～14d的鸡胚
优点：
来源充足、 组织分化程度低、 本身很少携带病毒和细菌、 对接种病毒不产生抗体及 病毒较易增殖等
第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
不同病毒在鸡胚的 不同部位的生长特 性差异很大
选择不同的接种部位是病毒分离成功的关键
常用的主要有： 尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种
第二节 病毒的分离与鉴定
2.鸡胚培养
常用接种途径： 尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种
尿 囊 腔
第二节 病毒的分离与鉴定
是指某些病毒特别是无包膜的病毒感染组织细胞后，正常生 长的梭形细胞变圆、变性、坏死、溶解及从培养瓶壁脱落， 细胞堆积形成葡萄状
正常细胞
病变细胞
第二节 病毒的分离与鉴定
1．细胞形态的改变 （2）多核巨细胞
多见于有包膜的病毒， 如呼吸道合胞病毒、麻 疹病毒等，由感染细胞 融合而成多核巨细胞
病毒学检验技术是用实验室检验方法对临床和流行病学现场送 检的标本（如人或宿主的血液、组织、尿、粪便和组织液等） 进行病毒学的定性和定量分析，为病毒感染和病毒性疾病的诊 断、治疗和预防提供科学依据。
检验程序包括标本的采集、分离培养鉴定、快速诊断。
第一节 标本的采集、处理与运送
一、标本的采集与处理