毒理学基础实验指导.
食品毒理学实验bk
食品毒理学实验指导食品毒理学实验（一）毒理学实验的目的和要求食品毒理学实验的目的是通过实验掌握有关的毒理学实验技术和方法，培养分析问题和解决问题的能力。
为了提高实验效率，特作如下要求：１．课前预习实验指导，对实验目的、方法、步骤应有充分了解，明确本次实验的目的和理论根据，作到心中有数，避免实验中出现忙乱和差错。
２．进入实验室后，首先检查实验桌面上的仪器、器皿、药品等实验器材是否齐全及有无损坏。
３．实验时务必安静，不能喧哗，作到整齐整洁，有条有理。
严格按照实验指导的步骤进行操作，准确计算用药量，注意爱护实验动物，节约实验材料和药品。
４．仔细阅读实验指导，根据实验指导进行小组分工，尽可能每人都有操作机会。
５．及时地、准确地将观察到的数据和反应如实记录。
实验完毕，根据实验结果写出实验报告。
６．实验后整理实验器材，作好实验室的清洁卫生工作。
实验室规则１．实验室须保持安静、整齐和清洁。
２．实验完毕将实验台、桌、仪器、用具等擦洗干净。
仪器、用具如有损坏，应报告老师，各组轮流打扫实验室。
关好门窗，切断水源及电源。
３．节约实验用品，爱护器材及动物。
４．随时注意安全操作。
实验一、食品毒理学实验基础常用实验动物的捉取方法小鼠：用右手提起尾部，放在鼠笼盖上或其他粗糙面上，向后上方轻拉，此时小鼠前肢紧紧抓住粗糙表面，迅速用左手拇指和食指捏住小鼠颈部皮肤并以小指和手掌尺侧夹持其尾根部固定手中。
兔：捉拿时一手抓其颈背部皮肤，轻轻将兔提起，另手托其臀部。
二、实验动物的选择毒理学中研究外源化学物的基础毒性主要是进行体内试验，常选用大白鼠和小白鼠、家兔。
根据不同实验目的，可选用不同实验动物。
例如，皮肤刺激实验，可选用家兔，因为家兔为皮肤刺激实验的敏感动物。
动物应注明来源及品系。
除特殊要求外，动物年龄一般选用初成年者：大白鼠、小白鼠为出生后2～3个月左右，体重分别为180～240g和18～24g；家兔为2～2.5kg，猫为1.5～2kg；狗为出生后一年左右。
毒理学基础实验指导
毒理学基础实验指导
以下是一份关于毒理学基础实验的指导：
实验目的：了解常见的毒物对生物体的毒性影响。
实验材料：
1. 实验动物（例如小鼠、大鼠或离体组织）
2. 各种毒物（例如重金属盐、农药、有机溶剂等）
3. 实验室常用设备和试剂（例如试管、移液器、显微镜）
实验步骤：
1. 实验前应先准备好实验动物，确保动物健康且体重相近。
2. 将动物随机分组，每组注射不同浓度的毒物。
3. 观察实验动物的行为和生理状况，记录脱毛、体重下降、活动能力减退等现象。
4. 按照实验动物的生理时间表，定期进行采血样本和组织标本收集。
5. 使用合适的实验方法和仪器，对采集的样本进行毒性指标的分析，例如血液生化指标、组织病理学检查等。
6. 对实验结果进行统计学分析，以评估不同浓度毒物对动物的毒性影响。
7. 根据实验结果，给出毒物的毒性分类，并评估不同剂量的毒物引起的毒性反应。
注意事项：
1. 所使用的毒物应具备相应的安全证书，并按照实验室安全操作规程进行操作。
2. 在实验过程中，需格外注意动物的福利和保护，遵守实验伦理规范。
3. 实验结束后，对实验动物和实验室环境进行适当的处理，确保没有潜在的危害。
以上是一份毒理学基础实验的指导，具体实验操作和流程应根据实际需要进行调整和规范。
毒理学实验操作规程
毒理学实验操作规程一、实验目的毒理学实验的目的是评估化学物质、生物制剂、物理因素等对生物体的潜在有害影响，为制定安全标准、环境保护政策、药物研发和风险评估提供科学依据。
二、实验准备（一）实验动物的选择根据实验目的和研究对象的特点，选择合适的动物种类、品系、年龄、性别和体重。
常用的实验动物包括小鼠、大鼠、豚鼠、兔子等。
实验动物应来自具有资质的供应商，并经过检疫和适应性饲养。
（二）实验动物的饲养环境提供适宜的饲养条件，包括温度、湿度、光照周期、通风和清洁卫生。
动物笼具应定期清洗和消毒，给予充足的饮水和营养均衡的饲料。
（三）实验试剂和仪器准备所需的化学试剂、药品、标准品等，确保其质量和纯度符合实验要求。
同时，检查和校准实验所需的仪器设备，如移液器、离心机、分光光度计、显微镜等。
（四）实验人员的培训实验人员应接受毒理学相关知识和实验操作技能的培训，熟悉实验流程、安全注意事项和应急预案。
三、实验设计（一）剂量设计根据预实验结果或相关文献资料，确定合适的剂量范围和剂量组。
通常包括低剂量组、中剂量组和高剂量组，有时还设置对照组。
（二）给药途径根据研究对象的性质和实际应用情况，选择合适的给药途径，如口服、腹腔注射、静脉注射、吸入、皮肤涂抹等。
（三）观察指标确定全面、敏感和特异性的观察指标，包括动物的一般状况（如外观、行为、饮食、体重等）、生理指标（如体温、血压、心率等）、生化指标（如肝肾功能、血液学指标等）、组织病理学检查等。
（四）实验周期根据实验目的和观察指标的变化特点，确定合理的实验周期。
急性毒性实验一般为数小时至数天，亚慢性和慢性毒性实验则可持续数周、数月甚至数年。
四、实验操作流程（一）动物分组和标记将实验动物随机分组，每组动物数量应根据实验要求和统计学原则确定。
采用适当的标记方法对动物进行个体标识，如耳标、染色、纹身等。
（二）给药操作按照预定的给药途径和剂量，准确地给予实验动物受试物。
给药过程中应注意操作的规范性和准确性，避免药物损失和交叉污染。
第十章-毒理学实验基础
（2）人和实验动物的生物学过程包括化 学物的代谢，与体重或体表面积相关。
2. 实验动物必须暴露于高剂量，这是发 现对人造成潜在危害的可靠方法。
3. 染毒途径的选择，应尽可能模拟人接 触该受试物的方式
毒理学实验的局限性
--动物实验结果外推到人的不确定性
（2）组织病理学检测.
八、毒理学实验的统计学基础
• 统计学要点： 实验设计遵循原则：随机、重复、对照. 包括： （1）剂量水平数目及间隔； （2）每个剂量点的实验单位数，实验单位确定要
保证样本的独立性、代表性； （3）对照设置； （4）非实验因素条件的均一性：样本足够数量、
适当重复、盲法观察等。 结果统计分析：方法选择，可用不同方法处理.
第十章 毒理学实验基础
一、毒理学实验的原则 二、毒理学实验的目的 三、实验动物的选择和处置 四、剂量设置和对照 五、结果处理
教学目标
• 1.掌握食品毒理学实验的原则和局限性 • 2.掌握实验动物选择的基本原则 • 3.掌握食品毒理学实验设计的三大原则 • 4.了解量反应资料和质反应资料的统计方法
一、毒理学实验的原则和局限性
二、毒理学实验的目的
1. 受试物毒作用的表现和性质（描述毒理学） 在急性或慢性实验中观察动物异常，发现有害 作用
1. 剂量-反应（效应）研究 参毒通数性过和评动剂以价物量期和对-评安反外价全应源化性（化学评效学物价应物对的）的人基线毒的础的性危；斜反害得率应和到，危多向险种人性毒外性推，
1. 确定毒作用的器官 阐明毒作用特点，为机制研究和毒性防治提供
• refinement优化：必须 使用动物时，减少非人道 程序的影响
《毒理学实验基础》课件
通过统计图表（如柱状图、折线图、散点 图等）直观地展示实验数据和分析结果。
05
毒理学实验的应用与展望
毒理学实验在药物研发中的应用
药物安全性评价
毒理学实验是药物研发过程中评 估药物安全性的重要手段，通过 动物实验观察药物对机体的毒性 作用，为新药上市提供安全性依
据。
药物作用机制研究
毒理学实验可以帮助研究药物的 作用机制，了解药物在体内的代 谢、转化和毒性作用机制，为新
生态风险评估
毒理学实验可以帮助评估人类活 动对生态环境的潜在风险，预测 污染物对生物多样性和生态平衡 的影响，为环境保护和可持续发 展提供支持。
环境修复与治理
毒理学实验可以用于环境修复与 治理过程中，研究生物修复技术 的有效性，评估治理措施对环境 的影响，提高环境治理的效果。
毒理学实验的发展趋势与展望
实验动物的选择
实验动物种类
01
选择适合的实验动物种类，如小鼠、大鼠、豚鼠、家兔等，以
满足实验需求。
实验动物品系
02
根据实验目的和要求，选择不同品系的实验动物，以确保实验
结果的准确性和可靠性。
实验动物年龄与性别
03
根据实验目的和要求，选择不同年龄和性别的实验动物，以确
保实验结果的准确性和可靠性。
染毒方法与途径
盲法原则
实验过程中应保持盲态，避免主观偏见对实 验结果的影响。
实验数据的收集与整理
数据记录
准确、完整地记录实验数据，包括实验对象的基本信息、实验条件、观察指标等。
数据整理
对实验数据进行分类、排序、筛选等处理，使其更易于分析和解释。
数据核对
对实验数据进行核对，确保数据的准确性和完整性。
数据保密
药物毒理学：毒理学研究设计及实验基础
2．各组动物数 3．试验期限
（二）体外（遗传）毒理学试验设计
1.测定受试物溶解性 2.试验最高剂量的推荐 3.代谢活化 4.阳性对照 5.重复
环境条件(气温,气湿等)
外源化学物
·化学结构 ·理化性质
水溶性 脂/水分 配系数 挥发度 气/血分 配系数 ·分散度 ·纯度/杂质
2.药物的开发
开发阶段也包括四个重要环节 ：
（1）临床前试验：由制药公司进行的 实验室和动物研究，以观察化合物针 对目标疾病的生物活性，同时对化合 物进行安全性评估。
（2）研发中新药申请（Investigational New Application, IND）
（3）临床试验：（ Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、 Ⅳ期 ）
8.不应用酸碱解离受试物，基于保护动物的原因，并避免改变肠道或者 肾小管内的pH值
9.非胃肠道染毒，受试物应尽可能接近等渗
环境条件(气温,气湿等)
外源化学物
·化学结构 ·理化性质
水溶性 脂/水分 配系数 挥发度 气/血分 配系数 ·分散度 ·纯度/杂质
暴露
———→
·途径 ·时间/频 率 ·溶剂 ·稀释度 ·交叉暴 露
毒性评价试验的基本目的
1.受试物毒作用的表现和性质 2.剂量-反应(效应)研究 3.确定毒作用的靶器官 4.确定损害的可逆性
5.其它 （1）毒作用的敏感检测指标和生物学标志 （2）毒作用机制研究 （3）受试物的毒物动力学和代谢研究 （4）中毒的解救措施
五.毒理学试验设计要点
(一) 体内毒理学试验设计
（二）实验动物品系的选择
1. 近 交 系 ： C57 、 Balb/c 、 dba-1 ； shrn 、 ZDF大鼠、F344/DuCrlCrlj大鼠
毒理实验基本操作
实验动物的一般操作技术
预防医学实验教学中心
一、实验目的
1、了解动物实验是毒理学研究的重要手段之一 2、掌握小鼠动物实验的基本操作技术
一、实验器材
电子称、小鼠固定器、注射器、灌胃针、棉签、 电子称、小鼠固定器、注射器、灌胃针、棉签、 镊子、毛细管、龙胆紫、苦味酸、 镊子、毛细管、龙胆紫、苦味酸、生理盐水
单 色 法
大小鼠标记方法（单色法 大小鼠标记方法（单色法n<10） ）
单色法标记原则： 单色法标记原则：单色 法编大于10的号码时， 法编大于10的号码时， 10的号码时 我们规定顺时针旋转， 我们规定顺时针旋转， 后一位必需大于前一位 数，例如：可以编，12， 例如：可以编，12， 13，14……19，但不能 19， 13，14 19 编10，11，20，21，22， 10，11，20，21，22， 30，31，32，33， 30，31，32，33，等， 以此类推。100以内最 以此类推。100以内最 大能编89号 大能编89号。 （可编 89 46个鼠） 46个鼠） 个鼠
三、实验内容
1. 实验动物的选择、性别鉴定、随机分组及标记。 实验动物的选择、性别鉴定、随机分组及标记。 实验动物的抓取和固定 抓取和固定。 2. 实验动物的抓取和固定。 3. 实验动物的染毒：灌胃，肌内、腹腔、尾静脉、 实验动物的染毒：灌胃，肌内、腹腔、尾静脉、 皮下、皮内注射。 皮下、皮内注射。 实验动物的采血：鼠尾尖采血法、 4. 实验动物的采血：鼠尾尖采血法、眼眶静脉丛采血 断头采血法等。 法、断头采血法等。 实验动物的处死：颈椎脱臼法、断头法、 5. 实验动物的处死：颈椎脱臼法、断头法、急性大失 血法（摘取眼球法）、空气栓塞法等。 ）、空气栓塞法等 血法（摘取眼球法）、空气栓塞法等。
环境毒理学常用实验方法
• 急性毒性进行评定：与同系物或其他毒物比较，与毒性分
级比较分析。
环境毒理学常用实验方法
急性毒性试验
四、哺乳动物的急性毒性实验 （二）急性阈剂量的测定
急性阈剂量指毒物经一次染毒后对机体产生不良作用的最小 剂量，是用于评价毒物非致死性损害的参数。
环境毒理学常用实验方法
变)
环境毒理学常用实验方法
实验动物的选择
个体选择
• 年龄
除特殊要求外，动物年龄一般选用初成年者。
• 性别
根据目的，若对动物性别无特殊要求，宜选用雌雄各半。
• 生理状态——怀孕、哺乳
通常实验均不宜采用处于特殊生理状态的动物进行，为了 某种特定的实验目的除外。
• 健康状况
所用动物进入实验室后，于实验开始前应观察一周以上， 以删除不健康的动物，并使实验动物适应环境。
作病理组织学观察时，则应有对照组。
环境毒理学常用实验方法
急性毒性试验
四、哺乳动物的急性毒性实验 （一）半数致死量(LD50、LC50)的测定 4.症状观察
• 染毒开始后应观察并记录实验动物的中毒表现、生理状况
变化和死亡情况。
• 观察时间可确定为几小时、几天、一周或两周，但一般不
超过二周（二周内）。
环境毒理学常用实验方法
急性毒性试验
系统和器官
中枢神经系统与神经肌肉系统
植物神经系统 呼吸系统 皮肤和被毛 眼睛
表 8-3 啮齿类动物中毒常见症状及发生部位 中毒后常见的表现
体位异常，叫声异常，活动增多和呆卧少动，肌颤，痉挛，麻痹，后肢无力， 运动失调，管状尾，对外界刺激反应过敏或迟钝 瞳孔扩大，流涎，流泪，出汗 鼻孔溢液，鼻翼扇动，呼吸深缓，呼吸过速，张口和腹式呼吸 皮肤充血，紫绀，被毛蓬松、污秽 眼球突出，充血，角膜混浊，血性分泌物
毒理学实验指导一、二
《食品毒理学》实验指导综合实验（四氯化碳）对肝脏谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT) 的影响实验实验一半衰期的测定-比色法测定水杨酸钠的血浆半衰期实验二血液红细胞、白细胞计数*所需实验仪器：电子天平、pH计（试纸）、显微镜、分光光度计、灌胃针头、（小）/（大）离心机、注射器。
实验一半衰期的测定-比色法测定水杨酸钠的血浆半衰期一、原理、目的药物血浆半衰期t1/2即血浆药物浓度下降一半所需的时间。
绝大多数药物是按一级动力学规律消除（恒比消除），因此每种药物都有固定的t1/2，不因血浆浓度高低而改变。
本实验用分光光度法测定水杨酸钠的血浆浓度并计算t1/2。
水杨酸钠为抗炎药，经肝代谢，在酸性环境中与三氯化铁生成一种紫色的络合物，在520nm波长下比色，其光密度与水杨酸浓度成正比。
通过测定水杨酸钠的血浆半衰期，使学生了解水杨酸钠在体内的消除速度，并掌握其血浆半衰期的测定方法。
半衰期是判断毒物蓄积程度的重要参数，对中毒和解毒有一定的实践意义。
二、试剂、器材及动物离心管、试管、磅秤、玻璃棒、注射器、吸管、离心机、721型分光光度计；三氯醋酸、水杨酸钠、三氯化铁；兔。
三、方法步骤1、取离心管和试管各5支，分别标为1~5号，备用。
5支离心管各加入10％三氯醋酸7ml。
2、取兔1只，称体重，从耳静脉取血2ml置入1号离心管，用玻璃棒搅拌。
然而自耳静脉注入10%水杨酸钠(剂量为150mg/kg)，并立即和60min后两次自另一耳静脉取血2ml，分别注入2、3号离心管中，搅拌。
4、5号离心管分别加入蒸馏水和0.02%水杨酸钠2ml。
3、取上述5支离心管进行离心(2 000r/min，5min)，准确吸取上清液6ml放入编号相对应的试管中，分别滴入10%三氯化铁12滴(0.6m1)摇匀5min后比色。
4、用721型分光光度计510nm波长比色，以4号管调“0”，读得5号管光密度为x，再以1号管调“0”，读得2号管为x1，3号管为x2，将上述操作归纳为下表：水杨酸钠血浆半衰期的测定试管名编号三氯醋酸（ml）兔血（ml）0.02%水杨酸钠（ml）蒸馏水（ml）离心上清液（ml）三氯化铁（gtt）对照 1 7 2 —— 6 12 立即 2 7 2 —— 6 12 60min 3 7 2 —— 6 12 空白 4 7 —— 2 6 12 标准 5 7 — 2 — 6 125、计算半衰期①求k值：k=y/x; y=0.02②求水杨酸钠血浓度：给药后立即血浓度y1=kx l；给药后60min血浓度y2=kx2 。
药物毒理学实验指导
药物毒理学实验指导南方医科大学药学院实验中心二0一0年八月目录实验一、药物急性毒性实验（LD50测定）实验二、急性肺损伤实验实验三、药物免疫毒性试验实验四、小鼠骨髓细胞微核试验实验五、小鼠精子畸形实验实验六、药物生殖毒性实验实验一 急性毒性试验［盐酸二甲弗林（回苏灵）LD 50测定］一、实验目的化学物急性毒性试验是研究化学物毒性效应的基本试验。
本实验的目的是学习急性毒性试验的实验设计、实验原理和实验操作方法。
二、基本原理选择健康的实验动物，根据体重按随机分组的方法，依据LD 50计算的设计原料则将动物分成数个染毒组。
一次或24h 内多次给予受试物后，观察动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的情况等，根据各组动物死亡数计算半数致死量（LD 50）。
据此分析受试物毒性反应与剂量的关系，并根据LD 50值对化学物进行毒性分级。
三、实验材料1、器材 1ml 注射器、烧杯、电子天平、苦味酸、镊子、剪刀、酒精棉球等。
2、药品 0.4％回苏灵注射液（经预试验后按比例稀释）。
3、动物 健康成年小白鼠若干只，体重18-22g ，雌雄各半。
四、实验方法 1、预试验（1）探索剂量范围：先找出100%与0%的致死量为实验的上下限剂量，即Dmax 和Dmin 。
取动物若干，每4只一组，按估计量给药，如出现4/4死亡时，下一组剂量降低，当出现3/4死亡时，则上一剂量为Dmax ；如降低一剂量出现的死亡率2/4或1/4时，应考虑到4/4死亡剂量组在正式实验时可能出现死亡率低于70%，为慎重起见可将4/4死亡剂量乘以1.4倍，作为Dmax 。
同法找出Dmin 。
（2）确定合适的剂量分组方案：组数（n ）以5-8组为宜，根据下面公式计算组间剂量公比r 。
r=1/1min max/ n D D各组剂量分别Dmax 、(Dmax) r 、(Dmax)r2、(Dmax)r3……。
2、正式试验（1）动物的称重、编号和分组： 每组10只动物（雌雄各半），随机分组和用苦味酸编号。
食品毒理学实验指导-2010
实验一、动物的一般操作技术1.实验目的和要求*毒理学研究需要用实验动物来进行各种实验，通过对动物的实验观察和分析来研究毒作用，获得毒物的毒性、剂量—反应关系、毒作用机制等方面的资料，因此动物实验是毒理学研究中重要的手段之一。
通过本次学习毒理学实验中有关动物实验的基本操作技术，掌握实验动物的选择、动物抓取和分组等技术。
2.实验原理做毒理学实验，首先要了解实验动物选择的要求，实验动物分组、实验样品的采集、实验动物处死方法等。
3．实验仪器设备：小鼠若干，手套15副，苦味酸酒精饱和液，0.5％中性红或品红溶液，棉签，感应量为0.1g的天平一台。
4．实验内容步骤：(一)健康动物的选择无论选择哪种种属品系的动物进行实验，均要求选择健康的实验动物。
健康动物检查时要求达到：外观体形丰满，被毛浓密有光泽、紧贴体表，眼睛明亮，行动迅速，反应灵活，食欲及营养状况良好。
选择时重点检查以下几项：l．眼睛明亮，瞳孔双侧等圆，无分泌物。
2．耳耳道无分泌物溢出，耳壳无脓疮。
3．鼻无喷嚏，无浆性粘液分泌物。
4．皮肤无创伤、无脓疮、疥癣、湿疹。
5．颈部要求颈项端正，如有歪斜提示可能存在内耳疾患，不应选作实验动物。
6．消化道无呕吐、腹泻，粪便成形，肛门附近被毛洁净。
7．神经系统无震颤、麻痹。
若动物(大鼠、小鼠)出现圆圈动作或提尾倒置呈圆圈摆动，应放弃该动物。
8．四肢及尾四肢、趾及尾无红肿及溃疡。
(二)实验动物的性别鉴定小鼠主要依据肛门与生殖孔间的距离区分，间距大者为雄鼠，小者为雌性。
成年雄鼠卧位可见睾丸，雌性在腹部可见乳头。
(三)抓取方法正确地抓取固定动物，是为了在不损害动物健康、不影响观察指标、并防止被动物咬伤的前提下，确保实验顺利进行，小鼠的抓取方法先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台上向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。
（四）编号、标记方法1、称重鼠称的感应量在0.1g以下。
食品毒理学实验指导书
食品毒理学实验指导郭红辉刘永吉编写韶关学院英东食品科学与工程学院2012年9月实验注意事项食品毒理学所开设实验均要用到实验动物，为保证实验安全顺利进行，特别提出以下注意事项，所有实验人员务必认真阅读，严格遵守。
1.遵守卫生部颁布实施的《医学实验动物管理实施细则》和广东省第十一届人民代表大会常务委员会第十九次会议通过的《广东省实验动物管理条例》相关规定，不得戏弄或者虐待实验动物。
2.课前预习实验指导，熟悉实验操作流程，撰写预习报告。
3.进入实验室后，到小组所在实验台进行实验操作，不要随意走动，大声喧哗；抓取实验动物或解剖时要做好防护，防止被动物咬伤或抓伤、被实验器具扎伤等意外事故发生；如有意外发生，马上报告老师。
4.实验动物器官和尸体不要随意丢弃，交由班级指定负责人集中处理。
5.实验结束后，清洗和整理好实验用具，交由老师清点后方可离开。
实验一实验动物的基本操作一、目的和意义毒理学研究需要用实验动物来进行各种实验，通过对动物的实验观察和分析来研究毒作用，获得毒物的毒性、剂量-反应关系、毒作用机制等各方面的资料，因此掌握动物实验基本操作是毒理学研究必备技能。
二、实验器材及试剂1、器材大头针、泡沫板、帆布手套、橡胶手套、剪刀、棉签、小鼠鼠笼、1.5及0.5ml EP管等2、试剂（1）3% ~ 5%苦味酸溶液（即２，４，６－三硝基苯酚），因与动物的被毛中的蛋白发生反应，可染成较为牢固的亮黄色。
可用水，也可用一定浓度的乙醇来配制。
（2）0.5% 中性红或品红溶液,可染成红色。
三、内容（一）健康动物的选择无论选择哪种种属品系的动物进行实验，均要求选择健康的实验动物。
健康动物检查时要求达到：外观体形丰满，被毛浓密有光泽、紧贴体表，眼睛明亮，行动迅速，反应灵活，食欲及营养状况良好。
（二）实验动物性别的鉴定动物性别不同对毒物的敏感性也不同，这可能与性激素、肝微粒体羟基化反应有关，也随受试物而异。
因此，要根据实验要求选择性别，一般实验如对性别无特殊要求者，以选用雌雄动物各半。
毒理学实验基本技术与方法.ppt
(二)动物实验设计的主要方法
1.配对设计：将受试动物按一定条件配成对子，再随机分配每 对中的两个受试动物到不同的处理组。 2.随机区组设计：将受试动物按一定的特征划分为若干配伍组 或区组，再将机每一配伍组中的各受试动物随机分配到不同的 处理组。 3.完全随机设计：将受试动物随机地分配不同的处理组。 4.拉丁方设计：按拉丁方阵型将受试动物随机的分配到各个处 理组（涉及多个因素，且各个因素无交互作用、水平数相等）。
7 2021年3月22日星期一6时41分41秒
3 .动物实验的局限性
➢种属外推的不确定性 ➢高剂量向低剂量外推的不确定性 ➢样本量到大样本外推的不确定性 ➢无法观察主观指标
8 2021年3月22日星期一6时41分41秒
二、 动物实验的职业道德-3R原则
实验动物在人类认识生命、预防与治疗疾病的医学发展
5
6
7
8 9 10 11 12
随机数字 07 81 63 77 86 82 74 64 40 42 23 71
除3余数
1
0
02
2
1
2
01
0
2
2
组别
A C CB B A B CA C B B
随机数字表
以3除各随机数字，若余数为1，即该鼠归A组；余数为2，归人B组；余数 为0，归人C组。随机分组结果如下：
4 2021年3月22日星期一6时41分41秒
一、动物实验的目的、要求、局限性
实验动物(Laboratory animals)是专门培育供实验用的动物，主 要指作为医学、药学、生物学、兽医学等的科研、教学、医 疗、鉴定、诊断、生物制品制造等需要为目的而驯养、繁殖、 育成的动物。
毒理学实验资料
实验一毒理学实验的基本操作一、实验目的1、了解动物实验是毒理学研究的重要手段之一2、掌握小鼠动物实验的基本操作技术二、实验器材与试剂电子称、小鼠固定器、注射器（3号针头）、灌胃针（12号针头）、棉签、镊子、眼科镊、毛细管、小号毛笔、品红、苦味酸、生理盐水、巴比妥钠、报纸、5ml离心管三、实验内容1. 实验动物的抓取和固定。
2. 实验动物的选择、性别鉴定、随机分组及标记。
3. 实验动物的给药途径（麻醉）：灌胃及腹腔、尾静脉、皮下注射。
4. 实验动物的采血：摘取眼球法。
5. 实验动物的处死：颈椎脱臼法。
实验动物的种类——小鼠（Mouse )（一）小鼠的捉拿、固定（二）辨别小鼠的性别，小鼠的编号及染色方法，完全随机分组1. 颜料涂擦被毛编号法（常用于大小鼠）：红色：0.5%中性红或品红溶液黄色：3-5%苦味酸溶液（水）80-90%苦味酸酒精饱和溶液2. 实验动物的分组——完全随机分组法将符合实验要求的40只小白鼠随机分配到A，B两组。
（1）动物编号1-40；（2）根据随机数字表，任意指定第10行第15列，从左到右依次读取40个两位的随机数字；（3）对随机数字按大小顺序排序，如数字相同，按先后顺序，先出现的为小；（4）随机数字序号为1~20号对应的小鼠分为A组，21~40号对应的小鼠分为B组。
（三）常用给药方法1、经消化道给药法A自动摄取法B灌胃给药法：小鼠专用灌胃针由注射器和喂管组成，喂管长约1nm，喂管尖端焊有一金属小圆球，金属球中空，用途是防止喂管插入时造成损伤。
金属球弯成20度角，以适应口腔与食道之间弯曲。
将喂管针头尖端防放进小鼠口咽部，顺咽后壁轻轻往下推，喂管会顺着食管滑入小鼠的胃，插入深度约3cm。
用中指与拇指捏住针筒，食指按着针竿的头慢慢往下压，即可将注射器忠的药液灌入小鼠的胃中。
在插入过程中如遇到阻力或可看见1/3的针管，说明灌胃并没有插入胃中，需要取出重新操作。
2、注射给药法A皮下注射B腹腔注射(巴比妥钠)：左手提起并固定小鼠，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部，右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两恻进行穿刺，针头刺入皮肤后进针3nm左右，接着使注射针头与皮肤呈45°角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。
毒理学基础实验设计.
四氯化碳毒理学的基础实验设计生化系食品082 200800602052 黄瑞锦引言：在进行某一种受试物毒理学的基础实验设计前要先认识和了解其有关知识。
所以，要进行四氯化碳毒理学的基础实验设计先认识和了解有关性质。
一、理化性质四氯化碳 (carbon tetrachloride，CCl4)，化学式CCl4，又称四氯甲烷(tetrachloromethane)。
是一种比水重，无色、易挥发、不易燃，易流动的液体。
具氯仿的微甜气味，并具有一种令人愉快的气味。
相对分子量153.84，相对密度1.595g/cm3(20/4℃)，沸点76.74℃，熔点－22.8℃，蒸气压15.27kPa(25℃)，蒸气密度5.3g/L。
四氯化碳的蒸气有毒，它的麻醉性较氯仿为低，但毒性较高。
吸入人体2～4ml就可使人死亡。
四氯化碳在水中的溶解度很小，且遇湿气及光即逐渐分解生成盐酸。
易溶于各种有机溶剂，能与醇、醚、氯仿、苯等任意混合。
对于脂肪、油类及多种有机化合物为一极优良的溶剂。
四氯化碳用作灭火剂时，不能灭活泼金属的火，因为活泼金属可以与之反应。
也会在高温下与水反应生成有毒物质。
遇火或炽热物可分解为二氧化碳、氯化氢、光气和氯气等。
二.污染来源四氯化碳（CCl4）是较常用的有机溶剂。
在工业生产中用作萃取剂、清洗剂、脱脂剂、制冷剂、灭火剂和驱虫剂等。
在医学上用作麻药剂。
在日常生活中，用作衣服的洗涤及去脂等。
在生产和使用过程中，四氯化碳可释入空气而污染环境。
近年来，美国对供水系统中CCl4的检测结果发现，约2000万人饮用的水源被CCl4污染。
据估计美国有近400万人在生产中暴露于CCl4中。
三.毒性作用CCl4可经消化道、呼吸道和皮肤进入机体。
吸入量的20%～35%可被人及动物机体吸收。
CCl4在血液中的浓度与脑中的含量接近，脂肪组织蓄积的量为血液中的2～8倍。
部分CCl4在肝微粒体细胞色素P450的催化作用下，通过脱卤素和氧化作用，解离成Cl·和CCl3·自由基，后者能使生物膜脂质过氧化，扰乱干细胞脂质代谢，引起干细胞坏死。
毒理学基础实验指导
卫生毒理学实验指导编写：陈秉符古雅2009年3月目录实验一毒理学实验设计 ..................................................................... 错误!未定义书签。
实验二实验动物的一般操作技术 ..................................................... 错误!未定义书签。
实验三灭多威经口急性毒性试验 ..................................................... 错误!未定义书签。
实验四苯经呼吸道急性毒性试验 ..................................................... 错误!未定义书签。
实验五蓄积毒性试验 ......................................................................... 错误!未定义书签。
实验六亚慢性和慢性毒性试验 ......................................................... 错误!未定义书签。
实验七小鼠骨髓细胞微核试验 ......................................................... 错误!未定义书签。
实验八小鼠精子畸形试验 ................................................................. 错误!未定义书签。
实验九骨髓细胞染色体畸变分析 ..................................................... 错误!未定义书签。
实验十鼠伤寒沙门菌回复突变试验 ................................................. 错误!未定义书签。
毒理实验基本技术
实验一毒理实验基本技术一、常用实验动物染毒技术在进行毒理学动物实验时要使动物经一定的途径接触毒物，染毒的途径（Route of administration）要依实验目的并结合人类的实际接触方式，毒物的多少及理化性质和具体设备条件等来决定。
食品毒理学中最常用的染毒方式有经消化道染毒（Gastrointestinal tract exposure），在特殊需要时也使用注射染毒。
（一）经消化道染毒方法经消化道染毒方法主要有灌胃法、喂饲法和吞咽胶囊三种。
为防止胃纳充盈影响化合物的吸收及毒性，经消化道染毒要求实验动物空腹。
依动物生活习性的不同，禁食的时间也不同，白天进食的动物（如兔、猫、狗等）可在白天动物进食前给毒，夜间进食的动物（如大鼠、小鼠等）应隔夜禁食。
1 ．灌胃法( 1 ）大鼠、小鼠及豚鼠灌胃法灌胃针头连接注射器，吸取受试物。
左手抓住动物背部皮肤，将动物固定，要使动物的消化道为自然垂直位。
右手持注射器，针头由动物嘴角插入，沿咽后壁缓缓插入食道。
进针过程应没有阻力，若遇阻力，应调整方向，不要强行进针。
进针后先回抽针芯，如无气泡抽出，并有一定负压，说明位置在胃中，可进药。
否则应重新进针。
一般灌胃针插入深度小鼠约3~4cm，大鼠、豚鼠约4~6cm。
灌胃量小鼠0.2~ l ml，大鼠l~4ml，豚鼠l~5ml。
( 2 ）免、猫、狗等较大动物灌胃法通常以胃管或导尿管为灌胃导管。
先将动物固定，保持伸直的体位。
在动物上、下门牙间放一开口器，并固定之。
开口器可用本料或金属制成，梭形，宽度依动物口腔大小而定，中间钻一小孔，以使灌胃导管能通过。
灌胃导管经开口器中心圆孔插入，沿咽后壁经食道插入胃中。
如遇阻力应拔出，稍等片刻后重新插入，不可强行插管，以免造成创伤或误入肺部。
为检查导管插入是否正确，将导管外口通人一盛水的烧杯中，如不发生气泡，即认为在食道中，若不断出现气泡，则可能误人肺内，应拔出重插。
确认插入胃中后，用注射器吸取受试物，经导管注入。
毒理学基础本科实验教学大纲
毒理学基础本科实验教学大纲课程名称：毒理学英文名称：TOXICOLOGY课程性质：专业基础课，必修课程代码：5046350本大纲主笔人：黄毅娜面向专业：预防医学专业和卫生检验专业实验指导书名称：毒理学实验方法与技术出版单位：人民卫生出版社出版日期：2003年8月主编：王心如一、课程学时学分课程总学时：90学时课程总学分：5分实验总学时：18学时（预防医学专业）15学时（卫生检验专业）实验总学分：1分二、实验的地位、作用和目的毒理学研究外源化学物对于机体（特别是人体）的有害作用及其机制。
毒理学作为一门实验科学，以动物实验为主要研究方法，评估外源化学物对健康的危害。
毒理学基础理论与实践技能对于提高专业素质，培养创新性预防医学专业人才具有同等重要的地位，故毒理学实验课程目的是使学生在掌握毒理学的基本概念、基本理论的基础上，熟悉和掌握一些基础的毒理学动物实验基本技能，外源化学物评价试验的设计、实施、结果观察和评价等毒理学研究基本功。
三、实验方式及基本要求采用观看视听教材，教师讲解和示教，以及学生自己动手操作等方式。
熟悉和掌握一些基本的毒理学动物实验的设计、实施、结果观察和评价等。
四、实验报告实验报告内容包括实验名称、目的要求、方法、结果、讨论。
五、考核与考试考核学生实验报告，评优（A）、良（B）、差（C）三个等级。
实习成绩占期末总成绩的20%。
六、基本设备与器材配置小鼠笼子(10个/组)、天平（1台/组）、剪刀（1把/人）、镊子（1把/人）、止血镊（1把/人）、灌胃针（1个/人）、显微镜（1台/人）、多目共览显微镜（1台）、静式染毒柜（2个）、超净工作台（2台），培养箱（1台）等。
七、实验项目及内容提要以下内容双线部分应重点掌握，单线部分应熟悉，其它部分应有所了解。
实习一染毒方法和实验动物目的要求1.了解动物饲养和动物房环境的基本要求。
了解大、小鼠习性。
2.了解染毒的各种方法，掌握大、小鼠灌胃方法，熟悉家兔皮肤染毒方法。
毒理学实验基础
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第一节
毒理学实验的原则和局限性
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一、毒理学实验的基本原则
2. 动物必须暴露于高剂量，这是发现对人潜在危 害的必需和可信的方法。
观察剂量-反应(效应)关系 安全性评价
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第三节**
实验动物（laboratory animal）
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3. 成年健康（雄性或雌性未孕）实验动物和人可能
的暴露途径是基本的选择。选用成年健康实验动物，
是为了使实验结果具有代表性和可重复性。
成年的健康(雄性和雌性未孕)实验动物降低实验对象
的多样性，减少实验误差。保证试验结果的准确性
和可重现性
应尽可能模拟人接触该受试物的方式
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（三）动物繁育方式的选择 不同的繁育方式可得到不同的实验动物： 品系（strain): 是实验动物学的专有名词，指用计
划交配的方法，获得起源于共同祖先的一群动物。
近亲繁殖 异系杂交 随机繁殖
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一、毒理学实验的基本原则 1. 化学物在实验动物产生的作用，可以外推于人。 1. 人是最敏感的动物物种。 前提 2. 人和实验动物的生物学过程包括化学物 的代谢，与体重（或体表面积）相关。
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卫生毒理学实验指导编写：陈秉符古雅2009年3月目录实验一毒理学实验设计 (1)实验二实验动物的一般操作技术 (10)实验三灭多威经口急性毒性试验 (20)实验四苯经呼吸道急性毒性试验 (24)实验五蓄积毒性试验 (27)实验六亚慢性和慢性毒性试验 (29)实验七小鼠骨髓细胞微核试验 (33)实验八小鼠精子畸形试验 (37)实验九骨髓细胞染色体畸变分析 (40)实验十鼠伤寒沙门菌回复突变试验 (42)实验十一致畸试验及胚胎胎仔检查方法 (47)实验十二网织红细胞计数 (53)附录：动物实验报告的撰写及注意事项 (54)实验一毒理学实验设计一、目的和意义毒理学的很多研究工作需要通过动物实验来进行。
使用实验动物进行科研的优点是花费人力、物力较少，时间短，易发现单因素与结果的关系，能提供大量有价值的可与人类生命活动现象相类比的资料。
在毒理学实验研究中，健康的实验动物是保证工作顺利进行和获得正确可靠的研究结果的重要条件。
毒理学研究外源化学物对于机体(特别是人体)的有害作用及其机制。
毒理学研究的主要手段是动物实验。
体内试验是以实验动物为模型，最终目的是通过外源化学物对实验动物的毒性反应，向人(原型)外推，以期评估外源化学物对人的危害及危险性。
体外实验主要用于筛选和预测急性毒性和机制研究；人体实验和流行病学调查则可进一步深化和证实在动物实验中所得到的资料。
实际上，毒理学作为一门实验科学是以动物实验为中心的，毒理学动物实验的设计、实施、结果观察和评价是毒理学研究的基本方法。
通过本次讨论，要求学生基本掌握毒理学实验设计的原则和方法。
二、内容（一）毒理学实验的原则和局限性1、毒理学实验的原则在毒理学的试验中，有三个基本的原则。
第一个原则，化学物在实验动物产生的作用，可以外推于人。
第二个原则，实验动物必须暴露于高剂量，这是发现对人潜在危害的必需的和可靠的方法。
第三个原则，成年健康(雄性和雌性未孕) 的实验动物和人可能的暴露途径是基本的选择。
2、毒理学实验的局限性用实验动物的毒理学实验资料外推到人群接触的安全性时，会有很大的不确定性。
（二）毒理学常规毒性试验的基本目的毒性评价或安全性评价方面的基本目的包括以下几点：1. 受试物毒作用的表现和性质。
2. 剂量-反应(效应)研究。
3. 确定毒作用的靶器官。
4. 确定损害的可逆性。
毒理学研究还可能有其他的目的和要求，例如毒作用的敏感检测指标和生物学标志、毒作用机制研究、受试物的毒物动力学和代谢研究、中毒的解救措施等。
对这些要求，应扩展常规试验的设计以包括有关的项目，或者另外设计和进行靶器官毒理学研究及机制毒理学研究。
（三）实验动物的选择毒理学的动物实验是以实验动物作为研究对象的，为获得可靠的研究结果，先决条件是正确地选用实验动物。
1、实验动物物种的选择对实验动物物种选择的基本原则是：选择对受试物在代谢、生物化学和毒理学特征与人最接近的物种；自然寿命不太长的物种；易于饲养和实验操作的物种；经济并易于获得的物种。
在毒理学研究中常用的实验动物物种如下：大鼠、小鼠、豚鼠、兔、狗。
其他可能用到的实验动物有地鼠、猕猴、小型猪、鸡等。
常用实验动物生物学和生理学参数见表1-1。
以上实验动物各物种中，实际上没有一种完全符合上述物种选择的原则，目前常规选择物种的方式是利用两个物种，一种是啮齿类，另一种是非啮齿类。
系统毒性研究最常用的啮齿类是大鼠和小鼠，非啮齿类是狗。
豚鼠常用于皮肤刺激试验和致敏试验，兔常用于皮肤刺激试验和眼刺激试验。
遗传毒理学试验多用小鼠，致癌试验常用大鼠和小鼠，致畸试验常用大鼠、小鼠和兔。
迟发性神经毒性试验常用母鸡。
表1-1 常用实验动物生物学和生理学参数参数猴狗猫兔大鼠小鼠豚鼠地鼠成体体重(kg) 3.5 14.0 3.3 3.7 0.45 0.035 0.43 0.12 寿命(a) 16 15 14 6 3 1.5 31 水消耗(ml/d) 450 350 320 300 35 6 145 30饲料消耗(成本g/d) 150 400 100 180 10 5 12 10成体代谢(cal／kg d) 158 80 80 110 130 600 100 250 体温(℃) 38.8 38.9 38.6 39l4 38l2 37.4 38.6 38.0 呼吸频率50 20 25 53 85 160 90 83 (次／min) (40～60) (10～30) (20～30) (40～65) (65～110) (80～240) (70～100) (35～130) 心率(次／min) 200 100 120 200 328 600 300 450 血压mmHg 159／127 148／100 155／100 110／80 130/90 120／75 77/50 108/77 (收缩／舒张)出生体重(g) 500～700 1100～2200 125 100 5-6 1.5 75～100 2.0断乳时体重(g) 4400 5800 3000 100～1500 40～50 10～12 250 35 开眼(d) 出生当天8～12 8～12 10 10～12 11 出生当天15 妊娠(d) 168 63 63 31 21 20 67 16 性周期(d) 28 22 15～28 15～16 4～5 4～5 16～19 4 动情期(d) 1～2 7～13 9～19 30 1 1 1 1 窝数量 1 3～6 1～6 1～13 6～9 1～12 1～5 1～12 断乳年龄(周) 16～24 6 6～9 8 3～4 3 2 3～4 生殖年龄(月) 54 9 10 6～7 2～3 2 3 2 生殖期(年) 10～15 5～10 4 1～3 1 1 3 1 生殖季节任何时间春，秋冬季2～3个月任何时间任何时间任何时间任何时间任何时间所需面积(tf2)* 6 8 3 3 0.4 0.4 0.7 0.34 环境温度(℃) 18～28 18～28 18～28 18～28 19～25 19～25 19～25 19～25血容量( ML/Kg) 75 79 60 53 65 80 75 85 凝血时间(s) 90 180 120 300 60 14 60 143 HCT(％红细胞) 42 45 40 42 46 41 42 50 Hb(g／bl) 12.5 16.0 11.8 13.6 14.8 16.0 12.4 12.02、实验动物品系的选择品系(strain)是实验动物学的专用名词，指用计划交配的方法，获得起源于共同祖先的一群动物。
实验动物按遗传学控制分类可分为：①近交系：指全同胞兄妹或亲子之间连续交配20代以上而培育的纯品系动物。
如小鼠有津白I、津白Ⅱ、615，DBA／1和DBA／2，BALB/C，C3H，C57B／6J，A和A／He等。
②杂交群动物(杂交1代，F1)，指两个不同的近交系之间有目的进行交配，所产生的第一代动物。
③封闭群：一个种群在五年以上不从外部引进新血缘，仅由同一品系的动物在固定场所随机交配繁殖的动物群。
如昆明种小鼠、NIH小鼠、LACA小鼠、F344大鼠、Wistar大鼠、SD(Sprague-Dauley)大鼠等。
根据实验动物遗传的均一性排序，近交系最高、杂交群次之、封闭群较低。
不同品系实验动物对外源化学物毒性反应有差别，所以毒理学研究要选择适宜的品系，对某种外源化学物毒理学系列研究中应固定使用同一品系动物，以求研究结果的稳定性。
遗传毒理学一般利用啮齿类动物，主要是小鼠或大鼠。
如果有合适的理由，其他物种也可接受。
有的文献报告在小鼠骨髓微核试验MS／Ae品系比ddy，CD-1或BDF品系更敏感。
但一般认为还没能证明某一品系对所有的遗传毒性物质比其他品系都敏感。
在致癌试验中对实验动物的品系有一定的要求，特别重视有关病理损害的自发发生率。
3、对实验动物微生物控制的选择按微生物控制分类，实验动物分为四级，见表1-2。
对于毒性试验及毒理学研究应尽可能使用二级(或二级以上)的动物，以保证实验结果的可靠性。
表1-2 实验动物微生物等级级别要求I 级Ⅱ级Ⅲ级IV 级普通动物，应没有传染给人的疾病清洁动物，除I级标准外，种系清楚，没有该动物特有的疾病无特定病原体动物(SPF)，除Ⅱ级标准外，动物为剖腹产或子宫切除产、按纯系要求繁殖，在隔离器内或层流室内饲养，可有不致病细菌丛，没有致病病原体无菌动物，在全封闭无菌条件下饲养的纯系动物，动物体外不带有任何微生物和寄生虫(包括绝大部分病毒)4、个体选择实验动物对外来化学物的毒性反应还存在个体差异，应注意实验动物的个体选择。
（1）. 性别同一物种、同一品系的实验动物雌雄两性通常对相同外源化学物毒性反应类似但雌雄两性对化学物的毒性敏感性上存在着差别。
如果已知不同性别的动物对受试物敏感性不同，应选择敏感的性别。
如对性别差异不清楚，则应选用雌雄两种性别。
如实验中发现存在性别差异，则应将不同性别动物的实验结果分别统计分析。
在遗传毒理学体内试验中，对性别的选择有几种意见：①对单个物种应用两种性别。
②对单个物种应用两种性别，除非已在一个性别得到阳性反应，就不必对另一种性别进行试验。
③对单个物种应用两种性别，除非经毒代动力学研究证明受试物(和其代谢产物)在雄性和雌性无差别和／或如果在确定剂量的预试验证明有相等毒性。
此假定在非遗传毒性与遗传毒性之间有相关。
④对单个物种常规用一种性别(雄性或雌性)，除非预期／证明存在性别差异。
由于历史的原因UDS体内／体外试验常规用雄性大鼠。
一般来说，对于初次试验的受试物，应该采用两种性别。
对大鼠和小鼠各一种性别进行试验可能比单个物种两种性别提供更好的危害鉴定，但这需要更多的资料来证明。
（2）. 年龄和体重（3）. 生理状态（4）. 健康状况(四)毒理学试验设计要点1、体内试验设计1）.剂量分组在毒理学试验中，最重要的就是研究剂量-反应(效应)关系，也就是当外源化学物染毒剂量增加，实验动物的毒性反应(效应)随之而增强。
剂量-反应(效应)关系的存在是确定外源化学物与有害作用的因果关系的重要依据，也可证明实验结果的可靠性。
因此，在毒理学试验中，一般至少要设3个剂量组(即高剂量组、中剂量组、低剂量组)，希望能得到满意的剂量-反应(效应)关系。
特别注意设立对照组：①未处理对照组(以前有称为空白对照组)：②阴性(溶剂/赋形剂)对照：③阳性对照：④历史性对照：2）. 各组动物数3）. 试验期限2、体外试验设计1）．测定受试物溶解性2）．试验最高剂量的推荐3）. 代谢活化4）. 阳性对照5）. 重复（五）实验动物的染毒和处置1、动物实验前的准备2、受试物和样品的准备3、染毒途径4、实验动物处死及生物标本采集1）．实验动物处死方法2）．血液采集3）．尿液采集4）．病理解剖、标本留取和组织病理学检查（六）实验结果处理和分析在毒理学试验的设计和实施中应贯彻实验设计的对照、随机和重复的原则，实验的各剂量组所得到的结果应与阴性对照组比较。