微生物实验问题与复习资料

微生物实验问题与答案

一、光学显微镜的操作及细菌、放线菌个体形态的观察

1、为什么油镜的放大倍数比普通物镜大？

答：油镜能减少光的折射，进而提高视野的亮度；通过提高显微镜的数值口径增加显微镜的分辨力。

2、数值口径的表达公式？

答案：N.A=n ×sin α，n为介质折射率；α为光线最大入射角的半数。

3、显微镜数值口径与分辨力的关系？

答案：分辨力是指显微镜能辨别两点之间最小距离的能力，它与光的波长成反比，与数值口径成正比。

4、油镜的使用与普通物镜有何不同？

答案：油镜必须借助于光折射率等于或接近于玻璃的试剂，如香柏油等才能使用，而普通物镜则不需要；油镜是由100×物镜与香柏油构成，而普通物镜则限于10×物镜、40×物镜等。

5、使用油镜时应特别注意什么？

答案：上下调节镜头时应使用微螺旋，否则容易损坏镜头；应使油镜始终浸泡在香柏油中，否则就不是油镜；使用完毕后，必须用搽镜纸沾取二甲苯等有机溶剂搽去残留的油迹，否则会玷污油镜。

6、什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？

答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。

7、根据你的实验体会,谈谈应如何根据所观察微生物的大小,选择不同的物镜进行有效地观察

答：细菌用油镜，真菌用高倍镜。都是先用低倍镜找到目标后，再用高倍镜调到合适的视野和合适的清晰度。

答：放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大，用放大40倍的物镜就可以看了，细菌小，要用放大1000倍的物镜看，感觉还很小。病毒那就要用电子显微镜看了。

二、微生物染色

1、单染色的原理是什么？

答案：主要基于微生物细胞能与各种染料进行不同程度地结合。

2、单染色过程中，为什么干燥固定？

答案：因为通过干燥可以使菌体蛋白变性，细胞质凝固，进而可以使菌体紧密地附着于载玻片表面。

3、单染色过程中，为什么水洗时水流要缓慢地从载玻片上端流下？

答案：因为如果水流直接冲洗有菌部位，容易使菌体被冲洗掉。

4、为什么载玻片要完全干燥后，才能使用油镜？

答案：因为香柏油与水不相溶，容易造成光线发生折射或散射，一方面无法构成油镜，另一方面也会降低视野的亮度。

5、革兰氏染色的原理是什么？

答案：对于G+细菌来说，当用乙醇脱色时，由于肽聚糖含量高，网孔小，再加上脂量低，所以乙醇脱色后，进一步地缩小了网孔，结晶紫-碘复合物无法脱出，第二次用番红染色时无法着色，进而呈紫色；对于G-细菌来说，当用乙醇脱色时，由于肽聚糖含量低，网孔大，再加上脂量高，所以乙醇脱色后，进一步地扩大了网孔，结晶紫-碘复合物被脱出，第二次用番红染色时着色，进而呈红色。

6、革兰氏染色时，为什么要加碘液？

答案：碘可以与结晶紫染料形成较大的复合物，从而可以阻止结晶紫向细胞外渗透；另一方面也可以增加结晶紫与细胞质的亲和力。

7、革兰氏染色时，为什么要用酒精冲洗？

答案：加酒精是为了溶解细胞壁中的脂类和脱去细胞内的有机染料。

8、革兰氏染色时，为什么不能涂片太厚？

答案：涂片太厚，容易使菌体重叠，造成假阳性。

9、革兰氏染色时，为什么说脱色（乙醇脱色）是最关键的一步？

答案：如果脱色时间较短，则容易使革兰氏阴性细菌脱色不完全，造成假阳性；如果脱色时间较长，则容易使革兰氏阳性细菌内的染料被脱出，造成假阴性。

10、革兰氏染色时，如何证明你的染色操作是正确的？

答案：将革兰氏阳性细菌—葡萄球菌与革兰氏阴性细菌--大肠杆菌制成混合涂片，经革兰氏染色后，如果葡萄球菌呈紫色，而大肠杆菌呈红色，则说明染色操作是正确的。

11、固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同？

自然死亡的菌体本身已经部分自溶，结构已经改变。固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。

12、不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？

能。在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。

三、无菌操作（补充）

1、无菌操作过程中，为什么试管或三角烧瓶在开塞或回塞之前，口部要过火几次？

答案：这样可以烧去管口或瓶口的微生物。

2、开塞后的试管或三角烧瓶口部微生物要平放？

答案：如果口部向上或朝下，则容易通过空气对流污染培养物。

3、接种针接种前后微什么要过火焚烧？

答案：主要防止微生物培养物之间交叉污染，也防止污染操作台面。

4、. 试述高压蒸汽灭菌的操作方法和原理。

答：高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。

操作方法：加水——装料、加盖——排气——升压、保压、和降压——取料

5、如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养？请写出实验的主要步骤。

答：通过观察菌落特征；单个菌落再次划线分离。

6、为什么干热灭菌比湿热灭菌所需温度高时间长？

在湿热条件下，有水蒸汽的作用：

a高温水蒸汽导热比干空气要快；

b高温水蒸汽冷凝变水时有放热过程；

c高温水蒸汽能穿透细菌的细胞膜，直接进入细胞内破坏细胞；

c高温水蒸汽能水解一部分细胞结构，加速导热。

（湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的穿透力比干热大；湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100℃时，由气态变为液态时可放出2．26kJ（千焦）的热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。）