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血库培训内容血库人员上岗培训内容聚凝胺交叉配血试验标准操作规程1 目的建立聚凝胺交叉配血试验标准操作规程，确保聚凝胺交叉配血试验操作的准确性和规范性。

2职责血库工作人员负责执行3.适用范围适用于聚凝胺交叉配血全过程。

4.操作规程4.1原理利用多聚季胺盐类—聚凝胺携带很多正电荷，中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，引起正常红细胞可逆性凝集。

无抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集，当加入中和液后，则凝集解散，而抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集，则不能解散。

4.2 试剂4.2.1 LIM4.2.2 RESUSPENDING4.2.3 POLYBRENE4.3 器材4.3.1贝索血库专用离心机4.3.2 10μl、1ml的移液器4.4 方法4.4.1制备红细胞悬液：分别将受血者及供血者的抗凝血标本用标本离心机离心1000×g60sec，将红细胞吸出洗涤3遍后，用生理盐水盐水稀释成3～5%的溶液【5μl红细胞沉淀溶于1ml生理盐水中】备用；4.4.2取试管标主次侧，主侧试管加受血者血浆2滴，加供血者红细胞悬液1滴，次侧试管反之。

4.4.3 每个试管加LIM0.7ml，摇匀后，再加POLYBRENE溶液2滴，混匀；4.4.4贝索离心机1000g离心力离心10秒，弃去上清，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体；4.3.6 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做；4.3.7 最后加入RESUSPENDING2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果。

4.4 结果判定4.4.1如果在30秒内凝集散开，代表是由POLYBRENE引起的非特异性凝集，配血结果相合4.4.2如果在30秒内凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。

4.4.3如反应可疑可将血样倒在玻片上用显微镜观察。

4.4.4如试管内发生溶血则同样认为是阳性反应。

4.5 注意事项4.5.1 离心后，倒掉上清，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。

4.5.2 结果观察要在30秒内，否则凝集散开会判为假阴性。

5 参考依据5.1 《全血成分血质量要求与血液标准化》5.2 《输血技术学》（第二版）ABO血型测定操作规程1 目的建立ABO血型鉴定试验标准操作规程，确保血型鉴定试验操作的准确性和规范性。

2职责血库工作人员负责执行3.适用范围适用于使用标准血型试剂进行血型鉴定试验4.操作规程4.1原理根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A 型、B型、AB型及O型四种。

A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。

可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。

所谓正定型，是用已知的抗A、抗B试剂与受检者的红细胞混合时，与抗A试剂发生凝集者即为A型，与抗B分型试剂发生凝集者即为B型，与抗A、抗B试剂均发生凝集者即为AB型，与抗A、抗B试剂均不凝集者即为O 型。

所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗－A或/和抗－B。

4.2. 标本采集4.2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血。

4.3 标本要求：4.3.1 抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTA K2（㎎/dL）抗凝。

4.3.2 用手指末梢血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有冻疮，则主张采耳垂血。

4.4. 试剂4.4.1 试剂名称：ABO血型检测试剂试剂生产厂家：长春博德生物技术有限公司4.4.2 试剂名称：5％A、B及O型红细胞悬液。

试剂生产厂家：上海血液中心4.5. 操作步骤4.5.1 玻片法--正定型4.5.1.1 取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用肥皂水刷洗后晾干，用蜡笔划出小格，并注明A、B字样。

将抗A试剂、抗B试剂各一滴分别滴于玻片（或瓷盘）上A、B处。

分别取等体积待检血样（5％-10％红细胞悬液或全血）于抗A试剂和抗B试剂。

4.5.1.2 用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀，同时不停的摇动玻片（或瓷盘）并观察血型凝集（或溶血）反应。

如以玻片做试验时，也可用低倍镜观察结果。

4.5.2 玻片法—反定型4.5.2.1取洁净玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。

4.5.2.2用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀，同时不停的摇动玻片（或瓷盘）并观察血型凝集（或溶血）反应。

如以玻片做试验时，也可用低倍镜观察结果。

4.5.3 试管法—正定型4.5.3.1 取洁净小试管（内径10mm×60mm）2支，分别标上A、B字样，用滴管分别向A管滴加抗A分型试剂1滴。

向B管滴加抗B分型试剂1滴。

向A、B管各滴加待检血样的5％红细胞悬液各1滴，混合。

4.5.3.2 摇匀后以1000转/分的速度离心1分钟判定结果。

将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。

如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

4.5.4试管法--反定型4.5.4.1 另取洁净小试管（内径10mm×60mm）3支，分别标明A、B 和O细胞。

用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％红细胞悬液1滴，混合。

4.5.4.2摇匀后以1000转/分的速度离心1分钟判定结果。

将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。

如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

4.5. 结果判断4.5.1 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。

4.5.2 凝集强度判断标准：4.5.3 按下表报告受检者红细胞ABO血型ABO血型正反定型结果分型血清＋受检者红细胞受检者受检者血清＋试剂红细胞抗－A ＋——＋抗－B—＋—＋抗－A＋B＋＋—＋血型ABOABA细胞—＋＋—B细胞＋—＋—O细胞————4.6注意事项4.6.1 分型血清质量性能符合要求，用毕后，应放置冰箱保存，以免细菌污染。

4.6.2 试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。

4.6.3 操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。

4.6.4 按理IgM抗—A和抗—B与相应红细胞的反应温度以4℃为最强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般仍在室温（20℃-24℃）内进行试验，37℃可使反应减弱。

4.6.5 离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。

4.6.6 观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。

4.6.7 判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。

4.6.8 试剂一旦发现浑浊不得使用。

5. 参考文献中国人民共和国卫生部医政司编. 全国临床检验操作规程（第二版）. 1997，89-92RH(D)血型鉴定操作规程1 目的建立RH(D)血型鉴定试验标准操作规程，确保血型鉴定试验操作的准确性和规范性。

2职责血库工作人员负责执行3.适用范围适用于使用标准血型试剂进行血型鉴定试验4.操作规程4.1原理Rh（D）血型是由红细胞表面是否存在或缺失D抗原确定。

IgM类免疫球蛋白人源单克隆抗-D抗体试剂，由BS226细胞克隆的细胞培养上清制备。

该试剂可以与大部分人类红细胞上的D抗原表位特异性结合，产生凝集的阳性结果。

若待测红细胞上为不完全D抗原，则应使用IgM/IgG类混合抗体。

4.2. 标本采集4.2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血。

4.3 标本要求：4.3.1 抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTA K2（㎎/dL）抗凝。

4.3.2 用手指末梢血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有冻疮，则主张采耳垂血。

4.4试验试剂：单克隆抗-D IgM多克隆试剂盒（BIOTEST）、4.5试验仪器血库专用离心机、光学显微镜（OLYMPUS）4.6试验步骤4.6.1在干燥洁净的纸片检定卡上滴一滴Rh（D）IgM试剂。

4.6.2用0.9%氯化钠注射液，制备3%-5%被测红细胞悬液或全血一滴，滴在试剂上,混匀。

4.6.3轻轻晃动纸片，2分钟内观察结果。

凝集为阳性，未凝集为阴性。

4.6.4结果判定4.7.1操作过程中若发生血液渗漏、溅出等情况，需先用含有有效氯的消毒剂对污染部位和（或）物体表面进行消毒，再用流水清洗。

若操作人员不慎使待测血液进入皮肤，应挤压刺伤部位，使其出血后，用肥皂水或流动清水清洗，在对刺伤部位进行消毒。

如有必要需对其进行医学观察。

4.7.2纸片法，室温较高时，应防止水分蒸发，注意干燥的边缘和凝集的区别，以免干扰结果。

4.7.3有些红细胞，如自身免疫溶血病人和新生儿溶血病患儿的红细胞，常被免疫球蛋白致敏，利用本操作规程的方法检测较为困难，容易造成假阳性结果。

应根据病人临床诊断和其他实验室试验确定病情后，利用放散试验进行定型。

4.7.4为保证试验准确度，检测前的红细胞可用生理盐水洗1～3次，去除吸附在红细胞表面的血型物质（以溶解的红细胞基质、可溶性的抑制物、血浆蛋白及抗凝剂等成分），若连续两侧洗涤后上清液仍不完全清澈，这种红细胞不宜使用。

4.7.5检测后标本需置于2°～6°标本专用冰箱中保存至少7天。

4.7.6注意缗钱样凝集与凝集的区别。

4.7.7若患者确定为Rh（D）血型阴性，及时通知其主管医生，根据其主管医生医嘱，积极联系血站为其进行备血。