高效液相色谱图中出现的问题
高效液相色谱仪使用中常见问题及对策
高效液相色谱仪使用中常见问题及对策高效液相色谱（HPLC）作为一种分离技术和方法，目前已经发展到一个全新的阶段。
高精度的输液泵，应用广泛的色谱分离柱，低噪音、高灵敏度的各种检测器和功能强大的数据处理软件系统的出现，都推动了液相色谱技术的迅猛发展。
液相色谱仪正以它分辨率高、分析速度快和应用广泛的优点倍受仪器分析工作者的青睐，广泛地应用于医药卫生、环境监测、食品检测等领域。
作者本人从事液相色谱分析工作二十多年，应用HPLC技术在血药浓度、生物胺、核苷酸、蛋白质浓度测定等实际工作中，积累了许多的方法和经验，在这里与大家交流，希望能对同行们有所帮助和借鉴，共同促进液相色谱分析技术的发展。
1高效液相色谱仪的基本工作原理高效液相色谱仪如图1所示，是由溶液贮器、高压泵、进样系统、色谱分离柱、检测器和数据处理系统几部分组成。
高压泵从溶液贮器中抽走流动相，流经整个仪器系统，形成密闭的液体流路。
样品通过进样系统注入色谱分离柱，在柱内进行分离。
柱流出液进入检测器，使已被分离的组分逐一被检测器收集，并将响应值转变为电信号后经放大被数据处理系统记录色谱峰，通过数据处理系统对记录的峰值进行存储和计算[1]。
液相色谱仪是依靠色谱柱进行分离的。
研究证明：物质的色谱过程是指物质分子在相对运动的两相（液相和固相）中分配“平衡”的过程。
液相色谱是以具有吸附性质的硅胶颗粒为固定相，各种洗脱液为流动相。
当液体样品在载体流动相的推动下，在液-固两相间作相对运动时，由于各组分在两相中的分配系数（K）不同，则使各自的移动速度不同，即产生差速迁移。
各组分在两相间经过多次分配，从而达到使混合物分离的目的。
上式反映了物质在两相中进行吸附、解吸、再吸附、再解吸…过程中，由于在两相中浓度的不同，而存在分配系数上的差异。
既然分配系数及其差异是引起组分在液相色谱柱分离的根本原因，那么，必然地也会同色谱理论中可测宏观量之间存在着某种定量关系，事实上，色谱理论中通常用容量因子k’的概念来反映物质在两相中的分配关系：k’值可以非常方便地表达组分在两相的分配，又很容易从色谱实验数据中直接测得，是色谱理论中重要的基本参数之一[2]。
高效液相色谱出现杂峰_解释说明以及概述
高效液相色谱出现杂峰解释说明以及概述1. 引言1.1 概述在进行高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）分析的过程中，常常会出现不期望的杂峰。
这些杂峰可能来源于色谱柱、样品制备方法或仪器条件等多个方面的问题。
分析人员需要了解和掌握这些可能导致杂峰产生的原因，并采取相应的方法来鉴定和消除这些杂峰，以确保分析结果准确可靠。
1.2 文章结构本文将从以下几个方面来详细讨论高效液相色谱中出现杂峰的问题。
首先介绍高效液相色谱的原理及其在不同领域中的应用；然后探讨高效液相色谱分析中可能导致杂峰产生的主要原因，包括色谱柱问题、样品制备问题和仪器条件问题；接着介绍鉴定和消除这些杂峰的方法，包括优化色谱条件、改善样品预处理方法以及使用数据处理技术；最后得出结论。
1.3 目的本文旨在帮助读者深入了解高效液相色谱中出现杂峰的原因及其影响，并提供相应的鉴定和消除方法。
通过掌握这些知识，读者可以更好地进行高效液相色谱分析，避免或解决杂峰问题，提高分析准确性和可重复性。
2. 高效液相色谱部分的内容如下：高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种广泛应用于化学、生物化学、制药等领域的分析技术。
它基于样品中组分在固定填料上的差异分配行为，利用流动相的力量将物质分离并进行检测。
2.1 原理介绍高效液相色谱主要由四个基本组件构成：溶剂输送系统、样品进样器、色谱柱和检测器。
其中，溶剂输送系统会将流动相以一定的速率压入进样器，再通过色谱柱，最后到达检测器。
在流动相的作用下，待测样品被引入色谱柱中，并与填料表面发生相互作用。
这些填料通常是多孔吸附材料或者反相材料等。
不同成分因为在填料表面和流动相之间交换速度不同而被分离开来。
2.2 应用领域高效液相色谱广泛应用于各个领域，包括但不限于以下几个方面：- 化学品分析：HPLC可用于对有机化合物、无机物质、蛋白质和核酸等的检测和分析。
高效液相色谱峰出现的问题及原因
高效液相色谱峰出现的问题及原因
在高效液相色谱中，峰形状不对、峰分离不良、信号强度不稳定等一系列问题可能会出现，以下是一些常见的问题及其可能的原因：
1. 峰形不对：可能的原因包括色谱柱和流动相选择不当、流速太快或太慢、进样量过大或过小、进样溶液中有杂质或有沉淀等。
2. 峰分离不良：可能的原因包括色谱柱分离度不足、流速太快或太慢、温度不合适、进样量过大等。
3. 信号强度不稳定：可能的原因包括进样溶液中有杂质、进样器和检测器的灵敏度不稳定、流速不稳定等。
4. 前峰过宽或拖尾：可能的原因包括色谱柱老化、流速太快或太慢、流动相溶液中有杂质等。
5. 峰形对称度差：可能的原因包括色谱柱老化、流速太快或太慢、流动相溶液中有杂质等。
6. 峰峰高不稳定：可能的原因包括进样器和检测器的灵敏度不稳定、流速不稳定、进样量不稳定等。
7. 噪音过大：可能的原因包括进样器和检测器的灵敏度不稳定、进样器和检测器中有杂质、流动相溶液中有杂质等。
针对这些问题，可以尝试调整色谱柱和流动相的选择，优化进样条件，调整流速和温度等参数，确保仪器的正常运行和稳定性，还可以尝试使用其他检测器来验证结果，以找到问题的真正原因并解决。
高效液相色谱仪可能出现的安全问题
高效液相色谱仪可能出现的安全问题
高效液相色谱仪可能出现的安全问题包括：
1. 高压液相泵泄压：如果出现高压液相泵泄压，可能造成仪器破裂或爆炸，存在安全隐患。
2. 溶剂泄漏：由于高效液相色谱仪使用大量的有机溶剂，如果溶剂泄漏，可能导致化学品污染、火灾或爆炸等危险。
3. 热源问题：高效液相色谱仪中可能存在高温部件，如果操作不当或故障可能导致火灾或烫伤等安全问题。
4. 电源问题：高效液相色谱仪需要外部电源供电，如果电源线路不良或电气部件故障，可能导致电击、火灾等安全问题。
5. 毒性化学品：高效液相色谱仪的某些试剂可能具有毒性，如果操作不当或泄漏，可能对人体健康造成危害。
6. 辐射危害：一些高效液相色谱仪可能使用放射性标记物进行分析，如果处理不当可能导致辐射危害。
7. 仪器操作错误：如果操作人员不熟悉仪器的正确使用方法，可能导致意外事故，如溢液、碎裂试管等。
8. 不适当的仪器维护和保养：如果高效液相色谱仪没有定期进行维护和保养，仪器的性能和稳定性可能受到影响，存在安全隐患。
为了确保高效液相色谱仪的安全使用，操作人员需要接受专业的培训，并且在操作过程中严格按照操作规程进行操作。
此外，应定期维护和检查设备，确保设备的正常运行。
高效液相色谱出峰拖尾的原因
柱外死体积（如进样环、连接管等）中的流体扩散和混合可能导致峰形拖尾。优化柱外系统可减少此类效应。
化学或二次保留效应
如硅胶中的硅羟基与目标化合物发生二级作用，可能导致峰形拖尾。在流动相中加入适当的添加剂（如酸、碱或缓冲盐）可减少此类作用。
重金属污染
色谱柱中的重金属离子可能与样品中的某些化合物形成螯合物，导致峰形拖尾。选择低金属含量的色谱柱可减少此类问题。
流动相粘度过高
流动相粘度过高可能增加流动阻力，导致峰形拖尾。降低流动相粘度可改善峰形。
温度波动
色谱柱温度的变化可能影响化合物的保留时间和峰形。调整并稳定色载，出现峰形拖尾。减少进样量或稀释样品可改善峰形。
样品溶剂不合适
样品溶剂的极性大于流动相极性时，可能导致峰形拖尾。更换与流动相极性相近的溶剂溶解样品可解决问题。
高效液相色谱出峰拖尾的原因
原因
简要说明
柱筛板堵塞
可能由于流动相污染、样品溶液不干净或手动阀门操作不当导致。可通过反冲色谱柱或更换筛板解决。
流动相或样品污染
流动相或样品中的杂质可能导致峰拖尾。更换干净的流动相或样品可解决问题。
流动相pH值不合适
pH值过高或过低可能影响化合物的电离状态，导致峰形拖尾。调整流动相的pH值至合适范围可改善峰形。
样品中干扰物质
样品中的杂质或干扰物质可能与目标化合物竞争色谱柱上的吸附位点，导致峰拖尾。通过样品预处理去除干扰物质可解决问题。
色谱柱污染或塌陷
色谱柱长时间使用或维护不当可能导致污染或塌陷，影响峰形。清洗或更换色谱柱可恢复性能。
柱子失效
色谱柱的填料可能因老化、磨损等原因失效，导致峰拖尾。更换新的色谱柱可解决问题。
高效液相色谱技术中常见问题分析及解决方法
更换。
仪器管路液体泄漏是导致系统压力不稳定的最
常见情况。 漏液严重时,仪器自身会发出系统压力
过低的警报。 轻微泄漏则可用干燥的餐巾纸擦拭管
路外部,观察纸巾是否被渗入液体进行判断。 泄漏
孔璐璐,等:高效液相色谱技术中常见问题分析及解决方法
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可能由管路松动或管路损坏引起,对于前者,重新拧
1. 1. 1 样品前处理不当
样品前处理不当可能会产生鬼峰,一般源于两
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个途径:一是所用试剂被污染;二是测试容器不干
净。 鉴别起来比较简单:使用试剂稀释样品,如果待
测样品出峰明显减小而鬼峰变化不大,则鬼峰源自
试剂污染。 如果洁净容器后重新检测鬼峰消失,则
鬼峰源自容器的污染。
1. 1. 2 流动相污染
的空气。 这种情况可预先将流动相进行超声脱气处
每次补充流动相时以直接补给的方式,没有对贮液
理,然后再装入储液瓶中待用。 二是由于水相和有
瓶进行清洗更换,富集的污染物就会进入到仪器流
机相的物理化学性质存在差异,两者在相互混合时,
路中产生鬼峰。
增加了空气在两种流动相中的溶解度。 对于这种情
上述问题的解决方法是更换流动相,即使用干净
样品的相溶性,如没有特殊原因,一般选择流动相作
留以及色谱柱和仪器管路中污染物的富集。
为待测组分的溶剂,以降低由于待测样品在流动相
在不改变测试条件情况下,如果鬼峰每次有规
中溶解性差引入的空气量。
律地出现在色谱图的相同位置,则污染很可能来自
液相色谱仪采用动态混合器和静态混合器将不
于自动进样器端。 这时可将自动进样针和针座拆
Key words: high performance liquid chromatography; common problems; influence factors;
高效液相色谱仪使用过程中常见问题及其解决方法
８ ２００５．０５高效液相色谱仪使用过程中常见问题及其解决方法陈莲 高洪 肖啸（云南农业大学动物科学技术学院，云南 昆明 ６５０２０１）高效液相色谱（ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， ＨＰＬＣ）技术是近３０年发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离分析技术。
它既能用于微量组分的分析测定，又能用于大量的制备分离，手段灵活多样，其应用范围已超过其它各种分离方法，尤其在生化医药样品的分析分离、食品卫生安全检验等方面更能充分发挥它的特长，为推动这些领域的进步和发展作出了巨大贡献。
液相色谱在使用过程中常会出现一些影响分析结果的小问题，如果使用人员了解了常见问题及其成因和相关解决方法，能做到早预防勤维护，使分析结果保持较好的稳定性与较高的精确性。
１ 液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、色谱柱、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。
对于整个系统而言，色谱柱、泵和检测器是核心部件同时也是容易出事故的主要部件。
２ 常见问题及解决方法２．１ 针对柱压问题柱压变化是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的指标，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效高低、分离效果及保留时间等密切相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在５０ＰＳＩ（针对Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪）之间。
压力过高、过低及波动较大都属于柱压问题，但柱压的高低与色谱柱的种类、品牌、液相系统本身及使用的流动种类相关。
值得注意的是在使用梯度洗脱进柱压的平稳缓慢的变化是允许的。
一般而言，柱压变化最先考虑的是柱子，在排除柱子因素后再考虑其它因素。
在实际应用中常见柱压问题可从以下几个方面来考虑（见表１）。
２．２ 针对保留时间漂移的问题保留时间的改变是很多液相色谱仪使用者常碰到的问题，包括了保留时间的延长或缩短。
它的产生与很多因素有关，可从以下方面进行考虑（见表２）。
图１ 液相色谱仪工作系统及流程２００５．０５ ９更换新的色谱柱。
高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法
高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法1 色谱柱跑干了，处理方法：将贮液瓶装入重蒸水，首先按purge键，将柱前气柱排出，若无法排出，可将色谱柱前拆下，用注射器抽吸。
待柱前气体排空后，连接色谱柱，用水高低流速交替冲洗色谱柱，直至柱压稳定为止。
2.基线不稳，有静电，处理方法：检查接地是否良好。
3.峰面积变化非常大，处理方法：检查是否进样阀堵塞。
4.基线突然提高，变粗，处理方法：检查样品池能量，若低于正常值，说明检测器污染。
5.柱压变动范围较大，处理方法：多为进气泡。
高低流速交替冲洗。
6.柱效或峰形突然变差，处理方法：更换预柱。
7塔板数低：色谱柱选择不对，二次保留、峰形不好的影响8色谱柱易变性：色说柱选择不对，二次保留的影响9色谱柱寿命短：色谱柱选择不对，样品需预处理（PH<3或PH>7）10保留值变化：色谱柱平衡不够，流动相比例改变11出现新的干扰峰：初始分离不够或初始样品无代表性选择波长要从以下几个方面考虑：1. 检测波长要大于溶剂截止波长。
如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。
溶剂有强吸收后，基线抬高，减小检测的线性范围而且会加大基线噪声，对溶质的检测灵敏度下降。
2. 对各组分都要有适当的吸收。
一般是不可能做到的。
所以只要选择一个对大多数组分都有较大吸收的波长就可以了。
3. 外标法定量时，要选择被测组份最大吸收波长。
254nm 对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。
对饱和基团也有弱的吸收。
而对于常见的乙腈、甲醇的透过率很高。
是在不知道用什么波长时最理想的试验波长。
（一）涡流扩散（Eddy diffusion）流动相碰到较大的固体颗粒，就像流水碰到石头一样产生涡流。
如果柱装填得不均匀，有的部分松散或有细沟，则流动相的速度就快；有的部位结块或装直紧密则流就慢，多条流路有快有慢，就使区带变宽。
因此，固相载体的颗粒要小而均匀，装柱要松紧均一，这样涡流扩散小，柱效率高。
高效液相色谱使用过程中的常见问题及解决方法
高效液相色谱使用过程中的常见问题及解决方法2014-07-02高效液相色谱技术,HPLC 是近期发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离、分析技术.它既能用于微量组分的分析测定，又能用于大量的制备分离，灵活多样，应用范围已超过其它各种分离方法。
如果HPLC使用人员能在分析样品之时就熟悉常见的问题并加以解决，就能避免许多麻烦，让您在HPLC使用过程中轻松应对。
1 高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成(见图1)。
对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件，同时也是易出问题的主要部位。
2 高效液相色谱仪常见问题及解决方法高效液相色谱仪作为一种高精密仪器，如果在使用过程中操作不当的话,就容易导致一些问题，其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰形异常问题。
2.1 柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值，而是指压力波动范围在345kPa以内(在使用梯度洗脱时，柱压平稳、缓慢的变化是允许的)。
压力过高、过低都属于柱压问题。
2.1.1 压力过高这是高效液相色谱仪在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的情况。
此时，我们应该分段进行检查。
①首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。
处理方法：用30%的硝酸浸泡0.5h，在用超纯水冲洗干净。
如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，再检查。
②打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤头堵塞。
处理方法：将过滤头取出，用10%的异丙醇超声30min。
如果压力降至690kPa以下，过滤头正常，再检查。
③把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。
高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法
高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法1 高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。
对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。
2 常见问题及解决方法高效液相作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确操作的话，就容易导致一些问题。
其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。
2.1 柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（3.3 Bar）之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。
压力过高、过低都属于柱压问题。
2.1.1 压力过高这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。
此时，我们应该分段进行检查。
(1).首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。
处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。
如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查；(2).打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。
处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。
如果压力降至100PSI (6.7 Bar)以下，过滤白头正常，在检查；(3).把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。
处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。
如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。
假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。
这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。
高效液相色谱常见问题原因及处理方法
高效液相色谱法一．仪器的维护与常见问题处理若液相出现规律性基线波动，长时间不平稳可能原因是什么？快速解决方法：一般为仪器系统出现气泡，最好使用纯甲醇长时间冲洗系统（不少于3小时，特殊情况要12小时左右）柱压逐渐升高可能原因是什么？快速判断①色谱柱出现堵塞②针座堵塞③进样针出现堵塞④系统管路中有未冲洗干净的盐⑤滤芯脏了解决方法①色谱柱出现堵塞：一种是将堵塞了色谱柱的位置拆卸，取出里面的筛网用水或甲醇超解（不建议采用，除非没有其他方法）另一种是将堵塞一头色谱柱链接在仪器上另一头不要链接，先用10%甲醇根据色谱柱柱压调节流速冲洗一小时左右，然后换成纯甲醇再以此方法继续冲洗，根据其柱压随时调整流速。
②针座堵塞与进样针出现堵塞：情况不严重则将它们拆卸后用水超解几分钟就可以了，若堵塞严重只有更换新的（堵塞不代表不能用，若无明显的质量损坏如：变形，滑口，开裂等，后续修好后还能做备件使用）③系统管路中有未冲洗干净的盐：用水或10%异丙醇对系统冲洗，冲洗后柱压正常，则可正常使用。
（注意不建议对系统反冲洗，会造成管路中的残留盐类物质重新回到系统中造成二次堵塞。
）④滤芯脏了：更换滤芯若出现保留时间飘移可能原因是什么？快速判断原因：①流动相混合不均匀②柱温不稳③压力不稳④密封圈松动⑤对于是四元泵的液相，其比例阀区域有堵塞情况（流动相是按比例配置，若比例阀区域堵塞，进样第一针时，可能有一个阀只进入25%另一个阀则是75%，进样第二针时则会变成一个阀进入20%，另一个阀80%）快速解决方法：①流动相重新配置，并按要求混匀②保证环境温度与仪器设定温度相差不大并稳定③系统冲洗平衡后方能实验④更换或调整密封圈⑤将出现堵塞区域的设备进行超声清洗。
1.气相检验化学残留：对照品重复性必须符合要求，但供试品重复性不做要求（上海海尼是对照品重复性必须符合要求，但配置两个供试品，各进一针不计算重复性。
目前海陵是对照品与供试品都要计算重复性）液相进样针无法正常采集?解决方法：一般为仪器机械故障，若进样器显示信号一直为红色，可能是进样针损坏或机械臂故障。
高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法
每天用足够的时间来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！------ 一定得做！新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。
并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。
卡套柱的安装（不加预柱）1．将卡套架套入柱芯2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夹套（见左图）3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片4．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧5．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端6．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手注意：使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。
不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。
卡套柱的安装（加预柱）1．将卡套架套入柱芯2．将两片夹套片嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于柱芯（见左图）3．将已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高过夹套片4．将"子弹头"预柱放入卡套片内5．将卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手拧紧6．然后依同样的顺序连接好柱子的另一端7．连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片（同时可以修补色谱柱）注意：在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前，应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗，而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。
1．将修补工具中的2套入柱芯的顶端2．将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中，并顺时针方向旋转到旋紧3．一手握柱芯，另一只手轻轻地向外拉3，取出柱芯顶端的滤网4．用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料5．将新的填料用甲醇润湿，然后填入挖去的部位，压平6．照（左图）装上新的玻璃棉滤网，并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端7．柱芯顶端套上2，然后参照（左图）将滤网放入8．压紧，然后取下2，再用4将滤网的边缘压平平衡色谱柱反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。
液相色谱使用注意及保养
高效液相色谱(HPLC)使用中常见故障及解决方法（一）峰型异常问题峰型问题是液相的主要问题，在做液相过程中，我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型，对于各种各样的异常峰，要区别对待，从主要问题出发，一个一个加以解决。
1、色谱图中未出峰。
解决方法：系统未进样或样品分解；泵未输液或流动相使用不正确；检测器设置不正确；针对以上情况成因作相应调整即可。
2、一个峰或几个峰是负峰。
解决方法：流动相吸收本底高；进样过程中进入空气；样品组分的吸收低于流动相。
3、所有峰均为负峰。
解决方法：信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒；光学装置尚未达到平衡。
4、所有峰均为宽峰。
解决方法：系统未达到平衡；溶解样品的溶剂极性比流动相差很多；色谱柱尺寸及类型选择不正确；色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；温度变化造成的影响。
、5、所出峰比预想的小。
解决方法：样品黏度过大；进样品故障或进样体积误差；检测器设置不正确．定量环体积不正确；检测池污染；检测器灯出现问题。
6、出现双峰或肩峰。
解决方法：进样量过大；样品浓度过高；保护柱或色谱柱柱头堵塞；保护拄或色谱柱污染或失效；柱塌陷或形成短通道。
7、前伸峰。
解决方法：进样量或样品浓度高；溶解样品的溶剂较流动相极性强；保护柱或色谱柱污染或失效。
8、。
解决方法：柱超载，降低样品量；增加柱直径采用较高容量的固定相；峰干扰，对样品进行清洁过滤；调整流动相；硅羟基作用，加入三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值；柱内烧结不锈钢失效，更换烧结不锈钢；加在线过滤器，对样品进行过滤；死体积或柱外体积过大，将连接点降至最低；尽可能使用内径较细的连接管；柱效下降，更换柱子；采用保护柱，对柱子进行再生。
9、出现平头峰。
解决方法：检测器设置不正确；进样体积太大或样品浓度太高。
10、出现鬼峰。
解决方法：进样阀残余峰，在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统；样品中存在未知物，改进样品的预处理；流动相污染，更换新流动相，尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤；尽可能使用HPLC级试剂；流路中有小的气泡，打开Purge阀，加大流速排除。
高效液相色谱基线的各种问题汇总
高效液相色谱基线的各种问题L、基线漂移原因解决方法1、柱温波动。
（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。
通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。
）1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图2、流动相不均匀。
（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。
）2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。
流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。
3、流通池被污染或有气体3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。
如有需要，可以用1N的硝酸。
（不要用盐酸）4、检测器出口阻塞。
（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）4、取出阻塞物或更换管子。
参考检测器手册更换流通池窗。
5、流动相配比不当或流速变化5、更改配比或流速。
为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。
6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时6、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。
7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成7、检查流动相的组成。
使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。
8、使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。
9、使用循环溶剂，但检测器未调整。
9、重新设定基线。
当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。
10、检测器没有设定在最大吸收波长处。
10、将波长调整至最大吸收波长处M、基线噪音（规则的）原因解决方法1、在流动相、检测器或泵中有空气1、流动相脱气。
冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。
2、漏液图2、见第三部分。
检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。
如有必要，更换泵密封。
3、流动相混合不完全3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）4、减少差异或加上热交换器5、在同一条线上有其他电子设备5、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。
高效液相色谱法的常见问题及解决方法
高效液相色谱法的常见问题及解决方法高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法(正相与反相)、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法，这些方法在使用的过程中往往会遇到诸如鬼峰、基线漂移、拖尾、分叉峰、保留时间漂移、柱压过高等系列问题，如何解决这些问题呢?1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?如何解决?关于漂移问题：①温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定;②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等;③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡;关于快速变化问题①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定;②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出;③流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合;2.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子;②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子;③可能柱超载，减少进样量;3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法①样品量不足，解决办法为增加样品量;②样品未从柱子中流出。
可根据样品的化学性质改变流动相或柱子;③样品与检测器不匹配。
根据样品化学性质调整波长或改换检测器;④检测器衰减太多。
调整衰减即可;⑤检测器时间常数太大，解决办法为降低时间参数;⑥检测器池窗污染。
解决办法为清洗池窗;⑦检测池中有气泡。
解决办法为排气;⑧记录仪测压范围不当。
调整电压范围即可;⑨流动相流量不合适。
调整流速即可;⑩检测器与记录仪超出校正曲线。
解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。
4.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在?如何解决?①泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理;②比例阀失效，更换比例阀即可;③泵密封垫损坏，更换密封垫即可;④溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法;⑤系统检漏，找出漏点，密封即可;⑥梯度洗脱，这时压力波动是正常的。
高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法
高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法1色谱柱跑干了，处理方法：将贮液瓶装入重蒸水，首先按purge键，将柱前气柱排出，若无法排出，可将色谱柱前拆下，用注射器抽吸。
待柱前气体排空后，连接色谱柱，用水高低流速交替冲洗色谱柱，直至柱压稳定为止。
2.基线不稳，有静电，处理方法：检查接地是否良好。
3.峰面积变化非常大，处理方法：检查是否进样阀堵塞。
4.基线突然提高，变粗，处理方法：检查样品池能量，若低于正常值，说明检测器污染。
5.柱压变动范围较大，处理方法：多为进气泡。
高低流速交替冲洗。
6.柱效或峰形突然变差，处理方法：更换预柱。
7塔板数低：色谱柱选择不对，二次保留、峰形不好的影响8色谱柱易变性：色说柱选择不对，二次保留的影响9色谱柱寿命短：色谱柱选择不对，样品需预处理(PH 3或PH 7)10保留值变化：色谱柱平衡不够，流动相比例改变11出现新的干扰峰：初始分离不够或初始样品无代表性选择波长要从以下几个方面考虑：1.检测波长要大于溶剂截止波长。
如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。
溶剂有强吸收后，基线抬高，减小检测的线性范围而且会加大基线噪声，对溶质的检测灵敏度下降。
2.对各组分都要有适当的吸收。
一般是不可能做到的。
所以只要选择一个对大多数组分都有较大吸收的波长就可以了。
3.外标法定量时，要选择被测组份最大吸收波长。
254nm对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。
对饱和基团也有弱的吸收。
而对于常见的乙腈、甲醇的透过率很高。
是在不知道用什么波长时最理想的试验波长。
(一)涡流扩散(Eddy diffusion)流动相碰到较大的固体颗粒，就像流水碰到石头一样产生涡流。
如果柱装填得不均匀，有的部分松散或有细沟，则流动相的速度就快；有的部位结块或装直紧密则流就慢，多条流路有快有慢，就使区带变宽。
因此，固相载体的颗粒要小而均匀，装柱要松紧均一，这样涡流扩散小，柱效率高。
(二)分子扩散(Molecular diffusion)分子扩散就是物质分子由浓度高的区域向浓度低的区域运动，也称纵向分子扩散。
高效液相色谱仪器故障的诊断及其维修
高效液相色谱仪器故障的诊断及其维修液相色谱仪器是一种广泛应用于化学、生物和医药等领域的分离和分析仪器。
然而，由于长期使用或操作不当等原因，液相色谱仪器可能会出现故障。
本文将介绍一些常见的液相色谱仪器故障，并提供诊断和维修方法。
1. 压力异常当液相色谱仪器出现压力异常时，可能是由于柱堵塞或柱压力不足等原因引起的。
首先，可以检查柱是否堵塞，可以通过更换柱或者清洗柱来解决。
另外，也需要检查柱前的过滤器是否堵塞，如果是，则需要更换过滤器。
2. 泵故障液相色谱仪器的泵可能会出现泵头堵塞或密封件损坏等故障。
当出现这种情况时，需要检查泵头是否堵塞，并清洗或更换泵头。
另外，也需要检查泵的密封件是否完好，如果密封件损坏，则需要更换密封件。
3. 检测器信号异常检测器信号异常可能是由于检测器灯管老化或污染、检测器电路故障等原因引起的。
当出现这种情况时，可以先清洗检测器灯管或更换灯管；同时，也需要检查检测器电路是否正常，如果电路故障，则需要修复或更换电路。
总的来说，液相色谱仪器的故障诊断和维修需要具备一定的专业知识和技能。
在进行维修前，建议先查阅液相色谱仪器的使用说明书，了解其工作原理和结构，以便更好地诊断和解决故障。
同时，定期对液相色谱仪器进行维护和保养，可以有效地减少故障的发生，延长仪器的使用寿命。
液相色谱仪器（HPLC）是一种高效、精确的分析仪器，在化学、生物、药学等领域都有着广泛的应用。
然而，由于长期使用、操作不当或者设备老化等原因，液相色谱仪器也会出现各种故障。
在这种情况下，对仪器进行准确的故障诊断，并采取适当的维修措施，是保障仪器正常运行的关键之一。
4. 色谱柱问题液相色谱仪器中的色谱柱是重要的部件，若出现问题则会导致分离效果下降。
柱子可能会发生堵塞、损坏或老化，而影响分离效果。
如果怀疑柱子的问题导致了色谱仪器的故障，第一步就是检查柱子的状态。
可以通过更换柱子或者清洗柱子来解决这一问题。
此外，也要检查柱前的过滤器是否正常运行，如果过滤器故障，也会影响色谱仪器的运行。
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高效液相色谱谱图的各种问题
液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。
其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决;而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。
对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。
A、峰拖尾
原因解决方法
1、筛板阻塞1、a、反冲色谱柱
b、更换进口筛板
c、更换色谱柱
2、色谱柱塌陷2、填充色谱柱
3、干扰峰3、a、使用更长的色谱柱
b、改变流动相或更换色谱柱
4、流动相PH选择错误4、调整PH值。
对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰
5、样品与填料表面的溶化点发生反应图5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂
b、更改色谱柱
B、峰前延
原因解决方法
1、柱温低1、升高柱温
2、样品溶剂选择不恰当2、使用流动相作为样品溶剂
3、样品过载3、降低样品含量
4、色谱柱损坏4、见A1、A2
C、峰分叉
原因解决方法
1、保护柱或分析柱污染图
1、取下保护柱再进行分析。
如果必要更换保护柱。
如果分析柱阻塞，拆下来清洗。
如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。
如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。
2、样品溶剂不溶于流动相2、改变样品溶剂。
如果可能采取流动相作为样品溶剂。
D、峰变形
原因解决方法
1、样品过载1、减少样品载量
E、早出的峰变形
原因解决方法
1、样品溶剂选择不恰当1、a、减少进样体积
b、运用低极性样品溶剂
F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
原因解决方法
1、柱外效应1、a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路)
b、使用小体积的流通池
G、K’增加时，脱尾更严重
原因解决方法
1、二级保留效应，反相模式1、a、加入三乙胺(或碱性样品)
b、加入乙酸(或酸性样品)
c、加入盐或缓冲剂(或离子化样品)
d、更换一支柱子
2、二级保留效应，正相模式2、a、加入三乙胺(或碱性样品)
b、加入乙酸(或酸性样品)
c、加入水(或多官能团化合物)
d、试用另一种方法
3、二级保留效应，离子对3、加入三乙胺(或碱性样品)
H、酸性或碱性化合物的峰拖尾
原因解决方法
1、缓冲不合适1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液
b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液
I、额外的峰
原因解决方法
1、样品中有其他组份1、正常
2、前一次进样的洗脱峰2、a、增加运行时间或梯度斜率
b、提高流速
3、空位或鬼峰3、a、检查流动相是否纯净
b、使用流动相作为样品溶剂
c、减少进样体积
J、保留时间波动
原因解决方法
1、温控不当1、调好柱温
2、流动相组分变化2、防止变化(蒸发、反应等)
3、色谱柱没有平衡3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱K、保留时间不断变化
原因解决方法
1、流速变化1、重新设定流速
2、泵中有气泡2、从泵中除去气泡
3、流动相选择不恰当3、a、更换合适的流动相
b、选择合适的混合流动相。