实验二 微生物接种技术电子教案
《接种方法》教学设计
《接种方法》教学设计一、教学目标了解微生物接种的工具和基本方法二、教学重难点平板划线法、涂布平板法三、教学过程导入新课微生物培养的目的就是为了获得纯净的微生物，由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。
纯培养的步骤包括配制培养基、灭菌（培养基和器具）、微生物接种、分离、恒温箱中培养。
我们这节课就一起来了解一下微生物常用的接种方法。
微生物接种指在无菌条件下将微生物或含菌材料转移到合适其生长繁殖的培养基中的过程。
接种工具：1）玻璃涂布器——涂布接种2）接种针——穿刺接种3）接种环——划线接种微生物方法1、划线接种这是最常用的接种方法。
即在固体培养基表面作来回线形的移动，就可达到接种的作用。
斜面培养法：用琼脂等固体培养基在试管中制成斜面，在此面上对微生物进行培养称为斜面培养。
这种培养可以充分观察所培养的微生物的生长状态，并且接种方便。
（视频展示）平板划线法：用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而达到纯化分离微生物的方法。
通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，称为菌落。
2、涂布接种将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。
通过涂布器在琼脂固体培养基表面的操作，使菌种分散到培养基的表面。
可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。
（视频展示）3、穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。
用的接种工具是接种针;用的培养基一般是半固体培养基。
接种时，用接种针(尖部挺直的)蘸取少量菌液，自固体深层培养基表面的中心点垂直穿刺，直到底部，保持接种线整齐。
接种完毕后，静置培养，可根据穿刺部分菌落的生长和扩散状况来判断该微生物的运动性能和对氧气的需求状况。
在微生物接种过程中的注意事项：1、保证器具的灭菌。
微生物的无菌操作及接种技术PPT学习教案
超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施，以 保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供某些程 度的保护以防污染并保护操作者。
原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空 气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流方向来分 ，现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式 。
第28页/共39页
2、常用的接种方法
※划线接种
目的：使混合的细菌呈单个分散生长 ，形成 单个菌 落，以 便获得 纯菌、 活菌计 数。 方法：
★ 分区划线法：适用于含菌量较多的标 本 ★ 连续划线法：适用于含菌量较少的标 本
第29页/共39页
2、常用的接种方法
※划线接种
第30页/共39页
2、常用的接种方法
精棉球将手擦干净。 （5）缓冲室内换上洗净并经紫外线灯照射过的工作衣、帽、
鞋。
第14页/共39页
无菌操作要求
（1）在操作中不应有大幅度或快速的动作； （2）使用玻璃器皿应轻取轻放。 （3）在火焰上方操作； （4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌； （5）在接种培养物时，协作应轻、准。 （6）不能用嘴直接吸吹吸管。 （7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液
第10页/共39页
垂直流超净工作台
垂直流超净工作台
水平流超净工作台
第11页/共39页
无菌环境的要求与保持
超净台的使用与维护
风速保持在0.32-0.48米/秒 使用前打开紫外灯照射40~60min 开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过氧
乙酸喷洒擦拭消毒工作台面。 使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布檫拭； 请保持超净台整洁、干燥，不要堆积杂物； 使用完毕擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯
《微生物接种和传代的无菌技术》 教学设计
《微生物接种和传代的无菌技术》教学设计一、教学目标1、知识目标（1）学生能够理解无菌技术的概念和重要性。
（2）掌握微生物接种和传代的基本原理和操作流程。
2、能力目标（1）学生能够熟练进行微生物接种和传代的无菌操作，培养实践动手能力。
（2）通过实验操作，提高学生观察、分析和解决问题的能力。
3、情感目标（1）培养学生严谨的科学态度和团队合作精神。
（2）增强学生对微生物学实验的兴趣和探索欲望。
二、教学重难点1、教学重点（1）无菌操作的基本技术和要点，包括消毒、灭菌方法的选择和应用。
（2）微生物接种和传代的具体操作步骤，如平板划线法、斜面接种法等。
2、教学难点（1）如何确保无菌操作的准确性和有效性，避免污染。
（2）理解微生物在不同培养基上的生长特性和传代规律。
三、教学方法1、讲授法讲解无菌技术的概念、原理和操作要点，使学生对理论知识有初步的了解。
2、演示法教师进行现场演示，让学生直观地观察正确的操作方法和流程。
3、实践法学生分组进行实验操作，亲身体验微生物接种和传代的过程，在实践中掌握无菌技术。
四、教学准备1、实验材料（1）菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
（2）培养基：营养琼脂平板、斜面培养基等。
（3）器材：接种环、酒精灯、培养箱、超净工作台等。
2、教学资源（1）多媒体课件，包括图片、视频等，展示无菌操作的过程和注意事项。
（2）实验指导手册，详细说明实验步骤和要求。
五、教学过程1、导入（5 分钟）通过展示一些微生物污染导致实验失败的案例，引发学生对无菌技术重要性的思考，从而导入本节课的主题——微生物接种和传代的无菌技术。
2、知识讲解（20 分钟）（1）介绍无菌技术的概念和意义，强调在微生物实验中防止杂菌污染的重要性。
（2）讲解常用的消毒和灭菌方法，如高温灭菌、紫外线灭菌、化学消毒等，并比较它们的优缺点和适用范围。
（3）详细阐述微生物接种和传代的基本原理，包括平板划线法、斜面接种法等的原理和目的。
3、演示操作（15 分钟）教师在超净工作台内进行微生物接种和传代的演示操作，边操作边讲解操作要点和注意事项，如接种环的灼烧灭菌、无菌操作的姿势和手法等。
《微生物接种和传代的无菌技术》 学历案
《微生物接种和传代的无菌技术》学历案一、学习目标1、理解无菌技术的概念和重要性。
2、掌握微生物接种和传代过程中的无菌操作方法和步骤。
3、学会正确使用无菌操作所需的仪器和设备。
4、培养严谨的科学态度和无菌操作意识。
二、学习重难点1、重点（1）无菌操作的基本原理和方法。
（2）微生物接种和传代的具体操作流程。
2、难点（1）如何在操作过程中始终保持无菌状态。
（2）解决可能出现的污染问题及应对措施。
三、知识准备1、微生物的基本知识了解微生物的形态、结构、生长特性等，为后续的接种和传代操作奠定基础。
2、实验室安全知识熟悉实验室的安全规则，包括防火、防爆、防中毒等，确保实验过程中的人身安全。
四、学习过程1、无菌技术的概念和重要性（1）无菌技术是指在微生物实验操作过程中，防止微生物污染和防止微生物在实验过程中发生交叉污染的技术。
（2）重要性：微生物实验的结果准确性和可靠性取决于无菌技术的严格执行。
如果在操作过程中引入了杂菌，将会导致实验结果的错误，甚至可能影响后续的研究和应用。
2、无菌操作所需的仪器和设备（1）超净工作台超净工作台是提供局部无菌环境的重要设备。
它通过高效过滤器过滤空气，形成无菌的工作区域。
在使用超净工作台前，需要提前开启紫外灯照射一段时间进行消毒，然后再开启风机进行通风。
（2）接种环和接种针接种环和接种针是用于挑取和转移微生物的工具。
通常由金属制成，在使用前需要在火焰上灼烧灭菌，冷却后再进行操作。
（3）培养皿和试管培养皿用于培养微生物，试管则常用于液体培养基的培养和保存菌种。
使用前需要进行高压蒸汽灭菌处理。
（4）酒精灯酒精灯用于在操作过程中对器械进行灼烧灭菌，同时也可以创造局部无菌的环境。
3、微生物接种的无菌操作方法和步骤（1）准备工作穿戴好实验服、口罩和手套。
对实验台面进行清洁和消毒。
将所需的仪器和设备摆放整齐，并检查其是否处于无菌状态。
（2）点燃酒精灯将酒精灯放置在合适的位置，点燃酒精灯，火焰周围形成一个相对无菌的区域。
实验微生物接种技术讲解
实验微生物接种技术讲解实验微生物接种技术讲解微生物接种篇一：实验微生物接种技术一、目的：学习微生物工作的基本接种方法，建立纯培养技术中的“无菌”概念，掌握无菌操作技术。
二、原理：所谓接种就是将一定量的纯种微生物在无菌操作条件下转移到另一已灭菌，并适宜于该菌生长繁殖所需的培养基上的过程。
本实验要求严格进行无菌操作，一般是在无菌操作台或在实验室内火焰旁进行。
根据不同的实验目的和培养方式，可以采用不同的接种工具和接种方法。
三、实验材料：斜面培养基、液体培养基、平板培养基、记号笔、酒精灯、接种针、消毒酒精、涂布棒等。
四、操作步骤（一）无菌操作菌种分离或移接工作应在无菌环境中进行，接种室、接种箱或超净工作台是常用的接种环境。
用前先清洁好卫生，再进行消毒处理。
可用紫外线灯和甲醛熏蒸的双重作用，或用3%来苏尔及其他表面消毒进行喷雾。
操作者的手应先用肥皂洗净，再用酒精棉球消毒；整个操作过程都要靠近酒精灯火焰；接种工具在用前和用后必须在灯焰上灭菌；棉塞不得乱放，操作中只能夹在手上；不能有跑、跳等力度大的动作，以免引起空气大振动而增加染菌机会。
（二）接种方法（1）斜面接种：从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方法。
此法用于好气性微生物的接种。
左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。
用右手先将棉塞拧转松动，再拿接种环，用右手的小指、无名指和手掌拨下棉塞并夹紧，同时将管口在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部，沿斜面划曲线或直线。
图1.斜面接种示意图（2）液体接种：由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。
操作与上法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。
如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种。
（3）穿刺接种：用接种针挑取菌种后，插入深层固体培养基内，（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法用于厌气性细菌接种、检查细菌的运动能力。
《药学微生物》2-2-2 实训 微生物的接种与纯培养技术
一、实训目的
接种与纯培养技术
ห้องสมุดไป่ตู้
熟悉无菌操作在微生物接种过程中的重要性。 掌握几种常用的微生物接种方法。 掌握微生物的培养方法。
二、实训原理
接种与纯培养技术
将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内 的过程叫做接种。
接种技术是生物科学研究中的一项最基本的操作技术。由于目 的不同，可采用不同的接种方法。如斜面接种、穿刺接种或三点 接种等，以获得生长良好的纯种微生物。
三、材料和用具
接种与纯培养技术
菌种：大肠杆菌斜面和菌悬液、啤酒酵母、产黄青霉。 试剂：营养琼脂斜面、肉汤蛋白胨培养液（试管）、营养琼脂平板、半 固体肉汤蛋白胨直立柱、PDA平板、PDA斜面。 用具及设备：接种环、接种针、涂布棒、试管、移液管、滴管、酒精灯 、恒温培养箱、超净工作台等。
四、准备工作
4．平板接种
接种与纯培养技术
（2）倾注平板法
③加样 用1ML无菌吸管分别吸取10-4，10-5，10-6稀释液1ml注入已编好 号的10-4，10-5，10-6号无菌培养皿中。
④倾注平板 将融化后冷至45℃左右（以手持三角瓶，不绝烫手为宜） 的琼脂培养基，向加有稀释液的各培养皿中分别倒入10～15ml,迅速旋 转培养皿，使培养基和稀释液充分混匀，水平放置，待其凝固后，倒置 于28～30℃恒温箱中培养。48～72h后，观察并记录各平板上菌落生长 和分布情况。确定哪个稀释度最合适。
接种与纯培养技术
①无菌室的里外两间均应安装日光灯和紫外线杀菌灯。紫外灯常用规格 为30W，吊装在经常工作位置的上方，距地面高度2.0～2.2M。 ②缓冲间内应设工作台供放置工作服、鞋、帽、口罩、消毒用药物、手 持式喷雾器等，并备有废物桶等。
(完整版)微生物的接种技术
微生物的接种技术1 目的1.1学习掌握微生物的几种接种技术1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节2 实验说明将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。
接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。
无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。
接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。
3 实验器材3.1 器械和用品酒精灯，玻璃铅笔，火柴，试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、移液管、三角型接种棒等接种工具。
3.2 菌种和培养基菌种：大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。
培养基：普通琼脂斜面和平板,营养肉汤,普通琼脂高层(直立柱)。
4 实验流程斜面接种法→液体接种法→固体接种法→穿刺接种法。
5 操作步骤5.1 斜面接种法斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种。
通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，肉汤中的纯培养物接种到斜面培养基上。
操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行，先点燃酒精灯。
将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在前，接种管在后，斜面向上管口对齐，应斜持试管呈45～0度角，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。
以右手在火焰旁转动两管棉塞，使其松动，以便接种时易于取出。
右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。
镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍，尤其是接镍铬丝的螺口部分，要彻底灼烧以免灭菌不彻底。
用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。
微生物的接种以及菌落和抗生素抑菌现象的观察(实验)-沪科版生物拓展型课程教案
微生物的接种以及菌落和抗生素抑菌现象的观察（实验）——沪科版生物拓展型课程教案实验目的1.掌握微生物的接种方法；2.观察不同微生物的菌落形态特征；3.了解抗生素抑菌现象。
实验材料1.培养基（营养琼脂、培养平板、葡萄糖琼脂、牛肉膏汁琼脂等）；2.动物模型；3.火柴棒或抽线器；4.吸管；5.无菌培养皿。
实验步骤实验一：微生物接种1.消毒液将动物模型表面消毒；2.用火柴头或抽线器取出一小块细菌样本并放入营养琼脂平板中；3.用吸管将菌液均匀地涂抹在琼脂平板上；4.拧紧涂抹盖裔，倒置培养皿，放入恒温培养箱；5.培养48小时后，观察菌落。
实验二：菌落观察1.看到形成的菌落后，用气锅钳取出一小块菌落；2.将其移到葡萄糖琼脂平板或牛肉膏汁琼脂平板上；3.在实验后，观察菌落的形态特征。
实验三：抗生素抑菌现象观察1.换取2个营养琼脂平板；2.将其中一个平板中的菌液均匀涂抹在另一个平板上；3.在其中一个培养皿上加入抗生素；4.将两个培养皿放入恒温培养箱中实验后，观察不同培养皿中菌落的变化。
实验记录实验一：微生物接种 |取样地点|微生物名称|菌落形态| |:—:|:—:|:—:| |嗓子|金黄色葡萄球菌|圆形、凸起、呈金黄色| |手指|大肠杆菌|圆形、平坦、边缘整齐| |鼻子|鼻炎链球菌|圆形、平坦、灰白色|实验二：菌落观察|菌落名称|菌落特征| |:—:|:—:| |金黄色葡萄球菌|成群分布，大小相同、呈圆形、表面光洁、发黄| |大肠杆菌|大小不一、形态不规则| |鼻炎链球菌|成对或链状出现，呈灰白色|实验三：抗生素抑菌现象观察 |培养皿|菌落形态| |:—:|:—:| |无抗生素平板|菌落较为茂密| |加抗生素平板|只有少量生长|实验分析实验结果表明，菌落形成和抗生素的抑菌作用涉及诸多因素，其中最为关键的是微生物自身特征和营养环境。
在微生物接种实验中，从不同部位采集的微生物形态差异明显。
金黄色葡萄球菌菌落颜色呈现金黄色、大肠杆菌菌落呈现大小不一、形态不规则，而鼻炎链球菌则在平板上成对或链装呈现灰白色。
微生物学实验教案2 - 赣南医学院
赣南医学院实验课教案专业临床医学本科课程医学微生物学任课教师二00 学年度第学期一、教学目的与要求：1、掌握细菌的分离培养方法及无菌操作技术，熟悉细菌的常用培养方法。
2、初步掌握高压蒸气灭菌器的使用方法及注意事项；证实煮沸消毒方法和紫外线杀菌的效果，并了解影响其效果的因素；3、证实常用消毒剂的抑菌作用二、教学重点、难点：1、细菌的分离接种法——平板划线分离法2、纯种细菌接种法3、紫外线杀菌试验4、常用消毒剂的抑菌作用三、教学方法设计：讲解+实验+示教四、实验教学准备：1、培养基：普通平板、斜面培养基、液体培养基、半固体培养基；2、高压蒸汽灭菌器、紫外线灯罩、蜡笔、酒精灯、接种环、接种针等3、葡萄球菌液体培养物；大肠杆菌液体培养物4、常用消毒剂：0．1％新洁尔灭、2％红汞，、1％龙紫、2.5％碘酒五、实验步骤：(一) 实验讲解1.举例说明分离纯种细菌的重要性及常用分离接种方法2.介绍常用的纯种细菌接种法及其主要用途3. 图示讲解并示范操作细菌平板划线分离法的过程操作注意事项：无菌操作；划线时接种环与平碟成30～40度角；划线要连续、平行、轻快；分区划线4.图示讲解并示范操作细菌斜面培养基接种法的过程操作注意事项：沿斜面的作蜿蜒划线5.图示讲解并示范操作细菌液体培养基接种法的过程操作注意事项：接种时，接种环应在近液面的管壁上轻轻研磨，不应直接插入液体中6.图示讲解并示范操作细菌半固体培养基接种法的过程操作注意事项：接种时沿半固体表面中心刺入，但不能插入管底，然后沿原穿刺线退出7.展示并讲解如何观察和描述菌落的主要特征及意义8.展示并讲解细菌在固体、液体、半固体培养基上的生长特点及结果意义9.介绍高压蒸汽灭菌器的使用方法、注意事项及主要用途10. 讲解并示范操作化学消毒剂的杀菌试验的过程及操作注意事项取液量要尽量一致，贴纸片时不要拖动，并提问设立生理盐水的作用11. 讲解并示范操作紫外线的消毒作用(二) 学生做实验或看示教等1.学生按要求取实验材料并作标记2.分组操作进行平板划线分离混合菌液3.分组操作进行斜面培养基接种纯种细菌4.分组操作进行液体培养基接种纯种细菌5.分组操作进行半固体培养基接种纯种细菌6.分组操作化学消毒剂的杀菌试验取液量要尽量一致，贴纸片时不要拖动，并提问设立生理盐水的作用7.将培养基集中放置进行培养8.完成实验报告六、实验报告：1．记录紫外线杀菌结果并分析2. 记录化学消毒剂的杀菌效果并简要分析3. 记录不同细菌在普通培养基的菌落特征。
实验微生物接种技术
实验微生物接种技术一、实验实训目的学习微生物工作的基本接种方法，建立“无菌“概念”，掌握无菌操作技术。
二、实验实训材料1．菌种大肠杆菌斜面菌种。
2．器材牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养基、接种环（针）、酒精灯、酒精棉球。
三、实验实训内容及方法（一）无菌操作菌种分离或移接工作应在无菌环境中进行，接种室、接种箱或超净工作台是常用的接种环境。
用前先清洁好卫生，再进行消毒处理。
可用紫外线灯。
操作者的手应先用肥皂洗净，再用酒精棉球消毒；整个操作过程都要靠近酒精灯火焰；接种工具在用前和用后必须在灯焰上灭菌；棉塞不得乱放，操作中只能夹在手上；不能有跑、跳等力度大的动作，以免引起空气大振动而增加染菌机会。
（二）接种方法1．接种前，需在待接种试管上贴好标签，注明菌名及接种日期。
接种最好在无菌室或无菌箱内进行，若无此条件，可在较清洁密闭的室内进行。
室内应事先消毒，桌面要清洁，除去灰尘和杂物。
2.点燃酒精灯，灯焰周围约1～2cm处的空间为无菌区，所以在酒精灯灯焰旁进行无菌操作法接种，可避免杂菌污染。
3.将菌种及接种用的斜面培养基（即两支斜面试管）同时握在左手中，使中指位于两试管之间。
管内斜面向上，两试管管口相互平行，两支试管处于接近水平位置，用右手的小指、无名指及手掌在火焰旁同时拔去两支试管的棉塞，并使管口在火焰上通过，以烧死试管口的杂菌。
随后把管口移至火焰近旁约1-2cm 处。
4.右手拿接种环，先垂直、后水平方向把接种环放在火焰上灼烧。
凡是需进入试管的杆部分均应通过火焰灼烧，下端的环须烧红，以彻底灭菌。
灼烧时，应把环放在酒精灯之外焰（氧化焰）上，因外焰温度高，易于烧红。
5.将烧过的接种环伸入菌种管内，先使环接触斜面上端的培养基或试管壁，使接种环充分冷却，待培养基不再被接种环融化时，即可将接种环伸向斜面中部蘸取少量菌体，然后小心地将接种环从试管内抽出。
注意不能让环接触管壁和管口。
取出后，接种环不能通过火焰，在火焰旁抽出并迅速伸入新培养基斜面管内，在斜面下1/5处，由下至上轻轻划线。
《微生物接种和传代的无菌技术》 学历案
《微生物接种和传代的无菌技术》学历案一、学习目标1、理解微生物接种和传代中无菌技术的重要性。
2、掌握微生物接种和传代过程中的无菌操作方法和要点。
3、能够正确进行微生物的接种和传代实验，并在实践中严格遵守无菌操作规范。
二、学习重难点1、重点（1）无菌操作的概念和原则。
（2）微生物接种和传代的具体操作步骤及注意事项。
2、难点（1）如何在实际操作中确保无菌环境的维持。
（2）理解并掌握不同类型微生物接种和传代方法的差异。
三、学习过程（一）知识铺垫1、微生物的基本概念和特点微生物是指肉眼难以看清，需要借助显微镜才能观察到的微小生物。
它们包括细菌、真菌、病毒、支原体、衣原体等。
微生物具有体积小、结构简单、生长繁殖快、代谢类型多样等特点。
2、无菌技术的概念无菌技术是指在操作过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术。
（二）无菌操作的原则1、环境无菌操作应在经过消毒处理、洁净且相对封闭的环境中进行，如无菌室、超净工作台等。
2、人员无菌操作人员需做好自身清洁，穿戴无菌衣帽、口罩和手套。
3、物品无菌使用的器具、培养基等必须经过灭菌处理，确保无菌。
4、操作无菌操作过程应规范、迅速，避免微生物的污染。
（三）微生物接种的无菌技术1、接种工具的准备常见的接种工具包括接种环、接种针、移液管等。
这些工具在使用前需要进行灭菌处理，通常采用高温灼烧或高压蒸汽灭菌的方法。
2、接种方法（1）平板划线法通过在平板培养基表面多次划线，将微生物逐步稀释，从而分离得到单个菌落。
操作时，接种环在火焰上灼烧灭菌，冷却后蘸取菌液，在平板上进行划线。
每次划线后，接种环都要再次灼烧灭菌，冷却后再进行下一次划线。
（2）涂布平板法将菌液均匀涂布在平板培养基表面。
先将适量菌液加入无菌培养皿中，然后用无菌涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面。
（3）斜面接种法用于保存菌种或扩大培养。
将待接种的菌种用接种环或接种针从原菌种斜面上挑取少量菌苔，在新的斜面培养基上自下而上划线接种。
1.2微生物接种
微生物接种技术实验目的•学习无菌操作技术。
•学习微生物划线培养技术。
实验原理自然界中各种微生物混杂生活在一起，即使取很少量的样品也是许多微生物共存的群体。
人们要研究各种微生物的特性，首先需使该微生物处于纯培养状态。
也就是说培养物中所有细胞只是微生物的某一种或株，他们有着共同的来源，是同一细胞的后代。
▪为了获得单菌落，实验室常用的方法是平板划线分离法。
平板划线分离法可分为连续划线和分区划线，但两种方法的主导思想都是将样品由浓变稀，从多组分的混合样品最后得到较纯的单菌落。
▪将平板划线分离得到的单菌落接种到斜面上，可进一步观察其生长特征。
微生物在斜面培养基上生长，可以呈丝线状、刺毛状、念珠状、舒展状、树枝状、或假根状。
培养特征可以作为微生物分类鉴定的指征之一，并能为识别纯培养是否被污染作为参考。
平板划线分离连续划线分区划线酒精灯接种棒（接种环）接种工具及灭菌方法酒精灯火焰外焰灼烧接种棒金属部分（接种棒其他部分用酒精棉擦过）灭菌并冷却的接种环蘸取少量微生物接种到新鲜培养基1、灼烧接种棒灭菌，在酒精中冷却无菌操作无菌操作2、挑取一环细菌（少量）右手持接种环，在火焰上灭菌，待稍冷却后挑取样品，左手拿皿底，右手控制接种环以一定倾角与培养基接触，连续地在培养基上来回划线，从培养基的一端到另一端。
在末端处划线时可将平皿作一定角度的倾斜，使接种环接触到培养基。
3、连续划线培养无菌操作第一次挑取微生物划线后灼烧接种环灭菌，以后每次从前一次线条里向外划线，划线后灼烧接种环。
一般第三区出现单菌落4、分区划线培养法无菌操作连续划线和分区划线的酵母菌、插片法（产孢微生物）51. 接种：用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在琼脂平板上平行划线接种。
2. 插片：用无菌镊子将灭菌盖玻片以约45°角插入琼脂内，插片数量5-10片。
a 、先在火焰旁挑取单菌落，然后左手持斜面试管，右手拔出试管帽后迅速烧灼管口。
6、斜面接种b 、试管帽夹于右手手心，将已挑菌的接种环伸入斜面试管，用环在斜面上自试管底部向上端轻轻地划一直线。
微生物接种方法-教学设计.
手段
借助图片、视频等多媒体手段
参考资料
①食品微生物学(食品科学与工程类专业用) 江汉湖 中国农业出版社 ②食品微生物学 董明盛、贾英民 中国轻工业出版社 ③现代食品微生物学实验技术 刘慧 中国轻工业出版社 ④食品微生物学检验 李松涛 中国计量出版社 ⑤食品微生物学 吕嘉枥 化学工业出版社 ⑥食品检验技术(微生物部分适合食品检验与质量控制技术专业) 刘 用成 中国轻工业出版社
教学设计食品微生物检测技术课程教学设计项目食品微生物检验技术基础学时20学时任务微生物接种方法学时学时知识点技能接种定义接种工具及方法
《食品微生物检测技术》课程教学设计
教学设计
项目
食品微生物检验技术基础 学时
20 学时
任务
微生物接种方法
学时
8 学时
知识点（技能 接种定义、接种工具及方
点）
法；无菌操作
实训中心
思考、讨论、总结
微生物接种方法及无菌
归纳
引导
多媒体课件
思考、总结
操作技术
微生物几种常用接种方
总结
法的异同及无菌操作技 讲授 多媒体课件、图片 听讲、思考
术要点
作业
无菌操作技术要点及划线法、点植法、涂布法和倾注法接种的注意事项
考核与评价 课堂表现、接种操作及培养结果、作业
教学设计
了解液体接种和穿刺接种等技术
积极进取，勤于思考，形成严谨、公正、客观的
态度素质目标
工作态度
具有团队精神，善于与人交流自己的想法
教学重点
教学条件要 求
接种方法及注意事项 无菌操作概念及技术
无菌操作技术 教学难点
教材、多媒体课件、视频、国家标准、网络资源、实训中心、检验用品与试剂、
微生物的接种技术(斜面接种和平板接种)
等。贴在距试管口约2-3cm的位置。（若用记号笔标记则不需标签）。
B、点燃酒精灯。
C、接种用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上。操作必须按无
菌操作法进行。
简述如下：
a.手持试管：
将菌种和待接斜面的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中，使中指位
建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节
2.实验说明
将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为 接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。无论微生物 的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行 接种。接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结 果就不可靠，影响下一步工作的进行。
3.实验器材
器械和用品酒精灯，火柴，试管架、接种环等接种工具 菌种和培养基菌种：
金黄色葡萄球菌；培养基：
普通xx斜面和平板
4.实验流程
准备XX斜面T斜面接种
准备XX平板T平板接种
5.操作步骤
（1）斜面接种
斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一支新鲜斜面 培养基上的一种接种方法。具体操作如下：
h.塞管塞取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。塞棉塞时不要 用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。i.将接种环灼烧灭菌。放下 接种环，再将棉花塞旋紧。
（2）平板接种
以中指、无名指和小指托住培养皿下盖底部，用虎口及食指扶住上盖，再 将斜面菌种管放于培养皿之上，以拇指压住。然后用接种环移取菌种按“Z”划
于两试管之间部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。
b.旋松管塞先用有于松动棉塞或塑料管盖，以便接种时拔出。
实验二 微生物接种技术
试验二微生物接种技术一、目标微生物接种技术就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新培养基上进扩大培养技术。
了解学习灭菌操作技术；掌握斜面接种技术。
二、原理接种就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）（图3-1）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新培养基上进扩大培养技术。
接种就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新培养基上进扩大培养技术。
我们要想得到大量菌种，适应生产，科研和教学要求，就要进行微生物接种，扩大菌种数量。
接种因使用不一样容器、不一样培养基，达成不一样目标，而有不一样接种方法，不过它们基础要求是相同。
通常接种全部应在空气经过消毒灭菌过“接种室”、或接种箱或超净工作台内进行。
三、材料、试剂和器具1．材料苏云金杆菌斜面菌种，牛肉膏蛋白胨斜面培养基。
2．试剂75%酒精或1：50新法尔天水溶液。
3．超净工作台，接种针（环），接种工具（图3-1）、酒精灯等。
四、操作步骤（一）准备工作1．接种或接种室使用前半天先擦洗洁净，然后每立方米体积用5~10毫升福尔马林盛在容器中加热熏蒸或是用1/10福尔马林重量高锰酸钾加到盛有福尔马林容器中，不用加热，亦可进行熏蒸；也可用5%石炭酸喷务灭菌；用紫外灯照射20~30min。
也可达成灭菌目标。
应注意，要把接种时要所需用具（如接种针（环），酒精灯等）及培养基放入接种箱（室）一起灭菌消毒，不过菌种不能放入，以免死。
超净工作要预先通风，紫外线照射30min方可使用。
2．进入接种室前先把手洗净，再用75%酒精或新洁尔灭擦两手，菌种试管表面一样要用酒精或新洁尔灭抹擦后才放入接种室（箱内）。
（二）接种技术1、斜面菌种接种技术（从斜面培养基上菌种接种至另一新斜面培养基上方法）。
（1）准备工作就绪后，点然酒精灯。
（2）将菌种和斜面培养基两支试管用大拇指和其它四指握在左手中，使中指拉于两试管之间部分，斜面向上，并使它们拉于水平位置，也可将试管放在左手掌中，用手指托住试管。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验二微生物接种技
术
实验二 微生物接种技术
一、目的
微生物接种技术就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。
了解学习灭菌操作技术；掌握斜面接种技术。
二、原理
接种就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）（如图3-1）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。
接种就是在灭菌条件下，用接种工具（针、环）从一支原菌种中挑取少许菌体，接入到另一支新的培养基上进扩大培养的技术。
我们要想得到大量的菌种，适应生产，科研和教学要求，就要进行微生物的接种，扩大菌种数量。
接种因使用不同容器、不同的培养基，达到不同的目的，而有不同的接种方法，但是它们的基本要求是相同的。
通常接种都应在空气经过消毒灭菌过的“接种室”、或接种箱或超净工作台内进行。
三、材料、试剂与器具
1．材料 苏云金杆菌斜面菌种，牛肉膏蛋
白胨斜面培养基。
2．试剂 75%酒精或1：50的新法尔天水
溶液。
3．超净工作台，接种针（环），接种工
具（如图3-1）、酒精灯等。
四、操作步骤 （一）准备工作
1．接种或接种室使用前半天先擦洗干净，然后每立方米体积用5~10毫升福尔马林盛在容器中加热熏蒸或者是用1/10的福尔马林重量的高锰酸钾加到盛有福尔马林的容器中，不用加热，亦可进行熏蒸；也可用5%的石炭酸喷务灭菌；用紫外灯照射20~30min 。
也可达到灭菌的目的。
应注意，要把接种时要所需的用具（如接种针（环），酒精灯等）及培养基放入接种箱（室）一起灭菌消毒，但是菌种不能放入，以免死。
超净工作要预先通风，紫外线照射30min 方可使用。
2．进入接种室前先把手洗净，再用75%酒精或新洁尔灭擦两手，菌种试管表面同样要用酒精或新洁尔灭抹擦后才放入接种室（箱内）。
（二）接种技术
图3-1 接种工具 A. 接种环；B.接种针；C.接种钩；
D.接种铲；
E.
F.玻璃涂布器
1、斜面菌种接种技术（从斜面培养基上的菌种接种至另一新的斜面培养基上的方法）。
（1）准备工作就绪后，点然酒精灯。
（2）将菌种和斜面培养基的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中，使中指拉于两试管之间的部分，斜面向上，并使它们拉于水平位置，也可将试管放在左手掌中，用手指托住试管。
（3）先将棉塞用右手拧转松动，便以接种时拔出。
（4）右手拿接种环（拿的方法就和拿钢笔一样），在火焰上将环的部分烧红灭菌。
环以上凡是在接种时可能进入试管的部分，均应用火烧过（如图3-2）。
以下操作都要把试管口靠近火焰旁进行。
（5）用右手小指、无名指和手掌拔掉棉塞（如图3-2）。
（6）用火焰灼烧管口，灼烧时应不断转动试管口（靠手腕的动作，使试管口沾染的小量菌得以烧死）。
（如图3-2）。
（7）将烧过的接种针（环）触动没有长菌的培养基部分，使其冷却，以免烧死被接种的菌体，然后轻轻接触菌体，取出少许，慢慢将接种针（环）抽出试管（如图3-2）。
（8）迅速将接种针（环）在火焰旁无菌区伸进另一试管，在培养基斜面上轻轻划线，在上面接细菌，划线时要由底部划到顶部，由上而上，划线可划之字形，或划几条直线，但都不要把培养基划破，也不要使菌种沾污管壁（如图3-2）。
（9）将接种针（环）抽出，灼烧试管口，并在火焰旁将棉塞塞上。
塞棉塞时，不要用试管去迎棉塞，以免试管在运动时纳入不洁空气（如图3-2）。
（10）把针（环）在火焰上再灼红灭菌，放下接种钟（环）后，再腾出手来将塞塞紧。
（如图3-2）。
（11）全部培养基接种完毕后，要将试管斜面培养基包扎好，并标明姓名、时间和菌种名称；整理好接种室（箱）的台面，搞好清洁卫生。
2、液体接种技术（由斜面菌接入液体培养基内或液体菌种接入液体培养基）
（1）准备工作和操作方法与前相同，但可使试管向上略斜，以免培养液流出。
（2）将取得菌种的接种环送入液体培养基时，可使环在液体表面与管壁接触的部分轻轻摩擦。
接种后塞棉塞，将试管在手掌中轻轻摇动，使菌体在培养基中分散开来。
（3）由液体菌种接种液体培养基时，接种用无菌滴管或移液管，接种量通常为培养液体积的1/10。
无菌操作的注意事项与前相同，只是移液管不同于接种针，系由玻璃做成，它不能在火焰上灼烧，接种前在火焰上迅速通过一两次即可。
3、穿刺接种技术（深层柱形固体培养基的接种技术）（如图3-3）
（1）取两支新鲜半固体牛肉膏蛋白胨深层柱状培养基，做好标记（写上菌种名、接种日期和接种人等）。
（2）接种的方法是，用接种针沾取少量待接菌种，然后从柱状培养基的表面中心穿入其底部（但不要穿透），然后沿原刺入路线抽出接种针，注意接种针不要移动。
以上接好种的材料置于30℃下培养24~48h。
图
3-3 穿刺接种技术
五、注意事项
1、菌种取出
后，接种针（环）不要通过火焰、以免烧死菌体。
2、斜面接种时，不要使接种针（环）的碰到管壁；不要划破培养基，但也不能在试管空间划，一定要接触到斜面表面上划线接种。
3、接种前的准备和接种过程都要有无菌概念。
六、实验报告
培养后取出试管，观察划线接种效果、菌种生长情况，检查是否有杂菌生长，评价无菌操作的效果。
七、思考题
微生物接种时，通过哪些措施可防止杂菌污染？。