【CN109762915A】一种细菌耐药基因的检测方法及其专用试剂盒【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910119759.4

(22)申请日 2019.02.18

(71)申请人 中国人民解放军军事科学院军事医

学研究院

地址 100850 北京市海淀区太平路27号

(72)发明人 刘鹏　李倩　姜永强　律清宇　

江华　郑玉玲　

(74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限

公司 11245

代理人 关畅

(51)Int.Cl.

C12Q 1/689(2018.01)

C12Q 1/14(2006.01)

C12Q 1/10(2006.01)

C12Q 1/04(2006.01)

C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称

一种细菌耐药基因的检测方法及其专用试

剂盒

(57)摘要

本发明公开了一种细菌耐药基因的检测方

法及其专用试剂盒。本发明提供的试剂盒包括序

列表中序列1-296所示的296条单链DNA。本发明

提供的细菌耐药基因检测方法包括如下步骤：

(1)提取待测细菌的基因组DNA，利用成套单链

DNA对所述基因组DNA进行扩增，得到扩增产物；

(2)基于Ampliseq技术利用所述扩增产物构建测

序文库；(3)对所述测序文库进行测序，得到测序

结果，并将所述测序结果与耐药基因序列进行比

对，确定待测细菌是否携带耐药基因。本发明的

检测方法和试剂盒可高通量、快速、准确的同时

检测待测样本的多个耐药基因，具有良好应用前

景。权利要求书2页 说明书14页序列表61页CN 109762915 A 2019.05.17

C N 109762915

A

权　利　要　求　书1/2页CN 109762915 A

1.成套单链DNA，由序列表中序列1-296所示的296条单链DNA组成。

2.权利要求1所述的成套单链DNA在检测或辅助检测细菌耐药基因中的应用；

或，权利要求1所述的成套单链DNA在制备检测或辅助检测细菌耐药基因的产品中的应用。

3.权利要求1所述的成套单链DNA在检测或辅助检测待测细菌是否携带耐药基因和/或携带耐药基因种类中的应用；

或，权利要求1所述的成套单链DNA在制备检测或辅助检测待测细菌是否携带耐药基因和/或携带耐药基因种类的产品中的应用。

4.权利要求1所述的成套单链DNA在检测或辅助检测待测样品是否含有携带耐药基因的细菌中的应用；

或，权利要求1所述的成套单链DNA在制备检测或辅助检测待测样品是否含有携带耐药基因的细菌的产品中的应用。

5.根据权利要求2-4任一所述的应用，其特征在于：所述耐药基因为如下至少一种：aac (2’)-lb、aadA1、aadA3、aadB、aadD、adeb、ant(4’-llb)、aph3-la、armA、blaZ、catB3、catB6、catB8、cmlA5、CTX-M-14、dfrA19、dfrG、E.coli_gyrA、E_coli_parC、IMP-1、KPC-1、mecA、mecC、mcr-1、mtrC、mtrD、mtrE、mtrR、NDM-1、oprD、oqxA、oqxB、bla OXA-10、bla OXA-23、bla OXA-24、bla OXA-1、bla OXA-51、bla OXA-58、bla OXA-66、bla OXA-69、bla OXA-82、PAO_gyrA_parC、patA、patB、pbp1a、pbp2b、pbp2x、phoP、phoQ、pmrA、pmrB、qacA、qnrA1、qnrB4、rpsJ、sat-1、bla SHV-60、strA、strB、sul1、bla TEM-12、tetA、tetD、tetM、tetR、vanA、vanB、VIM-2。

6.根据权利要求2-5任一所述的应用，其特征在于：所述细菌为如下至少一种：鲍曼不动杆菌Acinetobacter baumannii、粪肠球菌Enterococcus faecalis、屎肠球菌Enterococcus faecium、肺炎克雷伯菌Klebsiella pneumoniae、带beta-内酰胺耐药的肺炎克雷伯菌Klebsiella pneumoniae with beta-lactamase、万古霉素耐药的肠球菌vancomycin-resistant Enterococci、铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、表皮葡萄球菌Staphylococcus epidermidis、溶血葡萄球菌Staphylococcus haemolyticus、人葡萄球菌Staphylococcus hominis、甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌methicillin-resistant Staphylococcus aureus。

7.一种试剂盒，其包括权利要求1所述的成套单链DNA；

所述试剂盒的功能为如下1)或2)或3)：

1)检测或辅助检测细菌耐药基因；

2)检测或辅助检测待测细菌是否携带耐药基因和/或携带耐药基因的种类；

3)检测或辅助检测待测样品是否含有携带耐药基因的细菌。

8.一种检测或辅助检测待测细菌是否携带耐药基因和/或携带耐药基因的种类的方法，包括如下步骤：

(1)提取待测细菌的基因组DNA，利用权利要求1所述的成套单链DNA对所述基因组DNA 进行扩增，得到扩增产物；

(2)基于Ampliseq技术利用所述扩增产物构建测序文库；

(3)对所述测序文库进行测序，得到测序结果；并将所述测序结果与耐药基因序列进行比对，确定待测细菌是否携带耐药基因及携带耐药基因的种类。

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