【CN109762915A】一种细菌耐药基因的检测方法及其专用试剂盒【专利】

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细菌耐药基因检测方法、基因芯片和试剂盒[发明专利]

细菌耐药基因检测方法、基因芯片和试剂盒[发明专利]

(10)申请公布号 CN 102952875 A(43)申请公布日 2013.03.06C N 102952875 A*CN102952875A*(21)申请号 201110254798.9(22)申请日 2011.08.31C12Q 1/68(2006.01)C12Q 1/02(2006.01)(71)申请人宁波市第二医院地址315010 浙江省宁波市西北街41号申请人上海生物芯片有限公司上海伯豪生物技术有限公司(72)发明人蔡挺 张春秀 张顺 陈金丝李巧云 周佳菁 肖华胜(74)专利代理机构上海浦一知识产权代理有限公司 31211代理人刘昌荣(54)发明名称细菌耐药基因检测方法、基因芯片和试剂盒(57)摘要本发明公开了一种细菌耐药基因检测方法、基因芯片和试剂盒。

该试剂盒包括扩增待测细菌耐药基因的引物对和检测探针。

该基因芯片包括检测待测细菌耐药基因的探针。

利用该试剂盒和基因芯片进行耐药基因检测的方法,包括步骤:1)利用试剂盒中的引物,PCR 扩增待测样本DNA 中的耐药基因;2)扩增产物与试剂盒中的检测探针进行荧光标记反应;3)荧光标记的扩增产物与基因芯片进行杂交,确定样本所含耐药基因。

本发明的检测方法覆盖了临床最常见的16种耐药基因的检测,有助于实现临床细菌耐药情况的快速诊断,从而可以为临床合理选择治疗药物提供支持。

(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书9页序列表17页 附图1页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 9 页序列表 17 页 附图 1 页1/1页1.一种细菌耐药基因检测试剂盒,其特征在于:包括扩增待测细菌耐药基因的引物对和检测所述细菌耐药基因的探针;所述引物具有如SEQ ID No :1~32所示的序列或其互补链;所述探针具有如SEQ ID No :33~61所示的序列或其互补链。

2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述耐药基因为OXA-23、IMP 、VIM 、aac(6’)-Ie-aph(2”)-Ia 、CTX-M 、KPC 、CIT 、mecA 、TEM 、SHV 、DHA 、qnrB 、qnrS 、aac(6’)-Ib 、ParC 和GyrA 。

一种细菌耐药基因检测的方法[发明专利]

一种细菌耐药基因检测的方法[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201811257679.7(22)申请日 2018.10.26(71)申请人 厦门大学地址 361005 福建省厦门市思明区思明南路422号(72)发明人 李庆阁 安晓霞 廖逸群 许晔 (74)专利代理机构 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 11038代理人 杨棽 林远成(51)Int.Cl.C12Q 1/689(2018.01)C12N 15/11(2006.01)(54)发明名称一种细菌耐药基因检测的方法(57)摘要本申请提供了一种检测细菌耐药基因的方法,所述方法能够同时检测多个细菌耐药基因(例如能够导致细菌耐受碳青霉烯类抗生素耐药的KPC等基因、导致β-内酰胺类抗生素耐药的CTX -M等基因、导致头孢菌素类抗生素耐药的AAC 等基因,以及能够导细菌耐受其它类型抗生素的耐药基因)在样品中的核酸分子中的存在或水平。

此外,本申请还提供了一种探针组和包含一种或多种所述探针组的试剂盒,所述探针组和试剂盒可用于实施本发明的方法。

此外,本申请还提供了一种试剂盒,其能够在一轮反应中同时检测多个细菌耐药基因(例如能够导致细菌耐受碳青霉烯类抗生素耐药的KPC等基因、导致β-内酰胺类抗生素耐药的CTX -M等基因、导致头孢菌素类抗生素耐药的AAC等基因,以及能够导细菌耐受其它类型抗生素的耐药基因)在样品中的核酸分子中的存在或水平。

权利要求书7页 说明书52页序列表17页 附图2页CN 111100935 A 2020.05.05C N 111100935A1.一种探针组(probe set),其包含一种检测探针,以及至少两种的媒介子探针,其中,所述媒介子探针各自独立地从5'至3'方向包含媒介子序列和靶特异性序列,所述靶特异性序列包含与特异于一种细菌耐药基因的一种靶核酸序列或一种对照序列互补的序列,所述媒介子序列包含不与所述靶核酸序列或对照序列互补的序列,并且,所有媒介子探针所包含的媒介子序列彼此不同;和所述检测探针从3'至5'方向包含,与每一种媒介子序列或其部分互补的捕获序列,以及模板序列(templating sequence);并且,所述检测探针标记有报告基团和淬灭基团,其中,所述报告基团能够发出信号,并且,所述淬灭基团能够吸收或淬灭所述报告基团发出的信号;并且,所述检测探针在与其互补序列杂交的情况下发出的信号不同于在未与其互补序列杂交的情况下发出的信号。

一种检测细菌氨基糖苷类耐药基因的引物及试剂盒[发明专利]

一种检测细菌氨基糖苷类耐药基因的引物及试剂盒[发明专利]

专利名称:一种检测细菌氨基糖苷类耐药基因的引物及试剂盒专利类型:发明专利
发明人:任绪义,虞闰六
申请号:CN201510033921.2
申请日:20150123
公开号:CN104561340A
公开日:
20150429
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本发明公开了一种检测细菌氨基糖苷类耐药基因的引物及试剂盒,属于微生物检测技术领域。

本发明提供的引物序列如SEQ ID NO:1~10所示,通过在NCBI的基因序列库中比对多种菌及临床隔离株氨基糖苷类耐药基因序列,在保守位点处设计的特异性引物,能够对多种细菌的aac(3)-II、aac(6')-Ib、aph(3')-III、ant(3″)-1a、ant(4')-1a5种氨基糖苷类耐药基因进行快速检测。

本发明还公开了包含上述引物的检测细菌氨基糖苷类耐药基因的试剂盒,能快速、准确检测细菌氨基糖苷类抗生素相关耐药基因。

申请人:杭州迪安医学检验中心有限公司
地址:310030 浙江省杭州市西湖区城北商贸园33幢
国籍:CN
代理机构:南京苏高专利商标事务所(普通合伙)
代理人:肖明芳
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一套用于细菌耐药基因NDM-1检测的多核苷酸、方法和试剂盒[发明专利]

一套用于细菌耐药基因NDM-1检测的多核苷酸、方法和试剂盒[发明专利]

专利名称:一套用于细菌耐药基因NDM-1检测的多核苷酸、方法和试剂盒
专利类型:发明专利
发明人:许丽,刘刚,梁文,李妍,闻艳丽,李兰英,徐勤
申请号:CN201510875803.6
申请日:20151202
公开号:CN105400875A
公开日:
20160316
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本发明公开了一种用于细菌耐药基因—新德里金属β-内酰胺酶-1基因(NDM-1)检测的多核苷酸、方法和试剂盒。

具体地本发明中公开了可用作细菌耐药基因NDM-1实时荧光PCR检测标准分子的多核苷酸和DNA构建物pXL08。

本发明的质粒标准分子解决了细菌耐药基因NDM-1实时荧光PCR检测中标准物质缺乏的难题,保证细菌耐药基因NDM-1实时荧光PCR方法检测结果的可比性,为细菌耐药基因NDM-1实时荧光PCR方法检测提供了可靠质量控制方法。

申请人:上海市计量测试技术研究院
地址:201203 上海市浦东新区张衡路1500号
国籍:CN
代理机构:上海一平知识产权代理有限公司
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耐药性检测组合物、耐药性检测试剂盒及耐药性检测方法[发明专利]

耐药性检测组合物、耐药性检测试剂盒及耐药性检测方法[发明专利]

专利名称:耐药性检测组合物、耐药性检测试剂盒及耐药性检测方法
专利类型:发明专利
发明人:孙青芝,谭德勇,邓中平,刘佳,戴立忠
申请号:CN201811382277.X
申请日:20181120
公开号:CN109457020B
公开日:
20220405
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本发明涉及一种耐药性检测组合物、耐药性检测试剂盒及耐药性检测方法,耐药性检测组合物包括第一引物对、第二引物对、第三引物对、第一探针、第二探针和第三探针。

本发明提供了一种经过筛选优化的耐药性检测组合物,可利用多重实时荧光PCR技术快速同时进行三种细菌耐药基因的联合检测,即碳青霉烯类耐药基因KPC、C类头孢菌素耐药基因CMY‑2以及甲氧西林耐药基因mecA,极大地简化了检测流程,缩短了检测时间,且具有较高的灵敏度和精密度,为量少珍贵的核酸样品提供更多的靶点检测信息,为科研及临床的细菌耐药性检测提供了简单高效的检测方法,对临床治疗成败和抗生素的合理应用具有重要意义。

申请人:圣湘生物科技股份有限公司
地址:410205 湖南省长沙市高新技术产业开发区麓松路680号
国籍:CN
代理机构:华进联合专利商标代理有限公司
代理人:黄晓庆
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一种细菌耐药性诊断试剂盒[实用新型专利]

一种细菌耐药性诊断试剂盒[实用新型专利]

专利名称:一种细菌耐药性诊断试剂盒专利类型:实用新型专利
发明人:王郁生
申请号:CN201220309170.4
申请日:20120628
公开号:CN202794036U
公开日:
20130313
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本实用新型提供了一种细菌耐药性诊断试剂盒,其特征在于,它包括:长方形盒体(1)及与其一侧边弯折连体的盒盖(2),而在盒体内放置有试剂架(3),试剂架上形成有分别放置荧光底物瓶(4)、双蒸馏水瓶(5)、非变性细胞裂解缓冲液瓶(6)、样品瓶(7)和空白对照瓶(8)以及相应的5个长方体插孔(9)。

本实用新型提供细菌耐药性诊断试剂盒可以检测出市售产品所不能检测的头孢3、4代耐药菌,且可达到10~10个耐药菌的检测值,填补了市场空白,为临床中抗生素的使用提供了更有效的监测方法和使用向导,具有极大的实用价值。

申请人:上海百可生物科技有限公司
地址:201203 上海市浦东新区张江高科技园区蔡伦路781号1109室
国籍:CN
代理机构:上海精晟知识产权代理有限公司
代理人:何新平
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革兰氏阴性细菌耐药基因检测方法及其专用芯片与试剂盒[发明专利]

革兰氏阴性细菌耐药基因检测方法及其专用芯片与试剂盒[发明专利]

[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公开说明书[11]公开号CN 1840693A [43]公开日2006年10月4日[21]申请号200610001309.8[22]申请日2006.01.18[21]申请号200610001309.8[71]申请人北京博奥生物芯片有限责任公司地址102206北京市昌平区生命科学园路18号共同申请人清华大学[72]发明人祝令香 张治位 蒋迪 杜宁 王璨 杨华卫 张琼 高华方 周玉祥 程京 [74]专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司代理人关畅[51]Int.CI.C12Q 1/68 (2006.01)C12Q 1/18 (2006.01)权利要求书 6 页 说明书 37 页 附图 4 页[54]发明名称革兰氏阴性细菌耐药基因检测方法及其专用芯片与试剂盒[57]摘要本发明公开了一种革兰氏阴性细菌耐药基因检测方法及其专用芯片与试剂盒。

该试剂盒包括扩增待测革兰氏阴性细菌菌株的耐药基因的引物对,和检测所述革兰氏阴性菌菌株的耐药基因探针。

利用该试剂盒进行耐药基因检测的方法,包括:1)利用试剂盒中的引物PCR扩增待测菌株的耐药基因;2)将扩增产物与所述检测革兰氏阴性菌耐药基因探针进行杂交,确定待测菌株所含耐药基因。

本发明的试剂盒具有集成化程度高、灵敏度高,应用范围广,特异性高,检测结果稳定,可靠性高的特点。

200610001309.8权 利 要 求 书第1/6页 1、革兰氏阴性细菌耐药基因检测试剂盒,包括扩增待测革兰氏阴性细菌菌株耐药基因的引物对,和检测所述革兰氏阴性菌菌株耐药基因探针; 所述扩增待测革兰氏阴性细菌菌株耐药基因的引物对的正向引物和反向引物的大小均为15-50个核苷酸,优选为15-35个核苷酸;所述扩增待测革兰氏阴性细菌菌株耐药基因的引物对中的正向引物或反向引物的5’端连接上通用加尾序列;所述通用加尾序列的5’端被荧光标记;被连接上所述通用加尾序列的正向引物或反向引物的5’端被荧光标记;所述通用加尾序列具有序列表中序列1的核苷酸序列;所述检测革兰氏阴性菌菌株耐药基因探针的大小均为15-50个核苷酸;所述探针的5’端连接上10-35个寡聚d T,优选连接上12-18个寡聚d T。

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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910119759.4
(22)申请日 2019.02.18
(71)申请人 中国人民解放军军事科学院军事医
学研究院
地址 100850 北京市海淀区太平路27号
(72)发明人 刘鹏 李倩 姜永强 律清宇 
江华 郑玉玲 
(74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限
公司 11245
代理人 关畅
(51)Int.Cl.
C12Q 1/689(2018.01)
C12Q 1/14(2006.01)
C12Q 1/10(2006.01)
C12Q 1/04(2006.01)
C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称
一种细菌耐药基因的检测方法及其专用试
剂盒
(57)摘要
本发明公开了一种细菌耐药基因的检测方
法及其专用试剂盒。

本发明提供的试剂盒包括序
列表中序列1-296所示的296条单链DNA。

本发明
提供的细菌耐药基因检测方法包括如下步骤:
(1)提取待测细菌的基因组DNA,利用成套单链
DNA对所述基因组DNA进行扩增,得到扩增产物;
(2)基于Ampliseq技术利用所述扩增产物构建测
序文库;(3)对所述测序文库进行测序,得到测序
结果,并将所述测序结果与耐药基因序列进行比
对,确定待测细菌是否携带耐药基因。

本发明的
检测方法和试剂盒可高通量、快速、准确的同时
检测待测样本的多个耐药基因,具有良好应用前
景。

权利要求书2页 说明书14页序列表61页CN 109762915 A 2019.05.17
C N 109762915
A
权 利 要 求 书1/2页CN 109762915 A
1.成套单链DNA,由序列表中序列1-296所示的296条单链DNA组成。

2.权利要求1所述的成套单链DNA在检测或辅助检测细菌耐药基因中的应用;
或,权利要求1所述的成套单链DNA在制备检测或辅助检测细菌耐药基因的产品中的应用。

3.权利要求1所述的成套单链DNA在检测或辅助检测待测细菌是否携带耐药基因和/或携带耐药基因种类中的应用;
或,权利要求1所述的成套单链DNA在制备检测或辅助检测待测细菌是否携带耐药基因和/或携带耐药基因种类的产品中的应用。

4.权利要求1所述的成套单链DNA在检测或辅助检测待测样品是否含有携带耐药基因的细菌中的应用;
或,权利要求1所述的成套单链DNA在制备检测或辅助检测待测样品是否含有携带耐药基因的细菌的产品中的应用。

5.根据权利要求2-4任一所述的应用,其特征在于:所述耐药基因为如下至少一种:aac (2’)-lb、aadA1、aadA3、aadB、aadD、adeb、ant(4’-llb)、aph3-la、armA、blaZ、catB3、catB6、catB8、cmlA5、CTX-M-14、dfrA19、dfrG、E.coli_gyrA、E_coli_parC、IMP-1、KPC-1、mecA、mecC、mcr-1、mtrC、mtrD、mtrE、mtrR、NDM-1、oprD、oqxA、oqxB、bla OXA-10、bla OXA-23、bla OXA-24、bla OXA-1、bla OXA-51、bla OXA-58、bla OXA-66、bla OXA-69、bla OXA-82、PAO_gyrA_parC、patA、patB、pbp1a、pbp2b、pbp2x、phoP、phoQ、pmrA、pmrB、qacA、qnrA1、qnrB4、rpsJ、sat-1、bla SHV-60、strA、strB、sul1、bla TEM-12、tetA、tetD、tetM、tetR、vanA、vanB、VIM-2。

6.根据权利要求2-5任一所述的应用,其特征在于:所述细菌为如下至少一种:鲍曼不动杆菌Acinetobacter baumannii、粪肠球菌Enterococcus faecalis、屎肠球菌Enterococcus faecium、肺炎克雷伯菌Klebsiella pneumoniae、带beta-内酰胺耐药的肺炎克雷伯菌Klebsiella pneumoniae with beta-lactamase、万古霉素耐药的肠球菌vancomycin-resistant Enterococci、铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、表皮葡萄球菌Staphylococcus epidermidis、溶血葡萄球菌Staphylococcus haemolyticus、人葡萄球菌Staphylococcus hominis、甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌methicillin-resistant Staphylococcus aureus。

7.一种试剂盒,其包括权利要求1所述的成套单链DNA;
所述试剂盒的功能为如下1)或2)或3):
1)检测或辅助检测细菌耐药基因;
2)检测或辅助检测待测细菌是否携带耐药基因和/或携带耐药基因的种类;
3)检测或辅助检测待测样品是否含有携带耐药基因的细菌。

8.一种检测或辅助检测待测细菌是否携带耐药基因和/或携带耐药基因的种类的方法,包括如下步骤:
(1)提取待测细菌的基因组DNA,利用权利要求1所述的成套单链DNA对所述基因组DNA 进行扩增,得到扩增产物;
(2)基于Ampliseq技术利用所述扩增产物构建测序文库;
(3)对所述测序文库进行测序,得到测序结果;并将所述测序结果与耐药基因序列进行比对,确定待测细菌是否携带耐药基因及携带耐药基因的种类。

2。

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