胡继红下呼吸道感染细菌培养操作规范花脸稿解读共49页
最新下呼吸道感染细菌学检验操作规范
下呼吸道感染细菌学检验操作规范—、相关临床知识临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌。
下呼吸道感染包括急性气管-支气管炎、慢性支气管炎急性发作、支气管扩张继发感染及肺实质感染（肺炎、肺脓肿）等。
病原体有细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次体和原虫等。
下呼吸道感染患者可有发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性，可伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音、白细胞总数及嗜中性粒细胞比例明显增高，x线检查提示肺部有炎症性浸润或胸腔积液等体症，严重时可导致感染性休克和呼吸衰竭，因此临床诊断一般不难；细菌学检验能明确感染病原，并提供有关抗菌药物对分离菌的抗菌活性等信息，有助于疾病治疗、流行病学调查研究和医院感染的监测。
临床呼吸道标本中常见分离细菌见表1表1呼吸道标本中的常见分离细菌二、标本米集本室必须注意生物安全防护。
（一）采集方法1 •自然咳痰法以晨痰为佳，采集标本前应用清水、冷开水漱口或牙刷清洁口腔和牙齿，有假牙者应取下假牙。
尽可能在用抗菌药物之前采集标本。
用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入无菌、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口带盖的容器中，标本量应》lml。
标本应尽快送检，不能及时送检的标本，室温保存w 2h o2•支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和支气管肺泡灌洗法均由临床医生按相应操作规程采集，但必须注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。
3 •小儿取痰法用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。
幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。
（二）标本验收遇有不合格标本，应及时与临床联系，报告不合格标本拒收的具体理由。
下呼吸道标本验收与拒收见表2o三、实验室检查（一）肉眼观察 观察痰液的颜色、粘度、有无血丝和是否呈脓性，如见有颗粒存在，则应注意可能 与放线菌属及奴卡菌属感染有关。
下呼吸道感染细菌培养操作规范
Standard for Bacterial Culture Procedures 标本European Manual Microbiology.1罗斯菌属（Rothia spp.) `脑膜炎奈瑟菌草绿色链球菌草绿色链球菌、奈瑟菌属嗜血杆菌属、莫拉菌属常见引起细菌性社区感染典型肺炎病原菌：•肺炎链球菌•流感嗜血杆菌上呼吸道正常菌群•金黄色葡萄球•卡他莫拉菌细胞内病原引起非典型肺炎：•肺炎支原体•肺炎/鹦鹉热衣原体•嗜肺军团菌•柯克斯体（Q 热）痰的来源？是否被上呼吸道污染？hospitalization.Clin.Infec.Dis.31:869-874.9Gleckman,R.,J.DeVita,D.Hibert,C.Pelletier,and R.Martin.1988.Sputum gram stain assessment in community-acquired bacteremic pneumonia.J.Clin.Microbiol.26:846-849.内容特异性82%～91%，诊断价值远高于痰标本；附录B:“适合诊断的病原及检验项目”5.下呼吸道感染细菌培养的局限性培养结果假阴性、假阳性的原因球菌、流感嗜血杆菌（具侵袭性）定植数量会增加；`基础条件变化：使用免疫抑制剂、慢性肺病、广谱抗菌药物治疗或住院患者等人群中，革兰阴性杆菌的优势明显增加。
1）肺部感染的最常见机制：肺泡内吸入了口咽部定植菌；¾吸入性肺炎患者咽部菌群种类：多侵袭性细菌或耐药细菌，如肺炎链球菌或革兰阴性杆菌。
¾清除机制：健康宿主吸入口腔定植菌后常无临床症状，细菌通常被粘液柱状纤维清除。
¾吸入能否引起肺部感染取决于：吸入菌的致病性及数量；患者免疫系统；呼吸道功能等诸方面的因素。
2）吸入气溶胶肺部感染占第二位：主因：使用了不清洁的呼吸机。
3）血液播散性肺炎占第三位：感染通常造成双肺下叶肺炎。
下呼吸道感染细菌培养操作规范_3
2014/5/933.2 标本运送注1：若送检标本超过2h ，将导致有临床意义的致病菌数量减少，非苛养的口咽部定植 菌过度生长。
为防止口咽部正常菌群的过度生长，可将标本放置2℃～8℃环境，但 培养分离到肺炎链球菌等苛养菌的机会和数量会减少。
注2：若标本延迟送检超过2h 后未冷藏（超过2h ～24h ，2℃～8℃），应在报告中说明因 延误送检标本，可能对培养结果造成的影响。
3.3 筛选并拒收下呼吸道细菌培养标本❝拒收24h 内重复采集的痰细菌培养标本 ❝唾液❝鼻冲洗液和分泌物、鼻孔拭子 ❝咽部标本❝未经保护套管收集的支气管刷培养标本 ❝痰的厌氧菌培养标本注：除支气管穿刺吸出物、PSB 、活检标本、胸水或其他未经污染以外的标本做厌氧菌培养均不合格。
❝诱导痰注：诱导痰标本只适用于检测卡氏肺孢子菌和结核分枝杆菌，对其他病原菌检出效果差。
4.1 痰及气管吸出物标本处理 4.1.1标本处理要求❝接种标本及涂片操作必须在Ⅱ级生物安全柜中进行；❝应尽快处理所有标本，特别是来自急诊、新入院患者和有创方法采集的标本（如：BAL 和肺活检标本），以保证致病菌的活性，避免造成重复采集标本；❝使用全自动接种前处理系统的实验室按厂家说明书处理标本，洗痰、液化后自动接种和涂片革兰染色。
4.1.2 接种标本 4.1.3 培养4.1.4 标本涂片及革兰染色注1：革兰染色脱色时间因选用不同的脱色剂而异。
1）95%乙醇脱色时间为30s ；2）丙酮- 乙醇（体积比为3:7,棕色瓶室温保存，有效期1年）脱色时间1s ～5s ，脱色效果一致性 好；3）丙酮（试剂纯）脱色时间最短，当标本中含大量宿主细胞时脱色效果好。
注2：使用革兰染色仪染色的实验室按照厂家操作说明书进行，注意条件优化，使涂片染色结果达到满意效果。
4.1.5显微镜观察革兰染色结果注：低倍镜下细胞计数、油镜下细菌计数半定量指标；❝4.2 气管镜标本处理4.2.1 支气管肺泡灌洗液定量培养 4.2.2 保护毛刷定量培养4.2.3 接种其他培养基并培养 4.2.4 革兰染色标本处理4.2.5 剩余BAL 标本可用于其他病原检测（标本珍贵）对剩余BAL 标本离心后，可根据需要进行病毒、分枝杆菌、军团菌和真菌培养；或做病毒、卡氏肺孢子菌、抗酸染色和真菌涂片染色（见参考文献4的第六篇相关章节）（修改解释）。
呼吸道感染细菌学检验操作规范
细菌培养
01
02
03
04
培养基选择
根据不同病原体选择适宜的培 养基，如血琼脂、巧克力琼脂 等。
标本采集
采集呼吸道分泌物、痰液、肺 泡灌洗液等作为培养样本。
培养条件
菌落鉴别
在恒温（35-37℃）条件下进行 培养，观察菌落生长情况。
根据菌落的形态、染色特性、 生化反应等指标鉴别细菌种类 。
药敏试验
分子生物学检测
细菌学快速检测
采用自动化仪器和试剂盒进行细菌学 快速检测，如免疫分析仪、干式生化 分析仪等。
利用PCR等分子生物学技术检测病原 体核酸，具有快速、敏感的优点。
05
结果报告与解读
结果报告的格式与内容
检验结果
包括细菌培养、药敏试验等结果， 应详细记录。
检验报告单
应包括患者基本信息、送检标本类 型、检验项目、检验结果及结论等。
事故应急处理
制定实验室事故应急处理预案 ，并定期进行演练，确保在发 生事故时能够迅速、有效地应
对。
THANK YOU
感谢聆听
检验报告时间
应在规定时间内出具检验报告，并 注明报告时间。
结果解读与临床意义
解读依据
根据细菌培养和药敏试验结果， 结合患者临床表现和实验室检查 指标进行综合分析。
临床意义
为医生提供细菌种类、耐药性及 感染部位等信息，指导临床用药 和治疗方案制定。
结果报告的注意事项
准确性
确保检验结果的准确性，避免误差和误报。
样本稀释
将采集的样本进行稀释， 以便后续的细菌分离和培 养。
样本预处理
对稀释后的样本进行预处 理，如添加抗菌药物，以 抑制其他微生物的生长。
下呼吸道感染细菌培养操作规范_1
由于国内微生物检验专业缺乏系统的、按流程编写的操作规范；
2009年卫生部临床检验中心举办了全国临床微生物检验标准化培训班， 邀请美国斯坦福大学国际权威的临床微生物学家Prof. Ellen做了临床微 生物检验操作流程的标准化培训，得到参会学员的一致好评。
由此，2010-2011年中华医学会临床检验分会临床微生物学组任健康组 长和马筱玲副组长提议，由卫生部临床检验中心微生物室胡继红执笔， 合作草拟了《下呼吸道感染细菌培养操作规范》。
卫生部临床检验中心 陕西省人民医院 安徽省立医院
胡继红 任健康 马筱玲
卫生部北京Leabharlann 院胡云建 北京大学人民医院
王辉
中国医学科学院北京协和医院 徐英春
首都医科大学附属北京友谊医院 苏建荣
解放军总医院
罗燕萍
浙江省温州医科大学附属第二医院李向阳
1 美国微生物学会:《下呼吸道感染》临床微生物学检验技术技术及操作系列丛书.2004
2014/5/9
Standard for Bacterial Culture Procedures of Lower Respiratory Tract Infections
主要起草人：卫生部临床检验中心 胡继红
大多数微生物室每日近一半标本量：痰培养+药敏； 培养结果前后两天经常不一致； 培养生长的不同种类、数量细菌如何报告标准不统一； 定植菌、致病菌如何判断—标本是否合格如何判断？ 培养结果与临床诊断不符合；
2012年完成讨论稿，开过两次专家审稿会，也广泛征求了全国微生物专 家的意见，并在全国室间质评大会上征求了微生物室操作人员的意见， 大家普遍认为下呼吸道感染细菌培养操作急需规范性文件，此将对实验 室有重要指导作用。
下呼吸道感染细菌培养 ppt课件
患者免疫系统；
呼吸道功能等诸方面的因素。 2 ）吸入气溶胶肺部感染占第二 主因：使用了不清洁的呼吸机 位： 3）血液播散性肺炎占第三位： 感染通常造成双肺下叶肺炎。由呼吸道
感染引发的菌血症占 12%，因此对肺部感
染的高热患者送检血培养，有利于发现
ppt课件 肺部感染的病原菌。 5
下呼吸道感染的主要类型及常见病原体（1）
下呼吸道感染细菌培养
ppt课件
1
草绿色链球菌 痰的来源？ 是否被上呼吸道污染？ 奈瑟菌属 嗜血杆菌属
莫拉菌属
细胞内病原引起非典型肺炎 ： 常见引起细菌性社区感染典型肺炎病原菌： • 肺炎支原体 • 肺炎链球菌 • 肺炎/ 鹦鹉热衣原体 • 流感嗜血杆菌 上呼吸道正常菌群 • 嗜肺军团菌 • 金黄色葡萄球 • 柯克斯体（Q热） • 卡他莫拉菌 2 ppt课件
下呼吸道感染的主要类型及常见病原体（2）
类型/ 免疫状态 免疫抑制宿主条件 致病菌感染性肺炎 最常见病原菌 社区获得性肺炎典型菌，奴 卡菌属，念珠菌属，条件致 病真菌，曲霉菌 少见病原菌
环境暴相真菌、曲霉属、肺炎支 原体、肺炎衣原体
鼻疽假单胞菌，假鼻疽假单 胞菌，鼠疫耶尔森菌，贝纳 柯克斯体、图拉热弗朗西斯 菌
说明： 符。 ··婴幼儿和小龄儿童可吸取来自气管和支气管的分泌物， 常用于诊断细菌性肺炎的方法。
ppt课件 14
③血培养
当肺部感染患者伴有发热（38℃）或低温（36 ℃ ）、 白细胞增多或粒细胞减少等血培养送检指征时，送检血 培养 ；
送检血培养（具体参考《临床微生物实验室血培养操作 规范》 WS/ 中标本采集和送检要求）。
指征
痰
解释
标本包含唾液和上呼吸道分泌物，报告 “大于 10 个鳞状上皮细胞/低倍视野， 提示标本被唾液污染，不继续培养”
下呼吸道细菌学检验操作规范(讨论稿)
出芽酵母样孢子和假菌丝
通常提示鹅口疮或上呼吸道酵母菌感 染，不是肺炎，仅当其为主要所见菌 时报告
请高级医师进行确认，可能需要补充 实验如改良的抗酸染色
其他异常结构，如真菌，分枝的革 兰阳性丝状杆菌或奇特形状的细菌 （可能抗生素治疗的结果）
培养结果检查
观察24h后平板
继续培养平板24－48h，为检出霉菌、慢生长菌、 苛养的革兰阴性杆菌如博德特菌属
8
支气管 肺泡灌 洗液 BAL
保护毛 刷标本 PSB
库什曼 螺旋纤 维
术语及 定义
夏科雷 登结晶
弹性纤 维 纤毛柱 状上皮 细胞
9
肺泡巨 噬细胞
保护毛 刷(PSB) 支气管 肺泡灌 洗液标 本(BAL)
咳痰
分析前
标本采集
气管镜 标本
气管吸 出物
诱导痰 （通常 不用于 细菌培 养）
血培养
11
分析前下呼吸道标本检验
不要报告小菌落的beta-溶血链球菌或F群链球菌，
因为这些菌是上呼吸道正常菌群
链球菌 Alpha-溶血链球菌 Optochin敏感实验 胆汁溶菌实验 （联合上述两个实验进行鉴定） 药敏实验，贴OP纸片确认纯度以检查药敏结果是否
有污染
苛养革兰阴性杆菌 流感嗜血杆菌，卫星现象，ALA实验确认鉴定并 作beta-内酰胺酶试验。 百日咳博德特菌 触酶和尿素酶阳性，培养48h出 现肉眼可见菌落 巴斯德菌 吲哚和氧化酶阳性，动物口腔正常菌群
THANK YOU
报告“肠道革兰阴性杆菌”
报告“非发酵革兰阴性杆菌”
报告“分离到上呼吸道细菌”， 注如果只存在肠球菌和凝固酶阴 性葡萄球菌（有或没有酵母菌）， 报告“混合有革兰阳性微生物细 菌，或如果90%是培养物，则做 少量鉴定列出”
下呼吸道标本采集及临床报告解读
侵入性病原学标本采集技术适用患者
肺炎合并胸腔积液，尤其是与肺部感染病灶同侧的 胸腔积液
接受机械通气治疗的患者
经验性治疗无效、怀疑特殊病原体感染 的CAP患者，采用常规方法获得的 呼吸道标本无法明确致病原时
积极抗感染治疗后病情无好转，需要 与非感染性肺部病变(如肿瘤、血管炎、
间质病等)鉴别诊断者(ⅢB)
3
成人CAP发病率数据，2013年一项国内研究 显示，16585名住院CAP患者中≤5岁(37.3%)
COPD急性加重(AECOPD)
及＞65岁(28.7%)人群构成比远高于26～45 岁青壮年(9.2%)2
4
支气管扩张症急性加重(AEBX)
CAP，社区获得性肺炎
1. Woodhead M,Blasi F,Ewia S,et al.Clin Microbiol Infect 2011;17(Suppl.6):E1–E59. 2. 中华医学会呼吸病学分会.中华结核和呼吸杂志.2016;39(4)253-279.-01
标本的运送
• 用防漏螺旋盖无菌杯收集标本，贴好 标本信息(条码)后，在1~2h内运送到 微生物实验室，并于1h内接种
• 不能及时送检的标本，室温保存时间
应≤2h
• 对于普通细菌性肺炎，痰标本每天送 检1次．连续2~3d
• 不建议24h内多次采集，除非痰液外 观性状出现改变或怀疑分枝杆菌感染 者，应连续收集3d清晨痰液送检
多核白细胞
＞25个
或
二者比例
＜1:2.5
中华医学会呼吸病学分会.中华结核和呼吸杂志.2016;39(4):253-279.
咽拭子和鼻拭子标本采集
用拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁(3-5次)
×
下呼吸道感染细菌培养操作规范
下呼吸道感染细菌培养操作规范ICS点击此处添加中国标准文献分类号WS中华人民共和国卫生行业标准XX/TXXXXX—XXXX下呼吸道感染细菌培养操作规范StandardforBacterialCultureProceduresofLowerRespiratoryTractInfections点击此处添加与国际标准一致性程度的标识（报批稿）（本稿完成日期：）XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施中华人民共和国国家卫生计生委员会发布XX/TXXXXX—XXXX1目次前言 (4)引言 (5)1范围 (7)2术语及定义 (7)2.1支气管肺泡灌洗液 (7)2.2保护毛刷标本 (7)2.3库什曼螺旋纤维 (7)2.4夏科雷登结晶 (7)2.5弹性纤维 (7)2.6纤毛柱状上皮细胞 (8)2.7肺泡巨噬细胞 (8)3分析前 (8)3.1标本采集 (8)3.1.1咳痰 (8)3.1.4诱导痰（通常不用于细菌培养） (8)3.1.5气管镜标本 (8)3.2标本运送 (9)3.3筛选并拒收下呼吸道细菌培养标本 (9)4分析中 (9)4.1痰及气管吸出物标本处理 (9)4.1.1标本处理要求 (9)4.1.2接种标本 (9)4.1.3培养 (9)4.1.4标本涂片及革兰染色 (10)4.1.5显微镜观察革兰染色结果 (10)4.2气管镜标本处理 (10)4.2.1支气管肺泡灌洗液定量培养 (10)4.2.2保护毛刷定量培养 (11)4.2.3接种其他培养基及培养 (11)4.2.4革兰染色标本处理 (11)4.2.5剩余BAL标本检测其他病原 (11)4.3连续培养并观察慢生长菌 (11)4.4分离并鉴定下呼吸道重要致病菌（参见附录C） (11)XX/TXXXXX—XXXX24.4.1链球菌属 (11)4.4.2苛养革兰阴性杆菌（在麦康凯平板上难生长） (12)4.4.3革兰阴性双球菌 (12)4.4.4革兰阴性杆菌（在麦康凯平板上生长良好） (12)4.4.5葡萄球菌属 (13)4.4.6肠球菌属 (13)4.4.7革兰阳性杆菌 (13)4.4.8鉴定丝状真菌 (13)4.4.9涂片时可见但培养不生长的细菌 (13)4.5质量控制 (13)4.5.1革兰染色 (13)4.5.4试剂 (14)5分析后报告结果 (14)5.1革兰染色报告 (14)5.1.1痰标本报告原则（见表1） (14)5.1.2BAL细胞离心涂片报告 (15)5.2报告有临床意义的微生物 (16)5.2.1报告的病原菌 (16)5.2.2培养和涂片相符合时报告的病原菌 (16)5.2.3有临床意义的数量 (16)5.2.4报告有临床意义数量的非优势菌 (16)5.2.5报告有临床意义数量的优势菌 (16)5.3对非致病菌的报告 (17)5.3.1报告“肠杆菌科革兰阴性菌” (17)5.3.2报告“非发酵革兰阴性杆菌” (17)5.3.3只生长肠球菌和凝固酶阴性葡萄球菌 (17)5.3.4报告“分离到口咽部正常菌群” (17)5.4平板上无细菌生长 (17)5.5结果解释 (17)附录A（规范性附录）下呼吸道感染主要类型及常见病原体 (18)附录B（规范性附录）支气管镜采集的标本适合诊断的病原体和检验项目 (19)附录C（规范性附录）常见可疑菌落形态及经典快速鉴定方法 (20)参考文献 (22)XX/TXXXXX—XXXX3前言本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。
感控笔记丨胡继红：懂感染，从解读细菌药敏报告开始（下）
感控笔记丨胡继红：懂感染，从解读细菌药敏报告开始（下）讲者：胡继红整理：胡秀琼审稿：张静团队：SIFIC感控笔记团队上一期感控笔记丨胡继红：懂感染，从解读细菌药敏报告开始（上），胡教授对影响药敏报告的多种因素进行了全面讲解，可是到底采用哪些方法进行抗菌药物敏感试验呢？拿到一份药敏报告，如何能够正确理解其中的意义和内涵呢？抗菌药物敏感试验方法药敏常规方法，作为表型检测的，如现在用的纸片法，仪器自动/半自动商品化仪器；参考方法有琼脂稀释法、肉汤稀释法、表型确认方法；还有基因型检测，耐药基因检测。
1、当进行以下检测时，需用MIC法而不能用纸片法：•葡萄球菌-万古霉素，达托霉素；•金黄色葡萄球菌（MRSA）-Oritavancin,Telavancin•肠球菌-万古霉素“中介”结果，达托霉素；•肺炎链球菌-头孢噻肟/头孢曲松、美罗培南（CSF常规报告），青霉素，阿莫西林/棒酸，厄他培南、亚胺培南、头孢呋辛、头孢吡肟•草绿色链球菌-青霉素•Beta溶血链球菌-达托霉素2、CLSI推荐对与下列疾病相关的分离菌群检测最小抑菌浓度及敏感性结果•心内膜炎、脑膜炎、败血症、骨髓炎、免疫抑制、假体装置•虽然“敏感”但对治疗无反应的病人3、何时用浓度梯度药敏试验（Etest）？细菌药敏试验及结果解释依据•主要是美国临床和实验室标准化研究院（CLSI）颁布，每年都会有更新。
•需氧菌/兼性菌（纸片扩散法、稀释法）药敏解释结果见M100-S27（2017）•少见菌和苛养菌（纸片扩散法、稀释法）药敏解释结果见M45-3建议常规试验和报告细菌/药物分组（稀释法、纸片法）•A组：基本试验和报告•B组：可用于首选试验，但选择性报告，当对A组同类药物耐药时可选用，脑脊液中分离肠道杆菌用三代头孢菌素；泌尿道分离菌株用复方新诺明，多种微生物感染，多部位感染；对A组药物过敏、不耐受/无效；感染控制目的。
•C组：替代性或补充性药物，当某些医院潜在对数种基本药物（特别是同类耐药或广泛流行株；治疗对基本药物过敏者；治疗少见菌感染等）或流行病学为目的向感染控制部门报告。
下呼吸道感染细菌学检验操作规范
培养基选择问题
总结词
培养基是细菌生长的媒介，不同的培养基适合不同的细菌，因此选择适合的培养 基是关键。
详细描述
针对下呼吸道感染的常见病原菌，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌等 ，应选择含有适量的血液、血清、抗生素和碳源的培养基。同时，培养基的pH 值和渗透压也要适宜，以确保细菌的正常生长。
药敏试验误差
增菌
在适当的培养基中对样本 进行增菌，以促进细菌的 生长。
分离纯化
将增菌后的样本进行分离 纯化，得到单一菌落。
细菌培养
选择培养基
根据不同的细菌选择适宜的培养基，以保证细菌 的生长和分离。
培养条件
设定适宜的温度和湿度等培养条件，保证细菌的 正常生长。
观察记录
对培养的细菌进行观察和记录，包括菌落形态、 染色特性等。
PART 02
下呼吸道感染细菌学检验 操作流程
样本采集
01
02
03
采集时间
在抗生素使用前采集下呼 吸道感染的样本，以避免 抗生素对细菌的影响。
采集方法
根据感染部位选择合适的 采集方法，如痰液、支气 管肺泡灌洗液等。
注意事项
采集过程中要严格遵守无 菌操作原则，避免交叉感 染。
样本处理
预处理
去除样本中的杂质，如痰 液中的唾液、食物残渣等 。
药敏试验的方法包括纸片法、稀 释法和自动化仪器法等，应根据
具体情况选择合适的方法。
药敏试验结果应准确、可靠，为 临床医生提供准确的抗生素选择
依据。
结果报告要求
结果报告应及时、准确，以便临床医 生及时了解患者病情和治疗情况。
结果报告应包括细菌种类、药敏试验 结果等信息，以便临床医生选择合适 的抗生素进行治疗。
下呼吸道感染细菌学检验操作规范详解演示文稿
痰及下呼吸道标本细菌学检验操作流程
痰及下呼吸道分泌物标本 肉眼观察及涂片革兰染色白细胞、鳞状上皮细胞和细菌学显微镜检查
初步报告
合格标本
培养前处理
血平板
（5%CO2环境）
巧克力平板 （5%CO2环境）
麦康凯平板
（需氧环境）
不合格标本
拒收及建议重新 采集合格标本
菌落观察，涂片染色镜检 结合涂片白细胞、鳞状上皮细胞计数和细菌学镜检结果与培养结果综合分析
第22页，共25页。
当在同一培养基上分离出多种病原菌时， 应主动与临床医生联系，结合患者的临床症状、 痰涂片染色镜检及近期细菌培养结果（如近期 同一病人多次分离培养出同一种菌）等综合判 断所分离的多种细菌中哪一种菌可能为优势病 原菌。当分离的优势菌与涂片染色镜检结果相 符时，优势菌必需进行药敏试验。若分离培养 结果与涂片染色镜检结果不相符时，或少量生 长优势可疑病原菌时，也需做药敏试验，但在 报告中提示，此结果请结合临床和涂片所见进 行分析。痰及下呼吸道分泌物标本检验流程见 下图。
油镜下观察细菌形态、排列和染色特性， 可初步推定菌属（或种），涂片中所见细菌的 量及吞噬细胞内是否有细菌等，如发现酵母样 菌孢子、菌丝或放线菌、奴卡菌等，应予相应 报告和继续检查。
第18页，共25页。
（三）分离培养
痰标本培养前处理 不含或含粘液很 少的合格标本，可直接接种，遇有含大量 粘液的标本，应加入等量的液化剂（如 pH7.6的10g/L胰酶溶液等），放置35°C待 充分液化再行接种。也可加液化剂后用旋 转 混 匀 器 搅 拌 混 匀 ， 3000r/min 离 心 10min ， 弃去上清液，取沉淀物接种。
推荐判别标本合格的标准见表2。
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培养结果假阴性、假阳性的原因
附录A 汇总表
附录B 汇总表
人类口咽部定植：需氧菌、兼性厌氧菌和厌氧菌等微生物； 菌群总数：1010 ～1012CFU/mL;
健康人咽部定植菌特点： 1. 菌量～最少； 2. 需氧的正常菌群组成：革兰阳性菌为主； 3. 影响因素：人体基础条件变化影响定植菌群的种类和数量；（微生态） 举例：长期接触携带定植菌人群菌群会变化，如日托儿童的父母的肺炎链球
7 Roson,B.,J.Carratala,R.verdaguer,J.Dorca,F.Manresa,and F.Gudiol.2000.Prospective study of sputum Gram stain in the initial approach to community-acquired pneumonia requiring hospitalization.Clin.Infec.Dis.31:869-874.
主要机制：吸入定植菌；吸入气溶胶；血播性； 附录 A: “下呼吸道感染的主要类型及主要病原菌”
3.痰涂片对下呼吸道感染病原菌诊断的重要作用
痰培养：敏感性低 / 培养+ 涂片 ：提高特异性和敏感性
4.支气管纤维镜标本定量培养的临床意义
特异性 82% ～91% ，诊断价值远高于痰标本； 附录 B : “适合诊断的病原及检验项目”
胡继红 任健康 马筱玲 胡云建 王辉 徐英春 苏建荣 罗燕萍 李向阳
1 美国微生物学会:《临床微生物学操作手册》（第3版）.2019.
（Clinical Microbiology Procedures Handbook）
2 美国微生物学会:《下呼吸道感染》临床微生物学检验技术及操作系列丛书.2019
8 Gleckman,R.,J.DeVita,D.Hibert,C.Pelletier,and R.Martin.1988.Sputum gram stain assessment in community-acquired bacteremic pneumonia.J.Clin.Microbiol.26:846-849.
报告的临床意义和格式内容。
（1）明确：下呼吸道标本 适合诊断的病原和检验项目 ； （ 2 ）规定：细菌培养项目需同时做革兰染色涂片—— （ 培养 + 药敏 + 涂片）； （ 3 ）规范：痰培养 / 气管吸出物的 定性培养 程序、气管镜
采集标本的 定量培养 程序； （ 4 ）明确：报告 的临床意义和格式内容 。
分析前
标本的采集、运送
标本初筛、合格判断
分析中 定性、定量培养、涂片流程
病原菌筛查和鉴定、质量控制
分析后
染色、培养结果报告（致病菌、非致病菌）、结果解释
内容
1.口咽部定植菌群变化对肺部感染的重要影响
肺部感染的影响因素 ( 定植菌变化：健康人 G+ 免疫、基础病 /住院、用抗菌药物 G-b )
2.肺部感染的常见机制
应用范围：针对医疗机构微生物实验室； 检验项目：常规细菌培养检测下呼吸道感染病原菌； 操作流程：按分析前、分析中和分析后的顺序书写； 引言：是全篇的背景知识； 三个“规范性附录”：结果报告的重要依据。
内容—— 定性培养——痰/气管吸出物； 定量培养——支气管纤维镜采集标本； 快速排除和鉴别——重要致病菌的方法； QC——培养基和试剂的质量控制； 细菌培养报告——需结合革兰染色涂片结果；
菌、流感嗜血杆菌（具侵袭性）定植数量会增加；
基础条件变化：使用免疫抑制剂、慢性肺病、广谱抗菌药物治疗或住院患 者等人群中，革兰阴性杆菌的优势明显增加。
常见因素： 住院患者（48h后）：
病毒感染 抗菌药物
——继发细菌感染 ——杀死、抑制正常菌群，使G-b、耐药
菌过度繁殖，如大肠埃希菌、铜绿假单胞
•肺炎支原体 •肺炎/鹦鹉热衣原体 •嗜肺军团菌 •柯克斯体（Q热）
常见引起细菌性社区感染典型肺炎病原菌：
• 肺炎链球菌
• 流感嗜血杆菌
• 金黄色葡萄球
• 卡他莫拉菌
上呼吸道正常菌群
卫生部临床检验中心 陕西省人民医院 安徽省立医院 卫生部北京医院 北京大学人民医院 中国医学科学院北京协和医院 首都医科大学附属北京友谊医院 解放军总医院 浙江省温州医科大学附属第二医院
➢ 清除机制：
健康宿主吸入口腔定植菌后常无临床症状，细菌 通常被粘液柱状纤维清除。
➢ 吸入能否引起肺部感染取决于： 吸入菌的致病性及数量； 患者免疫系统； 呼吸道功能等诸方面的因素。
2）吸入气溶胶肺部感染占第二位： 主因：使用了不清洁的呼吸机。
菌、不动杆菌、阴沟肠杆菌等； 定植菌：肠道菌，MRSA，多重耐药菌
损害
——机械通气（ICU）
侵入性仪器
嗜麦芽窄食单胞菌 鲍曼不动杆菌
引起医院获得性感染
1）肺部感染的最常见机制： 肺泡内吸入了口咽部定植菌；
➢ 吸入性肺炎患者咽部菌群种类： 多侵袭性细菌或耐药细菌，如肺炎链球菌或革兰 阴性杆菌。
标本最多
判断难 报告难 不符合
• 大多数微菌？致病菌？ • 生长不同种类细菌如何报告？ • 生长不同数量细菌取舍？ • 前后两天培养结果 • 培养结果与临床诊断
痰的来源？ 是否被上呼吸道污染？
草绿色链球菌、奈瑟菌属 嗜血杆菌属、莫拉菌属
细胞内病原引起非典型肺炎：
3 叶应妩, 等.全国临床检验操作规程(第3版). 2019
4 美国微生物学会:《临床微生物学手册》(第10版).2011
5 美国微生物学会:《临床微生物学手册》(第9版).2019
6 Nagendra, S., P.Bourbeau, S.Brecher, M.Dunne, Rocco, and G.Doern.2019.Sampling variability in the microbiological evaluation of expectorated sputa and endotracheal aspirates. J. Clin. Microbiol.39:2344-2347.