洗脱和提取溶剂对挥发油β环糊精包合工艺中的包合率测定的影响

洗脱和提取溶剂对挥发油β-环糊精包合工艺中的包合率测定的影响
【摘要】目的研究不同的洗脱和提取溶剂对中药挥发油β-环糊精包合率测定的影响，建立准确的包合率测定方法。

方法以石菖蒲油包合物为模型，采用不同极性的溶剂分别进行包合物表面未包合游离药的洗涤，以及包合物中已包合药物的提取，筛选出合适溶剂组合用于挥发油包合物的包封率测定。

结果不同极性的溶剂对石菖蒲油包合物的洗涤、提取效果有很大的差别，洗涤时药物损失，石油醚<醋酸乙酯<95%乙醇，包合物中药物提取效率，甲醇=乙醇>醋酸乙酯。

结论选择极性小的石油醚为洗脱溶剂，极性大的乙醇为提取溶剂，可以准确地测定挥发油包合物的包合率。

【关键词】β-环糊精包合物包合率有机溶剂洗涤提取
Effect of elute and extraction solvent on the inclusion efficiency determination of essential oil and β-cyclodextrin complex
【Abstract】 Objective To investigate the effect of elute and extraction solvents on the determination of inclusion efficiency of β-cyclodextrin （β-CD） complex.Methods Acorus gramineus soland was used as model .Different polar solvent was used for washing the uncomplexed oil and extracting the complexed oil respectively. The optimum solvent group were selected to determine inclusion efficiency. Results There
existed big difference between different polar solvent used for washing the Acorus gramineus soland inclusion and extrating the mixture. Low polar solvent fit for washing and high polar solvent ruined the β-CD inclusion.Conclusion The low polar solvent petroleum and high polar solvent ethanol were selected as elution and extraction solvent respectively for the inclusion efficiency determination of essential oil β-CD complex.
【Key words】β-cyclodextrin inclusion; inclusion rate; organic solvent; washing; extraction
挥发油是中药中常见的有效成分，目前在制备中药固体制剂时常采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，再将挥发油溶于乙醇，喷入到颗粒或粉末的制备工艺。

由于挥发油稳定性较差，简单地喷入最后的制剂中的做法，常导致制剂在放置过程中，里面挥发油成分含量降低或消失。

采用β-环糊精包合技术，可使挥发油与环糊精生成稳定的包合物，增加药物的稳定性，同时使液体药物粉末化，目前该技术已经广泛应用在含有挥发油的中药固体制剂工艺中［1］。

在包合物的制备研究中，人们通过测定包合率来考察优选包合制备工艺。

测定包合物的包合率，一方面需要除去吸附的未包合的药物，避免对包合率测定的干扰，另一方面需要设法将包合的药物充分提取出来。

目前较多的方法是采用溶剂提取法来测定包合率，选择两种不同的溶剂来处理包合物，一种溶剂为洗脱溶剂，用来除去未包合的药物，而不将包合的药物提取出来；而另一种溶剂是提取溶剂，需将已
经包合的药物从包合物中提取出来。

已有的关于挥发油包合工艺文献中，包合率测定时采用的洗涤及提取的溶剂比较混乱，为此，笔者在石菖蒲油β-环糊精包合物研究过程中，对包合率测定中几种常用的溶剂进行了考察筛选，确定了准确测定包合率的洗涤及提取溶剂。

1 仪器与试药
1.1 仪器 Heλiosα紫外分光光度计（美国热电），SB5500DT超声提取器（上海必能信），β-环糊精（陕西礼泉化工有限实业公司），JTM-50AB胶体磨（沈阳航天新光）。

1.2 试药石菖蒲油（超临界CO2法萃取，自制），石油醚、乙酸乙酯、乙醇、甲醇等均为分析纯。

2 方法与结果
2.1 石菖蒲β-环糊精包合物的制备取β-环糊精加3倍量水，置于胶体磨中研磨，按适当的比例加入石菖蒲油，研磨20min，研磨后的混悬液用布氏漏斗抽滤，滤饼经真空低温干燥即得包合物。

2.2 样品测定［2］将石菖蒲油用无水乙醇稀释，随行溶剂空白，置紫外分光光度计上全波长扫描，结果见图1。

得到石菖蒲油紫外最大吸收波长有两个，为254和304nm，由于304nm处干扰少，故选定在304nm条件下测定样品。

图1 石菖蒲油紫外扫描图
精密称取石菖蒲挥发油15.40mg置50ml量瓶中，加入无水乙醇配制成0.308mg/ml的对照品溶液。

吸取0.3，0.6，0.9，1.2，1.5，1.7，2.0ml对照品溶液分别置10ml的量瓶中，加入无水乙醇稀释并
定容至刻度，制得浓度为9.24，18.48，27.72，36.96，46.20，52.36，61.60μg/ml的对照品溶液，以无水乙醇作空白溶液, 304nm为测定波长，进行测定。

以吸光度值 A对浓度C进行回归分析，得回归方程：A＝15.73C+0.0493，r＝0.9999。

结果表明石菖蒲油在9.24～61.60μg/ml 范围线性关系良好。

将包合物的提取或洗涤样品溶液，在304nm测定紫外吸收，代入标准曲线方程，求得含量。

2.3 提取溶剂的考察包合物常用石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇、甲醇提取包合物中的成分［3，4］，本试验比较以上几种溶剂对包合物的提取效果。

将干燥包合物研细，过四号筛，取粉末50mg各4份，分别置100ml 容量瓶中，加入溶剂（石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇、甲醇）定容至刻度，超声提取10min，放至室温，用相应溶剂定容，滤过，测定。

试验结果见表1。

结果可看出，不同的提取溶剂对石菖蒲油的提取效果有很大的差别，其中以甲醇和无水乙醇的提取效果为好，乙酸乙酯次之，石油醚效果最差。

因此，可选择甲醇或无水乙醇为包合物总药量的提取溶剂。

表1 不同溶剂提取结果
2.4 洗涤溶剂的考察将干燥包合物研细，过四号筛，取粉末约50mg 各3份，置载有滤纸的漏斗内，分别以石油醚（60℃～90℃）、乙酸乙酯、95%乙醇等溶剂洗涤3次，每次10ml，收集洗涤液，并用相应溶剂稀释并定容至50ml。

不同的洗涤溶液及次数对未包合的石菖蒲油的洗涤效果,试验结果见表2。

从表2中可以看出，不同的洗涤溶剂对石菖蒲油的洗涤效
果有很大的差别，其中以石油醚的洗脱量为最小；在采用考察洗涤次数对未包合油的洗涤效果时，试验数据表明，采用石油醚洗涤时，洗脱油量第一次基本洗脱完全，后两次洗脱基本没有洗脱下药物，所以基本认为未包合的油已经洗涤完全。

而乙醇洗脱药量最大，后两次洗脱液中仍有药物。

估计可能除了未包合的游离药物，一部分已经包合的药物也被洗脱出来。

故本试验确定样品的洗涤方法为：用石油醚（60℃～90℃）洗涤一次。

表2 不同溶剂的洗涤结果
3 讨论
测定包合物的包合率，一方面需要将游离药物与包合的药物分离，另一方面要把包合的药物充分提取或释放出来，所以选择适当的溶剂至关重要。

作为测定游离药物溶剂，应避免破坏包合物的结构，不至于将包合的药物提取出来；而测定包合药量的提取溶剂，则需将已经包合的药物从包合物中提取出来。

已有的中药挥发油包合物文献中包合率测定时采用洗涤及提取溶剂比较混乱，有的采用极性大的溶剂如乙醇来洗涤包合物表面吸附的游离药物，这将造成包合药物的损失；或者有使用极性较小的溶剂如乙酸乙酯来提取包合挥发油的报道，这将造成提取挥发油不完全。

从本文结果可见，石油醚作为极性小的溶剂对于包合物包封的药物没有破坏，适于作为洗脱溶剂，而乙醇作为极性大的溶剂容易破坏包合物，适于作为提取溶剂。

以往文献中曾有使用乙酸乙酯来提取包合挥发油的报道，我们的结果显示乙酸乙酯不适于作为提取溶剂。

已有文献报道，乙醇可以破坏环糊精的结构，容易使里面的药物游离出来。

此种情况可能与β-环糊精的结构有关。

β-环糊精为七个葡萄糖单体以1，4-糖苷键结合而成一个环形中空的桶状物［5］，其两端是亲水的，空穴内是疏水［6］。

根据溶剂的相似相溶原理，当洗涤（或脱包）时，极性较大的溶剂比较容易靠近包合物，进而破坏β－环糊精与客体结合的驱动力。

4 结论
故药物包合后洗涤未包合的药物应选择极性较小的石油醚为溶剂，测定总药物含量时应选择极性较大的无水乙醇或甲醇为溶剂。

【参考文献】
1 刘有平,秦春梅,鄢丹.β-环糊精物在中药学领域中的研究进展.中草药，2003,34（7）:4-7.
2 蒋丽君,夏新华.石菖蒲挥发油与β-环糊精包合物的制备工艺研究.中国中药杂志, 2001,26（ 2）:109-111.
3 邓伟峰,谢昭明,黄本东.β-环糊精包合物脱包方法研究.湖南中医药学报，2000,6（4）:53.
4 赵阳等.丁香油-β-环糊精制备工艺的研究.中国中医药信息杂志,2000,7（3）:19-21.
5 阎有旺. 环糊精包合物. 化学世界,2006，（5）：252-254.
6 何华. 尼莫地平包合物的制备及其光解动力学研究. 东南大学学报，2004，3（2）:82-85.。