血小板聚集功能生物参考区间验证

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血小板聚集功能生物参考区间验证

St udy on t he V al i dat i on f or B i ol ogi c al R ef er ence I nt e r va l

of Pl at el et A ggr egat i on

实验方法研究

马建宏(M AJi an—hong)。李广华(LI G uang—hua)．周东铭(ZH O U D ong-r ui ng)。梁玲(H A N G Li ng)。

黄美群(H U A N G M ei—qun)。欧阳维富(O U Y A N G W ei f u J，黄锦维(H U A NGJ i n—w ei)。贾雪(JI A X ue)

广东省人民医院、广东省医学科学院。广州，510080

G u a ngdo ng G en er al H os pi t a l。G uang dong A cadem y of M e di cal S c i e nc es-G uangz hou510080，Chi na

摘要：目的对血小板聚集仪C H R O N O-L O G C A560的生物参考区间进行验证，以保证其适用于临床。方法按美国临床实验室标准化委员会NC C L S C28-A2推荐的方法，验证项目选择健康参考个体20例，用仪器C H R O N O L O G

C A560血小板聚集仪进行检测。结果20例健康个体数据中，以胶原作为聚集剂95％结果符合厂家提供的生物参考

区间，而另外两个聚集剂二磷酸酰苷(A D P)和肾上腺素的结果则100％符合该生物参考区间。结论原厂家提供的生物区间适用于广东省地区人群，可供使用。实验验证简单易行，容易发现生物参考区间的偏离，值得建立完善的验证制度和程序，并推广应用。

关键词：血小板聚集功能；生物参考区间；验证

[中图分类号]R446[文献标志码]B[文章编号]1009—6213(2010)06-284-03

通过生物参考区间，我们可以判断出检验结果正确与否。但按照国际化学委员会提出的建立实验室生物参考区间的方法要求严格、程序复杂，不适合中、小型实验室贯彻执行，因此许多实验室选择使用《全国临床检验操作规程》提供的参考值。但是检验对象来源于不同个体，年龄、性别、民族、居住地或妊娠与否等差异都可能带来生物参考区间上的差异；不同的检验方法、系统和不同的仪器、试剂来源也会导致结果的不一致。因此每个实验室引用文献或厂家的说明书必须慎重，最好是自行建立生物参考区间。为确保原厂家提供的生物参考区间符合临床要求，本文对血小板聚集功能(聚集剂有胶原、二磷酸酰苷和肾上腺素)生物参考区间进行了验证探讨。

1资料与方法

1．1标本来源健康参考个体20名，均来源于本院体检中心，给自愿者发放“知情同意书”和“广东省人民医院血小板聚集试验样本调查问卷”，由研究医生初步确定体检者符合要求并按照抽血要求抽取2．7 I I l l的血量进行血小板聚集功能的研究试验。

1．2仪器与试剂美国血小板聚集分析仪C hr ono—L og560Ca；试剂为美国C hr ono—L og公司产品。

1．3方法按美国临床实验室标准化委员会N C C L S C28-A2推荐方法进行验证。

1．3．1方案一：收集一组20例健康个体标本在已经进行过性能评价且结果稳定可靠的检测系统上检测，假如检测结果95％(19例)落在假设的参考区间以内，不超过5％(1例)结果落在假设参考区间以外，说明该参考区间有效；假如有2例或者以上检测结果落在参考区间以外，必须重新收集第二组数据进行检测。假如第二组数据不超过2例结果落在参考区间以外，可认为验证有效。

方案二：假如第二组数据超过2例结果落在假定参考区间以外，先检查检测系统的性能、检测程序是否正确，然后考虑该项目是否具有人群生物特性，并作进一步调查，重新选择合适的生物参考区间，必要时重新收集120个标本自建生物参考区间…。1．3．2健康参考个体选择要求(1)必须是没有任何影响检测结果的生理卫生指征(包括月经、怀孕)者；(2)发育、精神正常，无肝脏病变，无高脂血症；

(3)近期避免大强度规则运动(如持续跑步40m i n每周4次)旧J，避免吸烟∞J、喝酒、服避孕药、用过阿司匹林等抗凝药物者【4】。

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1．3．3检测系统准备用新鲜混合血浆作批间质控，在广东省人民医院住院行外科手术的病人术前检查凝血项目标本中，选取凝血指标正常(其血小板数目在120～200×109／L，最佳在150x109／L)者，采血后2h内，共随机选取其中20份，于2009年9月至2009年10月间连续20个工作日每日按以上方法进行。将上述已选好的标本轻轻颠倒缓慢混匀约20次，移取0．5m l至一支光滑洁净的硅化塑料管中按照要求进行血小板聚集功能的A D P最大聚集率检测。

用一健康人新鲜血浆作批内质控，标本来源于广东省人民医院体检中心。按照合格标本要求抽血10管，共27I I l l，连续20次做血小板聚集功能的A D P最大聚集率测定。

1．3．4实验对象的准备实验对象按照本实验健康参考个体要求选取，主要通过样本调查问卷和电话反馈获取信息，并由研究者送检标本进行检测”J。

2结果

2．1首先对美国血小板聚集分析仪C hr ono—L og 560C a的性能进行验证、评价。

目前血小板聚集功能这个检验项目暂时没有质控品，所以本实验选用混合血浆和新鲜血浆，盯(能力验证)为20％。本实验中，所选检测项目的批间(7．38％)与批内(6．39％)的变异系数均<10％，即小于Pr，由此可证明检测系统的稳定。

2．220例健康参考个体在经过性能验证且评价符合要求的血小板聚集分析仪C hr ono—l og560C a上进行检测，数据在2h内完成，结果见表1、表2。以下健康个体参考区间由有效数据通过SPS Sl l．5计算5％一95％区间范围获得。

表1健康参考个体范围一览表

’注：胶原的数据是20个健康成人的数据中剔除了1个不满足要求的超标数据，有效数据共19个，占原来数据的95％，数据合格。

表1结果显示，本次验证的3个项目的健康参考

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个体测定结果95％以上落在现用的参考区间范围内。

表2血小板聚集功能的检测数据

诱导剂(co麟llagen)臻(A勰DP)苷(嚣：)

3讨论

本实验充分尊重实验者的医学道德伦理要求，严格按照“只有被实验者同意才可以进行实验”的原则进行标本的采集和检测。

按N CC L S C28．A2文件要求，在生物参考区间进行验证前须对检测仪器进行性能评价。因血小板难以保存，血小板聚集实验一直以来没有质控品，故本实验通过选用新鲜混合血浆和新鲜个体血浆来评价其批间稳定性与批内稳定性。由于国际上没有明确的文件规定血小板聚集实验的盯值，在此，我们选用PT=20％。只要批间质控和批内质控均小于P I．，即10％，就证明了仪器的稳定性。本实验中，所选检测项目的批间质控与批内质控的变异系均<10％，由