常用抗体标记荧光染料的特性及其应用
抗体标记方式
抗体标记方式引言：抗体标记是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断中的方法，通过将抗体与特定的标记物结合，可以实现对目标分子的高度敏感和特异性检测。
本文将介绍几种常见的抗体标记方式，包括荧光标记、酶标记、放射性标记以及磁性标记。
一、荧光标记荧光标记是一种常见的抗体标记方法，通过将荧光染料与抗体结合，可以实现对目标分子的可视化检测。
荧光标记具有高灵敏度、高特异性、实时监测等优点，常用于免疫组织化学、流式细胞术等研究领域。
常见的荧光染料有荧光素、荧光素同工异构体、荧光素同系异构体等。
二、酶标记酶标记是一种常用的抗体标记方式，通过将酶与抗体结合，可以实现对目标分子的间接检测。
酶标记的原理是将酶与底物反应产生可检测的产物，常见的酶标记有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等。
酶标记具有灵敏度高、信号稳定、操作简便等特点，广泛应用于酶联免疫吸附试验（ELISA）等实验中。
三、放射性标记放射性标记是一种非常敏感的抗体标记方式，通过将放射性同位素与抗体结合，可以实现对目标分子的定量检测。
放射性标记常用的同位素有^125I、^32P等，其辐射可被探测器捕获，从而实现对目标分子的高灵敏度检测。
放射性标记在免疫组织化学、放射免疫分析等领域得到广泛应用。
四、磁性标记磁性标记是一种新兴的抗体标记方式，通过将磁性颗粒与抗体结合，可以实现对目标分子的快速分离和检测。
磁性标记具有操作简便、快速高效、可重复使用等优点，常用于磁性分离、磁共振成像等研究领域。
磁性标记颗粒的大小和形状可以根据需要进行调节，常用的磁性标记颗粒有超顺磁性颗粒、亚顺磁性颗粒等。
结论：抗体标记是一种重要的生物学工具，不同的标记方式具有各自的特点和应用范围。
荧光标记适用于可视化检测，酶标记适用于间接检测，放射性标记适用于高灵敏度定量检测，磁性标记适用于快速分离和检测。
在实际应用中，选择合适的抗体标记方式非常重要，可以根据研究需求和实验条件综合考虑。
未来，随着技术的不断发展和创新，抗体标记方式将更加多样化和精准化，为生物医学研究和临床诊断提供更多可能。
DAPI标记的原理
DAPI标记的原理，应用以及优缺点一、DAPI的特性DAPI荧光染料是由Dann等人于1971年合成的，共化学名称为4',6-diamidino-2-phenylindole, dihydrochloride (DAPI) 的中文名称是4，6-联脒-2-苯基吲哚，其结构式为是一种常用的荧光染料，分子量为350．3．这种二价阳离于的荧光染料是一种黄色晶体易镕于水，最大溶解度为2．5％．可按高浓度的两价或高价阴离于(硫酸盐离子和磷酸盐离子)所沉淀，其作用机理与溴化乙锭等染色剂的机理类似：DAPI具有与各种来源的、富古A—T碱基对的DNA专一结合的特点．DAPI与DNA形成的复合物发出志强度的浅蓝色荧光．共最大的激发波长为372nm，最大的发射波长为454nm，其荧光可按适当浓度的SO42－加强．DAPI最初是作为一种杀锥虫剂合成的，以后用于DNA的检测．Brunk等和Coleman等人证明了DAPI荧光强度与细胞内的DNA含量呈正比，并指出，在pH4—8范围内，DAPI－DNA 复合物的荧光强度不受pH 变化的影响．用DAPI染色法可以测出2x10－16g DNA。
近年来，DAPI多用于细胞生物学和细胞遗传学的研究，由于死、活细胞的细胞膜对DAPI的通透性不同，极低浓度(0.5ug／ml)的DAPI 就可与死亡细胞的DNA结合，产生明亮而稳定的荧光，所以人们开始把这一理想的话体荧光染科用于微生物、植物和动物细胞的细胞生物学和生物化学的研究。
作为一种新型的DNA荧光染科，它具有专一性强、灵敏度高、稳定性好等特点，而且迄今尚来见到DAPI致癌。
致畸等毒性报告．有文献称之为无毒性荧光染料(Renard，1982)．利用DAPI能与细胞DNA稳定结合这一特性，最近被人们用于干细胞的体内示踪。
如造血干细胞和间充质干细胞的体内移植。
DAPI是一种标记细胞核的荧光染料，因其与dsDNA有高度的亲和力，与DNA结合后会发出强烈的荧光。
常用免疫荧光染色抗体
常用免疫荧光染色抗体概述免疫荧光染色是一种常用的实验技术，用于检测和定位细胞中的特定蛋白质或其他分子。
它通过结合特异性抗体和荧光染料来实现对目标分子的可视化。
常用的免疫荧光染色抗体是指在科学研究和临床诊断中广泛应用的一类抗体。
抗体的基本原理抗体是一种由机体产生的特异性蛋白质，它可以与特定抗原结合并形成稳定的复合物。
在免疫荧光染色中，选择适当的抗体可以使目标分子与荧光染料结合，从而产生荧光信号。
这种信号可以通过显微镜观察，并且可以提供关于目标分子在细胞或组织中的位置和表达水平的信息。
免疫荧光染色抗体的选择选择适当的抗体对于成功进行免疫荧光染色非常重要。
以下是一些选择抗体时需要考虑的因素：1. 特异性抗体应具有高度特异性，即只与目标分子结合，而不与其他分子发生交叉反应。
这可以通过使用已经经过验证的抗体或进行免疫吸附等方法来确保。
2. 效价抗体的效价是指其与抗原结合的能力。
高效价的抗体可以更好地检测低表达水平的目标分子。
一般来说，选择效价较高的抗体可以提高免疫荧光染色的灵敏度和准确性。
3. 免疫原性选择抗体时需要考虑其免疫原性。
某些抗体可能会引发机体免疫反应，导致实验结果不准确或产生假阳性信号。
因此，在选择抗体时需要注意其是否具有良好的免疫原性。
4. 经济性在实验室中进行大规模实验时，经济性也是选择抗体时需要考虑的因素之一。
一些常用的商业化抗体价格较高，因此需要根据实验需求和预算进行选择。
常用免疫荧光染色技术常用的免疫荧光染色技术包括直接染色和间接染色两种方法。
1. 直接染色直接染色是将荧光标记的抗体直接与目标分子结合。
这种方法简单快速，适用于只需要检测一个目标分子的情况。
直接染色可以通过将荧光染料共价结合到抗体上来实现。
2. 间接染色间接染色是在目标分子与一种未标记的一抗（一级抗体）结合后，使用荧光标记的二抗（二级抗体）来检测。
这种方法可以增强信号强度，提高检测灵敏度。
一般来说，二级抗体是针对一级抗体不同物种来源的抗体。
免疫分析中常用的荧光染料与标记染色
（⼀）免疫荧光标记最常⽤的荧光染料
最常⽤的染料有FITC和藻红蛋⽩类（PE）及罗丹明等。
FITC（异硫氰酸荧光素）：绿⾊530nm
PE（藻红蛋⽩）：橙黄⾊575nm
PerCP（多甲藻黄素叶绿素蛋⽩）：深红⾊675nm
PI（碘化丙啶）：橙红⾊620nm
488nm波长的氩离⼦激光激发
APC（别藻青蛋⽩）：红⾊660nm
630nm波长的氦氖激光或红⾊⼆极管激光激发
（⼆）免疫荧光标记
常⽤的标记染⾊为直接免疫荧光染⾊和间接免疫荧光染⾊。
在进⾏双参数或多参数分析时，常常需要进⾏荧光抗体的组合标记，⽬前已经有双⾊、三⾊以及四⾊标记。
（三）细胞⾃发荧光
⾃发荧光信号为噪声信号，在多数情况下会⼲扰对特异荧光信号的分辨和测量。
在免疫细胞化学等测量中，对于结合⽔平不⾼的荧光抗体来说，如何提⾼信噪⽐是个关键。
⼀般说来，细胞成分中能够产⽣⾃发荧光的分⼦（例如核黄素、细胞⾊素等）的含量越⾼，⾃发荧光越强；培养细胞中死细胞／活细胞⽐例越⾼，⾃发荧光越强；细胞样品中所含亮细胞的⽐例越⾼，⾃发荧光越强。
荧光染料在生物标记中的应用方法
荧光染料在生物标记中的应用方法荧光染料是一种广泛应用于生物标记领域的工具，它们可以通过各种方法标记和追踪生物分子、细胞和组织。
本文将介绍荧光染料在生物标记中的应用方法。
一、荧光染料的选择荧光染料的选择是生物标记中的关键一步。
在选择荧光染料时，需要考虑其吸收和发射光谱的重叠程度，以及荧光强度、稳定性和耐光性等因素。
一些常用的荧光染料包括荧光素、荧光素同位素、硫苏磺酮类染料和量子点等。
这些染料具有不同的特性和应用范围，可以根据实验需要选择合适的染料。
二、直接染色法直接染色法是将荧光染料直接与目标分子或细胞结构结合来实现标记的方法。
例如，可以利用共价键或亲和性结合将荧光染料与抗体结合，在细胞或组织中特异性地标记目标蛋白。
这种方法具有简单、直观的优点，可以快速得到标记结果。
然而，直接染色法通常需要较高的染料浓度，可能对生物样本产生毒性或干扰效应。
三、间接染色法间接染色法是将荧光标记的二级抗体与一级抗体结合，间接地将荧光染料引入目标分子或细胞结构中。
这种方法具有较高的灵敏度和特异性，可用于检测低表达量的目标分子。
间接染色法还可以利用荧光标记的亲和素（如蛋白A和蛋白G）结合至目标分子上，实现高效的标记效果。
四、荧光染料的共淬灭共淬灭是利用两种或多种荧光染料之间的相互作用来实现生物标记的方法。
常见的共淬灭方法包括荧光共淬灭显微镜和荧光共淬灭光谱学。
通过选择适当的荧光染料组合和参数设置，可以实现超分辨率成像和多重标记的效果。
这种方法具有高分辨率和灵敏度的优点，可用于研究生物分子和细胞的微观结构和功能。
五、荧光蛋白标记除了荧光染料，荧光蛋白也是常用的生物标记工具。
荧光蛋白是由生物体产生的蛋白质，具有自发光的特性。
例如，绿色荧光蛋白（GFP）可以利用其自身的荧光来标记特定的蛋白质或细胞。
荧光蛋白标记具有非侵入性和实时观察的优势，已广泛应用于细胞生物学和分子生物学研究领域。
六、应用案例荧光染料在生物标记领域已经取得了许多重要应用。
cy3 cy5激发波长和发射波长
cy3 cy5激发波长和发射波长1. 引言生物荧光染料在各个领域中起着重要的作用，特别是在生物医学研究中。
荧光染料的发射波长和激发波长是选择合适染料的关键因素之一。
本文将介绍cy3和cy5这两种常用生物荧光染料的特性、激发波长和发射波长。
2. cy3 激发波长和发射波长cy3（Cyanine 3）是一种荧光染料，通常用于单克隆抗体标记等应用。
它的化学结构由若干个苯环和一个三甲基链组成。
cy3染料具有以下特点： - 吸收峰和激发波长：cy3染料在可见光范围内吸收，其吸收峰位于550纳米附近，对应的激发波长一般为532-555纳米。
- 发射峰和发射波长：cy3染料在吸收光能量后会发出荧光，其发射峰位于570纳米附近，对应的发射波长一般为570-610纳米。
- 光稳定性：cy3染料具有较好的光稳定性，能够在长时间的光照条件下保持较高的荧光强度。
3. cy5 激发波长和发射波长cy5（Cyanine 5）是另一种常用的荧光染料，它通常用于生物成像、分子探针等应用。
cy5染料具有以下特点： - 吸收峰和激发波长：cy5染料在近红外光范围内吸收，其吸收峰位于650纳米附近，对应的激发波长一般为647-666纳米。
- 发射峰和发射波长：cy5染料在吸收光能量后会发出荧光，其发射峰位于670纳米附近，对应的发射波长一般为667-714纳米。
- 光稳定性：cy5染料具有较好的光稳定性，能够在长时间的光照条件下保持较高的荧光强度。
4. 荧光染料选择在选择荧光染料时，激发波长和发射波长非常关键。
合适的激发波长和发射波长能够使得荧光探针在特定的实验条件下表现出良好的性能。
选择合适的荧光染料需考虑以下几个因素： - 光源可用性：确定实验室中可用的激光器或光源的激发波长范围，根据其激发波长选择合适的荧光染料。
- 光敏感度：不同荧光染料对光敏感度不同，在长期光照下可能产生荧光强度衰减。
因此，在长时间实验中，选择光稳定性较好的荧光染料。
常见荧光染料及用途
常见荧光染料及用途《常见荧光染料及用途》荧光染料是一种能够吸收可见光或紫外光，并在吸收能量的激发下发射可见光的化学物质。
它们的应用非常广泛，涵盖了许多领域，例如生物医学、材料科学、环境监测等。
以下介绍几种常见的荧光染料及其主要用途。
1. 墨水蓝(BR)：墨水蓝是一种具有强烈蓝色荧光的染料，常用于生物实验中的DNA染色。
它与DNA结合后能发出强烈的荧光信号，从而在实验中方便地观察和分析DNA的存在和定位。
2. 罗丹明B(RhB)：罗丹明B是一种红色荧光染料，广泛用于组织切片和细胞染色。
它能够与细胞核和胞浆中的核酸结合，以显示细胞和组织的结构，帮助科研人员研究细胞分裂和组织结构变化。
3. 草酸罗丹明G(OG)：草酸罗丹明G是一种绿色荧光染料，主要应用于蛋白质和核酸的定量分析。
在分光光度计中配合荧光检测器使用，可以精确测定溶液中蛋白质和核酸的浓度。
4. 罗丹明110(Rh110)：罗丹明110是一种黄绿色荧光染料，常用于细胞活性检测。
通过与细胞内的酶或细胞膜结合，罗丹明110可以用来评估细胞的活力和存活情况，特别适用于细胞毒性测试和细胞增殖研究。
5. 荧光素(FITC)：荧光素是一种与生物相容性极高的荧光染料，常用于免疫染色和分子生物学实验。
它能与抗体特异性结合，在免疫组化和流式细胞术中用于检测蛋白质的表达以及细胞表面标记。
以上只是常见的荧光染料中的几种，它们的应用还远不止于此。
随着科学技术的不断进步，新型的荧光染料不断问世，为各个领域的研究提供了更多更有力的工具。
通过荧光染料的运用，科学家们能够更好地理解和研究生物、物质和环境，进一步推动科学的发展。
临床常用标记免疫技术及特点
临床常用标记免疫技术及特点1.引言1.1 概述标记免疫技术是现代生物医学领域中常用的一种实验方法，其通过在生物样本中引入特定的标记物，来检测、定量或分析目标物质的存在和性质。
这些标记物可以是荧光染料、放射性同位素、酶或其他具有特异性的物质。
在临床医学中，标记免疫技术具有广泛的应用，可以用于诊断疾病、评估治疗效果、研究疾病机制等方面。
常用的标记免疫技术包括免疫荧光染色、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)等。
免疫荧光染色技术是一种利用特异性抗体与标记物结合后发出荧光信号的技术。
通过荧光显微镜观察样本中的荧光信号，可以定位、鉴定并定量分析目标物质。
这种技术具有高灵敏度、高特异性和高分辨率的特点。
酶联免疫吸附测定(ELISA)是一种利用特异性抗体与酶结合后，通过酶催化反应来产生可定量的信号的技术。
ELISA技术可以用于检测血清中的免疫球蛋白、抗原、抗体等多种生物分子，并可定量测定其浓度。
ELISA 技术具有高灵敏度、高准确性和高通量的特点。
放射免疫测定(RIA)是一种利用放射性同位素标记分子，通过测量放射性同位素放出的射线来定量目标物质的技术。
RIA技术在测定极低浓度物质或微量物质时具有非常高的敏感性和特异性。
然而由于放射性同位素标记物的安全性和环境污染问题，RIA技术在临床实验室中的应用受到了限制。
总之，标记免疫技术在临床医学中具有重要的应用价值，可以帮助医生准确、快速地诊断疾病，评估治疗效果，深入研究疾病的发生机制。
随着科学技术的不断进步，标记免疫技术也在不断发展，将为临床医学带来更多的突破和进展。
1.2文章结构文章结构部分：本篇文章主要介绍临床常用标记免疫技术及其特点。
文章结构如下：第一部分为引言，包括概述、文章结构和目的。
在概述中，将介绍免疫技术在临床应用中的重要性和广泛应用的背景。
在文章结构部分，将详细说明本篇文章的章节分布和内容安排。
在目的部分，将说明本文的目的和意义，为读者明确文章的目标。
流式常用试剂配制精选文档
流式常用试剂配制精选文档TTMS system office room 【TTMS16H-TTMS2A-TTMS8Q8-一、流式细胞术常用试剂1、10％NaN3：将10gNaN3溶解于100ml蒸馏水中，室温保存；活体实验或在辣根过氧化酶反应中可不使用NaN3。
2、3％BSA/PBS：100ml PBS中加入3g BSA，使之溶解，再加入 10％的NaN3。
3、500mmol/L EDTA：将186g EDTA?Na2?2H2O溶解于400ml蒸馏水中，用NaOH将PH调至，补充蒸馏水至500ml，分装，高压灭菌，室温保存。
4、4％多聚甲醛：在磁力搅拌下，将4g多聚甲醛溶于100ml PBS，加入数滴NaOH，在通风柜中于60度加热，使其溶解，调整PH至，使用前新鲜配制。
5、消化液：％胰蛋白酶（用培养液或PBS配制）或％胰蛋白酶与％ EDTA的混合液。
6、红细胞裂解液：NH4Cl ，KHCO3 ，EDTA?2Na ，溶于100ml水中，调PH 至，补充蒸馏水至500ml，4度储存，使用时需恢复至室温。
7、流式细胞抗体稀释剂：L PBS液（PH ）＋1％BSA＋％Na2N3。
8、常用细胞破膜剂：PBS液（PH ）＋1％FBS（或BSA）＋％NaN3＋％saponin（Sigma的效果不错）。
9、流式细胞染色洗涤液：含2％的BSA、％NaN3的PBS（PH ）。
10、PI染液（保存液，10×，用于细胞周期和凋亡检测）：10mg PI溶于10ml PBS，加入2mg无DNA酶的RNA酶，4度保存备用。
应用时，10倍稀释，每管加～ PI染液。
11、Hanks液的配制（BSS，主要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液，不能单独作为细胞、组织培养液）原液ANaCl 160gMgSO4?7H2O 2gKCl 8gMgCl?6H2O 2gCaCl2溶于1000ml双蒸水原液B1）Na2HPO4?12H2OKH2PO4葡萄糖溶于800ml双蒸水2）％酚红溶液：取酚红置玻璃研钵中，逐滴加入 NaOH并研磨，直至完全溶解，约加入 NaOH 10ml。
常用荧光染料的激发和发射波长
常用荧光染料的激发和发射波长荧光染料广泛应用于生物医学、材料科学、光电子学等领域，其特点是在受到激发后会发出可见光，具有较高的荧光量子产率和灵敏度。
在实际应用中，荧光染料的激发和发射波长显得尤为重要，因此本文将整理常用荧光染料的激发和发射波长，方便读者在实验或研究中的选择。
常用荧光染料1. FITC （荧光同型素-异硫氰酸酯）FITC是一种广泛应用于生物学实验的荧光染料，常用于标记蛋白质、抗体、药物等分子，其最大吸收波长和最大发射波长分别为495 nm和519 nm。
FITC的分子量小，荧光量子产率高，这使得它成为一种理想的荧光标记分子。
2. Rhodamine 123Rhodamine 123是一种阳离子荧光染料，可在细胞中标记线粒体，同时也可在许多生物学应用中标定其他细胞器。
Rhodamine 123的最大吸收波长和最大发射波长分别为507 nm和529 nm，其荧光量子产率高，荧光亮度高。
3. Texas RedTexas Red是一种常用的激发波长长达596 nm的荧光染料，在荧光共振能量转移等实验中被广泛应用。
Texas Red的最大发射波长在610 nm左右，其在荧光共振能量转移实验中能够提供强烈的荧光标记。
4. PE （腺苷酸酰基酯）PE是一种被广泛用于流式细胞仪实验中的荧光染料，其最大激发波长为488 nm，最大发射波长在575 nm左右。
PE作为一种非常亮的荧光染料，可用于标记和鉴定特定类型的细胞。
荧光染料的选择在实验或研究中，需要根据具体的情况选择合适的荧光染料。
对于激发波长和发射波长的选择，一些因素应该被考虑，如：•研究对象的荧光信号贡献；•其他染料的交叉激发和发射波长；•激发和发射波长的设备可用范围。
一般来说，应选择滤光片相对集中并且有较高吸收的荧光染料，以确保设备需要的能量和检测返回信号的量达到最大程度。
总结本文简要介绍了几种常用的荧光染料及其特性，这些荧光染料可以分别从不同角度用于生物学、光学、材料学等领域的研究和实验中。
流式细胞所用试剂配置及荧光特性
一、流式细胞术常用试剂1、10％NaN3：将10gNaN3溶解于100ml蒸馏水中，室温保存；活体实验或在辣根过氧化酶反应中可不使用NaN3。
2、3％BSA/PBS：100ml PBS中加入3g BSA，使之溶解，再加入0.2ml 10％的NaN3。
3、500mmol/L EDTA：将186g EDTA•Na2•2H2O溶解于400ml蒸馏水中，用NaOH将PH调至8.0，补充蒸馏水至500ml，分装，高压灭菌，室温保存。
4、4％多聚甲醛：在磁力搅拌下，将4g多聚甲醛溶于100ml PBS，加入数滴NaOH，在通风柜中于60度加热，使其溶解，调整PH至7.4，使用前新鲜配制。
5、消化液：0.25％胰蛋白酶（用培养液或PBS配制）或0.25％胰蛋白酶与0.02％EDTA的混合液。
6、红细胞裂解液：NH4Cl 4.16g，KHCO3 0.5g，EDTA•2Na 0.02g，溶于100ml水中，调PH 至7.2，补充蒸馏水至500ml，4度储存，使用时需恢复至室温。
7、流式细胞抗体稀释剂：0.1mmol/L PBS液（PH 7.4）＋1％BSA＋0.1％Na2N3。
8、常用细胞破膜剂：PBS液（PH 7.4）＋1％FBS（或BSA）＋0.1％NaN3＋0.1％saponin（Sigma 的效果不错）。
9、流式细胞染色洗涤液：含2％的BSA、0.1％NaN3的PBS（PH 7.4）。
10、PI染液（保存液，10×，用于细胞周期和凋亡检测）：10mg PI溶于10ml PBS，加入2mg 无DNA酶的RNA酶，4度保存备用。
应用时，10倍稀释，每管加0.3ml～0.5ml PI染液。
11、Hanks液的配制（BSS，主要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液，不能单独作为细胞、组织培养液）原液ANaCl 160gMgSO4•7H2O 2gKCl 8gMgCl•6H2O 2gCaCl2 2.8g溶于1000ml双蒸水原液B1）Na2HPO4•12H2O 3.04gKH2PO4 1.2g葡萄糖20.0g溶于800ml双蒸水2）0.4％酚红溶液：取酚红0.4g置玻璃研钵中，逐滴加入0.1N NaOH并研磨，直至完全溶解，约加入0.1N NaOH 10ml。
荧光抗体染料大集合
荧光抗体染料大集合染料在生物化学中最早的应用是直接对切片进行染色，然后进行观察。
随着生物技术、计算机技术以及荧光光谱测定技术的不断发展，许多染料尤其是荧光染料在细胞检测、肿瘤基因蛋白分析、毒物分析、临床医疗诊断等方面得到了广泛的应用。
荧光染料泛指吸收某一波长的光波后能发射出另一大于吸收光波长的光波的物质。
利用荧光染料进行抗体标记分析在现代生物免疫学领域中应用广泛，并逐步显示出明显的优越性。
下面简要介绍应用于标记抗体的荧光染料及其种类：1.荧光素类染料，包括异硫氰酸荧光素(FITC)、羟基荧光素(FAM)、四氯荧光素(TET)等及其类似物。
这是一类具有较多苯环的化合物。
应用最广泛的是FITC(如图为FITC标记的组织荧光图)，在488nm处由氩离子激光激发，发射525nm的蓝绿色荧光。
FITC能够与各种抗体蛋白结合，并在碱性溶液中稳定呈现蓝绿色荧光。
2.罗丹明类染料，包括红色罗丹明（RBITC）、四甲基罗丹明（TAMRA）、罗丹明B （TRITC）等。
TRITC在550nm处被激发可发射出570nm的黄色荧光。
3.Cy系列菁染料，菁染料通常有两个杂环体系组成，包括Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7及其类似物。
4.Alexa系列染料，它是由Molecular Probes开发的系列荧光染料。
其激发光和发射光光谱覆盖大部分可见光和部分红外线光谱区域，应用广泛。
以高亮度、稳定性、仪器兼容性、多种颜色、pH值不敏感以及水溶性为主要特点。
包括Alexa Fluor350、405、430、488、532、546、555、568、594、610、633、647、680、700、750。
目前市面上Alexa系列染料应用非常广泛，且逐渐替代传统的荧光染料，如Alexa Fluor488可替代FITC、Cy2；Alexa Fluor555可替代Cy3、TAMRA；Alexa Fluor633可替代APC、Cy5等。
免疫荧光染色技术及应用
免疫荧光染色技术及应用人类在面对各种疾病时，免疫荧光染色技术是一项十分重要的检测手段。
该技术利用荧光染料与抗体结合，并显示在微管中，从而帮助研究人员快速高效地检测出特定蛋白质及其存在的位置。
本文将介绍这一技术的基本原理、使用方法及其在生物医学领域中的应用。
一、免疫荧光染色技术基本原理免疫荧光染色技术（Immunofluorescence staining technique）是利用抗体特异性与组织靶分子相结合，再用荧光染料标记，进而检测特定蛋白质的位置。
该技术的基本原理是先用特异性的一抗（一种PECAM-1抗体）结合靶蛋白，再用荧光标记的二抗特异性结合第一抗体，从而形成荧光染色物，进一步观察其荧光信号的分布位置，同时判定靶分子的种类和分子量大小。
二、免疫荧光染色技术的使用方法首先，准备抗原或刺激物的样本，在荧光显微镜下将样品观察，选择合适的荧光标记，分别标记标本中要检测的特定蛋白质和待测试的抗体。
通过荧光显微镜观察这两种荧光染色物表现的方式和位置，如果两者在同一位置，则说明这种蛋白质与该抗体正好配对，是检测对象。
荧光显微镜的不断升级和发展，使得直接观察荧光成像成为一种非常高效且准确的技术。
三、免疫荧光染色技术在生物医学领域中的应用免疫荧光染色技术在生物医学领域中有广泛应用，其中包括诊断、治疗和预防疾病方面。
1.免疫组织化学分析免疫组织化学分析是免疫荧光染色技术的一种应用方式，它可以通过检测已知层面上蛋白质是否存在来帮助诊断疾病。
例如，LE会知道，如果一人有强直性脑脊髓炎，其免疫系统经常锁定GAD65（钩状攻角度分布并通过卷积峰在从35°到70°的较宽范围内）这种抗体。
该技术可以帮助诊断出很多常见疾病，如糖尿病、强直性脑脊髓炎、乳腺癌、白血病等。
2.病毒学方面的应用另外，在病毒学领域，免疫荧光染色技术也有着广泛的应用。
例如，利用该技术可以定量测定患者身上病毒负荷、病毒流行病学的强度、病毒分布情况，还可以分析病毒种群，为研究病毒的散布做出贡献。
免疫标记技术的原理及应用
免疫标记技术的原理及应用1. 引言免疫标记技术是一种通过添加荧光染料或酶等标记物，使得目标分子可以被直接观察、定量或检测的技术。
它在生物学、医学、生物工程等领域具有广泛的应用。
本文将介绍免疫标记技术的原理和常见的应用案例。
2. 免疫标记技术的原理免疫标记技术主要依赖于抗体的高度特异性和结合能力。
它通过标记抗体或抗原来实现目标分子的可视化或检测。
其中最常见的免疫标记技术包括：免疫荧光染色、酶联免疫吸附实验（ELISA）和免疫组织化学。
2.1 免疫荧光染色免疫荧光染色是利用荧光染料标记抗体或抗原，并通过特定的荧光显微镜观察目标分子的分布。
这种技术能够在细胞水平上观察目标分子的定位和表达水平。
免疫荧光染色常用在免疫细胞化学、蛋白质定位和细胞信号转导的研究中。
2.2 酶联免疫吸附实验（ELISA）酶联免疫吸附实验是一种常见且灵敏的定量检测方法。
它通过将酶标记的抗体或抗原与待检测分子结合，再用底物与酶作用生成可测量的产物。
这种技术广泛应用于血液学、临床诊断和药物研发等领域。
2.3 免疫组织化学免疫组织化学是通过在组织切片上标记抗体或抗原，利用显微镜观察目标分子在组织中的位置和表达情况。
它在研究肿瘤、组织发育和疾病等方面有重要应用。
3. 免疫标记技术的应用免疫标记技术在许多领域都有广泛的应用，下面介绍一些常见的应用案例。
3.1 免疫组织化学在癌症诊断中的应用免疫组织化学可以通过标记抗体来检测肿瘤标志物，从而帮助医生诊断和治疗癌症。
例如，可以利用针对特定抗原的抗体来检测肿瘤细胞在组织中的分布和表达水平，以辅助早期的癌症诊断和预后评估。
3.2 免疫荧光染色在细胞生物学研究中的应用免疫荧光染色可以在细胞水平上观察某个特定蛋白质的定位和表达情况。
这种技术广泛应用于细胞生物学研究中，例如研究细胞器的分布和功能、蛋白质互作和信号通路等。
3.3 ELISA在生物药物研发中的应用ELISA是一种常用的生物药物研发工具，可以用于检测和定量药物分子、抗体和蛋白质的浓度。
常用抗体标记荧光染料的选择
1、蓝色（350-450nm处激发）CF 350、Alexa Fluor 350、AMCA等----亮蓝和紫外光激发。
CF350是类似于Alexa Fluor 350和传统荧光染料AMCA的蓝色荧光染料，CF350的荧光强度高于Alexa Fluor350、AMCA，吸附在蛋白上的荧光超过50%，水溶性更好，耐光性非常优秀亮，更容易与现有的绿色荧光基团区分。
CF 405S/ CF 405 M、Alexa Fluor 405 ----近乎完美的匹配蓝色二极管激光器。
CF 405S/ CF 405 M、Alexa Fluor 405与近来使用的荧光显微镜和流式细胞仪405nm;谱线的蓝色二极管激光器完美的匹配。
在流式细胞仪上的分析结果显示CF 405S/ CF 405 M荧光信号强度高于Alexa Fluor 405染料1.7倍。
2、绿色（488nm处激发）CF 488A、Alexa Fluor 488、FITC、FAM、DyLight 488、Cy2等----针对488nm 氩离子激光器的绿色荧光染料。
以上染料其标记的抗体蛋白适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪，流式细胞仪的FL1通道检测，或者可用于荧光显微镜技术。
CF 488A最低限度的带电量降低了与抗体耦联物的非特异性结合，在红色通道溢出少于Alexa Fluor 488，耐光性好、水溶性好和pH 不敏感，良好的稳定性和活性染料的标记率。
Alexa Fluor 488在较宽的PH值范围内保持稳定（PH4~10）；FITC激发波长488nm，最大发射波长525nm，缺点：荧光强度易受PH值影响，PH值降低时其荧光强度减弱。
3、橙红色（543-555nm处激发）CF 543、Alexa Fluor 546、ATTO550, Cy 3, DyLight 549, Rhodamine (TRITC) 匹配543nm的橙色荧光染料；CF ™543 荧光条带明亮，耐光，水溶性好，确保了CF 543染料与抗体的耦联物保持优异的水溶性，为该波段最亮的橙色荧光染料。
荧光抗体标记技术
荧光抗体标记技术荧光抗体标记技术是一种广泛应用于生物医学研究领域的方法。
它可以用来检测医学样品中的分子或细胞，并对这些样品进行定量和定位分析。
在这种技术中，荧光染料通过共价键结合在抗体分子上，使得这些抗体成为抗原组织切片和细胞样品中的分子的标志物。
本文将详细介绍荧光抗体标记技术的原理、应用和优缺点等方面。
荧光抗体标记技术是基于三种原理的。
第一种原理是抗体的特异性。
正常情况下，抗体和抗原是相互作用的，这种特异性是荧光抗体标记技术的关键。
第二种原理是荧光染料的化学性质。
荧光染料是带有单电子的分子，它们可以通过激发或激光扫描光源进行激发并发出特定波长的荧光。
这种荧光可以在显微镜下观察到，从而得到关于标志物分子位置的信息。
第三种原理是显微成像技术。
显微镜通过光学、荧光和电子成像技术等手段，可以把观察到的样品放大到显微镜视野内，便于观察和研究。
荧光抗体标记技术的步骤分为标记前准备、荧光标记和特异性验证。
标记前准备包括抗体制备、样品制备、预处理和靶向。
荧光标记是在标记前准备的基础上，将荧光染料共价结合到抗体分子上的过程。
这一步骤有别于传统的化学标记技术，因为它通过利用抗体的生物胶体化学性质来实现标记。
荧光抗体标记技术可以更加快捷和简便地标记样品，而且准确性更高。
特异性验证是一种质量控制方法，用于确保标记的抗体仅对目标分子或组织点进行标记。
1. 细胞和组织检测荧光抗体标记技术可以用来标记细胞和组织中的分子、蛋白质和其他生物分子，从而研究它们在组织结构和功能中的作用。
这些分子的定位和分量可以通过显微镜来捕捉，从而帮助研究人员更好地理解细胞和组织的功能和生物过程。
2. 免疫荧光检测荧光抗体标记技术也广泛应用于识别、定位和判定免疫相关分子和生物分子的分布。
这种检测方式可以用于分析抗体、抗原、免疫球蛋白和细胞等样品。
在临床诊断中，荧光抗体标记技术可用于检测人类疾病的血清、尿液和乳腺组织等样品。
3. 肿瘤诊断和治疗荧光抗体标记技术在肿瘤诊断和治疗方面也有广泛的应用，特别是在早期癌症诊断和治疗中。
流式细胞术中应用的荧光染料介绍
流式细胞术中应⽤的荧光染料介绍当我们在进⾏多⾊流式分析的时候，对分析成功的⼀个关键影响因素是每个抗体选择何种荧光染料标记。
通常会有很多可⾏的结合，我们在做选择的时候有很多的因素需要我们去考虑。
对任何单克隆抗体，其阴性和阳性的信噪⽐相差四到六倍都取决于荧光素的使⽤。
相对的荧光强度也取决于使⽤的仪器。
⾼密度表达的抗原我们可以应⽤任何荧光素标记的抗体来检测，低密度表达的抗原就需要我们应⽤⾼信噪⽐⾼的荧光素，譬如PE或者APC标记的抗体来充分检测分离出阳性表达的细胞与阴性表达的细胞。
⾃发荧光个别的细胞有着他们各⾃特异性⽔平的⾃发荧光（荧光信号产⽣于他们⾃⾝）。
当在全波长荧光通道中进⾏观察的时候，⾃发荧光信号在长波长（>600nm）明显的降低。
对于有较⾼⽔平⾃发荧光类型的细胞，如长期组织培养的细胞，应使⽤较⾼发射波长的荧光染料（APC、APC-Cy7等）标记抗体，通常他们会有⼀个较好信噪⽐的结果。
对于那些不是有较多⾃发荧光类型的细胞，如新鲜的细胞，可以使⽤FITC 标记的抗体了。
以下为各种常⽤荧光素介绍：Alexa Fluor 488 has a spectrum almost identical to that of fluorescein isothiocyanate (FITC), but with extraordinary photostability. Because of this photostability, it has become a choice for fluorescent microscopy applications and has become popular in cytometry applications. It is detected in the FL1 detector of the FACSCalibur or FACScan. Unlike other fluorochromes with similar emission spectra, Alexa Fluor 488 is pH insensitive over a broad range.Alexa Fluor 633 is a practical alternative to APC as well as Cy5. Alexa Fluor 633 conjugates can be used in multi-color flow cytometry with instruments equipped with a second red laser or red diode. It is detected in the FL4 detector of the FACSCalibur. The FACScan cannot be used to detect Alexa Fluor 633 conjugates because the FACScan lacks a red laser or diode. Like other Alexa Fluor dyes, Alexa Fluor 633 exhibits uncommon photostability, making it an ideal choice for fluorescent microscopy.A great number of different Alexa Fluor dyes exist that are beyond the scope of this introductory fluorophore section. Many manufacturers sell directly-conjugated Alexa Fluor antibodies. Know that Molecular Probes' Zenon Antibody Labeling Kits, which are available for all of their Alexa Fluor dyes, make it possible to rapidly and quantitatively label antibodies from a purified antibody fraction or from a crude antibody preparation such as serum, ascites fluid or a hybridoma supernatant. See /servlets/publications?id=150 for specifics.Allophycocyanin (APC) is an accessory photosynthetic pigment found in blue-green algae. APC has 6 phycocyanobilin chromophores per molecule, which are similar in structure to phycoerythrobilin, the chromophore in phycoerythrin or PE. APC tandem dyes, APC-Cy5.5 and APC-Cy7, are also available. APC has a 650-nanometer wavelength absorption maximum and a 660-nanometer fluorescence emission maximum. APC can be used in flow cytometers equipped with dual lasers for multi-color analysis. Like Alexa Fluor 633, APC is excited using the helium-neon red diode laser (633 nanometers) of the FACSCalibur and is detected on the FL4 detector. APC cannot be detected on the FACScan as that instrument is not equipped with a red laser.APC-Cy7 is a tandem conjugate system that combines APC and a cyanine dye (Cy7) and has an absorption maximum at~650 nanometers. This tandem uses the efficiency of the fluorescence light energy transfer between the two fluorochromes. When excited by light from a helium-neon laser, the excited fluorochrome (APC) is able to transfer its fluorescent energy to the cyanine molecule, which then fluoresces at a longer wavelength. The resulting fluorescent emission maximum is in the deep red at approximately 767 nanometers. APC-Cy7 run on a FACSCalibur results in dim expression because the FL4 detector's optical filter is centered for APC emission (660 nanometers) and not the longer red wavelengths excited with the helium-neon diode. It is recommended that special precautions be taken with this conjugate, and cells stained with them, to protect the fluorochrome from long-term exposure to visible light.Carboxyfluorescein Diacetate (CFSE) can be used to track asynchronous cell division. Cell division results in sequential halving of the initial fluorescence, resulting in a cellular fluorescence histogram.The peaks labeled 1, 2, 3, 4 and 5 represent successive generations of CFSE-cultured cells.Cy3 and Cy5 are excited by the 488-nanometer line of an argon laser and the 633-nanometer line of a helium-neon diode or laser, respectively. These conjugates can be used in flow cytometry but typically do not give the fluorescence intensity comparable to that of PE or APC. Applications where a smaller dye is required are more appropriate for these dyes. These fluorochromes are well suited for fluorescent microscopy.Enhanced Cyan Fluorescent Protein (eCFP) cannot be analyzed using the FACScan or FACSCalibur as this molecule requires excitation in the violet range. The protein is easily detected using the violet laser of the LSRII, or the violet lines of the MoFlo's argon or krypton lasers. This molecule has an excitation maximum at 475 nanometers and is best excited using the MoFlo's 457nm line of the argon or argon-krypton mixed gas laser. Use of the 407nm violet laser of the LSRII will result in weak eCFP expression. More detailed discussion of this molecule can be found in the next section of this web site, the section on Fluorescent Proteins.Enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP) can be excited at 488 nanometers with a peak emission at 509 nanometers and is detected in the FL1 detector on the FACSCalibur or FACScan. The MoFlo and LSRII are able to distinguish between concurrently expressing eGFP and eYFP cells if the proper optical filters and experimental controls exist. More detailed discussion of this molecule can be found in the next section of this web site, the section on Fluorescent Proteins. Enhanced Yellow Fluorescent Protein (eYFP), a yellow-shifted variant of the eGFP molecule, is also excited at 488 nanometers with a peak emission at 535 nanometers and is also detected in the FL1 detector on the FACSCalibur or FACScan. More detailed discussion of this molecule can be found in the next section of this web site, the section on Fluorescent Proteins.Fluorescein isothiocyanate (FITC) is currently the most commonly used fluorescent dye for flow cytometry analysis. When excited at 488 nanometers, FITC has a green emission that's usually collected at 530 nanometers, the FL1 detector of the FACSCalibur or FACScan. FITC has a high quantum yield (efficiency of energy transfer from absorption to emission fluorescence) and approximately half of the absorbed photons are emitted as fluorescent light. For fluorescent microscopy applications, FITC is seldom used as it photobleaches rather quickly though in flow cytometry applications, its photobleaching effects are not observed due to a very brief interaction at the laser intercept. FITC is highly sensitive to pH extremes.Peridinin chlorophyll protein (PerCP) has a 677 nanometer maximum emission, red, when excited at 488 nanometers and is detected on the FL3 detector of the FACSCalibur or FACScan. A PerCP tandem dye is also available (PerCP-Cy5.5). PerCP is not suited for the high-powered lasing (>150mW) applications, such as on the MoFlo, due to its photobleaching characteristics. PerCP conjugates can only be obtained from Becton Dickinson and its subsidiary, Pharmingen. Phycoerythrin (PE or R-PE) has a huge absorption coefficient and almost perfect quantum efficiency. In vivo, it functions to transfer light energy to chlorophyll during photosynthesis. It is one of the brightest dyes used today and emits in theyellow/orange at about 570 nanometers. Those accustomed to fluorescent microscopy may not be familiar with this fluorochrome as it photobleaches rather quickly under a microscope.Phycoerythrin-Cy5 (PE-Cy5) is a tandem conjugate where PE is coupled to the cyan dye, Cy5. When excited by 488-nanometer light, the excited fluorochrome (PE) is able to transfer its fluorescent energy to the cyanine molecule, which then fluoresces at a longer wavelength in the red at 670 nanometers. This tandem dye is known by a confusing myriad of names to include Becton Dickinson's CyChrome, Caltag and Sigma's Tri-Color, GIBCO's RED670, Coulter's PC5, and probably others. Other PE conjugates exist, e.g., PE-Cy5.5 and PE-Cy7, that will not be discussed in this introductory fluorophore section. It is recommended that special precautions be taken with this conjugate, and cells stained with them, to protect the fluorochrome from long-term exposure to visible light.Phycoerythrin-Texas Red (PE-Texas Red) is a tandem conjugate where PE is coupled to Texas Red. Similar to other tandem conjuates, when excited by 488-nanometer light, the excited fluorochrome (PE) is able to transfer its fluorescent energy to the Texas Red molecule, which then fluoresces at a longer wavelength with a peak in the orange at 612 nanometers. This tandem is also known by other names such as Red 612 and ECD (Electron Coupled Dye). Know that PE-Texas Red conjugates run on the FACScan or FACSCalibur will result in dull expression due to the extant optical filters. This is not observed on the LSRII or MoFlo when equipped with the appropriate optical filters for this conjugate. There is considerable overlap of emission when running PE and PE-Texas Red specimens.Propidium Iodide (PI) is a membrane-impermeant dye that stains by nondiscriminately intercalating into every 4th or 5th nucleic acid base pair, binding both DNA and RNA. Once bound, PI undergoes a conformational change and becomes ~40 times brighter. Propidium iodide has a broad emission spectrum with a peak in the orange at 620 nanometers. A number of assays employ propidium iodide. Cells or nuclei with altered DNA content are identified by staining alcohol-fixed, RNAse-treated cells or nuclei with this dye (see below).The first peak (M1) on the left represents normal diploid cells. The next major peak (M2) represents tumor cells with increased DNA content and DNA index of 1.27. Propidium iodide can be combined with additional fluorescent antibodies that are specific for a unique cell population and allow for more accurate S phase analysis of multiple overlapping populations.Propidium iodide has also been employed for many years as a marker for viability as the disrupted membranes of dead cells allow the dye to pass freely to the nucleic acids. However, this dye is very sticky; it will stick to sample tubing and, given sufficient time exposure to living cells, living cells will appear to be propidium iodide positive. Given this dye's broad emission spectrum and its sticky properties, contemporary flow cytometry labs have replaced propidium iodide with other nucleic acid dyes, e.g., 7-AAD (listed below), TO-PRO-3, or DAPI, among many others, for viability measurements though propidium iodide remains the most commonly used dye for DNA content analysis.Texas Red has an excitation maximum in the yellow-orange range of the color spectrum; consequently, Texas Red cannot be excited on any of the benchtop analyzers in the core facility. It can, however, be detected using one of green laser lines of the MoFlo's argon laser but ideally using the yellow laser line of the MoFlo's krypton laser. When excited, Texas Red has an excitation maximum in the orange at 612 nanometers.7-Aminoactinomycin D (7-AAD), like propidium iodide, is a DNA intercalating dye but 7-AAD is specific for C-G base pairs. It is well suited for viability measurements and also for apoptosis experiments where it's paired with Annexin V. Unlike propidium iodide, this dye has minimal emission bleed from the FL3 detector into the FL2 (PE) detector on the FACSCalibur or FACScan. Whereas PI can be detected in either FL2 or FL3, though it is typically detected in FL2, of the FACScan or FACSCalibur, 7-AAD is detected in FL3.PE：Phycoerythrin 藻红蛋⽩；488nm，575nm（橙红）FITC，异硫氰酸荧光素 488nm，525nm（绿APC：英⽂全名：allophycocyanin，中⽂名：别藻青蛋⽩，最⼤吸收峰：650nm，最⼤发射荧光峰：660nm，适⽤于双激光流式仪，可被600-640nm波长的激光激发。
PerCP-Cy5
PerCP-Cy5.5串联染料解决方案常见流式抗体荧光染料介绍：1) 藻红蛋白（phycoerythrin，PE）：PE是从红藻中分离纯化获得的一种常见染料，经激光激发后发出橙黄色荧光，最大发射波长为575 nm。
PE具有吸光性能好和光量子产率高的特点，可用于标记表达水平较低的蛋白。
在流式细胞术检测中，PE标记的抗体适用于所有配备488 nm氩离子激光器的流式细胞仪。
2) PE-Cy5：PE-Cy5是一种复合染料，属于藻红蛋白偶联物，在此类复合染料中，激发能量可从PE传递到Cy5上，最大发射波长为667 nm。
由于PE-Cy5与FITC、PE在光谱上重叠范围较少，荧光干扰少，因此实验中常将PE-Cy5与FITC、PE搭配使用。
需注意，PE-Cy5不适合与APC搭配使用，两者荧光重叠大。
3)PE-Cy5.5：PE-Cy5.5也是一种复合染料，能量从PE传递到Cy5.5上，最大发射波长为694 nm。
同PE-Cy5不一样，PE-Cy5.5与FITC、PE、APC间荧光干扰小，可搭配使用，且其荧光强度要优于PE-Cy5。
4) PE-Cy7：复合染料，最大发射波长为785 nm。
PE-Cy7与FITC无光谱重叠，与APC重叠也较少，因此其可与FITC、PE、APC搭配使用。
在实验中需要注意，PE-Cy7的光淬灭性很强，需要绝对避光环境。
5) PerCP-Cy5.5：复合染料，最大发射波长为695 nm。
PerCP-Cy5.5光量子产率高，可用于表达水平较低物质的检测，与PerCP-Cy5.5相反，PerCP的光量子产率较低，适用于表达水平较高物质的检测，在双激光管仪器上与APC共同检测时，需要做补偿调节，但比PerCP补偿少。
6) PI/7-AAD：碘化丙啶（propidium iodide，PI）和7-AAD（7-amino-actinomycin D）的最大发射波长分别为617 nm和647 nm，是常见的荧光染料，常用于细胞凋亡检测，可用于鉴别死、活细胞。
常用荧光染料及应用领域
617nm 461nm 500-550nm 570-620nm 509nm/540nm —— —— —— —— ——
2
3
蛋白质、酶、 RITC（四甲基异硫氰基罗丹明） 抗体的检测 绿色荧光蛋白（GFP） 6-羧基荧光乙酰乙酸（CFDA）， FITC JC-1、Rhodamine123、SPMI NBD ceramide、BODIPY ceramide 细胞结构检测 Dil DAMP、neutral red
常用荧光染料及应用领域
序号 应用领域 燃料名称 吖啶橙（AO） 1 DNA和 RNA检 测 激发波长 492nm 发射波长 530/640nm
碘化丙啶（PI） Hoechst/DAPI FITC（异硫氰酸荧光素）
536nm 325nm 488nm 561nm 395nm/479nm —— —— —— —— ——
料及应用领域
特性 用激光共聚焦显微镜双通道观察可见；活细胞的胞核呈黄绿色荧 光，胞质呈绿色荧光；死细胞呈红色荧光 PI不能进入完整的细胞膜，常用于检测膜损伤、细胞凋亡、细胞 核定位、核酸定量等。 对细胞毒性小，特异性强。不与DNA特异性结合 能够结合细胞内总蛋白质，是检测蛋白质最常用的荧光探针，它 还能广泛地结合各种特异性的配体。光照下易淬灭。 常用的共价标记探针，稳定性高 跟踪活组织或细胞内基因表达及蛋白质定位的标记物 FRAP技术 线粒
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4河与FITC、PE、APC搭配，荧光干扰小、补偿小，是APC比较理想的搭 配。
11、PE-Alexa Fluor700:激发波长488nm,最大发射波长723nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道 检测；
15、APC-Cy5.5:激发波长633/635nm,最大发射波长668nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备氦氖激光器的流式细胞仪；
2）主要用于四色以上的流式细胞术。
16：PerCP:激发波长488nm,最大发射波长677nm。
1） 在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道 检测；
4）同样为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低
于APC。
5）与单核和粒细胞非特异性结合多，易出现假阳性结果。
5、PE:激发波长488nm,最大发射波长575nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；
2）在流式细胞仪的FL2通道检测；
3）其荧光泯灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术，但适用于激光共聚
常用抗体标记荧光染m。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；
2）在流式细胞仪的FL1通道检测；
3）可用于荧光显微镜技术
4）荧光强度易受PH值影响，PH值降低时其荧光强度减弱。
2、Alexa Fluor488：激发波长488nm,最大发射波长519nm。
检测；
2）不易湮灭；
3）可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式 细胞仪。
9、PE-Cy5:激发波长488nm,最大发射波长670nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道 检测；
2）可适用于大、小功率的流式细胞仪；
3）淬灭性强，不适用于传统的荧光显微镜技术；
4河与FITC、PE搭配，荧光干扰小、补偿小，但不宜与APC搭配。
5）与单核细胞和粒细胞非特异性结合多。
10、PE-Cy5.5:激发波长488nm,最大发射波长694nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道 检测；
2）可适用于大、小功率的流式细胞仪；
13、TR:激发波长595nm,最大发射波长615nm。
1）其标记的抗体适用于配备Texas Red激光器的流式细胞仪；
2）荧光不易淬灭，可用于荧光显微镜。
14、APC:激发波长633/635nm,最大发射波长660nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备氦氖激光器的流式细胞仪；
2）在BD细胞仪的FL4通道检测，在Beckman Coulter细胞仪只有配备双 激光器的FC500才能检测到。
2）光淬灭性很强，要绝对避光。
12、PE-Cy7:激发波长488nm,最大发射波长767nm。
1） 在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道 检测；
2）可适用于大、小功率的流式细胞仪；
3）光淬灭性很强，要绝对避光；
4）可与FITC、PE搭配，与FITC无光谱重叠，与APC搭配荧光干扰小， 补偿小，是比较理想的搭配。
2）在流式细胞仪的FL2通道检测；
3）适用于荧光显微镜技术；
4） 为小分子染料，非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于P
E。
4、Cy5:激发波长633/635nm,最大发射波长670nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备633nm氩离子激光器的流式细胞仪；
2）在流式细胞仪的FL4通道检测；
3）适用于荧光显微镜技术；
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；
2）在流式细胞仪的FL1通道检测；
3）具有超乎寻常的光稳定性，非常适用于荧光显微镜技术；
4）在较宽的PH值范围内保持稳定（PH4〜10）。
3、Cy3:激发波长488nm,最大发射波长570nm。
1）其标记的抗体适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪；
焦显微镜技术。
6、PE-TR：激发波长488nm,最大发射波长615nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL3通道检测；
2）可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流 式细胞仪。
7、PE-Alexa Fluor610：激发波长488nm,最大发射波长628nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL3通道检测；
2）荧光强度高；
3）可适用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流 式细胞仪。
8、PE-Alexa Fluor647:激发波长488nm,最大发射波长668nm。
1）在Beckman Coulter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道
2）可于FITC、PE搭配，荧光光谱重叠少，对随细胞的特异性结合少，但 量子产量较低，适用于较高表达物的检测。