实验3_光和K__对气孔运动的调节

3) 气孔密度的测定
原理：气孔密度（单位面积上气孔的数目）可用显微镜视野面 积（S=πr2，r可用40倍镜下物镜测微尺量取）内观测到的气 孔数求得。 注意：目镜测微尺刻度的大小是随显微镜放大的倍数而不同的， 必须用物镜测微尺来决定放大时目镜测微尺刻度的大小。
2. 实验器材
（1） 材料：蚕豆叶（洗净） （2） 仪器：显微镜、物镜测微尺 （3） 试剂：无水乙醇、胶棉液
• 吸水后，作用于外壁上的 （净）压力通过微纤丝传到 内壁，成为作用于内壁、背 离气孔口方向的拉力
实验目的
1 掌握测定气孔密度和开度的方法； 2 学会分析外界因素对气孔运动的调节； 3 学会利用物镜测微尺标定目镜测微尺及测定视野 直径的方法。
（Ⅰ）气孔状态的观察
1、 实验原理
1) 印迹法 原理：以有机物质的溶胶涂在植物的表面，胶体风干后就凝成薄膜，这 层膜就印有表皮组织各细胞的边界痕迹。除用来观察气孔状况外，还 可用于观测植物表皮上的细胞、茸毛以及蜜腺、蜜盘、刺鳞片等。 优点: 非破坏性取样，方便快捷； 缺点: 边界痕迹不明显的样品印迹模糊，凹陷气孔难以取到印迹，清晰 薄膜制作有难度。 2) 固定法 原理：无水酒精能使植物细胞迅速脱水死亡，因而细胞壁硬化、细胞形 状固定，气孔也得以保持原样，有利于以后镜检研究，植物材料还可 长期保存。 优点: 镜下观察较印迹法的醒目， 植物材料可长期保存，凹陷气孔仍可 观察； 缺点: 破坏性取样，不适用于下表皮难以剥离的样品观察。
目镜测微尺的标定
目镜测微尺
物镜测微尺
目镜测微尺17格
注：物镜每格 为10µ m
17格目尺对 6格物尺
物镜测微尺6格
目尺每格＝
6×10/17µ m 测气孔大小
4. 数据记录及处理
方 法 固定法 1 2 3 印迹法 1 2 3
视野内气孔数目
视ห้องสมุดไป่ตู้半径r＝
单位面积上气孔数目
单位面积上气孔数目平均值
开度
4. 数据记录及处理
不同溶液处理后的气孔开度
方 法 KNO3 1 2 3 4 5 NaNO3 1 2 3 4 5 水 1 2 3 4 5
气孔开度
气孔平均开度
5. 分析与讨论
6. 思考题
比较何种溶液中气孔开度最大？为什么？
7. 注意事项
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 首先确定显微镜好用 胶棉液涂均匀、超薄一层 叶表皮取下后迅速投入乙醇 物镜测微尺安全使用，切勿压破 先低倍镜找视野,后高倍观察气孔数目、大小或标定目尺 物尺放在视野直径线计算直径 物尺和目尺0刻度对齐再标定，之后即可还物尺 固定法、印迹法观察3个视野 胶膜朝上观察 实验结束后请将显微镜载物台调至最低。
实验三 气孔状态观察及K+对气孔 开度的影响
• 长7-40μm (H2O-0.54nm; CO2-0.46nm)
• 多数植物下表皮气孔数 目多于上表皮。
肾型： 双子叶植物,
哑铃型：单子叶植物
• 保卫细胞运动的结构基础
1 (肾型）外壁薄，内壁厚 2 壁中存在径向排列的微纤丝
• 微纤丝
难以伸长。以气孔口为中心，限 制了保卫细胞沿短轴方向直径的 扩大
（3） 试剂：0.5%KNO3、0.5NaNO3、蒸馏水
3. 实验步骤
取3 个培养皿编号，分别放入15ml 0.5%KNO3、 0.5%NaNO3、蒸馏水。 撕蚕豆叶下表皮分别放入3 个培养皿。 将3 个培养皿放入人工光照条件下，保温1 小时。 分别取出叶表皮放在载玻 片上，盖上盖玻片，在显微 镜下观察气孔的开度。
5. 分析与讨论 6. 思考题 固定、印迹法两种方法测定结果是否一样？ 哪一种方法观察到的气孔数较多？为什么？
（Ⅱ） K+对气孔开度的影响
1. 实验原理
保卫细胞的渗透系统受K+调节，Na+一定程度上 可代替K+ ，但不如K+有效。
2. 实验材料、仪器和试剂
（1） 材料：蚕豆叶
（2） 仪器：显微镜、温箱、培养皿等
3. 实验步骤
定性： 1）固定法：取蚕豆叶下表皮，迅速放入无水乙 醇，固定2-3min，取出镜检。 2）印迹法：蚕豆叶下表皮涂一层胶棉液，用镊 子取下，在稍有湿润的载玻片上此膜就能粘贴牢 固，即可镜检 。 定量： 3）气孔密度测定： A 标定目镜测微尺，并利用物镜测微尺计算 视野的直径 B 镜检，随机取3 个视野，观察气孔数；并算 出单位面积气孔数= a/s = a/πr2