毛细管气相色谱法的应用

毛细管色谱法测定洛美沙星中的有机溶剂残留量

来源: 作者:王国成,陈莹,徐波

摘要：目的:建立毛细管气相色谱法测定洛美沙星中的有机溶剂残留量。方法: 用INNOWAX 毛细管气相色谱柱,FID检测器, 以22戊酮为内标进行测定。结果: 乙酸乙酯、四氢呋喃、乙醇、乙腈的线性范围分别为0～80μg/m l ( r =0.999 7)、0～11.52μg/ml( r=0.9996)、0～80μg/ml( r=0.9997) , 0～6.56 μg/ml( r= 0.9996);平均回收率分别为100.5%、100.1%、101.2%、100.1%; RSD 分别为1.30%、0.9%、1.18%和1.23% (n = 9)。结论: 本方法简单、准确、灵敏度高、重现性好, 适用于洛美沙星中有机溶剂残留量的测定。

关键词洛美沙星,毛细管气相色谱法,有机溶剂残留量

药物生产过程中残存的有机溶剂均有不同程度的毒性, 不仅对人体有害, 而且这些溶剂与药物的治疗作用无关, 原则上应愈少愈好。洛美沙星为第三代喹诺酮类广谱抗菌药, 是由日本北陆株式会社研制的第一代口服长效抗菌药。该药物在合成过程中采用了乙酸乙酯、四氢呋喃、乙醇、乙腈等有机溶剂, 故对此4种有机溶剂加以检测有利于药物质量控制。本试验采用毛细管色谱法测定洛美沙星原料药中有机溶剂的含量,方法简便,结果准确可靠。

1 仪器与试剂

Agilent6890 增强型气相色谱仪, Agilent6890 工作站。乙酸乙酯、四氢呋喃、乙醇、乙腈均为分析纯(上海化学试剂公司) , 22戊酮(内标物) 为色标试

剂(天津化学试剂一厂) , 1-甲基-2-吡咯烷酮, 溶解样品用溶剂为化学纯(上海化学试剂公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱: Agilent HP-NNOWAX (固定液为键合聚乙二醇, 30m×0.53mm,1.0μm) 毛细管柱; 气化室温度: 220℃; 程序升温: 起始温度为40℃, 保持10min, 然后以20℃/min 升温至220℃,保持4 min;载气为氮气;分流比:1∶1; 进样量2μl; 检测器温度: 氢焰离子化检测器(FID) , 240 ℃。

2.2 溶液及试样制备

2. 2. 1 内标溶液的制备精密量取色标试剂2-戊酮124.0μl (约相当于100mg) , 置100ml 量瓶中, 用1-甲基-2-吡咯烷酮稀释至刻度, 摇匀; 精密量取1m l, 置10ml容量瓶中, 用1-甲基-2-吡咯烷酮稀释至刻度, 摇匀, 作为内标溶液。

2. 2. 2 对照溶液的制备精密量取乙酸乙酯111. 1μl (约相当于100mg) , 乙醇126.6μl(约相当于100mg) 置100ml 量瓶中, 用1-甲基-2-吡咯烷酮稀释至刻度,摇匀,作为对照贮备液A; 精密量取四氢呋喃162.2μl(约相当于144m g) , 乙腈105.0μl (约相当于82mg) 置100ml量瓶中, 用1-甲基-2-吡咯烷酮稀释至刻度, 摇匀, 作为对照贮备液B。精密量取对照贮备液A 10ml 与对照贮备液B 1ml 置同一100ml 量瓶中, 用1-甲基-2-吡咯烷酮稀释至刻度, 摇匀,

作为对照贮备液。精密量取对照贮备液5ml, 置10ml 量瓶中,精密加入内标溶液

1ml, 加1-甲基-2-吡咯烷酮稀释至刻度, 摇匀, 即得对照溶液。

2. 2. 3 供试品溶液的配制取本品约0.1g, 精密称定, 置10ml 量瓶中, 精密加入内标溶液1ml, 加1-甲基-2-吡咯烷酮适量, 振摇使溶解并稀释至刻度, 摇匀,作为供试品溶液。

2.3 系统适用性试验精密量取对照品溶液2μl, 注入气相色谱仪, 记

录色谱图, 测定各有机溶剂的分离度及柱效。结果表明, 以上各有机溶剂计算的理论塔板数均达到2500 以上, 相邻溶剂的分离度均符合要求。

2.4 线性关系精密量取对照贮备液0.5、1. 0、2. 0、4. 0、5. 0、6.

0 和8.0ml 分别置10ml量瓶中,各精密加入内标溶液1ml, 加1-甲基-2-吡咯烷酮稀释至刻度, 摇匀。分别精密量取上述各浓度溶液2μl, 注入气相色谱仪,

测定。分别以乙酸乙酯、四氢呋喃、乙醇、乙腈对照液的峰面积与22戊酮(内标) 峰面积的比值为纵坐标( Y ) , 以乙酸乙酯、四氢呋喃、乙醇、乙腈的浓度为横坐标( X ) , 进行线性回归。结果表明, 四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇、乙腈在相应的线性范围内线性关系良好。

2.5 回收率试验分别取本品约0.1g, 精密称定, 置10 ml量瓶中(共10份) , 精密加入对照贮备液4ml(3份)、5ml(3 份)、6ml(3 份),另取1份不加贮备液, 作为空白, 再精密加入内标溶液1ml, 加1-甲基-2-吡咯烷酮稀释至刻度, 摇匀(共10份)。分别精密量取上述各浓度溶液2μl, 注入气相色谱仪, 记录峰面积,计算回收率。

2. 6 精密度试验精密量取对照溶液2μl, 按上述测定法操作, 重复进

样6次, 四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇和乙腈RSD 分别为0.40%、0.59%、0.60% 和0.63%。

2. 7 最低检出限的测定取对照品溶液逐步稀释进样, 测得乙酸乙酯、四氢呋喃、乙醇、乙腈的最低检出限为50.

3.6.25和102.5 μg/ml。

2. 8 样品测定按“2. 2. 3”项制备供试品试样, 按“2.2.2”项制备对照品试样, 分别测定, 记录色谱图, 按内标法以峰面积计算各溶剂含量。

3 讨论

3.1 色谱柱的选择4种有机溶剂中乙醇和乙腈较难分离, 试验采用

DB2624 气相色谱柱不能达到基线分离, 选用Agilent HP-NNOWAX 毛细管柱, 在本试验条件下,各物质均可达到有效分离,4种有机溶剂和内标的出峰顺序依次

为四氢呋喃(2.142min)、乙酸乙酯(2.455min) , 乙醇(3.233min)、2-戊酮

(4.118min)和乙腈(5.074min) , 整个分析过程在20min内完成,快速简便。

3.2 内标物的选择内标物的选择应在分析的样品中间出峰, 且不干扰

被测成分的物质, 采用内标法测定有机溶剂含量, 可以减少仪器及实验者的操

作误差。经过多种有机溶剂的筛选, 选择22戊酮为内标可以和这4种有机溶剂达到有效分离,无干扰,方法学验证得到满意结果, 精密度符合中国药典要求(RSD< 5%) ,因此该方法应用于有机溶剂的含量测定准确、可信。

3.3 柱温的选择柱温升高可使有机溶剂的出峰时间提前, 但升高温度

不利于此4种有机溶剂的分离, 因此初始柱温选择40℃, 在此温度下, 溶剂1-甲基-2-吡咯烷酮的出峰时间保留时间过长, 在保证有机溶剂和内标得到有效分离的情况下, 利用程序升温使溶剂峰快速出峰, 缩短分析所用时间。

参考文献

1 周海钧, 金少鸿. 人用药品注册技术规范国际协调会( ICH)-质量的技术要求. 中国药学杂志, 1996, 31 (11) : 694

2 中国药典.2000. 二部. 附录64